Содержание к диссертации
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 5
ВВЕДЕНИЕ 7
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. РЕПРОДУКТИВНЫЕ ГОРМОНЫ КАК РЕГУЛЯТОРЫ
ИММУННЫХ РЕАКЦИЙ 12
Иммунобиология беременности 12
Основные гормоны и белки беременности как регуляторы иммунных реакций 21
Биологическая характеристика основного гормона беременности — хорионического гонадотропина 25
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 39
Объекты исследования 39
Гормональный препарат 39
Основные иммунологические методы 40
Экспериментальные подходы в системе in vivo. 46
Экспериментальные подходы в системе in vitro ,...53
Статистический анализ результатов. 54
Глава 3. ВЛИЯНИЕ ХГ НА ОДНОВРЕМЕННОЕ ФОРМИРОВАНИЕ
ГУМОРАЛЬНЫХ И КЛЕТОЧНООПОСРЕДОВАННЫХ ИММУННЫХ
РЕАКЦИЙ И ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ
ЛЕЙКОЦИТОВ 55
Влияние ХГ на уровень половых стероидов в условиях антигенной нагрузки 55
Воздействие ХГ на одновременное формирование гуморальных и клеточноопосредованных иммунных реакций на различных этапах иммуногенеза 59
3.3. Влияние XT на изменение популяционного состава, фагоцитарной активности лейкоцитов крови и перитонеальной полости при одновременном формировании гуморальных и клеточноопосредованных иммунных
реакций 65
Глава 4. ВЛИЯНИЕ ХГ НА ФОРМИРОВАНИЕ ВТОРИЧНОГО
ИММУННОГО ОТВЕТА И ПЕРВИЧНУЮ РЕАКЦИЮ ГЗТ, А ТАКЖЕ
ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ 78
4.1. Влияние ХГ на формирование вторичного иммунного ответа на фоне
первичной реакции ГЗТ '.,. 78
4.2. Влияние ХГ на изменение популяционного состава, фагоцитарной
активности лейкоцитов крови и перитонеальной полости при формировании
вторичного иммунного ответа 81
Глава 5. ВЛИЯНИЕ ХГ НА ФОРМИРОВАНИЕ ГУМОРАЛЬНЫХ
ИММУННЫХ РЕАКЦИЙ И ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ
ЛЕЙКОЦИТОВ 85
5.1. Воздействие ХГ на формирование гуморальных иммунных реакций на
различных этапах иммуногенеза 85
5.2. Влияние ХГ на изменение популяционного состава, фагоцитарной
активности лейкоцитов крови и перитонеальной полости при формировании
гуморальных иммунных реакций на различных этапах иммуногенеза 90
Глава 6. ВЛИЯНИЕ ХГ НА ФОРМИРОВАНИЕ
КЛЕТОЧНООПОСРЕДОВАННЫХ ИММУННЫХ РЕАКЦИЙ И
ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ 100
6.1. Воздействие ХГ на формирование клеточноопосредованных иммунных
реакций на различных этапах иммуногенеза 100
6.2. Влияние ХГ на изменение популяционного состава, фагоцитарной
активности лейкоцитов крови и перитонеальной полости при формировании
клеточноопосредованных иммунных реакций 103
Глава 7. ВЛИЯНИЕ ХГ НА ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И ПЕРИТОНЕАЛЬНОИ
ПОПОСТИ IN VIVO И IN VITRO 112
7.1. Влияние ХГ на фагоцитарную активность лейкоцитов и популяционный
состав у неяммунизированных животных in vivo 112
7.1. Роль Са -каналов L-типа и циклооксигеназы в активации
фагоцитирующих клеток и их модуляция ХГ in vitro 115
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 122
ВЫВОДЫ 132
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 133
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АОК - антителообразующие клетки
Ац - аденилатциклаза
V АКТГ - адренокортикотропный гормон
цАМФ - циклический аденозинмонофосфат
АТФ - аденозинтрифосфат
АФП - альфа-фетопротеин
ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа
ГТФ - гуанозинтрифосфат
ЛГ - лютеинизирующий гормон
ЛГ/ХГ-Р - рецептор для лютеинизирующего гормона и хорионического
гонадотропина
ЛЗХЛ - люминолзависимая хемилюминесценция
НАДФ - никотинамидадениндинуклеотид фосфат
ПГЕ2, nrF2a - простагландины Е2 и F:a
ПК-А - протеинкиназа А
ПЛ - плацентарный лактоген
ПФ - процент фагоцитоза
РБТЛ-реакция бласттрансформации лимфоцитов
РГ - рилизинг гормон
ФГА - фитогемагглютинин
ФДЭ - фосфодиэстераза
ФИ - фагоцитарный индекс
* ФЛС - фосфолипаза С
ФСГ - фолликулостимулирующий гормон
щ ФЧ - фагоцитарное число
ФЭБ - формалинизированные эритроциты барана
ХАКТГ - хорионический АКТГ
ХГ - хорионический гонадотропин
ХТТГ - хорионический тиреотропный гормон
ЦОГ - циклооксигеназа
ЦТЛ - цитотоксические Т-лимфоциты
ЭБ - эритроциты барана
Р ЯСК - ядросодержащие клетки
Con А - конканавалин А Е2 - эстрадиол
GM-CSF - гранул оцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор Ig - иммуноглобулин IL—интерлейкин INFy - гамма-интерферон KIR - киллер ингибирующий рецептор МНС - главный комплекс гистосовместимости NK - естественные клетки киллеры Рг - прогестерон
TGF - трансформирующий рост фактор Th — Т-хелпер TNF-a - фактор некроза опухолей альфа
Введение к работе
Актуальность проблемы. Процесс гестации является феноменом естественной трансплантации в силу того, что внезародышевые оболочки и эмбрион экспрессируют антигены гистосовместимости отцовского гаплотипа [127, 175], которые могут выступать мишенью для иммунокомпетентных клеток матери. Наличие гормонов и факторов, специфичных для беременности, позволяет блокировать афферентные, и эфферентные звенья иммунного реагирования клеток матери на фетоплацентарную единицу [27, 63, 67, 74]. Наиболее важным гормоном плаценты, протектирующим развитие беременности, является хорионический гонадотропин (ХГ) [1, 20]. ХГ регулирует секрецию половых стероидов, изменяя при этом эндокринное зеркало, и определяет иммуносупрессию в период беременности [70, 71, 168, 216]. Показано, что ХГ в культуре лимфоидных клеток угнетает реакцию бласттрансформации лимфоцитов на любые митогены [80, 271]. Такое же действие гормона фиксируется и в смешанной культуре лимфоцитов [93, 234]. Также выявлено, что ХГ может модулировать уровень антителообразующих клеток (АОК) в селезенке [31, 168] и поликлональный синтез IgA, IgM, IgG только в лимфоцитах женщин [157].
Показано, что системные материнские ответы при беременности относятся преимущественно к гуморальным [143, 130], поскольку клеточноопосредованные иммунные реакции сопровождаются высокой продукцией провоспалительных цитокинов, которые могут оказывать цитотоксические эффекты на клетки фетоплацентарного комплекса, что, как правило, заканчивается резорбцией эмбриона [175]. Однако ТЫ-ответы необходимы для противоинфекционной защиты. Поэтому ситуацию при беременности рассматривают как колеблющееся равновесие между двумя типами иммунных реакций, которое может смещаться в любом направлении [119]. Фагоцитирующие клетки также играют центральную роль в иммунорегуляторных механизмах в период беременности, поскольку активно
инфильтрируют ткани репродуктивного тракта и выступают в качестве мишени для ХГ [101, 252, 313]. Показано, что ХГ участвует в контроле функциональной активности мононуклеарных фагоцитов [153, 172, 280].
Цель работы. Изучить влияние хорионического гонадотропина на адаптивные иммунные реакции и фагоцитарную активность лейкоцитов.
Основные задачи:
Изучить иммуномодулирующую активность ХГ на процессы одновременного формирования первичных гуморальных и клеточноопосредованных иммунных реакций с учетом этапов дифференцировки клеток.
Исследовать влияние хориогонина на формирование вторичного гуморального иммунного ответа на фоне индукции первичной реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ).
Оценить влияние ХГ на процессы формирования первичного гуморального иммунного ответа и реакцию ГЗТ с учетом этапов дифференцировки клеток.
Изучить механизмы действия ХГ на фагоцитарную активность клеток периферической крови и макрофагов перитонеальной полости при одновременном формировании адаптивных иммунных реакций.
Научная новизна работы. Новыми являются данные о способности ХГ и индуцированного им стероидного фона при индукции как первичного, так и вторичного гуморальных иммунных ответов на фоне реакции ГЗТ смещать тип иммунного реагирования в сторону гуморального, параллельно активируя фагоцитарную активность лейкоцитов. При индукции только гуморальных реакций ХГ стимулирует формирование АОК селезенки и фагоцитарную активность лейкоцитов вне зависимости от этапа дифференцировки иммунокомпетентных клеток. При формировании
клеточных иммунных реакций хориогонин усиливает выраженность реакции ГЗТ вне зависимости от этапа дифференцировки клеток, параллельно угнетая фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов. Показано, что иммунодепрессивный эффект ХГ на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови и макрофагов перитонеальной полости в равной степени зависит от активности циклооксигеназы (ЦОГ) и функциональности
Са -каналов L-типа.
Теоретическая и практическая значимость. В теоретическом плане работа расширяет представления о контроле иммунной системы основным гормоном беременности, раскрывая новые аспекты механизмов иммуномодулирующей активности ХГ. Показана зависимость эффектов ХГ от половых стероидов. Выявлено, что ХГ способствует доминированию гуморальных иммунных реакций над клеточными. Продемонстрировано, что ХГ и индуцированные им половые стероиды, стимулируя гуморальные реакции, повышают фагоцитарную активность лейкоцитов. Напротив, при активации реакции ГЗТ, введение ХГ подавляет фагоцитарную активность лейкоцитов. In vitro угнетающее действие ХГ на фагоцитирующие клетки связано с активностью ЦОГ и Са2+-каналов L-типа. Полученные результаты необходимо учитывать при анализе патологических состояний, сопровождаемых эктопическим синтезом ХГ, в гормональной терапии крипто рхизма и экстракорпоральном оплодотворении. Результаты исследований внедрены в учебный процесс на кафедре микробиологии и иммунологии Пермского государственного университета и кафедре фармакологии с курсом клинической фармакологии и клинической иммунологии Пермской государственной фармацевтической академии.
Положения, выносимые на защиту:
1. ХГ и индуцируемые им половые стероиды при одновременном формировании гуморальных и клеточноопосредованных иммунных
реакций способствует развитию гуморального типа иммунного ответа, с одновременной активацией процессов фагоцитоза. Данный эффект гормона зависит от его дозы и этапа иммуногенеза.
При индукции вторичного гуморального иммунного ответа на фоне первичной реакции ГЗТ ХГ дозозависимо активирует вторичный ответ и фагоцитарную активность нейтрофилов, не влияя на реакцию ГЗТ и угнетая фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов.
ХГ независимо от этапа дифференцировки клеток активирует гуморальные иммунные реакции. Фагоцитарная активность лейкоцитов крови и перитонеальной полости стимулируется гормоном вне зависимости от его дозы и этапа дифференцировки иммунокомпетентных клеток.
При индукции клеточных иммунных реакций ХГ усиливает выраженность реакции ГЗТ вне зависимости от этапа дифференцировки клеток, параллельно угнетая фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов.
Введение ХГ мышам-самкам сопровождается повышением эндогенных половых стероидов, что непосредственно связано с эффектами гормона, реализуемыми в системе in vivo,
ХГ не влияет на фагоцитарную активность лейкоцитов у неиммунизированных животных. Механизмы фагоцитоз-ингибирующего действия ХГ в системе in vitro зависят от активности ЦОГ и Са2+-каналов L-типа.
Апробация результатов исследований. Результаты представлены на VI и VII Всероссийских научных конференциях "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, 2002-2003); Межрегиональной конференции "Современные проблемы экологии, микробиологии и иммунологии" (Пермь, 2002); II Конференции иммунологов Урала (Пермь, 2002); II Научной конференции с международным участием "Эндокринная регуляция
физиологических функций в норме и патологии" (Новосибирск, 2002); 7-ой Пущинской школе-конференции "Биология-наука XXI века" (Пущино, 2003); III Конференции иммунологов Урала (Челябинск, 2003). По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 168 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, пяти глав результатов собственных исследований, заключения и выводов. Работа иллюстрирована 34 таблицами и 18 рисунками. Список цитируемой литературы включает 328 наименований.
