Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Значение экспрессии онкобелков р53, her2 и c-myc для прогнозирования эффективности лучевой терапии больных плоскоклеточным раком шейки матки (обзор литературы) 9
ГЛАВА II. Материалы и методика исследования 30
Глава III. Определение иммуногистохимических маркеров в плоскоклеточном раке шейки матки 39
1. Распределение признаков, характеризующих исходное состояние больных раком шейки матки '. 39
2. Оценка лучевого патоморфоза опухолевой ткани шейки матки 43
3. Экспрессия онкобелка р53 в клетках рака шейки матки 46
4. Экспрессия онкобелка HER2 в клетках рака шейки матки 53
5. Экспрессия онкобелка с-тус в клетках рака шейки матки :..55
ГЛАВА IV. Обсуждение результатов исследования 62
Выводы 68
Практические рекомендации 69
Список литературы 70
- Распределение признаков, характеризующих исходное состояние больных раком шейки матки '.
- Оценка лучевого патоморфоза опухолевой ткани шейки матки
- Экспрессия онкобелка р53 в клетках рака шейки матки
- Экспрессия онкобелка HER2 в клетках рака шейки матки
Введение к работе
Рак шейки матки (РШМ) является одной из самых распространенных злокачественных опухолей у женщин. По данным ВОЗ, в мире ежегодно выявляется около полумиллиона больных РШМ и более 270000 женщин умирает от этого заболевания (Parkin D.M. и соавт., 2005). По данным Международной федерации гинекологов и акушеров (FIGO), около 60% впервые выявленных случаев РШМ относятся к местно-распространенным опухолям (Мерабишвили В.М., 2003; Чиссов В.И. и соавт., 2004). Почти половина больных инвазивным РШМ умирают от прогрессирования заболевания в течение 5 лет после окончания первичного лечения. (Вишневская Е.Е., Бохман Я.В., 1994; Вишневская Е.Е. и соавт., 1999; Гранов A.M., Винокуров В.Л., 2002). Однако показатели летальности от РШМ существенно ниже, чем показатели заболеваемости - во всем мире отношение смертности к заболеваемости составило 55% (Parkin D.M. и соавт., 2005). Это указывает на возможности эффективного лечения больных РШМ.
В России заболеваемость РШМ остается довольно высокой: РШМ занимает 6-е место (5,4%) среди других злокачественных опухолей у женщин, уступаялишь раку молочной железы, злокачественным опухолям кожи, раку желудка, ободочной кишки, а с 1993 года - и раку тела матки. За год диагностируется более 12 000 больных РШМ, и ежегодно умирают от него более 6 000 женщин (Давыдов М.И., Аксель Е.М., 2005).
В Санкт-Петербурге, так же как в США и других, экономически развитых странах, РШМ находится на третьем месте в структуре гинекологической онкологической заболеваемости, ежегодно регистрируется около 370 новых случаев РШМ (Мерабишвили В.М., 2004).
Главным методом лечения больных РШМ в настоящее время является лучевая терапия (ЛТ), которая в качестве самостоятельного метода или как компонент комбинированного лечения используется более чем у 90% больных РШМ (Бохман Я.В., 2002; Вишневская Е.Е., 2002; Костромина К.Н., 2002; Masood S. и соавт., 1993; Jones W.B. и соавт., 1995). Поэтому показатели выживаемости и смертности от РШМ» в значительной степени определяются эффективностью ЛТ. В целом на сегодняшний день после лучевого лечения в течение 5-летнего срока наблюдения от 30 до 45% больных РШМ погибают от основного заболевания (Вишневская Е.Е., Бохман ЯЗ., 1994; Вишневская Е.Е. и соавт., 1999; Гранов A.M., Винокуров В.Л., 2002). В связи с этим предсказание результатов ЛТ представляет важную задачу, от решения которой во многом зависит повышение эффективности лечения. Учет биологических характеристик опухолей и основных факторов предсказания при планировании и проведении ЛТ рассматривается в качестве существенного резерва повышения эффективности ЛТ больных РШМ.
При многофакторном анализе в общей сложности выделены 43 признака, которые обладают заметным влиянием на прогноз РШМ, в их числе отягощенный наследственный анамнез, форма роста и локализация опухоли, вариант распространения, глубина инвазии в строму, морфологическая структура, методы лечения и т.д. (Умарова Є.Г., 1992). -Оценка совокупности различных факторов определяет прогноз заболевания и служит основой рационального планирования ЛТ.
Изучение иммуногистохимических маркеров, отражающих активацию онкогенов и генов-супрессоров, апоптотическую и пролиферативную активность опухоли являются одним из современных путей прогнозирования клинического течения опухоли и выработки лечебной тактики (Пожарисский К.М., Леенман Е.Е., 2000). Особую роль в канцерогенезе играют дефекты генов, контролирующих повреждения ДНК и клеточную пролиферацию. В ряде случаев получены доказательства того, что некоторые из этих маркеров являются независимыми прогностическими показателями (Пожарисский К.М., Леенман Е.Е., 2000; Пожарисский К.М. и соавт., 2005).
Ген-супрессор р53 кодирует ядерный белок, модулирующий экспрессию генов, отвечающих за репарацию ДНК, деление клеток и апоптоз (Абрамов И.В., Фильченков А.А. 2003; Schmitt A., Love S.W., 1999). По меньшей мере в половине всех случаев злокачественных опухолей обнаруживаются мутации в хромосоме 17 в области локализации гена-супрессора р53 (Копнин Б.П.,2004; Soussi Т., 2000).
НЕ112/пеи-белок (с-егЬВ2) относится к семейству тирозин-киназных рецепторов эпидермального фактора роста, играющих важную роль в клеточной пролиферации, дифференцировке и апоптозе (Sliwkowski М.Х. и соавт., 1999). Известно, что нарушение функции гена HER2 обнаруживается при многих опухолях человека (Пожарисский К.М., Леенман Е.Е., 2000; Крпнин Б.П.,2004; Самсонова Е.А. и соавт., 2004; Esteva F.J., 2000).
C-myc - центральный регулятор клеточного деления, находится в тесном взаимодействии с р53 (Haas К. и соавт., 1997). Ген c-myc локализован в хромосоме 8, кодирует ядерный белок, являющийся транскрипционным фактором (Godwin А.К. и соавт., 1997). Амплификация генов c-myc значительно чаще наблюдается в- опухолях на поздних стадиях. Как правило, она коррелирует с высокой пролиферативной активностью новообразований, низкой степенью дифференцировки их клеток и более короткой продолжительностью жизни пациентов. Поэтому амплификация гена MYC является неблагоприятным прогностическим показателем (Pelengaris S. и соавт., 2002).
Многие авторы исследовали прогностическую и предсказательную ценность пролиферативной и апоптотической активности опухолей у больных РШМ: Однако согласованного мнения о прогностическом значении экспрессии онкобелков р53, HER2, c-myc и сочетания этих факторов до сих пор не получено (Kersemaekers A.M. и соавт., 1999; Mukherjee G. и соавт., 2001; Pelengaris S. и соавт., 2002; Soh L.T. и соавт., 2002; Carrilho С. и соавт., 2003; Niibe Y. и соавт., 2003; Brychtova S. и соавт., 2004; Beskow С. и соавт., 2006).
Цель настоящего исследования - повышение информативности предсказания прогноза эффективности лучевого лечения плоскоклеточного РШМ на основании определения иммуногистохимическим методом уровня экспрессии онкобелков р53, HER2/neu и с-тус, выявляемых в клетках опухоли.
Для достижения цели были поставлены следующие конкретные задачи:
1. Провести иммуногистохимическое исследование уровня экспрессии маркеров р53, HER2/neu, с-тусдо начала лечения и в процессе проведения сочетанной ЛТ больных РШМ.
2. Сопоставить исходный уровень маркеров и его изменения в процессе облучения со степенью распространения и дифференцировкой опухоли, возрастом больных и состоянием их менструальной функции.
3. Изучить корреляцию между экспрессией маркеров в опухоли и результатами лечения больных РШМ.
4. Определить рекомендации по использованию иммуногистохимических показателей р53, HER2/neu, c-myc в предсказании эффективности лучевого лечения больных РШМ.
Научная новизна. Впервые проведено комплексное клинико-морфологическое исследование с иммуногистохимическим анализом экспрессии р53, HER2/neu, c-myc в клетках плоскоклеточного РШМ.
Установлена зависимость между уровнем изучаемых маркеров и клинико-морфологическими параметрами: возрастом и менструальной функцией больных, степенью распространения РШМ, а также его злокачественностью.
Определено высокое значение экспрессии р53 для прогнозирования результатов лучевого лечения больных плоскоклеточным РШМ.
Практическая значимость. Показана высокая информативность иммуногистохимического определения экспрессии р53 для предсказания эффективности лучевой терапии плоскоклеточного РШМ. Использование с этой целью онкобелков HER2/neu и c-myc нецелесообразно.
Положения, выносимые на защиту.
1. Высокая экспрессия р53 служит неблагоприятным предсказательным признаком эффективности лучевого лечения больных РШМ.
2. Среди изученных клинико-морфологических и иммуногистохимических факторов высокая экспрессия р53 является независимым предсказательным признаком сниженной возможности успешного лучевого лечения РШМ.
3. Отчетливая экспрессия HER2 в опухолях шейки матки встречается исключительно редко (2,5%), что может быть показателем несущественной роли онкобелка в патогенезе РШМ.
4. Экспрессия c-myc не обладает предсказательной значимостью для больных РШМ, подвергающихся лучевому лечению.
Внедрение. Результаты исследования внедрены в практику работы клиники РНЦРХТ (отделение новых технологий лучевой терапии, отделение радиохирургической гинекологии). Результаты диссертации доложены на научной конференции молодых ученых «Современные технологии диагностики и лечения в клинической медицине» (2006), на Невском радиологическом форуме «Новые горизонты» (2007), на Всероссийской научно-практической конференции «Улучшение качества оказания онкологической помощи населению» (2007), XII межрегиональной конференции онкологов (2007).
По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе 1 журнальная статья в рецензируемом журнале ("Вопросы онкологии").
Распределение признаков, характеризующих исходное состояние больных раком шейки матки '.
Все больные подвергались общеклиническому исследованию, включающему сбор анамнеза, исследование объективного статуса, а также общепринятые лабораторные и инструментальные исследования.
Для определения степени распространенности опухоли и состояния смежных органов проводились следующие методы обследования: гинекологический осмотр в зеркалах, бимануальное исследование, цистоскопия и ректороманоскопия, цитоморфологическое и гистологическое исследование.
До начала и в процессе лечения неоднократно исследовали общие анализы крови и мочи, биохимические показатели сыворотки крови. Также в процессе курса лечения неоднократно брались мазки с поверхности шейки матки для цитологического исследования.
Биопсия шейки матки была выполнена всем 80 пациенткам до начала лечения, а у части больных (37 человек) - с целью оценки лучевого патоморфоза опухоли - в процессе лечения по достижении суммарной очаговой дозы (СОД) в точке А 14-20 Гр.
Внутриполостная гамма-терапия проводилась у 46 (57,5%) пациентов с использованием радионуклида 60Со низкой активности в блоке активных коек и у 28 (35%) источниками высокой активности 60Со на аппарате «АГАТ-В» и у 6 (7,5%) путем сочетания источников высокой и низкой активности.. Разовая очаговая доза (РОД) в точке учета (точка А) составляла 7-10 Гр, СОД в точке А при облучении источниками низкой активности, была 70-90 Гр, для источников с высокой активностью - 49-56 Гр.
Дистанционное облучение проводилось с помощью гамматерапевтических аппаратов у 77 (96,3%) больных, на линейные ускорителях электронов - у 3 (3,7%) пациенток. При наружном облучении разовые очаговые (РОД) в параметральных отделах таза (в точке В) колебалась от 2,0 до 3,0 Гр; суммарная очаговая доза (СОД) в точке В достигала 40-46 Гр, ритм облучения - 3-4 раза в неделю.
Эффективность ЛТ оценивалась по критериям, одобренным ВОЗ (Therasse Р. и соавт., 2000): по непосредственному эффекту, а также по отдаленным результатам лечения.
Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование опухоли было проведено всем 80 больным плоскоклеточным РШМ. Повторно 37 пациенткам ИГХ исследование было проведено также в процессе лечения, по достижении СОД 14 - 20 Гр в точке А.
Методика морфологического исследования препаратов заключалась в одновременном исследовании опухоли и пограничных тканей. Материал фиксировали в нейтральном забуференном формалине с обычной стандартной проводкой и последующей заливкой в парафин. Гистологические препараты окрашивали гематоксилином и эозином и , проводили ШИК-реакцию. При просмотре гистологических препаратов выбирался блок опухоли с периферической тканью шейки матки, из которого изготавливали гистологические срезы для ИГХ исследования.
В опухолях всех больных определяли уровень экспрессии следующих ИГХ маркеров: HER2, с-тус и р53.
Срезы подвергались депарафинизации в ксилоле (3 мин х2), дегидратации в абсолютном спирте (З мин х2) и этиловом.спирте (3 мин х2). Активность эндогенной пероксидазы блокировали в 3% растворе перекиси водорода на метаноле (20 мин при 4С в холодильнике). Затем промывали в дистиллированнойводе(3 мин).
Обработка срезов для»определения экспрессии белков HER2 и р53.
Термостойкие кюветы с цитратным буфером рН 6.0 или ЭДТА рН 9:0 нагревали на водяной бане до 95-99С. Стекла со срезами помещали в соответствующий буфер согласно протоколу обработки каждого антитела. По истечении 20 минут кюветы со стеклами охлаждали при комнатной температуре еще 20 минут. Затем переносили в дистиллированную воду на 1-2 минуты. После стекла помещали в TBS и промывали в нем два раза по 5 минут. После инкубации с. нормальной сывороткой в течение 20 минут при комнатной температуре проводили инкубацию с первичными антителами, разведенными в. 1% растворе бычьего сывороточного альбумина в Трис-буфере (18 часов при 6С) в соответствии с протоколом лаборатории утвержденным после контрольных экспериментов.
Обработка срезов для определения экспрессии белка С-тус. Антигенную активность восстанавливали путем кипячения в цитратном буфере (рН 6.0) при повышенном давлении в скороварке в режиме - 2. По
истечении 20 минут кюветы со стеклами охлаждали при комнатной температуре еще 20 минут. Затем переносили в дистиллированную воду на 2 минуты. После инкубации с нормальной сывороткой в течение 20 минут при комнатной температуре проводили инкубацию с первичными антителами в термостате при +37 С в течение 30 минут. Каждое антитело разводили diluent в соответствии с протоколом лаборатории, утвержденным после контрольных экспериментов.
Далее все срезы покрывали вторичными антителами (En Vision Rabbit или Mouse) в соответствии с протоколом и инкубировали 30 минут при +37С, после чего два раза по 5 минут промывали в TBS, и проявляли комплекс антиген-антитело с помощью 3,3 - диаминобензидина (ДАБ). Затем срезы докрашивали гематоксилином Майера, дегидратировали и заключали в канадский бальзам.
Оценка лучевого патоморфоза опухолевой ткани шейки матки
Возраст пациенток колебался в интервале от 25 до 76 лет, средний возраст пациенток составил 55,2±1,2 лет (табл.7). Наибольшее число пациенток с опухолевой патологией шейки матки находилось в возрасте 50-59 лет (42,5%).
Распределение больных РШМ по стадиям основывалось на международных классификациях по системе TNM — 6 издание 2002 г. и FIGO - 1985 г.
До начала лечения число больных с II и III стадией было приблизительно равным (48,7% и 51,3% соответственно) (рис.5). Повторные биопсии в процессе ЛТ выполнены у 23 (62,2%) пациенток с II стадией и у 14 (37,8%) женщин с III стадией. У 44 пациенток (55%) был диагностирован плоскоклеточный неороговевающий рак и у 17 (45,9%) взята биопсия в процессе облучения. Плоско клеточный ороговевающий рак выявлен у 31 (38,7%) больной, из них у 18 (48,4%) была выполнена повторная биопсия. В наших наблюдениях низкодифференцированный рак был выявлен лишь у 5 (6,3%) больных и 2 (5,5%о) из них попали в группу пациенток с повторно выполненной биопсией (табл. 8).
Менструальная функция была сохранена у 23 (28,7%) больных. В постменопаузе находились 57 (71,2%) пациенток (рис.6).
У 39 (48,7%) больных имелся парам етральный вариант распространения опухолевого процесса, у 3 (3,7%) пациенток - вагинальный, а у 38 (47,5%) - параметрально-вагинальный.
По форме роста опухоли больные распределялись следующим образом: цервикальный канал - 3 (3,7%) больных; экзофитная форма роста - 19 (23,7%)) пациенток; эндофитная, инфильтрирующая и смешанная - 33 (41,2%), 9 (11,2%) и 16 (20%) соответственно.
Рецидивы РШМ наблюдали у 28 (35%) больных. Время возникновения рецидива колебалось от 3 до 95 месяцев. Средняя продолжительность безрецидивного периода составила 18,6±3,2мес. (рис. 7).
Наличие рецидива у больных РШМ. Эффективность ЛТ оценивалась по критериям, одобренным ВОЗ (Therasse Р. и соавт., 2000): по непосредственному эффекту, а также по отдаленным результатам лечения. Ниже, в таблицах 9 и 10, отражены результаты лечения больных РШМ в зависимости от стадии процесса.
Чаще всего первичного клинического излечения удается добиться у больных со II стадией заболевания - у 37 (94,9%); при III стадии РШМ излечение было диагностировано у 21 (51,2%) пациентки.
Лучшие отдаленные результаты после лечения больных опухолями шейки матки наблюдаются при II стадии; 25 (64,1%) больных пережило пятилетний срок, при III стадии этот срок пережили 18(43,9%) пациентов (табл.10). Средняя продолжительность жизни больных после первичного лечения составила 70±5,5мес. Таблица 10 Выживаемость больных РШМ с учетом стадии заболевания Выживаемость Стадия 1 год 3 года 5 лет 2 37 (94,8%) 29 (74,3%) 25 (64,1%) 3 38 (92,6%) 23 (56,1%) 18(43,9%) Всего 75 (93,7%) 52 (65,0%) 43 (53,7%) 3.2. Оценка лучевого патоморфоза опухолевой ткани шейки матки
Первым этапом были пересмотрены готовые гистологичесие препараты всех 80 больных местнораспространенным РШМ. Пересмотр осуществлялся в соответствии с Международной гистологической классификацией (ВОЗ, Tavassoli F.A., Devilee P., 2003). При этом нами отмечались следующие морфологические признаки опухолевых клеток: гистологический тип, объем опухоли, соотношение опухоли и стромы, степень дифференцировки, воспалительная реакция стромы, состав воспалительного инфильтрата, выраженность стратификации, отмечалось количество митозов и наличие их патологических форм, ядерный и цитоплазматический полиморфизм. В препаратах, полученных в процессе облучения, опухоли у 37 больных, оценивался лучевой- патоморфоз опухолевой ткани с учетом изменения выше перечисленных признаков, а также дополнительно отмечались некротические изменения в опухоли, наличие апоптоза.
Из 37 больных местнораспространенным РШМ у 27 (73%) отмечен лечебный патоморфоз (рис.8а, б) в процессе ЛТ (при достижении СОД, в точке А 14-20 Гр) и у 10 (27%) отсутствовали выраженные изменения на тканевом уровне. В группе пациенток с признаками лучевого патоморфоза повышение дифференцировки опухоли отмечено в 75% случаев, нарастание ядерного полиморфизма - в 80%, увеличение доли патологических митозов, преимущественно К-митозов - в 34,5%), у 34% больных были выражены некротические изменения в опухоли. У 84% пациенток первой группы уменьшался относительный объем опухолевой ткани, соответственно возрастала относительная доля стромы. Кроме того, становилась более выраженной стратификация клеток - в 36,4% наблюдений. В 50% случаев лейкоцитарная инфильтрация, которая была в опухоли до ЛТ, в процессе лечения сменялась преимущественно на лимфоцитарную и плазмоклеточную. Наличие лучевого патоморфоза опухоли сопровождалось лучшими результатами лечения. Так общая 5-летняя выживаемость у этих больных составила 80,8% (р=0,03), в группе пациенток, у которых отсутствовали признаки лучевых изменений, указанная выживаемость наблюдалась лишь в 35,5% (рис. 9).
Экспрессия онкобелка р53 в клетках рака шейки матки
В настоящее время выделяют две группы факторов, используемых при оценке возможного исхода онкологического заболевания или ответа опухоли на лечение. К первой группе относятся многочисленные прогностические факторы, позволяющие предвидеть исход заболевания, ко второй — предсказательные факторы, определяющие вероятность ответа опухоли на специфическое лечение (Allred D.C. и соавт., 1998).
В плоскоклеточном РШМ хорошо изучены общепринятые клинико-морфологические факторы прогноза, такие как гистологический тип опухоли, степень ее морфологической дифференцировки, стадия заболевания и др.
Одним из современных путей прогнозирования клинического течения опухоли и выработки лечебной тактики является изучение многочисленных иммуногистохимических маркеров, отражающих активацию онкогенов и генов-супрессоров, апоптотическую и пролиферативную активность. Особую роль, в канцерогенезе играют дефекты генов, контролирующих повреждения ДНК и клеточную пролиферацию.
Многие авторы исследовали прогностическую и предсказательную ценность пролиферативной и апоптотической активности опухолей у больных РШМ. Однако согласованного мнения о прогностическом значении экспрессии онкобелков р53, HER2, с-тус и сочетания этих факторов до сих пор не получено (Mukherjee G. и соавт., 2001; Pelengaris S. и соавт., 2002; Soh L. и соавт., 2002; Carrilho С. и соавт., 2003; Niibe Y. и соавт., 2003; Brychtova S. и соавт., 2004; Beskow С. и соавт., 2006). Все вышеизложенное явилось поводом к настоящему исследованию.
В наших наблюдениях экспрессия р53 отмечалась в 30% карцином РШМ до начала лечения и в 49% - в процессе ЛТ, что близко соответствует данным литературы. A. Kersemaekers и соавт. (1999) определили экспрессию р53 в 32% опухолей, при этом уровень экспрессии онкобелка не ассоциировался с HPV-положительными опухолями, а также не коррелировал с прогнозом РШМ. G. Mukherjee и соавт. (2001) обнаружили в 34% случаев экспрессию р53 в радйорезистентных опухолях.. Нами выявлена корреляция между экспрессией р53 до начала лечения и показателями общей и безрецидивной выживаемости: 5-летняя выживаемость больных, в чьих опухолях обнаружена высокая или умеренная экспрессия р53, была достоверно ниже, чем таковая у больных с отсутствием или слабой экспрессией этого мутированного/ гена-супрессора - 53% против 67% (р=0,03). Пятилетняя безрецидивная выживаемость больных первой группы наблюдений составила 46,6%, а во второй возросла до 70,6% (р=0;01). Такую же закономерность наблюдали C.Carrilho и соавт. (2003), DJain и: соавт. (2003), C.Beskow и соавт. (2006). Принято считать, что увеличение экспрессии мутированного р53 в опухоли сопровождается его большей агрессивностью, поскольку уменьшается количество опухолевых клеток, подвергающихся апоптозу (Carrilho С. и соавт., 2003"; Wang J.E. и соавт., 2004); Напротив; в работах G. Haensgen и соавт.(2001), Ь. Horn и соавт. (2001) . частота выявления экспрессии р53 была: высокой - 86% и 64% соответственно, однако связи между состоянием онкопротеина и прогнозом РШМ не было установлено. На нашем материале уровень экспрессии р53 зависел от менструальной функции больных РШМ: у женщин с сохранившейся цикличностью эндометриальных изменений сверхэкспрессия р53 встречалась достоверно реже, чем у пациенток, находившихся в менопаузе - 42% против 58% (р=0,004). Уровень экспрессии р53 зависел от возраста пациенток: у женщин старше 50 лет сверхэкспрессия: названного онкобелка встречалась достоверно чаще, чем у пациенток, моложе указанного возраста — 54% против 46% (р=0,001). В доступной литературе не удалось найти работ, подтверждающих данные результаты. Высокий уровень экспрессии р53 достоверно увеличивал частоту возникновения рецидивов РШМ с 27% до 54% (р=0,001).
Экспрессия р53 не зависела от стадии заболевания, от гистотипа опухоли. В. литературе имеются работы, в которых исследователи не нашли корреляции между сверхэкспрессией р53 и типом опухоли, HPV 64 положительными опухолями, безрецидивной и общей "выживаемостью (Jeffers M.D. и соавт., 1994; Vecchione А. и соавт., 1994; Kim К.Н. и соавт., 1995; Milde-Langosch К. и соавт., 1995; Hunt C.R. и соавт., 1996; Kurvinen К. и соавт., 1996; Cavuslu S. и соавт., 1997; Kersemaekers AM. и соавт., 1999).
В процессе ЛТ в большинстве наблюдений отмечены изменения в уровне экспрессии р53: в 30% этот уровень уменьшился, в 49% случаев -увеличился, и только в 21%) не изменился. Эти изменения не были связаны с клинико-морфологическими особенностями больных. Y.Niibe и соавт. (1999) также наблюдали увеличение экспрессии р53 при облучении, эти изменения не сказывались на результатах лучевого лечения больных РШМ.
М. Pillai и соавт. (1999) изучили роль экспрессии онкосупрессора р53 и антиапоптотического белка bcl-2 в качестве предсказателя ответа РШМ на облучение. Экспрессия р53 не коррелировала с ответом опухоли на ЛТ, однако, была выявлена1 существенная связь между экспрессией bcl-2 и результатами лечения. Возможно, инактивация р53 связана с взаимодействием с такими белками, как Е6 и MDM-2.
Экспрессия онкобелка HER2 в клетках рака шейки матки
Случаи со сверхэкспрессией HER2 не обладали клинико-морфологическими особенностями по сравнению с основной массой больных. Совокупность данных литературы свидетельствует о большой прогностической и предсказательной значимости экспрессии онкобелка HER2 не только в отношении рака молочной железы, но и для многих других злокачественных опухолей (Пожарисский К.М., Леенман Е.Е., 2000; Самсонова Е.А.и соавт., 2004; Пожарисский К.М. и соавт., 2005; Esteva F.J. и соавт. 2000). Однако РШМ является исключением из многих разновидностей раковых заболеваний (Chavez-Bianco А. и соавт., 2004). Наши данные подтверждают сложившееся представление о малой значимости HER2 в патогенезе РШМ.
В исследовании A. Chavez-Bianco и соавт. (2004) был использован Hercep Test с соответствующими правилами оценки экспрессии HER2 в цервикальном раке, при этом только единственная опухоль плоскоклеточного типа (1 из 35) экспрессировала этот онкопротеин на уровне 3+. Аналогичная картина наблюдалась и при опухолях других локализаций. Например, М. Fujimura и соавт.(2002) сообщали, что в раке яичников сверхэкспрессия HER2 встречалась в 43% случаев. Однако когда этот же результат был оценен системой Hercep Test, только одна из 17 опухолей экспрессировала HER-2 на уровне 3+ (Iwamoto Н. и соавт., 2003). Низкая частота сверхэкспрессии HER2 отмечена при раке легкого (Hirsch F.R. и соавт., 2002), колоректальном раке (Nathanson D.R. и соавт., 2003), раке желчного пузыря (Matsuyama S. и соавт., 2004) и меланоме (Potti А. и соавт., 2003). Поскольку на частоту сверхэкспрессии HER2 влияют вид используемого антитела, техника приготовления препаратов, а также оценочные критерии, разъяснение феномена.требует дальнейших исследований.
Экспрессия с-тус обнаружена нами в клетках РШМ до лечения: ядерная - 29%, цитоплазматическая - 37,5%; в процессе лечения - 41% и 54% соответственно. S. Brychtova и соавт. (2004) также определяли с-тус как в ядре, так и в цитоплазме. Некоторые исследователи сообщали о преобладающем распределении с-тус в цитоплазме (Iwanaga Т. и соавт., 1986; Jack А. и соавт., 1986). В связи с этим возникал вопрос, могут ли процедуры фиксации повлиять на результаты иммуногистохимического окрашивания? S. Brychtova и соавт. (2004) предположили, что элюция Мус от ядер при процедуре фиксации может привести к изменению распределения. Эти факты могли бы объяснить соотношения ядерного и цитоплазматического распределения, установленного в нашем исследовании. Однако нельзя исключать причину, связанную с относящимися к опухоли изменениями в пределах патологического эпителия, как возможность измененного распределения онкопротеина (Royds J. и соавт., 1992). Вопрос о том, влияет ли дистопическое местоположение Мус-белка на его экспрессию, остается открытым. Поскольку транскрипция с-тус гена, как полагают, регулируется ядерным Мус белком (Penn L.J. и соавт., 1990), дефекты в его ядерном транспорте могли бы считаться характерными для сверхэкспрессии продукта с-тус.
Корреляции между экспрессией с-тус и отдаленными результатами лечения РШМ мы не выявили, аналогичные результаты были получены AM.Kersemaekers и соавт. (1999), S.M.F.Brenna и-соавт. (2002), L.T.Soh и соавт.(2002). В наших наблюдениях в процессеJ облучения- уровень экспрессии с-тус вядре не изменился у 52%о больных, уменьшился - у 24%), увеличился — у 24%), в цитоплазме соответственно - 49%, 24%, 27%. При сравнении вышеперечисленных групп по клинико-морфологическим признакам достоверной разницы не было выявлено. Данные о прогностическом значении c-myc в клетках цервикального рака противоречивы, Некоторые исследователи обнаружили связь высокой экспрессии c-myc с неблагоприятным прогнозом (Bourhis J. и соавт., 1990; Iwasaka Т. и соавт., 1992), другие этого не подтвердили (Brenna S.M.F. и соавт., 2002; Soh L. и соавт., 2002). J.Bourish и соавт. (1990) показали, что хотя c-myc обладал прогностической значимостью, корреляции между уровнем экспрессии c-myc и клиническими, а также патоморфологическими параметрами не обнаружилось. Несмотря на имеющиеся публикации, в которых показана роль c-myc в цервикальном карциногенезе (Pelengaris S. и соавт., 2002; Brychtova S. и соавт., 2004), к настоящему времени не обнаружено прямой связи между экспрессией белка и амплификацией гена. По данным O Leary J J. и соавт. (1997), соответствие между обнаруженным с-тус белком и мутацией c-myc гена наблюдается только в 7,5% случаев. Т. Iwasaka и соавт. (1992) показали, что амплификация c-myc встречалась редко, но сверхэкспрессия соответствующего белка была выявлена в 44% опухолей.
Таким образом, результаты выполненного исследования показали, что высокая экспрессия р53 может служить предсказательным фактором эффективности лучевого лечения РШМ. Сверхэкспрессия HER2 у больных РШМ встречалась исключительно редко, что может свидетельствовать о его незначительной роли в патогенезе РШМ. Экспрессия c-myc не обладала существенной предсказательной значимостью для больных . РШМ, подвергающихся лучевому лечению.
![Мегавольтная лучевая терапия местнораспространенного рака шейки матки [Электронный ресурс]](/i/i/4600/182487.png "Мегавольтная лучевая терапия местнораспространенного рака шейки матки [Электронный ресурс] Егорова Ирина Васильевна")
