Содержание к диссертации
Стр.
ВВЕДЕНИЕ 6
Глава I. ЖГИГЛОБУЛИНЫ, ИХ РОЛЬ В ГЕНЕЗЕ АЛЛЕРШЧЕСКИХ
РЕАКЦИЙ И МЕТСДЫ ИВДИКАЦИИ (обзор литературы) 10
Понятие об аллергии и аллергических реакциях 10
Аллергизирущее влияние сывороточных препаратов на организм 13
Условия образования, характеристика и свойства антиглобулинов 16
Роль антиглобулинов в побочных реакциях анафилактического (аллергического) типа 23
Лабораторные методы определения вторичных антител 26
Тесты для определения сенсибилизации организма человека к чужеродным сывороточным белкам и предупреждения шоковых состояний 35 I.6.I. Провокационные пробы, связанные
с введением материала в организм
(биологические методы). 35
1.6.2.. Тесты, не связанные с внесением
в организм аллергена 37
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 39
Объем исследований 39
Материалы для конструирования эритроцитар-ного диагностикума 39
Материалы исследования 42
Стр.
Сывороточные препараты ддя иммунизации 42
Сыворотки крови от здоровых людей 43
2.3.3. Сыворотки крови от больных 43
2.4. Методы исследованияv 44
Стандартизация эритроцитарной взвеси 44
Серологические методы 45
Постановка реакции непрямой гемаг-глютинации (макровариант) 45
Постановка реакции торможения непрямой гемагглютинации - РЖГА (макровариант) 47
Постановка РНГА, РТНГА (микроварианты) 48
Постановка реакции преципитации
в агаре (РИА) 49
2.4.2.5. Постановка реакции связывания
комплемента (РСК) 49
2.4.3. Биохимические методы 49
2.4.3.1. Фракционирование сывороточных
белков по молекулярной массе 49
2.4.4. Биологические методы 50
Активная анафилаксия 50
Общая пассивная анафилаксия 50
Феномен Овери 51 2.4.4.4.. Феномен Прауснитца-Кюстнера 52
Феномен "нейтрализации антиглобулинов в организме животных 52
Постановка кожной пробы 53
_ 4 -
Стр.
2.5. Статистическая обработка результатов 53
Глава 3. КОНСТРУИРОВАНИЕ СУХОГО ГЛОБУЛИНСВОГО ЭРИТРСЦИ-
ТАРНОГО ДИАПЮСТИКУМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ
К БЕЛКОВЫМ ПРЕПАРАТАМ 56
Клеточная основа диагностикума 57
Использование формальдегида для Фиксации эритроцитов 58
Обоснование рабочей дозы таннина для
дубления эритроцитов 61
3.4. Определение сенсибилизирующей дозы белка,
рН среды и температурного режима 65
Изучение состава защитных сред, используемых в качестве наполнителя при лиофилизации эритроцитов, и высушивание препарата 70
Определение остаточной влажности диагностикума 75
3.7. Специфическая активность диагностикума 75
Глава 4. СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДА ПРИГОТОВЛЕНИЯ АНТИ-
ГЛОБУЛИНШЬЗХ СЫВОРОТОК ДЛЯ РИГА 83
Сравнительная оценка различных схем иммунизации 83
Обоснование оптимальных схем иммунизации 88
Изучение специфической активности антигло-булиновых сывороток в серологических реакциях 98
Глава 5. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ И КЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ДИАГ
НОСТИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ СУХОГО ГЛОБУЛИНШОГО
ЭРИТРЩИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА 103
Стр.
Информативность кожных проб и РИГА при выявлении сенсибилизации организма животного лошадиными сывороточными препаратами 106
Исследование крови людей в РИГА на наличие антител к сывороточным белкам лошади 109
Зависимость между показателями кожных проб
и наличием антиглобулинов у людей ИЗ
Глава 6. ЭШГЕШЕНШЫЮЕ ИЗУЧЕНИЕ РОЖ АНТИГЛОБУЖОЗ
В РАЗВИТИИ АНАФИЛАКТИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ НА ЧЖЕРОДНЬМ
БЕЛОК 123
Анафилактогенность сывороток больных, леченных гетерогенными белковыми препаратами 124
Обоснование порогового (шокового) уровня антиглобулинов 129
Изучение анафилактогенных свойств сывороток рожениц и их детей 135
6..4. Тест "нейтрализации" антиглобулинов по
А.М.Безредка 138
Клинические наблюдения 144
Феномен Прауснитца-Кюстнера 145
Кожно-оенсибилизирукщие свойства антиглобулинов 148
Иммунохимичеекая характеристика антиглобулинов 150
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 155
ВЫВОДЫ 164
РЖШЕНДАЦИИ ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗДРАВООХРАНЕНИЮ 165
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК ' 166
Введение к работе
Актуальность проблемы. Применение иммунных гетерогенных сывороток и приготовленных из них препаратов сыграло исключительно важную роль в профилактике и терапии инфекционных заболеваний и продолжает оставаться актуальным направлением современного практического здравоохранения. Однако пассивная иммунизация сопровождается развитием ряда патологических реакций. К ним относятся сывороточная болезнь и анафилактический шок, являющийся наиболее опасным осложнением при применении сывороточных препаратов. По данным Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов (ГНИСК) им. Л.А.Тарасовича, в 1952 году было зарегистрировано 2 случая смерти от введения лошадиной сыворотки (А.Т.Кравченко, 1964), В 1968 году А.ТЛСравченко и др, привели сведения о том, что 10$ населения средней полосы Советского Союза сенсибилизировано к лошадиным сывороточным препаратам. Необходимо отметить, что с каждым годом число лиц, получивших чужеродные сывороточные препараты, увеличивается, в связи с чем возрастает и число сенсибилизированных. Осложнения на введение гетерогенных сывороточных препаратов могут возникнуть у чувствительных лиц не только на повторное их применение. Описаны случаи возникновения осложнений типа анафилактического шока при первичном введении сыворотки у лиц, страдающих различными аллергическими заболеваниями и проявляющими спонтанную чувствительность к лошадиному белку (СЯ.Флекс-нер, 1961). По данным мировой литературы, 1/3 лиц, погибших от анафилактического шока при первичном введении гетерогенной сыворотки, страдали бронхиальной астмой (С.Ю.Каганов, 1962).
Сенсибилизация к препаратам из крови лошади в настоящее время определяется только с помощью метода внутрикожных проб, . Тем не менее, кожная проба не всегда позволяет установить насколько организм сенсибилизирован гетерогенными белками (М.Д.Пет-ренко и др., 1968). Недостатком этого метода является также то, что при внутрикожном введении лошадиной сыворотки происходит сенсибилизация организма, в результате чего нельзя исключить возможность последующего возникновения общих реакций на гетерогенный белок, развивающихся чаще всего по анафилактическому типу (Ф.А.Черткова и др., 1965; Э.Райка, 1966). Вместе с тем, и при отрицательных кожных пробах возможно возникновение тяжелых анафилактических реакций, вплоть до смертельного шока (Б.П.Адамович, 1970).
Все это определяет необходимость поиска новых безопасных для людей методов выявления аллергии к гетерогенным белкам. В 1962 году научные эксперты ВОЗ в согласованной программе первоочередных исследований рекомендовали разработку методов оценки аллергии in vitro ввиду отсутствия тестов, пригодных для практического применения (В.А.Фрадкин, 1975).
В опытах на морских свинках и кроликах было показано, что антитела животных, сенсибилизированных белками крови лошади участвуют в механизме развития анафилактического шока (А.Д.Адо, 1964; В.КДозлов, 1973; А.Сейбутиене, 1977).
В доступной литературе мы не встретили данных об участии . антиглобулинов человека, леченного гетерогенными сывороточными препаратами, в патогенезе реакций анафилактического типа.
В соответствии с вышеизложенным, целью настоящего исследования является разработка нового метода диагностики повышенной чувствительности человеческого организма к гетерогенным сывороточным белкам, не связанного с дополнительным внесением в орга-
низм белкового антигена, и обоснование его в качестве объективного критерия оценки сывороточной аллергии.
Основными задачами работы были следующие:
I; Создание эритроцитарного глобулинового диагностикума для обнаружения в реакции непрямой гемагглютинации (РИГА) антиглобулинов, возникающих в организме человека под влиянием гетерогенных сывороточных препаратов, и приготовление антиглобуяи-новых сывороток, необходимых в качестве контроля при постановке РБГА. .
2» Изучение диагностического спектра РИГА и внутрикожных проб в качестве показателя сенсибилизации организма гетерогенными сывороточными препаратами,
3. Выявление роли гемаглютинирунщих антител к гетерогенному сывороточному белку в механизме развития немедленных аллергических реакций.
Научная новизна. Обоснован способ выявления повышенной чувствительности человеческого организма к гетерогенным сывороточным препаратам в РИГА, не связанный с аппликацией белков, выделенных из крови лошади. Для РИГА создан сухой глобулиновый эритроцитарный диагностикум.
Представлены сравнительные результаты оценки степени сенсибилизации организма человека лошадиными сывороточными препаратами методом внутрикожных проб и серологическим тестом и обоснованы преимущества последнего (РБГА).
Установлена связь формирования гиперчувствительности немедленного типа при белковой сенсибилизации с накоплением антиглобулинов. При выявлении антиглобулинов показана более высокая чувствительность РИГА по сравнению с имеющимися серологическими
тестами - реакций преципитации в агаре (ИІА) и реакций связывания комплемента (РСК) . Впервые приведены данные относительно анафшгактогенных сеойств глобулинов человека, формирущихся под влиянием сывороточных препаратов, приготовленных из крови лошади. Оригинальными являются также материалы, касащиеся получения антиглобулиновых сывороток фактически на всех используемых животных.
Практическая значимость проведенных исследований заключается в обосновании объективного критерия оценки сенсибилизации к лошадиным сывороточным препаратам с помощью серологического теста - РИГА, позволяющего судить об аллергической перестройке организма человека по уровню циркулирующих антиглобулинов. Выявлен пороговой уровень антиглобулинов,: потенциально опасный для развития анафилактического шока.
Метод апробирован в клиниках Пермского медицинского института, ряде учреждений практического здравоохранения г.Перми и рекомендуется для широкого использования в практике здравоохранения.
