Введение к работе
з
Актуальность проблемы
Растворимые формы (s-формы) мембранных антигенов клеток иммунной системы выполняют специфические регулирующие функции, выражающиеся чаще всего в ограничении иммунного ответа, и образуются за счет протеолити-ческого шеддинга или альтернативного сплайсинга матричной РНК. Сывороточный уровень отдельных растворимых антигенов является мониторинговым показателем течения патологического процесса при заболеваниях различной этиологии. Однако ограниченный объем информации о роли растворимых форм мембранных антигенов в патогенезе бактериальных инфекций определяет актуальность изучения их количественного содержания при различных патологиях бактериального генеза.
В настоящее время бактериальные инфекции урогенитального тракта занимают одно из ведущих мест в инфекционной патологии человека. Наряду с неспецифическими уретритами негонококковой природы другим широко распространенным в последние годы инфекционным заболеванием мочеполовой системы человека является урогенитальный хламидиоз, приводящий к стойкому нарушению репродуктивной функции. По данным ВОЗ урогенитальным хламидиозом ежегодно в мире заболевает около 89 млн. человек. Особенностями хламидиоза являются способность его возбудителей к персистенции в цитоплазме эпителиальных клеток, частое формирование хронических форм, развитие восходящей и диссеминированной инфекции, а также отсутствие во многих случаях выраженной клинической симптоматики.
К числу распространенных острых инфекционных заболеваний человека относится также внегоспитальная пневмония бактериальной этиологии — инфекция нижних отделов легких. За год в России пневмонией заболевают 1,5 млн. человек.
Урогенитальный хламидиоз, неспецифический уретрит и внебольничная пневмония - бактериальные инфекции, возбудители которых характеризуются
принципиально различным механизмом паразитирования: внутриклеточным при хламидиозе и внеклеточным при неспецифическом уретрите и пневмонии. Это предполагает различную степень участия тех или иных звеньев иммунного ответа в реализации защитных реакций организма на данные патогены. Исследование количественного содержания растворимых, форм мембранных антигенов клеток иммунной системы в сыворотке периферической крови при вышеприведенных бактериальных инфекциях представляется необходимым для понимания иммунопатогенетических механизмов их развития и имеет как теоретическое, так и практическое значение.
Цель исследования
Исследовать при бактериальных инфекциях различной природы характер изменения сывороточного уровня растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы, относящихся к разным функциональным группам клеточных белков.
Задачи
-
Разработать иммуноферментные методы определения растворимых форм суммарной и олигомерной фракций CD25, CD54 антигенов и олиго мерно го (димерного) CD38 антигена.
-
Провести сравнительный анализ сывороточного уровня растворимых антигенов адгезии CD18, CD38, CD50 и CD54 при урогенитальном хламидиозе, неспецифическом уретрите и внегоспитальной пневмонии.
-
Изучить изменение сывороточного уровня растворимого CD25 антигена при вышеприведенных бактериальных инфекциях.
-
Исследовать при этих же инфекциях сывороточное содержание растворимых молекул HLAI и II классов.
-
Оценить характер соотносительного изменения сывороточного содержания суммарных и олигомерных фракций растворимых CD25, CD38 и CD54 антигенов.
Научная новизна
Показано, что урогенитальный хламидиоз характеризуется повышением сывороточного уровня SHLA-DR антигенов на фоне нормального содержания sHLA-I молекул. Установлено, что хламидийная инфекция сопровождалась также увеличением содержания sCD18 и sCD50 антигенов. При урогениталь-ном хламидиозе обнаружено повышение сывороточного уровня суммарной и олигомернои фракций sCD25 и sCD54 антигенов и вСБЗв-димера. Продемонстрировано смещение соотносительного содержания мономерной и олигомернои форм sCD54 и sCD38 антигенов в сторону последней. Выявлен дисбаланс в содержании растворимых форм антигенов адгезии, выражающийся в многократном увеличении содержания sCD54 антигена, особенно его олигомернои формы, при сравнительно небольшом повышении уровня sCD18 антигена, чья мембранная изоформа входит в состав LFA-1 - рецептора CD54 антигена.
При неспецифическом уретрите выявлено достоверное снижение сывороточного уровня sCD18, sCD50 и sCD54 антигенов и зСБ54-олигомера. Показано, что неспецифическое воспаление урогенитального тракта сопровождается статистически значимым снижением уровня sCD25 антигена, а также повышением содержания sHLA-I молекул.
Установлено, что при внегоспитальной пневмонии происходит снижение сывороточного уровня sCD18, sCD25 и sCD50 антигенов, а также суммарной фракции sCD38 антигена. Наиболее выраженное падение содержания данных антигенов, а также снижение суммарной фракции sCD54 антигена выявлено при тяжелой, полисегментарной, осложненной пневмонии или пневмонии с развитием остаточных изменений. Обнаружено, что достоверное понижение уровня sHLA-DR антигенов на фоне нормального содержания растворимых молекул HLA I класса ассоциировано с тяжелой, полисегментарной или осложненной пневмонией.
(,) sHLA-I, sHLA-DR, sCD18, sCD50, sCD54, sCD38, sCD25 - растворимые формы молекул главного комплекса гистосовместимости I и II классов, CD 18, CD50 (ICAM-3), CD54 (ICAM-1), CD38, CD25 антигенов, соответственно
Практическая значимость работы
С использованием моноклональных и поликлональных антител разработаны иммуноферментные методы определения антигенов CD25, CD54 (суммарной и олигомерной формы) и вСБЗв-димера в сыворотке крови. На изобретение «Способ определения растворимой формы димера CD38 антигена в сыворотке крови человека» получена приоритетная справка № 2002132789 от 05.12.02. Методы применимы для изучения роли этих белков в молекулярных механизмах иммунных реакций, а также для определения дифференциально-диагностической и прогностической значимости уровня растворимых форм данных антигенов при различных заболеваниях. Показано, что низкий уровень большинства исследованных антигенов при внегоспитальной пневмонии является неблагоприятным фактором, сопутствующим отягощенному течению заболевания.
Положения, выносимые на защиту
-
Разработаны иммуноферментные методы определения относительного содержания растворимых форм суммарной и олигомерной фракций CD25, CD54 антигенов и олигомерного CD38 антигена в сыворотке крови.
-
При бактериальных инфекциях разной природы выявлено изменение сывороточного содержания растворимых форм CD18, CD25, CD38, CD50, CD54, HLA-DR антигенов и молекул HLAI класса. Урогенитальный хламидиоз характеризуется повышением среднего сывороточного уровня большинства тестированных антигенов, неспецифический уретрит и внебольничная пневмония - понижением.
Апробация работы
Результаты работы представлены на Научно-практическом симпозиуме «Рациональное применение лабораторных тестов в диагностике и мониторинге наиболее распространенных форм патологии», Национальные дни лабораторной медицины России - 2002 (Москва, 2002), Межрегиональной научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения акад. АМН СССР СП. Карпова
(Томск, 2003), 13-ом Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (С.-Петербург, 2003), IV Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные аспекты инфекционной патологии и деятельности госсанэпидслужбы» (Омск, 2003), П-ом Всероссийском симпозиуме «Тест-методы химического анализа» (Саратов, 2004), Научной конференции «Новые технологии в профилактике, диагностике, эпиднадзоре и лечении инфекционных заболеваний», посвященной 75-летию ННИИЭМ (Н.Новгород, 2004), Российской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекцией» (С.-Петербург, 2004).
Апробация диссертации состоялась на расширенной межлабораторной конференции Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. акад. И.Н. Блохиной 16 ноября 2004 года.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ.
Структура и объем диссертации
Диссертационная работа в объеме 158 листов состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 14 рисунками и 22 таблицами. Библиографический указатель включает 269 источников литературы (33 отечественных и 236 иностранных).
![Динамика плазменно-растворимых антигенов системы HLA при трансплантации аллогенных гемопоэтических клеток больным гемобластозами [Электронный ресурс]](/i/i/4353/180098.png "Динамика плазменно-растворимых антигенов системы HLA при трансплантации аллогенных гемопоэтических клеток больным гемобластозами [Электронный ресурс] Голубенко Рамиля Ахметовна")
