Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 12
1.1. Современные аспекты герпесвирусной инфекции 12
1.2. Методы этиологической диагностики герпесвирусной инфекции и их возможности в определение формы инфекционного процесса 19
1.3. Особенности иммунного ответа при герпесвирусных инфекциях 26
Глава II. Материалы и методы 36
2.1. Характеристика обследованного контингента 36
2.2. Методы этиологической диагностики герпесвирусной инфекции .. 38
2.3. Методы иммунологического обследования 46
2.4. Методы определения содержания металлопротеидов как одного из показателей антиоксидантной системы 56
2.5. Методы статистической обработки 57
Глава III. Клинико-зпидемиологическая характеристика герпесвирусной и вич инфекций на примере новгородской области 58
3.1. Клинико-эпидемиологическая характеристика герпесвирусной инфекции 58
3.2. Клинико-эпидемиологическая характеристика ВИЧ инфекции 74
3.3. Клинико-эпидемиологическая характеристика герпесвирусной инфекции на фоне ВИЧ-инфицирования 85
Глава IV. Показатели клеточного и гуморального иммунитета и содержания металлопротеидов как одного из показателей антиоксидантной системы у больных герпетической инфекцией, вич инфекцией и герпетической инфекцией на фоне вич 93
4.1. Оценка иммунного статуса с помощью моноклональных антител у больных герпесвирусной инфекцией 93
4.2. Оценка иммунного статуса с помощью моноклональных антител у ВИЧ-инфицированных больных 94
4.3. Оценка иммунного статуса с помощью моноклональных антител у больных герпетической инфекцией, ВИЧ-инфицированных и у больных герпетической инфекцией на фоне ВИЧ/СПИД 97
4.4. Оценка иммунного статуса с помощью проточной цитометрии у больных герпесвирусной инфекцией 110
4.5. Изучение содержания металлопротеидов как одного из показателей антиоксидантной системы у больных герпесвирусной инфекцией 115
Глава V. Влияние терапии аллокином-альфа на клинико-иммунологические изменения у больных герпетической инфекцией 118
Заключение
Выводы 152
Рекомендации 154
Литература 155
- Методы этиологической диагностики герпесвирусной инфекции и их возможности в определение формы инфекционного процесса
- Методы этиологической диагностики герпесвирусной инфекции
- Клинико-эпидемиологическая характеристика герпесвирусной инфекции на фоне ВИЧ-инфицирования
- Оценка иммунного статуса с помощью моноклональных антител у ВИЧ-инфицированных больных
Введение к работе
Актуальность темы.
В настоящее время известно 8 антигенных серотипов вирусов герпеса: вирусы простого герпеса 1 и 2 типа, ветряной оспы — опоясывающего герпеса, цитомегаловирус, вирус Эпштейна — Барр, вирусы герпеса человека 6, 7 и 8 типов. Герпесвирусы широко распространены в человеческой популяции, они способны поражать практически все органы и системы организма - хозяина, вызывая латентную, острую и хроническую формы инфекции (Лобзин Ю.В., 2003г.; Баринский И.Ф. и соавторы 1986г.; Рахманова А.Г., 1995г.). Особенно своё цитопатогенное действие они вызывают на фоне иммунодефицитных состояний.
Особая актуальность проблемы герпесвирусных инфекций связана с появлением больных СПИДом. Установлено, что вирусы герпеса могут активировать ВИЧ, находящийся в стадии провируса, и являются кофактором прогрессирования ВИЧ - инфекции и СПИДа. В этой связи герпетическая инфекция является одним из важных СПИД индикаторных заболеваний.
Число ВИЧ-инфицированных постоянно растет, каждый день появляется 6000 новых случаев болезни. В настоящее время в мире зарегистрировано 40 млн. ВИЧ-инфицированных, в то время как в 1996 г. число ВИЧ инфицированных в мире составляло 21,8 млн. По кумулятивным данным от СПИДа умерло более 8 млн. человек, из них более 2 млн. - дети. Около 42% ВИЧ-инфицированных взрослых приходится на долю женщин, и эта тенденция постоянно увеличивается. Следует отметить, что ВИЧ-инфицированные женщины находятся в репродуктивном возрасте, что, безусловно, влияет на вероятность рождения ими ВИЧ-инфицированных детей. В настоящее время СПИД занимает третье место в мире в группе смертельных исходов после заболеваний сердечно-сосудистой системы и новообразований, а среди детей ВИЧ/СПИД является основной причиной
смерти в большинстве развивающихся стран. Распространение ВИЧ-инфекции в России приобрело характер пандемии. В Великом Новгороде и Новгородской области зарегистрировано 752 ВИЧ-инфицированных на 25.12.2004г.
Активация герпесвирусной инфекции у ВИЧ-инфицированных больных, помимо общего усиления репликации ВИЧ, происходит с повышенным выделением вирионов ВИЧ в местах герпетических кожных высыпаний, которые не всегда имеют характерный для герпеса вид. Наиболее важно то, что при этом могут образовываться частицы смешанного фенотипа - вирионы ВИЧ, "одетые" в оболочку герпеса. Такие "закамуфлированные" частицы в отличие от обычных вирионов ВИЧ способны инфицировать различные типы клеток, включая эпителиальные клетки и фибробласты, давая при этом продуктивную ВИЧ-инфекцию, то есть становится возможным заражение ВИЧ через контакты с кожей и слизистой оболочкой.
Доказано, что вирусами простого герпеса инфицировано 65-90% взрослого и детского населения планеты. Среди онкологических больных у 50% лиц отмечена герпетическая инфекция, при ВИЧ - инфекции и СПИДе — в 95-100% случаев.
При герпесе развиваются иммунодефицитные состояния, обусловленные недостаточностью различных звеньев иммунной системы и ее неспособностью элиминировать вирус из организма. Сохраняющиеся в течение всей жизни, иногда в довольно высоких титрах, вируснеитрализующие антитела хотя и препятствуют распространению, но не предупреждают возникновения рецидивов.
Спектр клинических проявлений герпесвирусных инфекций отличается значительным разнообразием. Он зависит от локализации патологического процесса и его распространенности, состояний иммунной системы больного и антигенного типа вируса. Более тяжелое течение заболевания отмечается
после первичного инфицирования, когда отсутствуют специфические антитела к вирусу герпеса, у детей раннего возраста с незрелой иммунной системой, при иммунодефицитных состояниях различного генеза, в том числе при СПИДе (Исаков В.А., Сельков С.А. и другие, 2004г.; Пауашвили М.Н., Щелканов М.Ю., 2004г.; Рахманова А.Г., 2000г.). Так, клинические проявления инфекции, протекавшие ранее латентно, могут быть тяжелыми на фоне иммунодефицитных состояний, с тенденцией к генерализации и развитию осложнений, которые подчас определяют течение и исход основного заболевания, создавая угрозу для здоровья и жизни пациента.
Цель исследования.
Выявить клинико-патогенетическую и прогностическую значимость показателей иммунного статуса и содержания металлопротеидов у больных герпес и ВИЧ-инфекциями.
Задачи исследования.
Охарактеризовать клинические проявления у больных герпетической и ВИЧ- инфекциями и определить их частоту выявления;
Провести оценку иммунного статуса и содержания металлопротеидов как одного из показателей антиоксидантной системы у герпесвирусных больных и иммунного статуса у ВИЧ-инфицированных и ВИЧ/СПИД-больных с герпетической инфекцией;
Определить патогенетическую и прогностическую значимость выявленных изменений в иммунологическом статусе у больных с герпетической и ВИЧ-инфекциями;
Определить патогенетическую и прогностическую значимость выявленных изменений металлопротеидов у больных герпетической инфекцией;
5. Оценить терапевтическую эффективность препарата "аллокин-альфа" при лечении больных герпетической инфекцией.
Научная новизна работы.
Комплексная оценка клинико-эпидемиологических и
иммунологических параметров позволяет оценить активность инфекционного процесса и ведущую роль вирусов герпеса либо ВИЧ в прогрессировании основного заболевания.
При сочетанном течении герпетического заболевания на фоне ВИЧ-инфекции отмечаются более выраженные иммунологические изменения по большинству показателей иммунного статуса: снижение содержания CD3-клеток в 1,3 раза, СБ4-клеток в 1,3 раза, IgA в 1,3 раза и фагоцитоза в 1,8 раза по сравнению с аналогичными показателями при раздельном течении данных инфекций.
Впервые изучены иммунологические показатели
высокотехнологичным методом проточной цитометрии у больных герпесвирусной инфекцией и выявлены более значимые нарушения в иммунном статусе при исследовании данным методом. В частности, установлено достоверное снижение в 1,3 раза содержания не только CD3-, CD4-iaieTOK, выявляемых общепринятыми методами, но и существенное снижение содержания апоптотических клеток, несущих CD95 в 3 раза; количества В1 и В2-лимфоцитов, несущих CD20+CD5+ и CD20+CD5- в 2 раза по сравнению с аналогичными показателями у практически здоровых лиц. Выявлено увеличение количества CD3+CD16&56-mieTOK, отвечающих за антителозависимую цитотоксичность в 2,1 раза; HLA-DR в 1,8 раза и СБ25-клеток (несущих ИЛ-2), отвечающих за активацию и пролиферацию цитотоксических клеток в 2,9 раза по сравнению с аналогичными показателями у практически здоровых лиц.
Выявлена связь между тяжестью заболевания и количеством сопутствующей герпесвирусу бактериальной флоры. Чем тяжелее протекает герпесвирусная инфекция, тем в большем количестве выявляются различные виды бактерий в урогенитальной системе.
Выявленные повышения содержания церулоплазмина (ЦП) и снижение уровней лактоферрина (ЛФ), трансферрина (ТФ) в сыворотке крови больных при обострении ГВИ указывают на тяжесть и остроту процесса, что предпологает их прогностическую значимость у больных герпесвирусной инфекцией.
Впервые проведена оценка терапевтической эффективности препарата аллокин-альфа у больных рецидивирующей герпетической инфекцией с учетом показателей иммунного статуса.
Практическая значимость работы.
Выявленные разнонаправленные изменения показателей иммунной системы и содержания металлопротеидов, как одного из показателей антиоксидантной системы у больных ГВИ в период обострения и ремиссии позволяют оценить активность инфекционного процесса и прогнозировать тяжесть заболевания.
Выявленная положительная динамика изменений клинической симптоматики и иммунологических показателей при использовании аллокин-альфа в комплексном лечении ГВИ указывают на его терапевтическую эффективность.
Основные положения, выносимые на защиту. 1. При сочетанном течении герпесвирусной инфекции и ВИЧ/СПИД заболевании отмечаются более выраженные клинические проявления и изменения в показателях клеточного и гуморального иммунитета.
Использование высокотехнологичного метода проточной цитометрии для оценки иммунного статуса позволяет выявить больший спектр значимых изменений иммунологических показателей у больных герпесвирусной инфекцией.
Определение металлопротеидов как одного из показателей антиоксидантной системы при герпетической инфекции позволяет оценить тяжесть заболевания и активность инфекционного процесса. В период обострения при тяжелых формах ГВИ отмечаются более выраженные изменения в содержании металлопротеидов: снижение содержание ЛФ в 3,3 раза и повышение содержания ЦП в 1,4 раза по сравнению со значениями этих показателей в период ремиссии.
В оценке тяжести заболевания имеет также определенное значение наличие сопутствующей герпесвирусу бактериальной микрофлоры в урогенитальной системе.
Выявленное положительное влияние препарата аллокин-альфа на клиническую картину и на некоторые показатели иммунной системы, в частности CD 16, у больных герпесвирусной инфекцией позволяет рекомендовать этот препарат в комплексной терапии этого заболевания.
Апробация работы.
Материалы доложены на научно-практической конференции "Актуальные вопросы инфекционной патологии" на IX, X, XI и XII научно-практических конференциях сотрудников и студентов ИМО НовГУ им. Ярослава Мудрого (Великий Новгород 2002, 2003, 2004, 2005), на научно-практической конференции - Актуальные вопросы инфекционной патологии, посвященной 10-летию кафедры микробиологии, иммунологии и инфекционных болезней ИМО НовГУ им. Ярослава Мудрого В.Новгород 2004г.
По материалам диссертации опубликовано 10.
Внедрение в практику.
Результаты диссертационных исследований внедрены в практику работы Городской инфекционной больницы и центра по борьбе и профилактики со СПИДом "Хелпер" Великого Новгорода. Материалы работы используются в учебном процессе на кафедре микробиологии, иммунологии и инфекционных болезней (МИиИБ) ИМО НовГУ.
Объем и структура диссертации.
Диссертация включает следующие разделы и главы: введения, обзора литературы, материалы и методы, три главы, посвященные результатам собственных клинических наблюдений и исследований, заключение, выводы и практические рекомендации, список литературы. Материал диссертации изложен на 156 страницах компьютерного набора, с учетом 40 таблиц и 32 рисунков, в том числе 6 гистограмм; список литературы включает 169 названий работ отечественных и зарубежных исследователей.
Методы этиологической диагностики герпесвирусной инфекции и их возможности в определение формы инфекционного процесса
В настоящее время имеется достаточно широкий арсенал методов этиологической диагностики герпесвирусных инфекций. В диагностике герпесвирусов большинство авторов отдает предпочтение молекулярно-биологическим методам. Причем, диагностические технологии, основанные на амплификации ДНК, считаются наиболее чувствительными (90-98%) и специфичными (90-100%) и не требующими подтверждения с помощью других тестов (Алимбарова Л.М., Гараев М.М., 2004г.). Однако не все авторы считают методы, основанные на выявлении ДНК возбудителя, идеальными.
Остаются неучтенными ошибки, связанные с возможным присутствием в пробе от больного ингибиторов ДНК-полимеразы или с нарушением условий забора и хранения материала (Бойцов А.Г. и соавт., 2000г.).
Поэтому многими исследователями подчеркивается важная роль использования нескольких методов диагностики (Баринский И. Ф., Шубладзе А. К. и соавторы, 1986г.; Ивановская Т. Е., Гусман Б. С, 1989г.). В качестве скринингового метода при диагностике герпесвирусных инфекций рекомендуется использовать метод полимеразной цепной реакции (ГЩР), иммуноферментный анализ (ИФА) и реакция иммунофлюоресценции (РИФ), а в качестве подтверждающего - культуральный (Башмакова М.А., Савичева A.M., 2000г.). Предлагаются и другие диагностические алгоритмы. Отношение разных авторов к конкретным методам и диагностическим алгоритмам неоднозначно (Исаков В.А. и соавт, 2000г.).
Вирусологический метод является "золотым стандартом" в диагностике герпесвирусной инфекции. Положительной особенностью данного метода является высокая степень достоверности полученных результатов, а также высокая чувствительность (60-85%) и специфичность (100%), возможность получения чистой культуры возбудителя для его дальнейшего изучения, в частности испытания чувствительности к антивирусным препаратам; недостатком — длительность проведения (от 2 до 14 дней). Кроме того, этот метод недоступен большинству медицинских учреждений, т. к. культивирование с использованием клеточных культур является процессом трудоемким, дорогостоящим, требующим высокой квалификации персонала. Чувствительность метода зависит: от времени, прошедшего с момента забора материала до посева; от качества забора материала; от условий транспортировки; от качества используемых сред и реагентов (Алимбарова Л.М., Гараев М.М., 2004г.). Весь этот комплекс проблем заставляет искать новые более доступные диагностические методы и диагностические алгоритмы, способные полнее охарактеризовать всю картину инфекционного заболевания.
В настоящее время проводится ускоренный вирусологический метод выявления вируса. Сущность метода заключается в том, что материал, полученный от больных, культивируют совместно с культурой клеток vero в течение 24 ч., после чего клетки культуры фиксируют в холодном ацетоне. Далее проводят выявление антигенов вируса в реакции непрямой иммунофшооресценции (РНИФ). На фиксированные препараты наносят моноклональные антитела (МКА) к ВПГ. Далее препараты инкубируют во влажной камере в течение 1 часа при температуре 37С. Затем препараты промывают проточной водой. После промывки, на препараты наслаивают антивидовой конъюгат и помещают на 30 минут при температуре 37С. Окрашенные препараты исследуют с помощью люминисцентного микроскопа. При микроскопии определяют вирусспецифические включения в виде образований с зеленой или желто-зеленой флюоресценцией в ядре и/или цитоплазме эпителиальных клеток. Включения могут иметь зернистую, гомогенную или смешанную структуру.
Ценность культурального метода состоит в том, что он является пока единственным методом, позволяющим выбрать антивирусный препарат для лечения ГИ и оценить эффективность противовирусной терапии через 1,5 — 2 месяца после окончания лечения. Данный метод позволяет получить результат в течение двух суток.
Методы этиологической диагностики герпесвирусной инфекции
Для выявления герпетической инфекции были использованы методы иммуноферментный анализ (ИФА) с целью выявления специфических антигерпетических антител, полимеразной цепной реакции (ПЦР) для обнаружения ДНК герпесвируса и метод определения авидности антител.
Для этиологической диагностики ВИЧ инфекции использовали ИФА с целью выявления специфических антител к ВИЧ с последующим подтверждением их специфичности в реакции иммунного блоттинга (ИБ) — выявление антител к определенным белкам вируса.
Для этиологической диагностики прочих инфекционных патогенов (Chlamydia trachomatis, Toxoplasma gondii, Mycoplasma hominis, и пр.) использовали ИФА.
Методом ИФА определяли видоспецифические антитела классов IgG, IgM к ВПГ1,2, ЦМВ в единицах оптической плотности (ЕОП). Применяли иммуноферментные тест-системы "Вектор - ВПГ — IgG/IgM - стрип" фирмы "Vector-Best" (г.Новосибирск) в соответствии с прилагаемыми рекомендациями. Для определения антител к ЦМВ использовали "ДС-ИФА— АНТИ-ЦМВ-G", "ДС-ИФА-АНТИ-ЦМВ-О-авидность" и "ДС-ИФА-АНТИ-ЦМВ-М" выпускаемые НПО "Диагностические системы" (г. Нижний Новгород).
Методика осуществлялась следующим образом: в лунку А1 вносили 100 мкл раствора для разведения сывороток (РРС). Лунка А1 в последующем являлась контролем поглощения раствора ТМБ. В лунки В1 и С1 вносили по 100 мкл К". В лунку Д1 вносили по 100 мкл К+. В остальные лунки вносили по 90 мкл РРС и по 10 мкл предварительно разведенных исследуемых сывороток, взятых от больных. Таким образом, исследуемая сыворотка в лунке разбавляется в 100 раз. Стрипы инкубируются при t 37,5 ± 0,5 С в течение 30 ± 3 минут. Затем проводится промывание. В каждую лунку, кроме А1 вносятся по 100 мкл раствора конъюгата (РРК), а в лунку А1 100 мкл РРК. Инкубируются 30 ± 3 минут при t 37,5 ± 0,5 С во влажной камере. Стрипы промываются. Затем в каждую лунку вносятся по 100 мкл раствора ТМБ и инкубируются в темноте в течение 25 минут при t 10-25С. Для остановки реакции добавляется в лунки по 100 мкл стоп - реагента (это раствор серной кислоты с концентрацией 1 моль/л).
Результаты ИФА регистрируются с помощью фотометра АИФ - С (г. Витебск). Оптическая плотность (ОП) измеряется при длине волны 492 нм (при использовании ортофенилдиамина). Нулевой уровень задается по воздуху. Для оценки результатов рассчитывается среднее значение ОП в лунках с отрицательным контролем (ОП ср.К"). Качество тест-систем, как пример тест-системы фирмы "Vector-Best", считается удовлетворительным, если ОП ср.К" не превышает 0,250 о.е., а среднее значение ОП положительного контрольного образца (ОП ср.К"1") не менее чем в 3 раза превышает ОП ср.К" .Значение ОП контроля поглощения раствора ТМБ не должно превышать 0,1 о.е. Для оценки результатов и последующей интерпретации анализа (табл. 2) вычисляется контрольный уровень ОП критической:
Антитела других возбудителей определяли и оценивали этим же способом, но с использованием других тест-систем и с другими значениями ОП.
ПЦР плазмы крови проводили в пробирках 0,5 мл типа "Эппендорф" на амплификаторах "Терцик" ("ДНК-технология", Москва).
Подготовка к работе осуществлялась следующим образом: в пробирку 1,5 мл вносили 100 мкл плазмы крови больного, 400 мкл лизирующего реагента, перемешивали и термостатировали при 65С 5 минут.
Затем добавляли 20 мкл суспензии сорбента NucleoS, перемешивали, потом центрифугировали 10 сек. при 5000 об/мин и удаляли супернатант при помощи водоструйного насоса. В пробирку добавляли 800 мкл солевого буфера, центрифугировали 10 сек. при 5000 об/мин, осторожно убирали супернатант. К осадку добавляли 1 мл солевого буфера, перемешивали, центрифугировали 10 сек. при 5000 об/мин, убирали супернатант. Затем осадок просушивали и добавляли к нему 50-100 мкл исходного ЭкстраГена. Пробирку термостатировали 5 мин при 65С, затем центрифугировали 1 мин при 10000 об/мин. Переносили чистый супернатант (без гранул ЭкстраГена и NucleoS ) в чистую пробирку для постановки ПЦР.
Реакция осуществлялась следующим образом - брали 10 мкл готовой для анализа ДНК пробы и две контрольные пробирки (красную-К , синюю— К"), во все пробирки добавили 10 мкл ПЦР растворителя, в синюю и красную пробирки по 10 мкл исходного супернатанта ЭкстраГена, свободного от гранул ионообменников. Добавляли во все пробирки 20 мкл минерального масла для предотвращения испарения реакционной смеси. Вся реакция ашшфикации состояла из 46 циклов. Реакция амплификации проводилась по следующей схеме: 95С - 120", 62С -60", 74С -120" -1 цикл, 95С - 60", 60С -50", 74С -60" -1 цикл, 95С - 30", 58С -20", 74С -40" - 43 циклов и 74С -120" — 1 цикл. Результаты реакции оценивали в электрофорезе в 8% полиакриламидном геле с последующей окраской бромистым этидием и визуализировали в ультрафиолете.
Детекция результата анализа проводилась путем сопоставления материалов 2 пробирок: в пробе из пробирки маркированной (+) светящаяся полоса ДНК определенного размера (так, например, herpes simplex virus 1 type (HSV 1)-331, herpes simplex virus 2 type (HSV 2) - 432, herpes simplex virus 1/2 type (HSV 1/2) - 436, human cytomegalovirus (HCMV) - 451). В пробе маркированной (-) полоса ДНК должна отсутствовать, наличие светящейся полосы желтого цвета строго на уровне полосы положительного контрольного образца свидетельствует о положительной реакции образца на возбудитель. Наличие светящейся полосы желтого цвета в отрицательном контрольном образце на уровне положительного контроля следует рассматривать как результат контаминации. При этом результаты анализа обязательно аннулируются. Наличие светящихся полос выше или ниже полосы положительного образца может быть результатом неспецифической амплификации, которые не должны быть приняты во внимание (рис.1).
Клинико-эпидемиологическая характеристика герпесвирусной инфекции на фоне ВИЧ-инфицирования
В работе при анализе заболеваемости ВИЧ инфекции с ГВИ было выявлено из общего количества ВИЧ-инфицированных (752) 50 больных с герпесвирусной инфекцией (рис.21).
Наиболее чаще у ВИЧ/СПИД-больных встречаются ГВИ, вызванные ВПГ 1,2 (на долю которых приходится 36%); ЦМВ (36%); а также их сочетание (24%). Вирус опоясывающего герпеса встречается лишь в 4% случаев.
Клинические проявления ГИ отличается значительным разнообразием. Они зависят от локализации патологического процесса и его распространенности, состояния иммунной системы больного и антигенного типа вируса. Более тяжелое течение заболевания отмечается после первичного инфицирования, когда отсутствуют специфические антитела к вирусу герпеса, у детей раннего возраста с незрелой иммунной системой, при иммунодефицитных состояниях (ИДС) различного генеза, в т.ч. при СПИДе (Исаков В.А., Сафронова М.М., Аспель Ю.В. 1999г., Рахманова А.Г., Голубев Д.Б. и другие 1997г.). Так, клинические проявления инфекции, протекавшие ранее латентно, могут быть тяжелыми на фоне ИДС, с тенденцией к генерализации и развитию осложнений, которые подчас определяют течение и исход основного заболевания, создавая угрозу для здоровья и жизни пациента.
При анализе клинических стадий ВИЧ-инфицированных больных с клиническими проявлениями герпесвирусньгх инфекций видно, что большинство из них 78% находятся на 2 стадии (стадия 2Б - 52%, стадия 2В -26%) по классификации В.И.Покровского 1989г (рис.22).
В последние годы показано, что активация ГВИ у ВИЧ-инфицированных больных помимо общего усиления репликации ВИЧ происходит повышенное выделение вирионов ВИЧ в местах герпетических кожных высыпаний, которые не всегда имеют характерный для герпеса вид (Schacker Т., Ryncarz A.J, 1998; Mostad S.B., Kreiss J.K., 2000). Наиболее важно то, что при этом могут образовываться частицы смешанного фенотипа - вирионы ВИЧ, "одетые" в оболочку герпеса. Такие "закамуфлированные" частицы в отличие от обычных вирионов ВИЧ способны инфицировать различные типы клеток, включая эпителиальные клетки и фибробласты, давая при этом продуктивную ВИЧ-инфекцию, т.е. иначе говоря, становится возможным заражение ВИЧ через контакты с кожей и слизистой оболочкой (Calistri A. Et al., 1999).
В связи с актуальностью вопроса мы проанализировали данную группу больных. Из 50 ВИЧ-инфицированных больных с сочетанным течением герпесвирусной инфекции и вируса иммунодефицита человека 12 получали лечение в НГИБ. Среди госпитализированных преобладали мужчины - 58,3%. Средний возраст у мужчин — 29,7 лет, среди женщин — 27,6 лет.
При сравнительной оценке тяжести заболевания ВИЧ и герпетической инфекции на фоне ВИЧ-инфицирования видно (табл.21), что герпесвирусная инфекция чаще выявлялась у ВИЧ-инфицированных в стадии ЗБ, то есть преобладало число больных с более тяжелыми формами и прогрессирующем течением ВИЧ-инфекции.
По литературным данным известно, что вирусы герпеса активируют геном вируса иммунодефицита человека, находящийся в стадии провируса, и являются кофактором прогрессирования ВИЧ-инфекции и СПИДа (Исаков В.А. и другие, 2001г.; Новик А.А., Цыган В.Н. и соавторы, 2001г.). Также принимая во внимание тот факт, что к 7-летнему возрасту инфицированность населения герпесвирусами составляет 95-99%, можно предположить, что первичная активация ранее персистирующего вируса герпеса происходит непосредственно вирусом иммунодефицита человека, либо через вызванную им иммуносупрессию. Активация же герпетической инфекции способствует прогрессированию ВИЧ/СПИД-инфекции. В некоторых случаях возможна реинфекция новыми серотипами герпесвирусов, которые в данном случае служат кофактором активации ВИЧ-инфекции и прогрессировании основного заболевания.
Данная группа больных проанализирована в сравнительном аспекте имеющихся двух классификаций ВИЧ/СПИД инфекции. В соответствии с клинической классификацией ВИЧ-инфекции В.И.Покровского, 1989г., 3 пациента (25%) - находятся в стадии 2Б, 2 пациента (16,6%) - в стадии ЗА, 5 пациентов (41,8%) - в стадии ЗБ, 2 пациента (16,6%) - в стадии ЗВ (рис.23).
Оценка иммунного статуса с помощью моноклональных антител у ВИЧ-инфицированных больных
В таблице 25 представлены данные показателей клеточного иммунитета у ВИЧ-инфицированных и практически здоровых лиц, установлено, что общее содержание лейкоцитов в 1 мкл крови существенно не отличается между ВИЧ-инфицированными и здоровыми лицами (р 0,05). Абсолютно содержание лимфоцитов и CD3 клеток в 1 мкл крови, такасе существенно не отличается от таковых у здоровых лиц (р 0,05), тогда как содержание CD4-iaieTOK, отвечающих за хелперную субпопуляцию лимфоцитов, достоверно снижено по сравнению с контрольной группой (р 0,05). Подобные результаты получены в других исследованиях (Рахманова А. Г. и другие, 1995г., Покровский В. В.,
Ермак Т. Н. и соавторы, 2003г.). Отмечается также достоверное отличие содержания СБ8-клеток у ВИЧ-инфицированных и здоровых лиц, однако, это отличие связано с повышением уровня указанной субпопуляции лимфоцитов.
Соответственно регуляторный индекс CD4/CD8 значительно снижен по сравнению с нормой у ВИЧ-инфицированных (р 0,001), что также не противоречит данным других исследований (Покровский В. В., Ермак Т. Н. и соавторы, 2003г.).
Показатели гуморального иммунитета (табл.26), в частности уровни IgM и IgG, у ВИЧ-инфицированных не отличается от таковых показателей у здоровых лиц (р 0,05), тогда как содержание IgA почти в 2 раза выше у ВИЧ-инфицированных пациентов по сравнению с контрольной группой (р 0,001). Выявлено также более высокое содержание циркулирующих иммунных комплексов по сравнению с контрольной группой (р 0,001). Следовательно, полученные данные свидетельствуют о вовлечении в инфекционный процесс CD4-icneTOK, то есть кластеров являющихся мишенями для вируса иммунодефицита человека (Рахманова А.Г. и др. 1995г., Покровский В. В., Ермак Т. Н. и соавторы, 2003г.). Повышение уровня секреторного IgA свидетельствует об иммунном ответе на уровне местного, локального противоинфекционного иммунитета, однако напряженность его недостаточна, чтобы локализовать возбудителя или элиминировать его из организма.
Накопление же ЦИК в организме ВИЧ-инфицированных свидетельствует о нарушении функции всех звеньев иммунного ответа и свойств самого вируса: нарушение фагоцитарной функции клеток, участвующих в поглощении ЦИК, избыточное поступление в кровь вирусных антигенов, недостаточная активность системы комплемента и другие факторы.
Таким образом, установлено снижение основных показателей клеточного иммунитета, особенно CD4 фенотипа лимфоцитов. Отмечается увеличение содержания IgA и циркулирующих иммунных комплексов. Выявленные изменения в иммунном статусе разной степени выраженности у больных в наблюдаемой группе могут служить критерием оценки тяжести, течения и прогноза заболевания.
В наших исследованиях произведено сравнение иммунологических показателей в 3 группах больных: герпесвирусная инфекция, ВИЧ-инфекция и герпесвирусная инфекция на фоне ВИЧ-инфицирования. В качестве сравниваемой контрольной группы явились практически здоровые лица (табл. 27, 28). При анализе сравниваемых иммунологических данных, выявлены достоверные изменения большинства показателей в указанных группах больных по сравнению с аналогичными показателями у здоровых лиц (PN 0,001). Такая же закономерность выявлена в показателях общих и CD3 лимфоцитов (PN 0,001). Количество CD4 клеток достоверно снижено по сравнению с их содержанием у практически здоровых лиц во всех сравниваемых группах.
Содержание субпопуляции лимфоцитов CD8, представляющих преимущественно цитотоксические клетки, достоверно снижено только лишь в группе больных с герпетической инфекцией, тогда как в группе ВИЧ-инфицированных содержание CD8-KneTOK достоверно выше таковых в контрольной группе. Фенотипы этих клеток не являются мишенью для вируса иммунодефицита человека и их повышение связано не с вовлечением в патологический процесс, а с более низким содержанием других фенотипов клеток, то есть повышение CD8 клеток можно расценивать как относительное повышение. При сочетанном течении ВИЧ и герпес инфекции, когда присутствуют в организме два конкурирующих вируса, содержание CD8 клеток достоверно не отличается от аналогичных показателей здоровых лиц (PN 0,05).
![Клинико-эпидемиологическая характеристика ВИЧ-инфекции и поведенческих реакций у ВИЧ-инфицированных в Новгородской обл. [Электронный ресурс]](/i/i/4301/189413.png "Клинико-эпидемиологическая характеристика ВИЧ-инфекции и поведенческих реакций у ВИЧ-инфицированных в Новгородской обл. [Электронный ресурс] Ткаченко Татьяна Николаевна")
![Клинико-иммунологические особенности ВИЧ-инфекции, сочетанной с туберкулезом [Электронный ресурс]](/i/i/4320/208008.png "Клинико-иммунологические особенности ВИЧ-инфекции, сочетанной с туберкулезом [Электронный ресурс] Хамзина Рузалия Вагизовна")
