Оценка иммуномодулирующего действия полиоксидония в экспериментально-биологической модели проникающего ранения глаза Гейн Оксана Николаевна

Содержание к диссертации

Стр.

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ 4

ВВЕДЕНИЕ .' 5

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РАНЕНИЯ ГЛАЗА 10

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 55

1. Объект исследования !.-,.. 55

2. Общая характеристика экспериментальной модели и схемы эксперимента 55

3. Иммунологические методы 57

4. Определение гематологических и биохимических параметров 61

5. Морфологические и морфометрические исследования травмированных, нетравмированных (вторых) глаз экспериментальных животных и глаз интактных животных 62

2.6. Статистический анализ результатов 64

Глава 3. ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ ЭФФЕКТЫ ПОЛИОКСИДОНИЯ
В ЭКСГШРИМЕНТАЛЬНО-БИОЛОГИЧЕСКОЙ МОДЕЛИ
ПРОНИКАЮЩЕГО РАНЕНИЯ ГЛАЗА 66

3.1. Количественная характеристика содержания лейкоцитов и лейкоцитар

ной формулы 67

3.2/Динамика показателей кислородозависимой микробицидности фагоци-
^ тирующих клеток периферической крови в НСТ-тесте 75

3. Изменения фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови .- 80

4. Динамика концентрации глюкозы крови 92

5. Изменения массы и клеточности центральных и периферических органов лимфомиелоидного комплекса 93

Глава 4. МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ И МОРФОМЕТРИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТРАВМАТИЧЕСКОГО ВОСПАЛЕНИЯ И РЕПАРАТИВНЫХ ПРОЦЕССОВ ПРИ ПРОНИКАЮЩЕМ РАНЕНИИ

ГЛАЗА НА ФОНЕ РАЗНЫХ СХЕМ ТЕРАПИИ 100

Глава 5. ВЛИЯНИЕ АДРЕНЕРГИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ И ТЕОФИЛЛИНА IN VITRO НА ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ ПРОНИКАЮЩЕМ РАНЕНИИ ГЛАЗА НА ФОНЕ

ВВЕДЕНИЯ ПОЛИОКСИДОНИЯ. . „ 118

ОБСУЖДЕНИЕ .:., 146

ВЫВОДЫ - '.- 167

ЛИТЕРАТУРА 169

/

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ГОБ - гематоофтальмический барьер

ДМФА - диметилформамид
ЗС -забуференная среда

НСТ-тест - тест с нитросиним тетразолием
ФЭБ - формалинизированные эритроциты барана

цАМФ - циклический 3', 5'-аденозинмонофосфат
ЯСК - ядросодержащие клетки

CD - кластер дифференцировки (cluster of differentiation)

CSF-GM - гранул оцитарно-м акр офагальный колонне стимулирующий

фактор (granulocyte-macrophage colony-stimulating factor)
FGF - фактор роста фибробластов (fibroblast growth factor)

HLA - антигены главного комплекса гистосовместимости человека

(human leukocyte antigens) ICAM - межклеточные адгезионные молекулы (intracellular adhesion

molecules)
IFN-y - интерферон-у (interferon-y)
Ig - иммуноглобулин (immunoglobulin)

IL - интерлейкин (interleukin)

MIF - фактор, ингибирующий миграцию макрофагов (macrophage

migration inhibitory factor)
TGF-p - трансформирующий фактор роста-Р (transforming growth factor-p)
Th^y - Т-хелперы (T-helper)

TNF-a - фактор некроза опухоли-a (tumor necrosis factor-a) VLA - маркер "очень поздней активации", относится к интегринам (very

late antigens)

Введение к работе

Актуальность проблемы. Проникающее ранение глаза является одной из главных причин снижения и потери зрения [62]. Как и при травме другой локализации [4, 28, 30, 73, 85, 87, 101, 192, 224] при проникающем ранении глаза развивается состояние иммунодепрессии [35, 37, 61, 197, 199]. Травма глаза относится к тяжелой патологии, при которой ведущим фактором патогенеза является нарушение функций иммунной системы [8, 37, 233]. В ранее проведенных клинических исследованиях установлено, что при проникающем ранении глаза развивается вторичная недостаточность клеточного звена иммунной системы, повышение поглотительной активности фагоцитирующих клеток на фоне выраженной депрессии их микробицидного потенциала, дисиммуноглобулинемия [37, 199]. Особенностью ранения глаза является возможность аутоиммунных повреждений здорового глаза [9], Это предполагает включение в комплексную терапию наряду с антибиотиками и противовоспалительными препаратами им-мунодепрессантов, в частности, глюкокортикоидов [14], которые способны усугублять иммуносупрессивное действие самой травмы.

В связи с этим встает проблема целенаправленной иммунокоррекции с использованием препаратов, избирательно воздействующих на конкретные звенья иммунной системы и не оказывающих побочных эффектов [25, 114, 147, 180, 181, 225, 226]. К таким препаратам можно отнести отечественный имму-номодулятор полиоксидоний, который является синтетическим высокомолекулярным соединением, обладающим выраженной иммунотропной активностью. Поданным авторов препарата, полиоксидоний оказывает активирующее влияние на функции фагоцитирующих клеток, гуморальный и клеточный иммунный ответ у мышей, снижает выраженность экспериментального иммунодефицита, индуцированного введением гидрокортизона или циклофосфамида, и проявления вторичной иммунной недостаточности при клинических испытаниях [132, 143, 146]. Учитывая, что направленность действия иммуномодуляторов в условиях нарушения функций иммунной системы может существенно отличаться в зависимости от конкретной формы патологии и/или при комбинации их с дру-

гими лекарственными препаратами, перед использованием их в терапии необходима дополнительная оценка их действия в экспериментально-биологических моделях патологических процессов на этапе доклинических испытаний и в последующем в клинике [227], Поэтому представлялось целесообразным исследовать иммуномодулирующие эффекты полиоксидония при экспериментальном проникающем ранении глаза,

В течении травматического процесса, развития воспаления с последующей регенерацией важную роль играют фагоцитирующие клетки - гранулоцити и мононуклеарные фагоциты. Изменения функций этих клеток в периферической крови при травме могут быть связаны как с факторами системной регуляции, так и с динамикой местных реакций [73, 192]. Однако при травматическом повреждении глаза, функции этих типов клеток, в частности, гранулоци-тов изучены недостаточно. Учитывая участие стрессорных реакций в изменениях функций иммунной системы при травме и ведущую роль в них не только глюкокортикоидов, но и катехоламинов [56, 85, 87, 211, 220, 256, 257, 283, 287], представлялось необходимым оценить влияние полиоксидония на некоторые проявления общего адаптационного синдрома при проникающем ранении глаза и на изменения чувствительности к адренергической регуляции фагоцитирующих клеток.

Цель работы - изучение иммуномодулирующего действия полиоксидония в экспериментально-биологической модели проникающего ранения глаза.

Основные задачи / 1, Изучить влияние полиоксидония на стрессорные и травматические из-" менения функций циркулирующего пула фагоцитирующих клеток, гематологических показателей, массы и клеточности центральных и периферических органов иммунной системы, концентрации глюкозы крови в экспериментально-биологической модели проникающего ранения глаза на фоне разных схем терапии.

2. Оценить влияние полиоксидония на развитие травматического воспаления и репаративные процессы при проникающем ранении глаза в условиях разных схем терапии.

3. Исследовать влияние адренергических соединений и теофиллина на фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови в системе in vitro в экспериментально-биологической модели проникающего ранения глаза в условиях введения полиоксидония.

Научная новизна. Впервые изучены иммуномодулирующие эффекты полиоксидония при экспериментальном проникающем ранении глаза, его влияние на течение травматического воспаления и процессов регенерации при данной форме патологии.

Установлено, что полиоксидоний изменяет динамику показателей функций фагоцитирующих клеток крови при проникающем ранении глаза, оказывает антистрессорный эффект, отменяя развитие стрессор ной гипергликемии, гиперплазии костного мозга. Включение полиоксидония в состав комплексной терапии приводит к частичному нивелированию депрессии микробицидного потенциала фагоцитов и гиперактивации поглотительной активности нейтро-филов и моноцитов, а также лейкопении в сравнении с животными, получавшими только стандартную терапию. Совместное использование полиоксидония с препаратами стандартной терапии, в частности с глюкокортикоидами, снижает их неблагоприятные эффекты.

Установлено, что введение полиоксидония в комплексе или изолированно способствует оптимизации воспалительного процесса в тканях глаза по параметрам наименьшей инфильтрации зоны повреждения и процессов регенерации. Наиболее благоприятным по формированию структурированной рубцовой ткани является использование полиоксидония в комплексе со стандартной терапией.

В ранний травматический период (через 180 мин после ранения глаза) выявлено усиление ингибирующего или р-адренергического действия адренергических соединений и угнетающего эффекта теофиллина in vitro на суммарную фагоцитарную активность лейкоцитов. Включение полиоксидония в стандартную терапию повышает чувствительность фагоцитирующих клеток к Р-адренергической регуляции.

Теоретическая и практическая значимость работы. В теоретическом

плане работа расширяет существующие представления о роли фагоцитирующих клеток и механизмах их регуляции при травматическом повреждении глаза. Результаты исследования дополняют имеющиеся представления об имму-номодулирующем действии полноксидония в условиях нарушений функций иммунной системы при проникающем ранении глаза. Обоснована возможность включения полиоксидония в стандартную терапию для оптимизации течения травматического воспаления и репаративных процессов при проникающем ранении глаза.

В практическом плане работа имеет существенное значение для обоснования назначения полиоксидония с целью коррекции иммунных нарушений, а также стимуляции репаративных процессов при проникающем ранении глаза.

Результаты работы внедрены в учебный процесс на кафедре микробиологии и иммунологии Пермского государственного университета (614600, г. Пермь, ул. Букирева, 15).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Применение полиоксидония в экспериментально-биологической модели проникающего ранения глаза изменяет динамику показателей функций фагоцитирующих клеток периферической крови, отменяет некоторые отрицательные эффекты глюкокортикоидов, входящих в стандартную терапию, нивелирует отдельные стрессорные и травматические нарушения.

2. Включение полиоксидония в комплексную терапию оптимизирует те-чение травматического воспаления и процессов регенерации по параметрам наименьшей инфильтрации зоны повреждения иммунокомпетентными и эф-фекторными клетками, а также по структуре рубца.

3. В раннем травматическом периоде выявлена ингибирующая или р-
адренергическая направленность действия адренергических соединений in vitro
на суммарную фагоцитарную активность лейкоцитов. Включение полиоксидо
ния в комплексную терапию повышает чувствительность фагоцитирующих
клеток к р-адренергической регуляции.

Апробация работы и публикации. Основные положения работы доложены на конференции молодых ученых "Современные проблемы экологии, микробиологии и иммунологии", Пермь, 1999; VII Международном конгрессе по иммунореабилитации "Аллергия, иммунология и глобальная сеть: взгляд в новое тысячелетие", Нью-Йорк, США, 2001; XI Международном конгрессе иммунологов, Стокгольм, Швеция, 2001; IV конгрессе РААКИ "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии", Москва, 2001; I конференции иммунологов Урала, Екатеринбург, 2001; II конференции иммунологов Урала, Пермь, 2002; II конференции молодых ученых "Современные проблемы экологии, микробиологии и .иммунологии", Пермь, 2002. По теме диссертации опубликовано 24 печатные работы.

Диссертационная работа апробирована на расширенном заседании научной проблемной комиссии по аллергологии и иммунологии Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН и рекомендована к защите.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 203 странице печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов (3 главы), обсуждения, выводов. В диссертации 32 рисунка и 18 таблиц. Список литературы включает 321 источник, из них 235 отечественных и 86 зарубежных.

/

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЛАВА 1

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РАНЕНИЯ ГЛАЗА

1.1. Особенности глаза как иммунологически привилегированного органа

Иммунная защита глаза. Устойчивость глаза к повреждающему действию различных факторов во многом определяется состоянием анатомических барьеров, физиологических и иммунных механизмов. К анатомическим барьерам относят веки, роговицу, конъюнктиву, а также влагу передней камеры и стекловидное тело, которые препятствуют "прорыву забарьерных" антигенов, антител и иммунных комплексов. К физиологическим механизмам относят продуцируемую клетками слезной железы слезу с ее бактериостатическими свойствами, конъюнктивальную слизь; к иммунным механизмам - факторы неспецифической и специфической резистентности глаза [81, 139,168, 189].

Первым барьером на пути действия внешних факторов является слезная жидкость [154]. Слеза реализует свои защитные функции путем механического очищения поверхности глазного яблока, а также с помощью содержащихся в ней специфических и неспецифических иммунных защитных факторов. К первым относят IgA, IgG, IgM, IgE и фракции комплемента - СЗ и С4. Ко вторым принадлежат лизрцим, лактоферрин, ряд гидролитических ферментов, простаг-ландины,тистамин и др. [139, 154, 168]. Иммуноглобулины, присутствующие в слезной жидкости, продуцируются плазматическими клетками, источником которых являются ткани слезных желез и гардерова железа. Гардерова железа выполняет подобную функцию только у птиц и у ряда млекопитающих, так как у этих групп животных ее протоки открываются в конъюнктивальную полость [154]. Помимо этого она выполняет у птиц и ряда млекопитающих функцию эндокринного органа [286]. Установлено, что концентрация разных классов Ig в слезной жидкости различна [139, 154, 168]. Так, рядом исследователей отмечено преимущественное содержание в слезе IgG и IgA [139, 168, 189]. Последний может присутствовать в двух формах - сывороточной и секреторной. Сыворо-

точный IgA, подобно IgG, проникает в слезу через стенки кровеносных сосудов. Секреторный IgA продуцируется местно при участии эпителиальных клеток слезных желез [139,154, 168]. Концентрация IgA может изменяться с возрастом [154, 307] и при различных заболеваниях глаза. В слезной жидкости IgM в норме отсутствует и обнаруживается только при различных патологических состояниях глаза [139]. Особая роль в защите органа зрения принадлежит IgE, определение которого важно для диагностики и лечения ряда аллергопатологиче-ских состояний [139]. Уровень естественных антител в слезной жидкости прямо коррелирует с титром антител в сыворотке крови, что указывает на важную роль процессов фильтрации в проникновении антител в слезную жидкость [198]. Немаловажную роль в реализации защитных функций слезной жидкости играют присутствующие в ней компоненты комплемента, в частности СЗ и С4, а также С9, СН50 и фактор В [139], принимающий участие в образовании СЗ-конвертазы при активации комплемента по альтернативному пути.

Из факторов неспецифической защиты, содержащихся в слезе, первым по выраженности антибактериального действия протеином слезы является лизо-цим, вторым - лактоферрин [168], содержащиеся в специфических гранулах нейтрофилов [71].

В иммунной защите глаза наряду со слезной жидкостью принимает участие конъюнктива - своеобразный лимфоидный орган глаза [154]. В нормальном состоянии конъюнктива инфильтрирована клетками, большую часть которых составляют способные к пролиферации лимфоциты, встречаются нейтро-филы, плазмоциты и тучные клетки, которые готовы принимать участие в тече-" ние воспалительного процесса в глазном яблоке [154].

Важную роль в иммунной защите глаза играют внутриглазная жидкость и стекловидное тело. Во влаге передней камеры глаза выявлены IgG и IgA, которые поступают в нее путем фильтрации из плазмы крови, и отдельные субпопуляции Т-лимфоцитов [154, 277]. Иммунная защита в стекловидном теле осуществляется за счет активного фагоцитоза гиалоцитами [154].

В передних отделах глаза существуют и функционируют иммуно компетентные клетки, в частности, Т-лимфоциты [139, 154, 277]. Поэтому, вероятно, важную роль в местной иммунной реактивности глаза играют и продуцируемые лимфоцитами цитокины, в частности, IL-1, IL-2, TNF, интерфероны [139; 165]. X.Y. Li с соавт. [277] установили, что иммунные реакции, наблюдающиеся в передней камере глаза, связаны с функционированием в основном Т-хелперрв 2-го типа (Th2), продукцией ими преимущественно противовоспалительного цитокина - IL-10. M.S. Kuppner с соавт. [275] выявили, что клетки пигментного эпителия сетчатки при определенных условиях способны синтезировать IL-6 и IL-8, Однако до настоящего времени роль цитокинов в обеспечении местного иммунитета глаза изучена недостаточно.

Таким образом, слезная жидкость, конъюнктива, а также роговица, выполняющая барьерную функцию, являются первой линией защиты, задача которых не пропустить чужеродный агент внутрь глаза. Местную иммунную защиту глаза наряду со слезой, конъюнктивой обеспечивают также внутриглазная жидкость и стекловидное тело. При несостоятельности факторов местной защиты в условиях патологии (например, травме глаза) к ним подключаются системные иммунные реакции.

Гематоофталъмический барьер. Глаз отделен от иммунной системы гематоофтальмическим барьером (ГОБ) и относится к так называемым "забарь-ерным" органам. Чужеродность тканей глаза для организма заложена в особенностях и характере их формирования в эмбриональном периоде, поэтому толе-рантность к антигенам глаза отсутствует. Благодаря своим особенностям, ГОБ отделяет влагу передней камеры, сетчатку, сосудистую оболочку от кровеносного русла. В области цилиарного тела барьер между кровью и водянистой влагой обеспечивается стенками сосудов* и двумя слоями цилиарного эпителия, в области радужки - только стенками сосудов. Между сетчаткой глаза и кровью барьер обеспечен специальной структурой стенок капилляров, питающих эту часть оболочки. Клетки эндотелия сосудов уложены плотно, каждая клетка перекрывает своим телом места соединения с соседними клетками таким образом,

что исключается возможность межклеточного диапедеза для клеток или мельчайших антигенных частиц из кровеносного русла. Такое строение ГОБ характерно для внутренней трети сетчатой оболочки. Остальная часть сетчатой оболочки зависит от кровообращения в хориоидее [154]. ГОБ действует как иммунный барьер, препятствуя миграции тканевых антигенов из глаза и поступлению иммунокомпетентных клеток в глаз [81, 139, 154]. Однако в норме под влиянием физиологических факторов сквозь ГОБ могут проходить молекулы массой меньше 150-900 Ша [139]. В основном через ГОБ диффундируют низкомолекулярные фракции белков, ряд аминокислот, таких как аргинин, тирозин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты, лизин, аланин, глицин, пролин и другие, которые используются для синтеза белковых структур глаза, например, коллагена [177]. Присутствующие в водянистой влаге моносахариды представлены, в основном, глюкозой. ГОБ также проницаем для неорганических катионов и анионов, аскорбиновой кислоты, концентрация которой в водянистой влаге значительно выше, чем в плазме крови [177]. ГОБ проницаем для разных формаскорбиновой кислоты, при недостатке которой наблюдается синтез ати-пического коллагена и нарушение ГОБ. Недостаток гиалуроновой кислоты, которая легко разрушается тканевыми ферментами, в частности гиалуронидазой, также приводит к снижению резистентности этого барьера [22,177].

Понятие "забарьерность" в последние годы также связывают с молекулами адгезии [139, 253, 280, 289]. Как известно, при помощи адгезионных молекул происходят взаимодействия между клетками иммунной природы по типу лиганд-рецептор, циркуляция иммунных клеток и их миграция из сосудистого русла в очаг воспаления. Установлена важная роль Fas-рецептора и Fas-лиганда в индукции апоптоза, который играет важную роль в реализации функций гема-тоофтальмического барьера [139, 235,"268]. В процессах прикрепления клеток к эндотелию сосудов и их миграции через этот слой важную роль играют такие молекулы адгезии как ICAM-1,2,3; LFA-1; VLA-4; VCAM-1 и другие. Так, ICAM-1 повышает адгезию нейтрофильных лейкоцитов к эндотелию, а миграция CD4⁺ клеток через монослой пигментного эпителия сетчатки зависит от

экспрессии таких адгезионных молекул как ICAM-1, LFA-1, VLA-4, VCAM-1 [139]. Регуляция экспрессии молекул адгезии осуществляется при участии ряда факторов, среди которых наиболее важную роль играют провоспалительные цитокины и хемокины [94, 162, 163, 164, 175]. Так, введение IL-1 приводит к повышению экспрессии ICAM-1 в цилиарном теле у мышей [139]. Необходимо отметить, что IL-1 и TNF, относящиеся к классу провоспалительных цитокинов, способны нарушать функционирование ГОБ [139].

Антигены тканевых структур глаза. Исследование свойств тканевых структур глаза позволило обнаружить на них ряд антигенных структур. Были выделены и изучены антигены роговицы, хрусталика (а-, Р-, у-кристаллины, альбуминоид), сетчатки (S-антиген, Р-родопсин, интерфоторецепторный рети-ноид, опсин), увеального тракта [81, 136, 154, 167, 242, 279, 280]. Кроме того, обнаружены перекрестно реагирующие антигены глаза и внеглазных органов, микробных агентов, HLA I и II (Га-антигенов) классов. Например, антигены хрусталика имеют общие детерминанты с антигенами сосудистой оболочки, стекловидного тела, сетчатки, роговицы и перекрестно реагирующие эпитопы с такими внеглазными тканями, как базальные мембраны почек, клетки кожи, печени, эндотелия сосудов и др. [81, 139]. Присутствие на мембранах клеток тканевых структур глаза HLA класса I и II (la-антигенов) способствует развитию аутоиммунных реакций, а наличие перекрестно реагирующих антигенов обуславливает повреждение глаз при общих аутоиммунных заболеваниях [81, 154].

Роговая оболочка состоит из трех разделенных двумя базальными мем-бранами слоев тканей - переднего и заднего эпителия, стромы, которые разли-" чаются по антигенному составу и ряду других признаков [20, 120, 154]. У крыс отсутствует наружная ограничивающая передний эпителий боуменова мембрана [171]. Наибольшее количество антигенов, структура которых может видоизменяться под влиянием факторов внешней среды (микробов, вирусов или других агентов), было выделено из переднего эпителия [154]. Так, Т.В. Беликовой с соавт., [20] методом иммуноэлектрофореза в экстракте роговицы было обнаружено 9 антигенов, большая часть из которых была локализована в эпителии и

строме. Незначительное количество антигенов на эндотелии роговицы, по мнению этих авторов, биологически целесообразно, так как появление при повреждении глаза аутоантител усугубило бы состояние этого слоя роговицы.

В сетчатой оболочке присутствует ряд антигенов, ассоциированных с сосудами, нервной тканью и локализующихся главным образом в слое фоторе-цепторных клеток [10, 139, 154]. Среди них наиболее изучен органоспецифиче-ский растворимый антиген сетчатки - S-антиген. В специально проведенных исследованиях были выявлены перекрестные детерминанты данного антигена с антигенами структур шишковидной железы, а также вируса гепатита В и ряда микроорганизмов. S-антиген может выступать в роли этиологического фактора при экспериментальном аллергическом увейте, В норме его увеитогенная способность маскируется связанным с ним белком с молекулярной массой 42 Ша [154]. Другим антигеном, способным вызывать развитие аутоиммунного заднего увеита, является антиген РЕР-65 (молекулярная масса 65 кД), выделенный с помощью современных методов иммуногистохимии из клеток пигментного эпителия.

Увеальный тракт, включающий радужную оболочку, цилиарное тело и собственно сосудистую оболочку, содержит органоспецифические и видовые антигены. Иммунологическая толерантность к ним полностью или частично отсутствует [154]. .' .

Среди антигенов хрусталика, имеющих высокую органную специфичность, выделены три фракции растворимых белков (а-, {3-, у-кристаллины) и одна - нерастворимых (альбуминоид). Антигены хрусталика чужеродны для ор-" ганизма, так как ко времени закладки тимуса хрусталик оказывается уже полностью изолирован от контакта с развивающимся организмом. К хрусталико-вым антигенам формируется толерантность "низкой зоны", связанная в основном с регуляторными субпопуляциями Т-лимфоцитов. "Срыв" механизма этого типа толерантности может развиваться при выходе в кровяное русло большого количества антигена [141,154].

Как уже указывалось, в тканях глаза экспрессированы антигены гисто-

совместимости I и II классов. Главный комплекс гистосовместимости - важнейшая генетическая система иммунного распознавания и взаимодействия клеток в иммунном ответе. Особый интерес к нему обусловлен наличием данных о связи различных нозологических форм и определенных гагшотипов HLA. Кроме того, знания о системе HLA применяются в трансплантологии, в частности, при пересадке роговицы. Есть мнение, что у клеток увеалъного тракта снижена экспрессия антигенов гистосовместимости [51, 52, 82, 139,154].

Повреждение гематоофтальмического барьера и развитие аутоиммунных: заболеваний глаз. Аутоиммунное поражение может возникнуть в результате модификации антигенов глаза, развития иммунных реакций на пере-крестнореагирующие антигены, нарушения гематоофтальмического барьера при травме, инфекционных или других патологических процессах [9, 57, 58, 82, 154]. К структурам "забарьерных" тканей, к которым относятся и ткани глаза, не формируется иммунологическая толерантность, так как не выполняется условие постоянного присутствия антигена в кровяном русле и длительного кон-такта'его с иммунокомпетентными клетками [154]. При проникающем ранении глаза происходит нарушение ГОБ, появление в кровотоке "забарьерных" антигенов и их контакт с иммунокомпетентными клетками.

В настоящее время известно, что аутоиммунные поражения органа зрения сопровождаются "определенными сдвигами в иммунной системе, в частности, снижением активности регуляторных Т-лимфоцитов, супрессирующих иммунный ответ за счет влияния на клоны В-клеток, которые продуцируют аутоанти-тела. Патологический синтез антител против собственных тканевых структур может быть вызван "срывом" иммунологической толерантности, изменением антигенной структуры различных клеток организма под влиянием факторов физической, химической или биологической природы, а также соматических мутаций [139,154].

Развитие аутоиммунных реакций при травме глаза может привести и к повреждению здорового нетравмированного глаза с появлением иммунного воспаления (симпатическая офтальмия) [7, 10]. Проблема поражения второго

глаза при посттравматических процессах изучена недостаточно. Однако ряд исследователей склоняется к мнению о многофакторном патогенезе поражения второго глаза - ведущей роли аутоаллергии, адъювантной роли инфекции, развивающейся в условиях иммунодефицита и генетической предрасположенности [9, 10, 12, 37, 82]. Но не всегда травма глаза приводит к аутоиммунному повреждению. Нередко иммунный ответ при травме глаза заканчивается развитием толерантности (при попадании в кровь малых доз антигена). В какую сторону "пойдет" иммунная реакция при травме глаза будет зависеть от ряда факторов: характера травмы, ее тяжести, локализации, степени повреждения тканей и т.д., т.е. от первичного пускового фактора, а также степени нарушения ГОБ, величины выхода аутоантигенов и состояния иммунной системы пострадавшего [9].

7.2. Изменения отдельных звеньев иммунной системы при ранении глаза

Нарушение функций Т- и В-лимфоцитов, Для того чтобы охарактеризовать степень выраженности изменений отдельных звеньев иммунной системы при проникающем ранении глаза, необходимо привести данные о нарушениях ее функций при механической травме в целом.

При травме различной локализации вследствие развития стрессорной перестройки нейроэндокр инной системы, тканевой и бактериальной токсемии и других факторов," развивается состояние иммунодепрессии [4, 18, 69, 73, 85, 87, 192, 224]. В экспериментальных исследованиях для оценки выраженности иммунной недостаточности при травме разной степени тяжести, прежде всего ис-следуют изменения гуморального и клеточноопосредованного иммунного ответа. Тяжелая травма, как правило, характеризуется угнетением специфических форм иммунного реагирования, что связано с угнетением процессов созревания Т- и В-лимфоцитов из стволовых кроветворных клеток, нарушением их взаимодействия при развитии иммунного ответа [2, 4, 30, 69, 73, 192]. При относительно легких механических повреждениях, наоборот, отмечена стимуляция гуморального и клеточноопосредованного иммунитета [2, 4, 29, 69, 73].

Рядом авторов отмечена периодичность нарушений иммуногенеза в тече-

ниє травматического периода [2, 69, 30]. И.И. Долгушин и соавт. [73] выделяют 3 периода в течение травматической болезни - период ранней иммунодепрессии, неспецифичный для любой травмы и захватывающий первые несколько дней после нее; период компенсации, развивающийся вслед за первой фазой практически любой травмы и характеризующийся усилением иммунореактив-ности; период поздней иммунодепрессии, возникающий только после обширных поражений. Независимо от вида травматического повреждения (глубокие ожоги, термические или механические повреждения кожи), в первые дни после травмы отмечалось снижение образования АОК при иммунном ответе на ти-мусзависимый (эритроциты барана) и тимуснезависимый (Vi-антиген S, typhy) антигены и эффекторов РТПХ и ГЗТ. Степень выраженности иммунодепрессии зависела, как от величины повреждения, так и от тяжести течения травматического процесса [69]. После механических повреждений кожи площадью 10% поверхности тела вслед за иммунодепрессией развивалась реакция, проявляющаяся в усилении выработки антител к эритроцитам барана, повышении интенсивности РТПХ и ГЗТ. При дальнейшем увеличении повреждения ткани внача-ле снижалась активность клеток, участвующих в реакциях трансплантационного иммунитета, затем - продукция антител к тимусзависимым антигенам. После обширных травм поддерживалась на высоком уровне лишь выработка антител к тимуснезавйсимым антигенам [69]. Выраженной периодичностью характеризовались и изменения числа стволовых кроветворных клеток, их миграции из костного мозга, числа и функциональной активности Т- и В-клеток, более деталь-но изученные в моделях ожоговой травмы [69]. Угнетение иммунного ответа в первые дни после травмы может быть связано, по мнению авторов, с действием низкомолекулярных веществ, содержащихся в сыворотке крови, в частности, нейтрофилокинов и "среднихмолекул" [44, 69, 71, 104,105].

В.Н. Александров [2] исследовал изменение отдельных звеньев иммуногенеза в экспериментальной модели раздавливания мягких тканей бедер мышей. Было установлено, что подобная травма, затрагивающая практически все звенья иммунной системы, характеризуется развитием вторичной иммунной

недостаточности, в течение которой автором было выделено две стадии. Первая - стадия явной иммунной недостаточности (первые 7 суток после травмы) - характеризовалась подавлением гуморального иммунного ответа на эритроциты барана вследствие угнетения кооперации Т- и В-лимфоцитов, функций Т-хелперов и предшественников В-клеток и активации супрессорных лимфоцитов. На 1-е сутки после тяжелой политравмы было отмечено снижение числа стволовых клеток в костном мозге и миграции В-лимфоци-тов из костного мозга, однако миграция Т-лимфоцитов из тимуса и число стволовых клеток в селезенке повышались [4]. Вторая - стадия скрытой иммунной недостаточности развивалась спустя 7 суток после травмы. Типичным для нее являлись стимуляция иммунного ответа при иммунизации эритроцитами барана на фоне неполноценной кооперации Т- и В-клеток, Т-хелперов, предшественников В-лимфоцитов [2]. Переход первой стадии во вторую, по мнению автора, связан с включением приспособительных реакций: повышением способности макрофагов к индукции гуморального иммунного ответа, усилением способности мигрировавших в костный мозг Т-лимфоцитов изменять дифференцировку стволо-вых кроветворных клеток в миелоидном направлении, усилением миграции стволовых клеток из костного мозга в лимфоидные органы [2],

На основании проведенного экспериментального исследования влияния закрытой травмы груди на распределение популяций Т- и В-клеток в центральных и периферических органах иммунитета крыс Е.А. Вагнером с соавт. [30] в течении травматического периода были выделены 3 фазы. Первая фаза - анти-генно-стресс орная, возникающая непосредственно после травмы и продолжающаяся 5-7 суток. Она характеризуется повышением числа В-лимфоцитов в периферической крови, регионарных лимфатических узлах, селезенке и снижением количества Т-клеток в крови, тимусе, регионарных и отдаленных лимфатических узлах. Генерализованное снижение количества Т-лимфоцитов авторы связывают со стресс орной реакцией межорганного перераспределения лимфоцитов. Вторая фаза - Т-клеточной гиперплазии, характерная для травм легкой и средней степени тяжести, возникает со 2-й недели после нанесения травмы и

продолжается 2-3 недели. Эта фаза характеризуется увеличением числа Т-клеток в тимусе, селезенке, медиастинальных лимфатических узлах и крови. Возникающую Т-клеточную гиперплазию авторы объясняют как средство усиления иммунного надзора, так как после травматического повреждения в организме появляются видоизмененные ауто антигены и создается риск аутоагрес-сии. Третья фаза определяется состоянием организма во вторую фазу. После Т-клеточной гиперплазии наступает нормализация структуры лимфоидных органов, но если число Т-клеток спустя 2 недели после травмы находится на низком уровне, резко возрастает риск осложнений [30].

В некоторых клинических работах также показано изменение отдельных популяций лимфоцитов в зависимости от тяжести травматического повреждения [224], Н.А. Шиловой [224] выявлено снижение числа Т-лимфоцитов с повышенной аффинностью CD2 в крови пациентов с неосложненной травмой груди на 1-2-е и 5-7-е сутки от момента травмы, в то время как у больных с гнойными осложнениями эти изменения отсутствовали.

Анализируя данные литературы, необходимо отметить, что компонентом любой травмы является развитие выраженных стрессорных реакций, сопровождающихся активацией гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой и симпато-адреналовой систем [71, 80, 121, 155, 158]. Изменения иммунологических показателей при травматическом повреждении носят фазный характер [2, 30, 69, 73] и протекают по типу общего адаптационного синдрома Г.Селье [160]. Согласно классическим исследованиям [300], первая стадия стресса - стадия тревоги продолжается от 6 до 48 часов после повреждения. Она характеризуется наиболее выраженной недостаточностью функций иммунной системы (инволюцией тимуса, Т-лимфопенией, миграцией Т-лимфоцитов в костный мозг и соединительную ткань, угнетением гуморального и клеточноопосредованного иммунного ответа, недостаточностью клиренсовой функции клеток СМФ) [56, 66, 68, 84, 85, 87]. Вторая - стадия повышенной резистентности проявляется резким повышением устойчивости организма к действию стрессора. Некоторые авторы отмечают активацию иммунного ответа в этот период при механической травме

[З, 29, 192], Третья стадия - стадия истощения развивается только при очень тяжелых формах стресса, когда адаптационные возможности организма оказываются исчерпанными.

Выраженность активации симпатической нервной системы и гипотапамо-гипофизарно-надпочечниковой оси, оцениваемой по уровням катехоламинов и кортизола в плазме крови, коррелирует с тяжестью механической травмы [257]. Степень супрессии клеточноопосредованного иммунитета тесно связана со снижением продукции IFN-y, IL-12 и повышением секреции IL-10, то есть с переключением иммунного ответа на Th2 тип. В серии работ С. Woiciechowsky с соавт. [315, 316, 317] показана ключевая роль запускаемого через р-адренергические рецепторы в условия гиперактивации симпатической нервной системы повышения концентрации в крови IL-10 в развитии системной имму-нодепрессии при тяжелой механической травме. Этот процесс отменялся при введении неселективного Р-адреноблокатора пропранолола. По мнению C.R. Plata-Salamon [296], этот механизм играет важную роль в развитии инфекционных осложнений при травме.

В отличие от механической травмы в целом, при которой выраженность иммунных сдвигов во многом определяется тяжестью травматического повреждения, при ранении глаза степень иммунологических нарушений может зависеть и от локализации.раны [34]. Так, в экспериментах Г.А. Виньковой [34] при прободных ранениях глаза были выявлены развитие изменения концентрации циркулирующих медиаторов воспаления, накопление ЦИК в слезе. При рого-вично-склеральном ранении отмечено снижение количества В-лимфоцитов в кровотоке, увеличение уровня IgM, IgG, повышение активности лизоцима [34]. Выявлена зависимость силы иммунного ответа от глубины и близости к лимбу введения антигенов в роговицу. Антиген, попавший в центр роговицы, вызывает более слабый иммунный ответ, чем антиген, попавший в прелимбальную область. Это связано с тем, что иммунный ответ в большей мере зависит от степени васкуляризации и выхода антигена через сосуды прелим бальной сети, а также возможности проникновения в роговицу лимфоцитов, всегда присутствую-

щих в конъюнктиве в непосредственной близости к лимбу [154].

Проникающее ранение глаза сопровождается изменениями в иммунной системе с. преимущественной недостаточностью Т-клеточного звена. В ряде работ [13, 35, 37, 57, 58, 91, 200] отмечено снижение абсолютного и относительного количества Т-лимфоцитов в ранний травматический период. Степень снижения зависит от характера травмы и течения травматического процесса. При благоприятном течении раневого процесса наблюдается временное снижение показателей Т-клеточного звена иммунитета, что, вероятно, связано с развитием временной лимфопении и перераспределением иммунокомпетентных кле-ток, при осложненном течении развивается стойкое снижение абсолютного и относительного количества Т-лимфоцитов [35].

Сравнительный анализ содержания Т-лимфоцитов на субпопуляционном уровне показал снижение Т-лимфоцитов с хелперной активностью, дефицит и гиперактивность регуляторных Т-лимфоцитов, супрессирующих иммунный ответ [9, 81, 200]. Выраженное нарушение соотношения субпопуляций отмечено у больных с осложненным течением травматического периода [35]. Обнаружение дисбаланса регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов важно для выбора метода иммунокоррекции, направленной на стимуляцию или супрессию функций той или иной субпопуляции Т-лимфоцитов [35]. В ряде случаев при проникающей травме глаза отмечается увеличение числа активированных Т-лимфоцитов (экспрессирующих la-антигены или МНС класса II), что свидетельствует о благоприятном течении раневого процесса в глазу и обеспечивает адекватный от-вет/на травму [35, 37].

В меньшей степени выражены изменения числа В-лимфоцитов. При благоприятном течении травматического процесса количество В-лимфоцитов остается в пределах нормы, при осложненном - их число увеличивается и превышает контрольные показатели в течении длительного времени [35].

Исследованию концентрации иммуноглобулинов при травме глаза посвящен ряд работ [37, 139, 154]. По содержанию Ig разные структуры глаза резко отличаются между собой. Присутствие Ig может быть обусловлено местным

синтезом, а также фильтрацией молекул из кровяного русла [139]. Е.И. Волик [37] при изучении гуморального звена у пострадавших наблюдала дисбаланс уровней в крови IgA, IgG и IgM.

Таким образом, степень изменения показателей, характеризующих состояние Т- и В-систем иммунитета, при проникающем ранении глаза и при механической травме другой локализации имеют в целом одинаковую направленность. Однако степень выраженности иммунных отклонений при травме глаза во многом определяется не только тяжестью повреждения, но и локализацией раны, а именно близостью к лимбу.

Роль гранулоцитов е травматическом процессе. Гранулоциты - это полиморфноядерные лейкоциты периферической крови, имеющие единых костномозговых предшественников. Наиболее многочисленными из всех поли-морфноядерных лейкоцитов являются нейтрофилы. Долгое время нейтрофиль-ные гранулоциты оставались вне поля зрения иммунологов, так как большее внимание уделялось лимфоцитам и макрофагам как основным участникам иммунных реакций [70]. В настоящее время имеются работы, посвященные изучению роли и функций нейтрофильных гранулоцитов при травме [71, 73, 192].

Циркулирующие в крови нейтрофильные лейкоциты представляют собой армию фагоцитирующих клеток, обладающих высоким мобилизационным потенциалом и, благодаря этому, быстро реагирующих на любое повреждение органов и тканей. Нейтрофилы первыми мигрируют в зону альтерации, где активно участвуют в развитии воспаления [76, 95, 124, 125, 150, 201, 202]. Нейтро-фильный лейкоцитоз - стандартная реакция при всех видах повреждений, выраженность которого зависит от степени тяжести травмы: чем массивнее повреждение, тем выше численность сегментоядерных нейтрофилов в крови [101, 192, 194]. Так, в основе развития нейтро фил ьного лейкоцитоза в ранний травматический период лежат перераспределительные механизмы, а в более поздние сроки развития воспалительного процесса он связан с увеличением продукции соответствующих форм клеточных элементов в костном мозге [76, 192].

Важной функциональной характеристикой нейтрофильных гранулоцитов, непосредственно связанной с их участием в процессе воспаления и фагоцитозе, является их способность перемещаться в пространстве. Миграция нейтрофилов может быть направленной (хемотаксис) и случайной (хемокинез). При различных травматических состояниях отмечено как угнетение, так и активация спонтанной миграции нейтрофильных лейкоцитов. Выявлены нарушения хемотак-сической активности нейтрофилов при травме, связанные с отвлечением наиболее зрелых клеток в очаг повреждения и/или с выходом из костного мозга незрелых лейкоцитов, не способных к полноценному хемотаксису [192].

О течении патологического процесса при проникающей травме глаза можно судить по состоянию ферментного статуса нейтрофилов (активности щелочной и кислой фосфатаз, миелопероксидазы, количеству катионных белков и гликогена). При благоприятном течении травматического периода наблюдается повышение содержания щелочной и кислой фосфатаз, нейтральных полисахаридов, катионных белков, т.е. отмечается активация микробицидных систем нейтрофилов, что является физиологической реакцией на повреждение органа зрения [38]. Напротив, изменения активности щелочной и кислой фосфатаз, угнетение активности миелопероксидазы и снижение уровня нейтральных полисахаридов указывают на истощение энергетического потенциала нейтрофилов, разбалансировку в работе микробицидных систем, которая в свою очередь способствует развитию осложнений в посттравматическом периоде.

Существует два вида механизмов дезинтеграции антигенов в фагоците -кислородозависимые и кислородонезависимые. Включение кислородозависи-мых механизмов происходит сразу, как только инициируется фагоцитоз. При этом происходит резкая активация потребления глюкозы клеткой в дихотомическом и апотомическом путях, увеличение потребления кислорода и выделения СОг. Из-за быстроты этих изменений их назвали дыхательным или респираторным взрывом [71, 95, 122, 124, 125, 150, 179, 265, 298]. При активации апотомического пути (пентозный цикл) происходит повышенное образование НАДФН+Н, который используется для восстановления молекулярного кисло-

рода. Этот процесс катализируется уникальным мультиферментным мембранным комплексом - НАДФН-оксидазой - и сопровождается бурным потреблением кислорода. В результате образуются супероксидный анион, пероксид водорода, синглетный кислород и гидроксидные радикалы. Все они являются мощными микробицидными агентами. Более того, сочетание пероксида, миелопе-роксидазы и ионов галогенов создает высоко функциональную систему галоге-нирования, способную вызвать гибель, как бактерий, так и вирусов [298].

Для оценки изменений этих механизмов микробицидности распространение получили два метода: восстановление при участии НАДФН-оксидазы фагоцитов нитросинего тетразолия (НСТ-тест) и метод люминолзависимой хеми-люминисценции [150, 183, 297]. Последним выявляется экстрацеллюлярная продукция активных форм кислорода. Для регистрации образования интроцел-люлярных активных форм кислорода используется обработка клеток дихлор-флюоресцеином диацетатом с последующим анализом методом проточной лазерной цитометрии [67,150]. Продукция активных форм кислорода, измеряемая этими методами, при ряде состояний изменяется прямо противоположно [228]. Показано, что полиоксидоний в системе in vitro достоверно угнетал продукцию внеклеточных форм активного кислорода, регистрируемую с помощью люминолзависимой хемилюминисценции, но активировал образование внутриклеточной перекиси водорода по данным проточной цитометрии с дихлорфлюо-ресцином диацетатом [67]. В НСТ-тесте, по-видимому, регистрируется преимущественно внутриклеточный окислительный потенциал фагоцитов.

^} В последние годы открыт еще один кислородозависимый механизм микробицидности, связанный с образованием активированными фагоцитирующими клетками оксида азота (N0), который оказывает токсическое действие на микробные клетки и регистрируется в реакции с реактивом Грисса на спектрофотометре. Индукторами образования N0 являются IFN-y и TNF, Эти цитокины повышают активность фермента нитрикоксидсинтетазы (NOS) [313]. NOS катализирует реакцию превращения аминокислоты аргинина в цитруллин с образованием N0:

L-аргинин + O2 > цитруллин + NO.

тетрагидробиоптерин

В кислороднезависимых механизмах бактерицидности при дисмутации супероксиданиона потребляются ионы водорода и слегка повышается рН, а это создает оптимальные условия для функционирования семейства катионных белков, которые еще не полностью охарактеризованы. Эти белки разрушают бактериальную мембрану как за счет протеиназного эффекта (нейтральная про-теиназа катепсин G), так и за счет непосредственного присоединения к поверхности микроорганизма. Низкие значения рН, лизоцим и лактоферрин - это ки-слородонезависимые бактерицидные и бактериостатические факторы, которые могут действовать в анаэробных условиях. Помимо этого важную роль в кисло-родонезависимых механизмах играют интенсивно исследуемые в последние годы группы защитных белков - дефензины и кателицидины [71, 150, 298]. Недостаточность этих белков показана при стрессе [273]. В конечном счете, убитые микроорганизмы расщепляются гидролитическими ферментами, и продукты деградации высвобождаются из клетки.

Изменения микроскопического варианта НСТ-теста у больных с проникающим ранением глаза исследованы Е.И. Волик [37]. Установлено, что проникающая травма глаза оказывает дестабилизирующее воздействие на микроби-цидность нейтрофилов. Это подтверждено показателями стимулированного и спонтанного вариантов НСТ-теста: при благоприятном течении травматического периода показатели микроскопического варианта НСТ-теста незначительно повышались и снижались до уровня контроля к концу травматического процесса. При осложненном течении показатели НСТ-теста были ниже контрольных в течение длительного времени [37].

Поглощение нейтрофилами чужеродного материала - одна из важнейших функций этих клеток [71, 150, 192]. В литературе имеются данные о стимуляции и подавлении фагоцитарной активности нейтрофилов при травме [4, 192].

Усиление фагоцитарной активности нейтрофилов часто расценивается как защитная реакция [4], хотя нередко повышение поглотительной способности ней-трофильных гранулоцитов может наблюдаться и на фоне развившихся воспалительных и гнойных осложнений [192].

Сообщения о состоянии фагоцитоза при патологии глаз немногочисленны и в основном касаются фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови. Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови при некоторых глазных заболеваниях изучалась А.Ф. Корниловой с соавт. [111]. Ими выявлены четкие различия в фагоцитарной реакции нейтрофилов периферической крови при воспалительных и невоспалительных заболеваниях глаз. Установлено, что у подавляющего большинства здоровых лиц и больных с невоспалительными заболеваниями глаз все показатели фагоцитоза находились в пределах нормы. При воспалительном процессе экзогенного и эндогенного происхождения отмечали угнетение и дисфункцию фагоцитоза у половины больных. При благоприятном течении воспалительного процесса в случае проникающей травмы глаза имелся высокий уровень активности фагоцитоза (числа фагоцитирующих клеток), стабильные показатели поглотительной способности нейтрофилов (процент фагоцитоза, фагоцитарное число, фагоцитарный индекс) и стимуляция переваривающей функции нейтрофилов периферической крови больных [36, 37, 111]. При осложненном течении уровень поглотительной способности нейтрофилов оставался достаточным на фоне прогрессирующего угнетения переваривающей функции нейтрофилов. Е.И. Волик с соавт. [39] выявили увеличение количества циркулирующих в периферической крови нейтрофиль-ных гранулоцитов и их способность экспрессировать на своей мембране рецепторы к эритроцитам барана при проникающей травме глаза на фоне воспаления.

Таким образом, функции нейтрофильных фагоцитов изменяются и при таких локальных травмах, как повреждение глаза, структурные элементы которого в норме отделены от клеток крови гематоофтальмическим барьером.

В то же время изменения показателей микробицидной активности нейтрофилов крови при проникающем ранении глаза в динамике и влияние на нее

стандартных схем терапии изучены недостаточно. В последние годы нейтро-фильные гранулоцити рассматриваются не только как второстепенные клетки, обладающие фагоцитарной функцией и играющие роль в воспалении, но и как активные продуценты целого ряда биологически активных соединений [71]. Установлено, что активированные или стимулированные латексом нейтрофилы секретируют группу низкомолекулярных пептидных молекул, названных ней-трофилокинами. Показано участие нейтрофилокинов в изменениях функций иммунной системы при травме. Установлена их способность вызывать реакции в системе крови, сходные с проявлениями общего адаптационного синдрома, регулировать функции иммунокомпетентных клеток, принимать участие в регуляции антимикробной резистентности, повышать функциональную активность фагоцитов [70, 72, 105].

Для выполнения своих функций, фагоцитирующие гранулоциты мигрируют из кровеносного русла в ткани, очаг воспаления. В процессе миграции этих клеток через посткапиллярные венулы важную роль играют молекулы адгезии и хемокины. Основная функция хемокинов - привлечение клеток в зону повреждения. В настоящее время известны 4 основных семейства хемокинов -СХС (а-хемокины), СС ((З-хемокины), С (у-хемокины), СХЗС (5-хемокины) [175, 239]. В отношении нейтрофилов функционально активны преимущественно хемокины семейства СХС (в частности, IL-8, GRO-cc, Р, у), а в отношении моноцитов, базофилов и эозинофилов - преимущественно, СС семейства (МСР-1, RANTES, МІР и др.) [175]. Хемокины действуют через мембранные рецепторы/характерной особенностью структуры которых является наличие 7 трансмембранных доменов [175, 245, 295]. Семейство хемокиновых рецепторов представлено 18 белками, которые по номенклатуре 2002 г включают 4 основных подсемейства и два дополнительных рецепторных белка - Duffy и D6 [295]. На поверхности клетки располагаются не все типы хемокиновых рецепторов, что обуславливает, вероятно, неодинаковую чувствительность клеток к разным хемокинам. Так, например, на нейтрофилах отсутствует рецептор к эотаксину (CCR3), который в большей степени представлен на эозинофилах, и может экс-

прессироваться на базофилах, а также на Т-лимфоцитах. Несмотря на то, что CXCR4-peu.enTop представлен на большинстве клеток крови и тканей различных органов, он отсутствует на поверхности нейтрофилов [175,245].

Миграцию фагоцитов через посткапиллярные венулы, а также прикрепление микроба на поверхности фагоцитирующей клетки определяют молекулы адгезии [71, 245, 288]. Важную роль в адгезии патогенного микроба играют неспецифические рецепторы, распознающие структуры возбудителей (pattern recognition receptors, PRR). Эти рецепторы могут быть расположены на поверхности фагоцитирующих клеток (например, CD 14, интегрины) и находиться в составе сывороточных белков (например, С-реактивный белок, маннозосвязы-вающий белок). PRR неспецифически распознают молекулярные структуры, ассоциированные с патогенными микроорганизмами (pathogen-associated molecular pattern, PAMP), в частности, тейхоевые кислоты, липополисахариды грамотрицательных и грамположительных бактерий [150, 288]. К PRR, вероятно, можно отнести tool-подобные рецепторы (tool-like receptor, TLR), гомоло-/ гичньіе tool-рецепторам, впервые обнаруженным у дрозофилы [288]. В настоящее время у млекопитающих открыто два семейства этих рецепторов, расположенных на фагоцитирующих клетках - TLR4 и TLR2. У мышей TLR экспрес-сированы на макрофагах и на В-лимфоцитах. Установлено, что эти рецепторы способны неспецифически связываться с липополисахаридами бактерий, запускать активацию NF-kB -.ядерного фактора, который в фагоцитирующих клетках индуцирует на уровне транскрипции экспрессию некоторых цитокинов (хемокинов) и костимулирующих молекул, регулирующих адоптивный иммунный ответ. В процессе связывания TLR с липополисахаридами бактериальной стенки важную вспомогательную роль играют молекулы CD 14 [288].

Другим вариантом клеточной адгезии является феномен опсонизации, связанный с наличием на мембране фагоцитов рецепторов к Fc-фрагменту иммуноглобулинов (CD64, CD32, CD16 - рецепторы к Fc-фрагменту IgG у моноцитов, нейтрофилов и эозинофилов; CD23 - низко аффинный рецептор к Fc-фрагменту IgE у эозинофилов; CD89 -рецепторы к Fc-фрагменту IgA у моноци-

тов, гранулоцитов) и рецепторов к компонентам комплемента. Прежде всего -это рецепторы к СЗЬ компоненту комплемента и его аналогам (СЗЬі и др.). К ним относятся рецепторы Ї типа или CRI (CD35), рецепторы III типа или CRIII (CDllb/CD18), рецепторы IV типа или CRIV (CDllc/CD18). Благодаря им осуществляется адгезия комплексов антиген-антитело-комплемент. Важную роль в активации фагоцитов играют и рецепторы к растворимым, активным компонентам комплемента - СЗа и С5а (рецептор к С5а - CD88) [71, 150].

Миграции фагоцитов через посткапиллярные венулы способствуют молекулы клеточной адгезии, относящиеся в первую очередь к семействам селекти-нов, интегринов и иммуноглобулинов. Селектины инициируют обратимую лейкоцитарную адгезию [26, 71, 102, 137]. Так, например, на нейтрофилах экспрес-сируется L-селектин, обеспечивающий взаимодействие этих гранулоцитов с эндотелиоцитами, их роллинг и миграцию. L-селектин обнаружен на поверхности базофилов, в меньшей степени на эозинофилах [71, 239, 245]. Для ранних событий в процессе эмиграции лейкоцитов (перекатывание) важную роль играют муциноподобные адрессины - CD34, MadCAM и GlyCAM. Интегрины, как правило, определяют необратимый характер адгезии [71]. Для процесса фагоцитоза важны такие молекулы адгезии семейства интегринов, как LFA-1, Мас-1, CDllc/CD18. LFA-1 (CDlla/CDIS), обеспечивающий прилипание и трансмембранную миграцию из циркуляции в ткани, экспрессирован на поверхности всех лейкоцитов, но преимущественно на нейтрофилах и базо филах. Мас-1 (CDllb/CD18) присутствует на нейтрофилах и моноцитах, индуцирует зависимое от адгезии движение клеток в экстравазальное пространство, респираторный взрыв, фагоцитоз опсонизированных частиц и продукцию этими клетками цитокинов. С фагоцитозом опсонизированных частиц связана и функция CDIlc/CD18. При воспалительных процессах экспрессия на клетках селек-тинов и интегринов усиливается [71, 239, 245]. Молекулы адгезии фагоцитов (например, ICAM-1,2,3) взаимодействуют и с веществами внеклеточного мат-рикса - фибрином, фибронектином и ламинином.

Установлено, что миграция CD4⁺ клеток через монослой культуры ткани

пигментного эпителия сетчатки зависит от экспрессии таких молекул клеточной адгезии, как ICAM-1, LFA-1, VLA-4, VCAM-1. У астроцитов диска зрительного нерва выявлены специальные адгезивные молекулы (NCAM), которые формируют функциональный барьер против миелинизации [139, 253, 289].

Необходимо также отметить, что на экспрессию молекул адгезии на фагоцитирующих клетках значимое влияние оказывают цитокины, в частности, секретируемые Т-лимфоцитами, что дает возможность говорить о косвенном участии Т-лимфоцитов в фагоцитозе. Установлено, что продуцируемый ТЫ-лимфоцитами TNF усиливает экспрессию молекул адгезии сначала на эндоте-лиальных клетках и нейтрофилах, а затем на мононуклеарных фагоцитах. Для активации макрофагов и повышения на них экспрессии молекул адгезии необходимы два сигнала цитокинов, первый - INF-y, второй - TNFa и IL-1 [150].

Наряду с фагоцитозом нейтрофилы осуществляют экзоцитоз содержимого гранул и секрецию растворимых регуляторных продуктов. При фагоцитозе происходит гиперполяризация мембраны и выброс активных форм кислорода и гидроксильных радикалов, что может приводить к повреждению тканей органа, в частности, тканей глаза. Одновременно из гранул нейтрофилов в очаг воспаления выходят деструктивные ферменты и медиаторы воспаления. Развитие воспаления усиливается в результате образования иммунных комплексов, которые активируют белки системы комплемента с образованием растворимых фрагментов (прежде всего СЗа и С5а, обладающих активностью хемоаттрактан-тов), что приводит к нейтрофильной инфильтрации очага воспаления [71, 139]. Поэтому гиперактивация нейтрофилов и других фагоцитирующих клеток может усиливать явления вторичного повреждения при воспалении [191].

Помимо нейтрофильных гранулоцитов и клеток моноцитарно-макрофагального ряда к числу фагоцитирующих клеток относят эозинофилы. Фагоцитарной активностью обладают базофилы и тучные клетки соединительной ткани [125, 251, 284]. Вклад эозинофилов и базофилов в общую фагоцитарную активность лейкоцитов крови по сравнению с нейтрофильными гранулоцитами сравнительно невелик, однако эти клетки важны как продуценты цито-

кинов и низкомолекулярных медиаторов воспаления на уровне слизистых. Содержание эозинофилов и особенно базофилов в периферической крови составляет у большинства животных не более 2% от общего числа лейкоцитов. Однако известно, что резерв эозинофилов в костном мозге значителен и при необходимости (например, аллергических реакциях) эти клетки легко выбрасываются наружу [73]. Помимо этого эозинофилы - основной тип неспецифических эф-фекторных клеток в слизистых [245, 261]. Наиболее важными хемокинами для эозинофилов являются эотоксин, эотоксин-2, МСР-3, МСР-4, RANTES и некоторые другие, активирующие эозинофилы через расположенные на них CCR3-рецепторы. Маркерной для эозинофилов молекулой является VLA-6 [245]. Установлено, что при стрессе и связанных с ним состояниях, развивается эозино-пения, связанная с действием на эти клетки глюкокортикоидов [56, 287]. Основная функция базофилов и тучных клеток - участие в эффекторном звене противопаразитарного иммунитета и в аллергических реакциях [19]. Взаимодействие базофилов с IL-3, благодаря наличию на этих клетках специфического рецептора к данному цитокину, приводит к увеличению адгезивной способности базофилов к эндотелию, и-повышению экспрессии на них CD lib. Однако трансэпителиальная миграция базофилов не изучена [245]. Практически не изучена роль эозинофилов и базофилов в травматическом процессе. Однако установлено участие эозинофилов в процессе травматической регенерации [301]. Эозинофилы участвуют в раневом процессе, выделяя TGF-a и {Зі [319, 320]. Эо-зинофильная инфильтрация кожной раны, а также наличие в этих клетках TGF-a и его мРНК обнаружены и у кролика [308]. Помимо этого, эозинофилы выделяют фактор роста гепатоцитов (HGF), влияющий на регенерацию альвеолярного эпителия И-го типа и других эпителиальных клеток, продукция которого инициируется интерлейкином-5 [301].

Участие, макрофагов в травматическом процессе. Важную роль в механизмах естественной резистентности, а также в афферентную и эффекторную фазы иммунного ответа играют мононуклеарные фагоциты, которые в настоящее время объединены с гистогенетических позиций в единую систему моно-нуклеарных фагоцитов (СМФ) [124,125, 176, 178].

Макрофаги выполняют чрезвычайно многообразные и важные функции: они играют ключевую роль в индукции и регуляции гуморального и клеточного иммунитета, участвуют в реакциях ГЗТ, формировании противоинфекционной резистентности, противоопухолевого иммунитета, в воспалении и регенерации. Являясь секреторными клетками, макрофаги выделяют большое количество биологически активных соединений (IL-loc и р, EL-6, IL-10, IL-15, IL-19, IL-26, TNF, IFN-a и р, хемокины, TGF-p\ ангиогенин и другие цитокины ангиогенеза, простагландины, лейкотриены и т.д.), модулирующих функцию полинуклеаров, лимфоцитов, фибробластов и других клеток [73, 94, 99, 255].

При механической травме различной локализации выявлены изменения функций макрофагов, В первые сутки после травмы мягких тканей бедра отмечено существенное снижение антигенпредставляющей функции макрофагов, которая приходила в норму и увеличивалась к 4-8-м суткам после травмы [2]. В других экспериментальных моделях выявлено угнетение способности макрофагов к захвату и перевариванию антигена в первые сутки после травматического повреждения и восстановление этой способности к концу 1-й недели [69]. Угнетение фагоцитарной активности макрофагов при механической травме различных органов, которая может проявляться в снижении клиренса из кровотока чужеродного материала, отмечено в ряде других работ [124, 125, 178, 192].

Изучение участия цитокинов макрофагального происхождения в системе местного иммунитета глаза находится еще в стадии начальных разработок, но известны данные о важной роли IL-la и р, IL-6, TNF-a и р, IFN в системе местного иммунитета [139, 310]. В литературе' имеются сведения о повышенном --- уровне образования IL-1 макрофагами при механической травме разной локализации. IL-1 обладает широким спектром регуляторной активности, что определяет важную роль этого монокина в травматическом процессе. IL-1 активирует Т- и В-лимфоциты, NK-клетки, стимулирует синтез лимфокинов и повышает цитотоксичность макрофагов, участвует в процессах регенерации, стимулируя пролиферацию фибробластов, активирует образование коллагена и кол-лагеназы [109, 118]. IL-1 можно отнести к категории цитокинов, нарушающих

гематоофтальмический барьер [139]. Обнаружение повышенного содержания IL-ір в сыворотке крови является фактором риска развития гнойных и экссуда-тивных осложнений при проникающих ранениях и операционной травме глаза [37]. Важную защитную роль при травме выполняет IL-6, продуцируемый макрофагами. Установлено, что этот цитокин не только усиливает влияние эпидер-мального фактора роста на пролиферацию гепатоцитов, но способен самостоятельно активировать деление печеночных клеток, усиливать синтез ими белков острой фазы воспаления. Еще одно важное свойство IL-6 - способность стимулировать синтез фибронектина [262].

Основным противовоспалительным цитокином является IL-10, так как он супрессирует главные эффекторные функции макрофагов при воспалении, но может и усиливать синтез провоспалительных цитокинов - IL-6 и IL-8 клетками пигментного эпителия сетчатки [139]. О.С. Слепова с соавт. [60, 166] исследовали изменения концентрации TNF-a в слезной жидкости и сыворотке крови больных с разной глазной патологией, в том числе и с корнеосклеральньши ранениями глаза. Исследование слезной жидкости показало, что при проникающих ранениях глаза, особенно при неблагоприятном течении и исходе, резко увеличивается частота выявления повышенного уровня TNF-a. Сравнительный дефицит TNF-a в слезной жидкости отмечался и при тяжелых контузиях глаза. Следовательно, как длительное усиление локальной продукции TNF-a, так и практическое ее отсутствие в активный период болезни - проявление иммунологических нарушений, способствующее развитию тяжелых форм глазных за-болеваний. Результаты исследования продукции монокинов, эффектов их воздействия при различных повреждениях и септических посттравматических осложнениях показали важную роль макрофагальных медиаторов в развитии патологических и адаптационных процессов. Однако пока остается не установленной взаимосвязь между фагоцитарной функцией макрофагов и их секреторной активностью. Секреция интерлейкинов в раннем травматическом периоде, по-видимому, носит защитный характер и направлена на усиление процессов иммуногенеза, стимуляцию синтеза фибронектина, повышение антипротеиназ-

ной активности сыворотки крови. При массивных травмах эта реакция превращается в патологическую, ведущую к развитию шока. Возникновение генерализованного деструктивного процесса значительно ослабляет резервы макрофа-гальной системы, "обезаруживает" нейтрофилы, подавляет функции лимфоцитов, что нередко сопровождается развитием различных осложнений.

Таким образом, следует подчеркнуть большое значение систем не специфической резистентности для обеспечения устойчивости организма к травме. Включаясь на самых ранних этапах травматической болезни, они во многом определяют дальнейшее развитие патологических процессов [192].

1.3. Стрессорный компонент травматических дисфункций иммунной системы

Наряду с развитием воспаления обязательным компонентом механической травмы являются общие реакции с вовлечением (в том числе и через про-воспалительные цитокины - IL-loc и р, IL-6, TNF-a) нейроэндокринной системы и запуском реакций долговременного (общего адаптационного синдрома) и краткосрочного (симпатоадреналового) стресса [107, 192, 194, 271]. В ранние сроки травмы в изменениях функций иммунной системы ведущую роль играют гормоны коры надпочечников и катехоламины [108, ПО, 123].

В настоящее время развивается концепция о двух различных адаптационных стратегиях - резистентной и толерантной [41, 42, 46, 104, 113, 187]. Толерантная стратегия - филогенетически более древняя и характерна в большей степени для пойкилотермов и зимнеспящих животных, предполагает "уступку" окружающей среде, минимализацию функций, экономию резервов с целью выживания в тяжелых условиях, снижение потребления кислорода и катаболизма. Эта стратегия реализуется за счет эффектов аденозина, серотонина, у-аминомасляной кислоты, ацетилхолина, катехоламинов [46, 113].

Наиболее частой стратегией приспособления к окружающей среде у млекопитающих является стратегия резистентности, характеризующаяся активным противодействием внешней среде, максимизацией функций основных физиоло-

гических систем. В данном случае неблагоприятные воздействия на организм вызывают активацию симпато-адреналовой системы и гипоталамо-гипофизар-но-надпочечниковой систем, составляющих основу общего адаптационного синдрома [113, 160]. В зависимости от выраженности действия повреждающего фаісгора стресс может протекать в двух основных формах — краткосрочного и долговременного. Краткосрочный стресс, развивающийся при непродолжительном и невыраженном воздействии стрессора, был описан Вильямом Кенноном в 1914 г. и может рассматриваться как самостоятельная форма стресса или как стадия общего адаптационного синдрома; Основную роль в обеспечении адаптации при данной форме стресса играют катехоламины [248, 249]. При выраженном воздействии стрессового фактора развивается долговременный стресс, характеризующийся включением системы кора надпочечников-гипоталамус-гипофиз-кора и выбросом из коры надпочечников кортикостероидов (глюкокортикоидов), ответственных за развитие непосредственно общего адаптационного синдрома и связанного с ним повышением устойчивости организма.

Глюкокортикоиды обладают целым рядом эффектов, оказывающих сильное модулирующее влияние, как на отдельные стадии иммунного ответа, так и на его компоненты [109, 116, 156]. Глюкокортикоиды способны вызывать миграцию Т-лимфоцитов в костный мозг и селезенку, что может приводить к стимуляций гранулоцитопоэза в костном мозге [76, 77, 84, 85, 87, 128]. Этот эффект может опосредоваться и через прямое действие глюкокортикоидов на коммитированные клетки-предшественники гранулоцитопоэза. Так, дексамета-зон повышает пролиферацию клеток костного мозга, индуцированную грану-лоцитарно-макрофагальным и макрофагальным колониестимулирующими факторами (GM-CSF и M-CSF) [281]. В то же время глюкокортикоиды снижают миграцию КОЕс из экранированного при облучении костного мозга, их число в костном мозге и селезенке [103, 157, 180, 182, 188]. Хотя в условиях однократного введения гидрокортизона наблюдали кратковременное повышение относительного числа КОЕс в костном мозге [103, 188], при сопоставлении зависимости доза-эффект экзогенного гидрокортизона с концентрацией этого гормона

в крови доказано ингибирующее действие глюкокортикоидов на число стволовых клеток в костном мозге и селезенке [157]. Показано, что глюкокортикоиды снижают миграцию В-лимфоцитов из экранированного при облучении костного мозга, способность Т- и В-лимфоцитов к кооперации при индукции иммунного ответа в организме летально облученных рецепиентов [103, 148, 180, 182, 188]. Наиболее чувствительными к действию глюкокортикоидов на всех стадиях своего развития являются Т-лимфоциты, причем из них более чувствительны CD4⁺ 1-клетки по сравнению с CD8⁺ Т-лимфоцитами [110, 157, 180, 182, 285, 287]. Способность глюкокортикоидов вызывать опустошение кортикальной зоны тимуса опосредуется через индукцию гормон-зависимого апоптоза, реализующегося через Nur-77 [312].

Эффекты глюкокортикоидов на этапе антигензависимой активации, пролиферации и дифференцировки иммунокомпетентных клеток могут реализоваться, прежде всего, через модуляцию продукции многих цитокинов.

В экспериментах in vivo установлено, что глюкокортикоиды могут снижать продукцию таких цитокинов, как IL-la и IL-lp\ IL-6, IL-8, IL-10, TNF-a, IFN-y, что может быть обусловлено разными механизмами: связыванием с потенциальными глюкокортикоидчувствительными элементами в области промотора генов цитокинов; ингибированием факторов активации транскрипции цитокинов; ускоренным расщеплением мРНК [238, 244, 246, 252, 270, 287, 311]. Помимо этого глюкокортикоиды угнетают индуцированную взаимодействием CD40-CD40L дифференцировку дендритных клеток, экспрессирующих наиболее'важные для индукции иммунного ответа и антигенной презентации молекулы - CD80/CD86, CD83, HLA-DR [318]. Все эти механизмы приводят к угнетению активации Т- и В-лимфоцитов [109, 118, 149, 159]. С другой стороны, глюкокортикоиды супрессируют синтез цитокинов, продуцируемых ТЫ-лимфоцитами (IL-2), и повышают синтез цитокинов, образуемых Т1і2-клетками (IL-4), в результате чего эти стероиды могут участвовать в переключении иммунного ответа с ГЗТ на ГНТ [252, 315, 316, 317]. Показано, что глюкокортикоиды угнетают индуцированный митогенами и суперантигенами пролифера-

тивный ответ Т- и В-лимфоцитов, образование в культурах и цитотоксическую активность Т-киллеров [287]. Ингибирующий эффект этих гормонов на активность цитотоксических Т-лимфоцитов более выражен, чем на литическую способность NK-клеток [287], Хорошо документировано ингибирующее действие глюкокортикоидов на гуморальный иммунный ответ в системе in vivo, однако in vitro эти гормоны могут повышать или не влиять на продукцию иммуноглобулинов В-лимфоцитами [287]. В экспериментах in vivo показано, что введение IL-1 до стрессового воздействия способно предотвращать супрессию гуморального иммунного ответа, вызываемую фармакологическими дозами глюкокортикоидов, но только на ранних стадиях иммунного ответа [118].

В зависимости от дозы глюкокортикоиды способны усиливать или, наоборот, угнетать фагоцитарную активность лейкоцитов. Так, относительно невысокие дозы глюкокортикоидов (до 5 мг/кг) могут стимулировать активность макрофагальной системы у мышей, нейтрофильный фагоцитоз и переваривающую способность этих клеток на фоне снижения их поглотительной активности [114]. Другими авторами показано, что глюкокортикоиды могут дозозависимо угнетать фагоцитарную активность полиморфноядерных лейкоцитов [254], изменять их бактерицидную активность [299]. Выявлена способность глюкокортикоидов снижать экспрессию Fc-рецепторов к IgG (представлены в виде CD64, CD32, CD16) на "фагоцитирующих клетках [108, 110, 265, 272, 298]. Показано дифференцированное действие однократной инъекции гидрокортизона в дозе 50 мг/кг на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови и перитонеальных нейтрофильных гранулоцитов [211, 213, 214]. Фагоцитарная активность нейтрофилов крови значительно повышалась, а перитонеальных фагоцитов снижалась. Микробицидный потенциал фагоцитирующих клеток периферической крови в НСТ-тесте на этом фоне значительно угнетался. В системе in vitro гидрокортизон значительно ингибировал фагоцитарную активность нейтрофилов крови, поэтому авторы связывают стимулирующий эффект гидрокортизона in vivo с эффектами провоспалительных цитокинов.

Исследования в тестах клиренса эффекта различных глюкокортикоидов

на функции системы мононуклеарных фагоцитов показали, что как естественные (кортизон, кортизол, кортикостерон), так и синтетические (преднизон, дек-саметазон) глюкокортикоиды оказывают депрессивный эффект, зависимый от дозы и схемы введения. Установлено, что введение животным, подвергнутым стрессу (травма, кровопотеря, сепсис, шок), тех же доз стероидов, которые вызывают депрессию клиренса у интактных животных, не только не приводит к депрессии РЭС, но, наоборот, отменяет постстрессорную депрессию и часто даже стимулирует поглотительную функцию этой системы [237].

Эффекты глюкокортикоидов реализуются через их внутриклеточные ядерные рецепторы, которые действуют через регуляцию генной транскрипции [161, 274], Последняя может осуществляться при участии механизмов, включающих прямое взаимодействие рецептора со специфической последовательностью ДНК [309], так и опосредованное взаимодействие различными регулятор-ными белками [263, 276]. В настоящее время различают два типа ядерных рецепторов к глюкокортикоидам [241, 243]. Рецепторы I типа обладают большей аффинностью для глюкокортикоидов, имеющих естественное происхождение (кортизол у человека и кортикостерон у грызунов) [241, 243, 303]. Рецепторы II типа имеют большее сродство к синтетическим глюкокортикоидам, например, к дексаметазону [241, 303]. Оба типа рецепторов экспрессируются в клетках иммунной системы. Высокий уровень рецепторов II типа выявлен в клетках тимуса, моноцитах крови, напротив, низкий уровень - на нейтрофилах периферической крови. Одновременно два типа рецепторов могут экспрессироваться на клетках селезенки и лимфоцитах крови [161, 240, 290, 291].

Необходимо отметить, что количество естественных глюкокортикоидов в организме регулируется синтезирующимся в печени кортикостероид-связы ва-ющим глобулином, связывающим преимущественно свободные естественные глюкокортикоиды, и в меньшей степени - синтетические гормоны [116, 161].

Влияние глюкокортикоидов на функции фагоцитирующих клеток может опосредоваться через изменение экспрессии р-адренорецепторов на этих клетках, в результате чего изменяется чувствительность последних к эндогенным

катехоламинам [114, 211].

Наряду с глкжокортикоидными гормонами большое значение для регуляции функций фагоцитирующих клеток могут иметь катехоламины, в частности, адреналин. Основные эффекты адреналина реализуются через адренорецепто-ры, которые в настоящее время на основании фармакологических и молекуляр-но-генетических исследований разделены на девять подтипов: см a, am, otm, ct2A, снів, a₂c, Рь Рэ> Рз [247]. По своей природе - это гликопротеины с массой 60000-80000, принадлежащие к R(7)G семейству рецепторов, сцепленных с G-проте-инами, которые характеризуются наличием внеклеточного (поверхностного) гликозилированного N-концевого и внутриклеточного С-концевого участка и семью трансмембранными доменами, связанными тремя вне- и тремя внутриклеточными петлями [247]. С позиций чувствительности адренорецепторов к агонистам и антагонистам и вовлечения различных внутриклеточных сигнальных путей после связывания их с лигандом выделяют два подкласса сс-адренорецепторов: щ и 0 и три подкласса р-адренорецепторов: рь р2 и рз. Трансдукция сигнала через ai-адренорецепторы опосредована через фосфати-

дилинозитоловый путь и изменения концентрации внутриклеточного Са . Активация ссг-адренорецепторов приводит к снижению уровня цАМФ. Механизм трансдукции сигнала через все типы р-адренорецепторов связан с повышением уровня цАМФ [115]. В отличие от Pi и Р2, подкласс Рз-рецепторов устойчив к кратковременной десенсибилизации, большинство рі/р₂-антагонистов являются агонистами для рз-рецепторов [269, 293, 306]. Гетерогенность адренорецепторов' определяет различия эффектов адренергических соединений на клетки-мишени.

Установлено, что адреналин может угнетать поглотительную активность клеток СМФ, оцениваемую по показателям клиренса введенных внутривенно частиц [237].

Сотрудниками Института экологии и генетики УрО РАН в экспериментах in vitro были выявлены различия в зависимости от дозы эффектов адреналина на фагоцитарную активность нейтрофилов, моноцитов и эозинофилов перифе-

РОССИЙСКАЯ
41 ГОСУДАРСТВЕННАЯ

БШЯВОТЕКА

рической крови [204, 223]. Установлено, что одночасовая преинкубация крови здоровых людей при 37С с адреналином в концентрации 1 мкг/мл приводила к снижению показателей как общего лейкоцитарного фагоцитоза, так и фагоцитарной активности эозинофилов и нейтрофилов [204]. Напротив, при исследовании эффекта адреналина на фагоцитарную активность лейкоцитов крыс показано, что адреналин в концентрациях ОД и 1 мкг/мл при одночасовой преинку-бации стимулирует фагоцитарную активность нейтрофильных гранулоцитов [223]. В более низких концентрациях (0,0001-0,01 мкг/мл) адреналин приводит к стимуляции нейтрофильного фагоцитоза и оказывает перераспределительный эффект на моноцитарный и эозинофильный фагоцитоз (изменения пропорции клеток с разной активностью) [204]. Неоднозначность эффектов разных концентраций адреналина в этих исследованиях может быть связана с различиями экспрессии разных типов адренорецепторов в разных фагоцитирующих клетках. В пользу данного предположения свидетельствуют исследования влияния различных адренергических агонистов и антагонистов на продукцию TNF-a. Установлено, что стимуляция a-адренергических рецепторов повышала продукцию TNF-a, а Р-адренергических - угнетала ее [304]. В эксперименте по влиянию адреналового стресса на нейтрофильный фагоцитоз было показано, что блокада р-адренорецепторов приводила к увеличению всех интегральных относительных . показателей нейтрофильного фагоцитоза, а cti- и аг-адренорецепторов - к их снижению [210].

В системе in vitro показано, что стимуляция р-адренорецепторов тербута-лином сульфатом (Р-адренергический агонист, более избирательно действующий на р2-адренорецепторы) в концентрациях 10' и 10" М приводила к снижению фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови [223]. Сходный эффект оказывал и другой р-адренергический агонист гексопреналина сульфат в концентрациях 10~^б и 10~¹⁰ М на кислородозависимую микробицид-ность фагоцитирующих клеток крыс в НСТ-тесте [215]. Теофиллин (ингибитор фосфодиэстеразы, повышающий уровень внутриклеточного цАМФ) в концентрации 3 мМ угнетал в разной степени фагоцитарную активность лейкоцитов -

нейтрофилов, моноцитов, эозинофилов [134, 204]. В этих же сериях исследований в системе in vitro показано, что в условиях изолированного и комбинированного внесения антагониста всех типов а-адренорецепторов фентоламина гидрохлорида в концентрации 1СГ⁶ М, селективных антагонистов а₂-адренорецепторов йохимбина гидрохлорида в концентрации 10'⁶ М и cti-адренорецепторов празозина гидрохлорида в концентрации 1СГ⁶ М активирующий эффект катехоламинов на показатели кислородозависимой микробицидно-сти фагоцитирующих клеток в НСТ-тесте опосредован через a -адренорецепторы [215].

Значимость р-адренергических механизмов в регуляции функций фагоцитирующих клеток при остром стрессе показана в эксперименте с их фармакологической блокадой неселективным антагонистом пропранололом [220, 222]. В этих условиях выявлено более выраженное стрессорное увеличение показателей нейтрофильного, моноцитарного и эозинофильного фагоцитоза и кислородозависимой микробицидности фагоцитирующих клеток в НСТ-тесте в первые 6 ч после стрессорного воздействия. Поскольку эффекты блокады р-адренорецепторов прямо противоположны их стимуляции, авторы считают, что через р-адренергические механизмы ограничивается избыточная стрессорная активация функций фагоцитирующих клеток.

В отличие, от фагоцитирующих клеток, на которые адренергические соединения могут действовать прямо противоположно в зависимости от типа адренорецепторов (угнетение через р-адренорецепторы и активация через а-адренорецепторы), на уровне Т-лимфоцитов эти соединения действуют как им-мунодепрессанты независимо от типа адренорецепторов. Это было показано в прямых исследованиях на модели реакции бласттрансформации лимфоцитов человека с Т-клеточными митогенами [207, 208]. Угнетающий эффект катехоламинов на реакции ГЗТ в условиях иммобилизационного стресса снимался блокадой р-адренорецепторов [206, 209].

В последние годы большое внимание уделяется нейтрофилокинам (веществам пептидной природы, выделенные из супернатанта активированных ней-

трофилов) в выборе адаптационной стратегии организма и индукции общего адаптационнного синдрома [46, 105]. В экспериментах in vivo показано, что спустя 2 ч после подкожного введения нейтрофилокинов в дозе 7х10"⁷у крыс развивалась реакция крови, сходная с таковой после 60-минутной иммобилизации, а именно, нейтрофильный лейкоцитоз, эозинопения и лимфоцитопения. Отмечено также снижение числа кариоцитов в селезенке, которое можно рассматривать, как раннюю реакцию организма на воздействие стрессора [56, 105]. После трехкратного подкожного введения той же дозы нейтрофилокинов крысам наблюдалось усиление иммунного ответа на эритроциты барана, проявляющееся увеличением числа антителообразующих клеток в селезенке иммунизированных животных и усилением реакции гиперчувствительности замедленного типа. Нейтрофилокины вызывают провоспалительную направленность изменений в СМФ, а именно, повышают активность IL-1, стимулируют увеличение уровня белков острой фазы воспаления [46]. Способность нейтрофилокинов вызывать развитие стрессорных реакций связывают с их активным влиянием на систему перекисного окисления липидов, в результате которого происходит накопление переокисленных липидов, превышающих определенный базовый уровень, что и является отправной точкой стресс-реакции [105].

В качестве эндогенных модуляторов стресса некоторыми авторами рассматривается гетерогенная группа веществ, в основном пептидной природы, так называемые "средние молекулы" [43, 44, 45]. Накопление пептидных компонентов "средних молекул" в организме под действием сильного стрессора рассматривается как стресс-протективный механизм, реализующийся за счет поддержания и усиления р-адренергетических механизмов общего адаптационного стресса [44]. Различные фракции "средних молекул" могут оказывать ре-гуляторное влияние на функциональную активность нейтрофиллв, мононукле-арных фагоцитов, на выраженность воспалительной реакции, иммунный ответ [40, 43]. Получены результаты, подтверждающие участие "средних молекул" в модуляции эритропоэза и гранулоцитопоэза [45]. Наряду с этим существуют сведения о биоповреждающих и мембранодеструктивных эффектах "средних

молекул" в отношении нервной ткани, миокарда, клеток крови [45].

Таким образом, рассмотренные литературные данные позволяют говорить о преобладании ингибирующего влияния глюкокортикоидов на ход иммунных реакций при стрессе и связанных с ним состояниях, о возможной роли адренергических механизмов в регуляции функций иммунокомпетентных и фагоцитирующих клеток, об участии нейтрофилокинов в выборе адаптационной стратегии и стресс-модулирующем действии "средних молекул".

1.4. Иммунные механизмы в репаративных процессах при проникающем ранения глаза

Процесс репаративной регенерации включает в себя физиологический процесс воспаления и собственно регенерацию [71,. 190]. В результате некротических изменений ткани туда мигрируют клетки иммунной системы - нейтро-филы, затем моноциты, лимфоциты, привлекаемые хемоатграктантами плазменных (калликреин, фактор активации тромбоцитов, лейкотриены В_4> Сц, ЕД соединительнотканных (обломки коллагена, фибронектин) и клеточных (IL-1, IL-8, TNF-a, МСР-1) продуктов, и играющие впоследствии немаловажную роль в процессе регенерации. Мигрирующие первыми в очаг повреждения нейтро-фильные гранулоциты помимо выполнения своей фагоцитарной функции, направленной на очищение раны от собственных разрушенных клеток и патогенных возбудителей, синтезируют ряд цитокинов, таких как IL-la и р, IL-3, IL-6, IL-8, TNF-a, тем самым усиливая воспалительный процесс и приток в очаг по-вреждения новых нейтрофилоБ и макрофагов. Вовлеченные таким образом в процесс воспаления мононуклеарные фагоциты способны к синтезу цитокинов, однако, несколько иного характера по сравнению с нейтрофильными гранулоцитами. Макрофаги продуцируют преимущественно TGF-p, MTF, семейство FGF и другие цитокины, оказывающие стимулирующее влияние на пролиферацию фибробластов и кератобластов [71, 122, 190]. Продолжительность воспалительного процесса в среднем соответствует 1-2 неделям [71, 185].

Воспалительную реакцию в поврежденной ткани сменяют процессы ре-

генерации, протекающие в течение 2-4 недель, цель которых восстановить поврежденную ткань с минимальными нарушениями [71]. В течение этой стадии активно пролиферируют и синтезируют коллаген фибробласты, происходит рост поврежденных сосудов и нервов, реэпителизация раны. Центральную роль в этих процессах играют мононуклеарные фагоциты, они продуцируют медиаторы (IL-lct и р, TNF-a и р, TGF-p, факторы роста фибробластов, эпидермаль-ные факторы роста), способствующие этим процессам. Нейтрофилы в процессе регенерации играют скорее вспомогательную роль, продуцируют факторы (IL-1, TNF), активирующие фибробласты и ряд протеиназ, например коллагеназу, подавляющую избыточное разрастание соединительной ткани, и оказывающую влияние на коллагенолиз и восстановление внеклеточного матрикса [71].

Таким образом, для реализации репаративных процессов важное значение имеет участие в них цитокинов. Установлено, что IL-la и р, секретируемые моноцитами, нейтрофилами стимулируют пролиферацию эпителиоцитов, кера-тиноцитов, астроцитов, фибробластов и синтез последними коллагена [71, 109, 118, 135, 162]. IL-6 способствует пролиферации эндотелиоцитов, кератиноци-тов, остеобластов, росту нервов через продукцию фактора роста нервов, также усиливает синтез коллагена фибробластами. Сходное с IL-6 действие на эндо-телиоциты и фибробласты оказывают TNF-a и р [71, 99, 135]. Наиболее важную роль в процессе регенерации играют трансформирующие факторы роста-р. TGF-P первыми выбрасываются в местах повреждения, индуцируют пролиферацию клеток мезенхимального происхождения и тормозят рост эпителиальных клеток, тем самым TGF-p регулируют процессы синтеза при заживлении ран, стимулируя или ингибируя соответствующие гены фибробластов [99].

Характеризуя динамику репаративных процессов после проникающего ранения глаза, ряд авторов выделяют также два периода в реакции роговицы и тканей глаза на повреждение [65, 83, 186]. Первый период, длительностью 7-10 дней, характеризуется развитием выраженной воспалительной реакции: отеком краев раны, активной миграцией в зону повреждения сегментоядерных лейкоцитов, мононуклеарных фагоцитов, лимфоцитов, повышением их функцио-

нальной активности. Второй период, длительностью 10-30 дней, отличается усилением процессов регенерации и реконструкции новообразованной рубцовой ткани, связанной с пролиферацией керато- и фибробластов [32, 65, 83,186].

Однако в результате вышеописанных процессов репарации, в травмированных глазах животных происходит формирование грубого, васкуляризован-ного рубца, с преобладанием клеточных элементов, дезориентацией фибробластов [32, 65, 83, 186]. Поэтому в настоящее время для нормализации процессов заживления травмированных тканей глаза и их ускорения ведется поиск эффективных средств, способствующих формированию более ранней, зрелой и структурированной рубцовой ткани. Признаками структурированности рубцовой ткани являются преобладание волокнистого компонента над клеточным, правильное расположение коллагеновых пластин, бессосудистое формирование рубца [65, 83,186].

Изучена эффективность применения таких препаратов, как естественный комплекс цитокинов (ЕКЦ), обладающий активностью IL-1, IL-2, TNF-a, IFN-y [185, 186], олигопептид AKTIYio [83], адгелон - фактор адгезии и распластывания [65], миелопептидов [48]. Использование при проникающих ранениях глаза ЕКЦ, адгелона в течение 2-х недель после травмы способствовало уменьшению сроков воспалительной реакции, ускорению процессов регенерации, формированию более компактного и структурированного бессосудистого рубца [65, 185, 186]. Применение же АКТГ4.10 целесообразно только на ранних стадиях травматического процесса, требующих быстрого рассасывания клеточного детрита, чему способствует активация пролиферации и хемотаксис макрофагальных клеток. Использование данного олигопептида более 1-5 дней может приводить к протеолизу, который ведет к формированию рыхлого рубца, дистрофии тканей [83]. Применение отдельных фракций миелопептидов, в частности, МП-3 при экспериментальном ранении глаза у животных способствовало оптимизации течения травматического воспаления по параметрам наименьшей инфильтрации зоны повреждения и по процессам регенерации в зоне повреждения [48].

Таким образом, для снижения выраженности воспалительной реакции в

поврежденной ткани, ускорения процессов регенерации необходимо использовать препараты, оказывающие благоприятное воздействие на эти процессы.

1.5, Иммуномодуляторы в терапии проникающего ранения глаза

Как и при любом травматическом повреждении, при травме глаза терапия должна быть направлена на максимальное анатомическое восстановление травмированных структур глаза, на подавление и устранение инфекции и процессов воспаления, на оптимизацию регенерации, а также на подавление развития аутоиммунных реакций [11, 63, 64].

На предупреждение развития внутриглазной раневой инфекции, которая может приводить к гнойному воспалительному процессу, направлено действие антибактериальных препаратов [23, 24, 63,172, 230]. Поскольку при травме глаза возможно развитие аутоиммунных реакций, приводящих к повреждению здорового нетравмированного глаза, то основное место в лечении травматических повреждений глаза наряду с антибиотиками и противовоспалительными препаратами занимают иммунодепрессанты - стероиды и цитостатики (цикло-фосфамид, метотрексат и др.) [10, 16]. В качестве селективного иммунодепрес-санта возможно использование циклоспорина А [260], однако чаще используют глюкокортикоидные гормоны, как естественные гормоны коры надпочечников (гидрокортизон), так и их синтетические аналоги (например, дексаметазон). Использование глкжокортикоидов обусловлено тем, что они подавляют развитие клеточноопосредованного и гуморального иммунного ответа, функции фагоцитирующих клеток, тормозят высвобождение медиаторов воспаления (про-стагландинов, лейкотриенов, тромбоксанов, гистамина, серотонина и др.), синтез таких про воспалительных цитокинов как IL-la и (3, IL-6, IL-8, TNF-a, хемо-кинов, угнетают экспрессию участвующих в воспалительной лейкоцитарной эмиграции молекул клеточной адгезии [вв, 109, 116, 118, 148, 259, 263, 278, 305, 321].

Поскольку ранение глаза характеризуется развитием вторичного иммуно-дефицитного состояния [37, 197], связанного не только с иммунодепрессивным

действием травмы, но и включением в ее терапию глюкокортикоидов и других препаратов, воздействующих в той или иной мере на иммунную систему, необходимо использование иммунокорректоров - препаратов, избирательно действующих на конкретные звенья иммунной системы [25, 232].

Одним из наиболее широко применяемых препаратов для лечения вторичных иммунодефицитов при проникающих ранениях и операционной травме глаз является синтетический дипептид тимоген [37, 90]. Е.И. Волик [37] было показано, что тимоген оказывает выраженное стимулирующее влияние на реакции клеточного и гуморального иммунитета, нормализует количество CD4⁺ и CD8⁺ Т-лимфоцитов, усиливает процессы дифференцировки лимфоидных клеток. Тимоген влияет и на ферментный статус нейтрофилов, который характеризуется высоким уровнем щелочной и кислой фосфатаз, стабильным уровнем миелопероксидазы, повышением содержания катионных белков и нейтрофиль-ных полисахаридов. В раннем травматическом периоде у больных с проникающими ранениями глаза тимоген стимулирует показатели фагоцитоза (процент фагоцитоза, фагоцитарный индекс и индекс переваривания).

Ряд работ посвящен использованию при травматическом повреждении органа зрения миелопида [37, 39, 79, 174, 195]. Миелопид обладает выраженным положительным эффектом при различных заболеваниях, сопровождающихся вторичным иммунодефицитом с нарушением функций В-системы [169, 170]. Он восстанавливает число иммунокомпетентных клеток в крови и концентрацию сывороточных иммуноглобулинов. Важным его свойством является стимуляция сниженных параметров иммунитета при отсутствии эффекта в отношении нормальных иммунологических показателей,

Е.И. Волик с соавт. [39] изучали влияние миелопида на нейтрофильные гранулоциты, их цитохимические параметры и рецепторную функцию на фоне экспериментальной проникающей травмы глаза. Анализ результатов показал, что проникающее роговичное ранение глаза мышей и сопровождающее его травматическое воспаление стимулируют количество циркулирующих в периферической крови нейтрофильных гранулоцитов и способность экспрессиро-

вать Е-рецепторы на них. Миелопид не влияет на количество циркулирующих нейтрофильных гранулоцитов, но значительно повышает экспрессию Е-рецепторов. Введение миелопида подопытным животным усиливает эффект активации микробицидных систем нейтрофильных гранулоцитов и сохраняет их высокий энергетический потенциал в периферической крови, а также увеличивает количество нейтрофильных гранулоцитов, которые несут Е-рецепторы и характеризуются высоким уровнем индекса реализации медиаторов воспаления. Этот эффект авторы объясняют способностью миелопида стимулировать костномозговую фазу лейкоцитарной реакции.

М.В. Черешнева с соавт. [196] исследовали влияние комплексной терапии с включением миелопида и тимогена на изменения отдельных звеньев иммунной системы у больных с проникающими и непроникающими ранениями глаза. Основными результатами явились частичная нормализация показателей клеточного иммунитета и функций фагоцитирующих клеток, увеличение в крови абсолютного числа Т-лимфоцитов, включая наиболее зрелые в функциональном отношении клетки.

При экспериментальном проникающем ранении глаза также изучены отдельные фракции миелопептидов (МП-1 и МП-3), пока не применяющиеся в клинике [48, 49, 50]. Установлено, что применение миелопептидов купирует развитие нёйтрофильного лейкоцитоза и моноцитоза в ранний посттравматический период, повышает относительные параметры нёйтрофильного фагоцитоза. Применение МП-3 оптимизирует течение раневого процесса по параметрам наименьшей инфильтрации зоны повреждения и структуре рубца.

В настоящее время разрабатываются подходы использования в качестве иммуномодулирующих препаратов для местного лечения раневого процесса как отдельных цитокинов, так и их комплекса [229]. Наибольший интерес представляет новый отечественный препарат, разработанный Л.В. Ковальчуком с соавт. [96, 97, 98, 185, 186]. Этот препарат является естественным комплексом цитокинов (ЕКЦ), которые секретируются мононуклеарньши клетками периферической крови при стимуляции фитогемагглютинином и включает в себя EL-

la и p, IL-2, IL-6, TNF-a, TGF-p. Авторами было показано, что ЕКЦ стимулирует процессы заживления раны роговицы, ускоряет формирование рубцовой ткани, способствует формированию более зрелого рубца.

В качестве иммуномодуляторов широко применяются интерфероны, повышающие активность киллерных клеток, и активирующие ряд цитокинов, стимулирующие различные клетки иммунной системы [25].

Из отечественных синтетических иммуномодуляторов нового поколения заслуживает особого внимания полиоксидоний, обладающий широким спектром фармакологического действия и высокой иммуностимулирующей активностью. Было показано его преимущественное влияние на фагоцитарное звено иммунитета. Отсутствие побочных эффектов и токсичности способствует его применению в качестве лечебного и профилактического средства при многих заболеваниях [25, 145, 146]. В клинических условиях при включении полиокси-дония в комплексную терапию больных с повреждением органа зрения разной этиологии наблюдалась частичная нормализация показателей клеточного и фагоцитарного звеньев иммунной системы, существенно улучшались исходы травматического процесса [195,-499].

Поскольку настоящая работа посвящена оценке иммуномодулирующих эффектов полиоксидония при экспериментальном проникающем ранении глаза, необходимо более детальное рассмотрение его иммуномодулирующего действия при различной патологии.

1.6. Полиоксидоний — отечественный иммуномодулятор нового поколения

' Полиоксидоний является высокомолекулярным соединением, обладающим выраженной иммунотропной активностью. По своей химической структуре он является сополимером К-окси-1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиэтил)-1,4,-этиленпиперазиния бромида с молекулярной массой 60-100 Ш [145]. Разработка препарата явилась одним из результатов комплексных исследований, проводимых под руководством академика РАН Р.В. Петрова и академика РАМН P.M. Хаитова с середины 70-х годов по созданию искусственных антигенов на основе синтетических полиэлектролитов и фенотипической коррекции

иммунного ответа [140, 143, 144, 181]. Доказано, что иммунный ответ на комплекс антиген-водорастворимый полиэлектролит, выше, чем на сам антиген. Это важное свойство послужило для создания новых иммуностимулирующих препаратов [142]. Полиоксидоний относится к классу водорастворимых производных гетероцепных алифатических полиаминов. Физико-химические и фармакологические свойства полиоксидония во многом определяются N-оксидными группами, введенными в основную цепь макромолекулы, и величиной молекулярной массы [131].

По результатам доклинических исследований в условиях in vivo полиоксидоний обладает выраженной способностью стимулировать гуморальный иммунный ответ к эритроцитам барана у мышей. При совместном введении с низкими дозами антигена полиоксидоний усиливает антителообразование в 5-10 раз по сравнению с животными, получавшими только один антиген. Такое усиление наблюдалось у старых мышей, у которых иммунный ответ по сравнению с молодыми животными снижен. Полиоксидоний восстанавливает иммунный ответ на Т-зависимый антиген - эритроциты барана у мышей линии С57В1/6 с генетически детерминированной пониженной отвечаемостью на этот антиген, а также у В-мышей, практически не содержащих Т-лимфоцитов [146]. Показано, что стимулирующее действие полиоксидония на гуморальный иммунный ответ может опосредоваться через стимуляцию кооперации Т- и В-лимфоцитов. Препарат усиливал иммунный ответ у летально облученных мышей-реципиентов, получивших смесь сингенных клеток костного мозга и тимуса [132]. Полиоксидоний способен усиливать гиперчувствительность замедленного типа к Т-зависимым антигенам. ГЗТ является важным показателем функционального состояния клеточного иммунитета и коррелирует с пролиферативной способностью Т-лимфоцитов отвечать на Т-митогены и с их способностью продуцировать цитокины. Возможно, что в условиях in vivo полиоксидоний может усиливать продукцию цитокинов Т-лимфоцитами. Таким образом, по экспериментальным данным полиоксидоний обладает способностью стимулировать специфическую защиту организма от чужеродных антигенов [146].

Полиоксидоний способен стимулировать и миграционную активность фагоцитирующих клеток, их поглотительную и бактерицидную активность, усиливать клиренс чужеродных частиц из кровотока [17, 25, 119, 145]. Влияя на микробицидную активность фагоцитов, полиоксидоний способен подавлять образование активных внеклеточных форм кислорода и стимулировать продукцию внутриклеточных, что можно рассматривать как положительный эффект этого препарата, позволяющий избежать повреждающего действия, оказываемого активированными фагоцитами на различные ткани и органы [145].

Рядом клинических исследователей была показана эффективность применения полиоксидония при различных патологических состояниях на фоне развития вторичной иммунной недостаточности [17, 55, 119, 145, 152, 198, 203]. Препарат практически отменял летальность при инфекционном процессе, препятствовал его генерализации, повышал антиинфекционную резистентность организма за счет активации функциональной активности фагоцитарной системы, стимулировал ослабленный гуморальный иммунитет, восстанавливал уровень сниженных сывороточных иммуноглобулинов [25, 55, 133]. У больных хрони-ческим фурункулезом и хроническими заболеваниями легких полиоксидоний нормализовал число CD16⁺ и CD21⁺ лимфоцитов [25], у больных туберкулезом легких повышал относительное содержание CD3⁺ лимфоцитов [17]. При лечении детей, страдающих респираторными аллергозами, препарат оказывал активирующее влияние преимущественно на функции гранулоцитов и мононукле-арных фагоцитов [119].

/ В экспериментах in vitro полиоксидоний в концентрации 100 мкг/мл повышал адгезию полиморфноядерных лейкоцитов крови и их способность вырабатывать активные формы кислорода при контакте с опсонированными фрагментами микроорганизмов [132].

Сотрудниками Института экологии и генетики УрО РАН изучено влияние полиоксидония на фагоцитарную активность нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов периферической крови здоровых людей в условиях одночасовой пре-инкубации клеток крови in vitro в широком диапазоне концентраций препарата

(от 100 до 10"¹¹ мкг/мл с 10-кратным шагом) [152, 153, 193, 195]. Было установлено, что направленность влияния полиоксидония на различные типы фагоцитирующих клеток прямо зависела от концентрации препарата. Стимуляция ней-трофильного фагоцитоза наиболее выражена в диапазоне концентраций от 10"^п до 10 мкг/мл, а эозинофильного - в концентрациях 10"⁸, 10~⁷, \0^А и 10 мкг/мл. Слабо выраженная стимуляция моноцитарного фагоцитоза отмечена в концен-

І -і о

трациях 10 и 10' мкг/мл. Таким образом, в системе in vitro полиоксидоний стимулирует преимущественно нейтрофильный и эозинофильный фагоцитоз и сохраняет свой эффект в минимальных конечных концентрациях. В концентрации 10~⁸ мкг/мл полиоксидоний достоверно стимулирует поглотительную активность всех фагоцитирующих клеток крови.

С помощью иммуноферментного анализа in vitro была исследована способность полиоксидония индуцировать синтез цитокинов мононуклеарами [74, 145]. Было установлено, что полиоксидоний стимулирует синтез клетками мо-ноцитарно-макрофагальной системы и нейтрофилами IL-lp, TNF-ot и IL-6. Необходимо отметить, что полиоксидоний усиливает продукцию TNF-a только в случае его низкой или средней концентрации и не влияет на продукцию TNF-a при его исходно высокой концентрации. Усиление полиоксидонием синтеза провоспалительных цитокинов (IL-ip, TNF-a), вероятно, связано с его способностью усиливать антиинфекционную защиту организма за счет активации функциональной активности фагоцитарных клеток. Как известно, IL-б относится как к провоспалительным, так и к противовоспалительным цитокинам, спо-собным подавлять синтез провоспалительных цитокинов (IL-lp, TNF-a) и завершать развитие воспалительного процесса. Таким образом, в отношении синтеза цитокинов полиоксидоний проявляет иммуномодулирующий эффект [145].

Полиоксидоний проявляет широкий спектр фармакологической активности. Он активирует процессы регенерации при переломах, ожогах, некрозах, что позволяет использовать его в качестве стимулятора репаративных процессов [88, 151]. Наряду с иммуностимулирующим действием полиоксидоний обладает выраженной антитоксической активностью, которая, вероятно, опреде-

ляется полимерной природой препарата. Полиоксидоний повышает устойчивость мембран клеток к цитотоксическому действию, снижает токсичность ряда лекарственных препаратов" при их совместном применении [25]. Наиболее эффективно применение полноксидония в составе традиционных методов лечения, например, в комплексе с антибиотиками, которые убивают микроорганизм или понижают его функциональную активность, делая его более чувствительным к факторам иммунной системы, а полиоксидоний повышает функциональную активность этих факторов. Полиоксидоний также хорошо сочетается с ан-тигистаминными препаратами, кортикостероидами, цитостатиками. Отсутствие побочных эффектов и токсичности способствует его применению в качестве лечебного и профилактического средства при многих заболеваниях [25, 146].

Учитывая вышесказанное, представлялось целесообразным исследовать иммуномодулирующие эффекты полиоксидония при экспериментальном проникающем ранении глаза.

/

/

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Похожие диссертации на Оценка иммуномодулирующего действия полиоксидония в экспериментально-биологической модели проникающего ранения глаза

Оценка иммуномодулирующего действия профеталя при экспериментальном проникающем ранении глаза [Электронный ресурс]Файзрахманов Ринат Рустамович

Оценка изменения функций иммунной системы и коррекция миелопептидами в ранний период проникающего ранения глаза (экспериментальное исследование)Беркасова Наталия Леонидовна

Иммунокоррекция нарушений функций иммунной системы при проникающем ранении глаза (экспериментальное исследование)Гаврилова Татьяна Валерьевна

Разработка методических подходов к оценке иммунотоксилогических свойств пестицидов и коррекции их действияЖамсаранова, Сэсэгма Дашиевна

Иммуномодулирующее и противовоспалительное действие аутологичных, лекарственно индуцированных клеток-регуляторов и оценка клинической эффективности экстракорпоральной иммунофармакотерапии у больных бронхиальной астмойСнимщикова, Ирина Анатольевна

Индивидуализированная оценка чувствительности пациента к противогистаминному, противоаллергическому и лечебному действию современных Н1-антагонистовФридлянд Диана Григорьевна

Оптимизация оценки внешнего механизма гемокоагуляции и контролируемой терапии антикоагулянтами непрямого действияТараненко, Ирина Алексеевна

Сравнительная оценка специфической фармакологической активности различных гемостатических средств местного и системного действияТер-Арутюнянц Артем Андреевич

Метод локальной иммунокоррекции - аутолимфокинотерапия в комплексном лечении проникающих ранений глазаМакаров, Павел Васильевич

Прогнозирование инфекционных осложнений при прободных ранениях глаза, их лечениеФедорищева, Лариса Евгеньевна