Введение к работе
Актуальность.
В практической реализации долгосрочного хранения эритроцитов в России доминирующий остаются способы их криоконсервирова-ния при -150о--'-196оС, то есть в жидком азоте или его парах. Использование с этой целью электрорефрижераторной аппаратуры до настоящего времени не получило в стране широкого распространения, несмотря на ряд преимуществ этого метода перед жидкоазот-ным: замораживание клеточных суспензий в электрохолодильниках позволяет отказаться от громоздкого и дорогостоящего жидкоазог-ного оборудования и специальных металлических контейнеров; возможна транспортировка эритроцитов в замороженном состоянии в изотермическом ящике с использованием хладагентов (Пушкарь Н.С., 1972; Калено СП. и соавт., 1983; Цуцаева А.А., 1983).
О учетом этих преимуществ в нашей стране и за рубежом специалистами предложен ряд методов замораживания эритроцитов при температуре -Е0.. ,-600. Так в ЦНИИГПК разработаны методы низкотемпературного консервирования эритроцитов при температуре -30С и -60 v -70С под защитой глицерина в конечной концентрации 33 - 34 Z и 40 X соответственно. Сотрудниками Львовского НЙЙГПК Ш УССР предложен метод замораживания эритроцитов при температуре -40С с ограждающим раствором на основе глицерина в конечной концентрации 39,6 1. Н.Т. Терехов и соавт. (1986) (Киевский НИИГПК) создали способ долгосрочного хранения замороженных эритроцитов при -40 * -60С под защитой диметилсульфоксида (ДМСО) и поливинилпирролидона (ПБП). В.Н. Мельникова и соавт. (ЛенНИИГПК) в 1990 г. разработали метод замораживания эритроцитов при -25 * -40С под защитой криоконсерванта со сниженной до 20 % конечной концентрацией глицерина. Большинство этих методов
- о _
основано на использовании в качестве криопротектора глицерина, который не является идеальным криофилактиком в силу своей достаточно высокой токсичности и медленной скорости проникновения через мембрану, что делает процедуры низкотемпературного консервирования эритроцитов под его защитой и последующей деглицериниза-ции размороженной эритроцитной суспензии длительными и трудоемкими. Методы, предложенные специалистами Киевского и Львовского НИИГ1Ж, ориентированы на эксплуатацию стеклянных флаконов, а технология подготовки эритроцитов к замораживанию предусматривает деление 1 дозы эритроцитов на две части и последующую их раздельную обработку. Все эти методы ориентированы на диапазон умеренно низких температур, при которых не достигается достаточная степень клеточного анабиоза.
Все это значительно ограничивает использование этих способов замораживания эритроцитов в практической работе учреждений службы крови. Поэтому поиск новых решений проблемы низкотемпературного консервирования эритроцитов является актуальным.
Среди наиболее перспективных направлений исследования в этой области представляется использование электрохолодильников на -80С, -140С.
Цель исследования:
Разработать способ низкотемпературного консервирования эритроцитов при -80...-140С под защитой криофилактика на основе 1,-пропандиола (ПГ) и дшетилацетамида (ДМАД) в полимерных гемоконтейнерах отечественного производства.
Задачи исследования:
1. Сравнительное изучение и выбор наиболее перспективных вариантов криофилактического раствора для замораживания эритроцитов при -80...-140С.
-
Разработка методик замораживания эритроцитов при -80С и -140с с использованием отечественных полимерных контейнеров.
-
Изучение морфологических и функциональных свойств эритроцитов, замороженных под защитой «-пропиленгликоля и ДМАЦ при -80С и -140.
Научная новизна.
Разработан способ криоконсервирования эритроцитов под защитой пропиленгликоля (18,5 I) и ДМАЦ (5 %) при -80...-140С. Впервые доказана возможность долгосрочного хранения эритроцитов при -80 и -140С под защитой криофилактика на основе 1,2-про-пандиола и ДМАЦ в стандартных полимерных гемоконтейнерах отечественного производства.
Практическая значныость работа и ее реализация.
Разработанные методы предусматривают замораживание и хранение эритроцитов в электрорефрижераторах под защитой ограждающего раствора на основе пропиленгликоля и ДЩ при температуре -80...-140С в отечественных полихлорвишшвых гемоконтейнерах, что позволяет отказаться от эксплуатации жядкоазотного оборудования и металлических контейнеров многоразового использования. Это существенно удешевляет процедуру низкотемпературного консервирования эритроцитов, способствует повышению их качества и упрощает организацию работы "банка" клеток крови.
Консервирование эритроцитов при -80С, -140С под защитой ПГ и ДМАЦ в конечных концентрациях 18,5 % и 5 % соответственно обеспечивает более высокую степень сохранности иорфофункциональ-ных свойств клеток, чем использование классических методов криоконсервирования эритроцитов при -19бС под защитой глицерина или "Цропандиосахароля" (НДС).
Работа выполнена в соответствии -с планом НИР по теме
- 4 -100-95-пб "Обоснование системы долгосрочного хранения запасов гемотерапевтичесш средств, их транспортировки и применения в военное время", заданной ГВМУ Ш РФ.
Основные результаты исследований доложены и обсуждены на Российской конференции "Актуальные вопросы службы крови и транс-фузиологии" (С.-Петербург, 1995), II международной конференции "Новые информационные технологий в медицине и экологии" (Ялта -Гурзуф, 1995).
По теме исследования опубликовано 10 работ, получена приоритетная справка на изобретение: N 96114116/14 (019888) "Способ низкотемпературного консервирования эритроцитов"; оформлено б рационализаторских предложений.
Структура и объем работы.
