Содержание к диссертации
Стр.
ВВЕДЕНИЕ 5
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 35
ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ АНТРОПОМЕТРИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПЛОДА И ОСОБЕННОСТЕЙ ТЕЧЕНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ И РОДОВ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ И ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК И ЭФФЕКТИВНОСТЬ РЕДУКЦИИ ЭРИТРОЦИТОВ
ИЗ ПУПОВИННОИ КРОВИ 50
ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ КЛЕТОЧНОГО СОСТАВА ПУПОВИННОИ КРОВИ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ И ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК И ЭФФЕКТИВНОСТЬ РЕДУКЦИИ ЭРИТРОЦИТОВ
ИЗ ПУПОВИННОИ КРОВИ 82
ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ И ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК И ЭФФЕКТИВНОСТЬ РЕДУКЦИИ ЭРИТРОЦИТОВ
ИЗ ПУПОВИННОИ КРОВИ 98
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ИЗ
ВЫВОДЫ 117
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 118
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 120
Введение к работе
Трансплантация аллогенньгх гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) в последние годы стала важным компонентом лечения многих гематологических заболеваний, врожденных нарушений иммунной системы, наследственных анемий, некоторых болезней обмена и злокачественных новообразований (Thomas E.D., 1990; Афанасьев Б.В. и соавт. 1994; Bensinger W. et al., 1995; Schmitz N. et al., 1995; Савченко В.Г. и соавт. 1996; Румянцев А.Г., 1996; Птушкин В.В., 1997; Rubinstein P., 1999; Gluckman E., 2004); Стволовые гемопоэтические клетки для трансплантации получают из трех источников: костный мозг, периферическая кровь и пуповинная кровь (ПК). В последнее время возрастает количество трансплантаций гемопоэтических стволовых клеток из пуповинной крови (ГСКПК) (Rubinstein Р., 1999; Gluckman Е., 2004, Rocha V., 2007). Большая часть трансплантаций ГСКПК приходится на детей и взрослых с низкой массой тела, из-за проблемы ограниченного объема доступной ПК, и как следствие ограниченного содержания в ней ГСК необходимых для трансплантации. Потери ГСК, на'различных этапах обработки и хранения ПК используемой в дальнейшем для трансплантации, могут быть несущественными для детей младшего возраста, но являются критическими для детей старшего возраста и взрослых (Gluckman Е., 2004, Laroche V, 2005, Rocha V., 2007).
Создание банков пуповинной крови (ПК) в значительной степени облегчает заготовку, хранение, а также поиск материала для трансплантации, что в сочетании с дешевизной получения такого материала и легкой его доступностью является предпосылкой для увеличения количества трансплантаций ГСК ПК (Wagner J. Е., 1992; Harris D. Т., 1996; Rubinstein P., 1999; Gluckman E., 2005, Rocha V., 2007).
Эффективность трансплантации во многом зависит от достаточного количества ГСК, поэтому, важным вопросом является совершенствование методов обработки клеток для обеспечения достаточного количества ГСК в трансплантате и разработка системы критериев отбраковки ПК перед началом ее обработки для помещения в хранилище
(Rubinshtein P. et al. 1995; Rodriguez L. et al. 2004; Dazey В et al. 2005; Lapierre V. et al. 2007). Известно, что состав клеток ПК множества факторов и отражает течение беременности и родов, перенесенных заболеваний, а также зависит от пола и массы тела новорожденного, вида родоразрешения, сроков, прошедших после родов и сбора ПК до начала процесса обработки (Cairo M.S., 2005; Aravita S., 2005). Использование современных технологий сбора и обработки пуповинной крови в рамках международных стандартов NETCORD и FACT позволяет сократить потери клеток при сборе и обработке ПК, однако множество факторов, влияющих на клеточный состав, и, соответственно, на различную степень седиментации эритроцитов при обработке ПК (Sparrow RL., 2002; Askari S., 2005; Rocha V., 2007) делают актуальным определение прогностических факторов, на основании которых можно провести оценку пригодности ПК для хранения в качестве трансплантационного материала для неродственных трансплантаций, что позволит оптимизировать технологии заготовки трансплантационного материала банком ПК.
Цель исследования:
Усовершенствовать и внедрить критерии отбора ПК для проведения лейкоконцентрации и сохранения в банке стволовых клеток с целью получения максимально эффективного трансплантационного материала для неродственных трансплантаций.
Задачи исследования:
1. Определить влияние анте- и интранатальных факторов и антропометрических показателей и пола новорожденного на эффективность процедуры лейкоконцентрации ПК и сохранение в полученном материале лейкоцитов, мононуклеарных клеток, лимфоцитов и CD34 клеток.
2.Определить влияние технологических параметров сбора и обработки ПК на количество
и жизнеспособность лейкоцитов, мононуклеарных клеток, лимфоцитов и CD34 клеток в
полученном лейкоконцентрате ПК. 3.Изучить влияние клеточного состава ПК на эффективность процедуры
лейкоконцентрации. 4.Разработать критерии прогнозирования получения стандартизованного концентрата
ядерных клеток ПК.
Научная новизна
В работе впервые изучено влияние комплекса анте- и интранатальных факторов, пола и антропометрических характеристик новорожденного, технологических особенностей сбора и обработки ПК на эффективность процедуры лейкоконцентрации ПК, проводимой с целью уменьшения объема пуповинной крови для оптимального хранения в банках стволовых клеток, основанной на международных стандартах системы NETCORD. Показано, что эффективность процедуры лейкоконцентрации оптимальна при сборе крови в течение первых 5 минут после пересечения пуповины, сроке гестации от 38 до 40 недель, «чистом весе» образца ПК от 40 до 120 г и доле антикоагулянта в образце ПК от 20 до 40%. Гиперлейкоцитоз ПК более 20 х 106/мл ухудшает эффективность лейкоконцентрации, тогда как примесь нормобластов на эффективность лейкоконцентрации не влияет. Впервые показано, что на эффективность процедуры лейкоконцентрации ПК оказывает влияние количество родов в анамнезе — эффективность снижается при третьих и более родах. Другие изученные анте- и интранатальные факторы: многоплодная беременность, количество околоплодных вод, состояния хронической и острой гипоксии плода, масса плаценты, длительность безводного периода, способ родоразрешения, пол и масса тела новорожденного не оказывают влияния на эффективность процедуры лейкоконцентрации ПК.
Практическое значение
Научно-практическую значимость имеют данные о том, что сбор ПК в сроки более 5 минут после пересечения пуповины снижает эффективность процедуры лейкоконцентрации, при этом, длительное хранение (более 20 часов) собранной ПК перед проведением процедуры лейкоконцентрации увеличивает ее эффективность. Эффективность процедуры лейкоконцентрации выше при увеличении длительности периода изгнания плода более 30 минут. Большое практическое значение имеют данные о том, что образцы ПК с «чистым весом» более 120 г необходимо делить на две приблизительно равные части и обрабатывать как отдельные образцы. Научно-практическое значение имеет тот факто, что исследованные анте- и интранатальные факторы, технологические особенности с бора и обработки ПК не оказывают значимого влияния на изменение количества CD34 клеток и колониеобразующей активности ПК после проведения процедуры лейкоконцентрации, а также на уровень спонтанного апоптоза и некроза лейкоцитов и ГСК.
Практическое значение выполненной работы заключается в возможности использования разработанных дополнительные критериев отбора образцов ПК для безвозмездного донорства, которые включены в относительный список противопоказаний, что позволяет оптимизировать процесс работы БСК и получать наиболее эффективный трансплантационный материал.
![Оценка эффективности прогнозирования хромосомной патологии у плода на основе нейросетевого моделирования [Электронный ресурс]](/i/i/4239/189805.png "Оценка эффективности прогнозирования хромосомной патологии у плода на основе нейросетевого моделирования [Электронный ресурс] Синицина Оксана Викторовна")
