Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОВЛКМЫ. Апошоз или прої раммнроваппая клеіочпая гибель предсіавляеі собой универсальный мсхашпм, позволяющий многоклеточным организмам пзбавляїься о і липших пли опасных клеюк бел участия воспалительною процесса (Vanx et al., !404; King cl al., 1995; Mcikrantz et al.. 1495). ІІесмоіря на большое pa шообра шс выпивающих аноним сшмулов, суїнесівуюг сірого определённые биохимические и морфолої нческне пришаки программированной клеіочпоіі іибслп. Как правило, в і ибпушей клсіке пронсхолпі конденсация хромашиа и активация шдопуклсаі. осушесівляюіцих олптопуклеосомиуіо фраї метанию Л НІС. Другими харамерпыми признаками апопіоза являются вакуолизация піпоплачматической мембраны, редукция клегочпою объёма и фраї мепкпшя ядра. В конечном п юте, клсіка распадается на оїдсльпьіе мембрапоассонипрованиые фрагмешы (аііопіоіичсскпе іела), коюрые фаі оціпируюіся и перепариваюі ся макрофаіами (Clark cl al., 1990; Arena's et al., 1991; Stcllcr, 1995). Таким обраіом, попібіная клетка бьісіро хтимишіруеіся, п её по і сі шпально опасное содержимое не угрожает окружающим ікапям.
Ліімфондпі.іе клеікц іпГіпуі апопіоіичсски в опкч па самые разнообразные стимулы, включая тлюкокортикоиды. у-облученпе. оісутствие факторов роста н дпфферениировки, акпшашио (апш-СПЗ анппеламп, міпоіенамп), вирусную инфекцию, химіїоіераііевіпческпе аіепп.і. Аііоіпоз являемся одним in основных мехашпмов регуляции количества пчмунокомпеїеніньїх клсіок, )лимііііапніі аутореакшвпых клопов в оіпоіенсіс, а ііікжс удаления иібьпка акшвнрованпых лпмфоцнюв после іаверпіения иммунного ответа (Nagata et al., 1995; Pohl et al.. 1995). Нарушение регуляции апоіпоіичсскмх процессов и пммунокомпеїептш.іх клсіках приводит к разшпию іяжелой иаюлоіпи. Гак, повышенная рсіпсіепіпосіь к аноіііоіпческпм сінмудам может приводить к меоі ранпчепной жспапспн лпмфопшоп н раїшппю ауіопммушп.іх (сіісіемная красная волчанка, ауіоиммупш.и'і і ломерулопе(|)риі, диабеї І інпа) или лпм(|іоііроліі(|ісраіипньіх (фолликулярная лпмфома) іаболеванш'і. Ііібьпочная інбель лим(|к)идных клсіок способсівусі вошпкповеїпііо иммуподсфиппіов (СІ ПІД) (Bair et al., 1994; Tompson, 1995). В связи с вышеизложенным ирпобреіаюі шачимосіь исследования, связанные с
фармакологической регуляцией процессом акшвации и гибели иммупокомисгеигммх клеток.
И лаборатории нммуиоіспешки Мсдико-іенеіическоіо научною ценіра І'ЛМН на проіяжсііин нескольких лет исследовали свойства синтетическою гексанешнда имунофапа. ')юі иммуиомодуляїор представляет собой модифпппроваїїііі.ііі аналої акінвіїоіо нешра иімопошіпа II. При исследовании свойств препарат ііьіясмилосі.. чт нмупофап способен модулирован, продукцию ироиоспалиіельпі.іх шиокппов (фикюра пекроіа опухоли и п іііперлейкипа 6), а также окан.іваїь иммуиокорриї ііруюіцее влияние па уровень пммупої лобулнпов классов Л п І:. (Писарев, ІЧ')5; Pnkhalsky et al„ l(>%).
циь и злдлчіі исоі:доі$лния
Целью настоящего исследования явилось нгученпе клеточных и молекулярных механизмов действия нммупомодуляїора имунофапа, а іакжс выяснение возможности фармаколоїпческоіі регуляции процессов акптацпп н гибели лимфоцитов человека с помощью )Ю1 о препарата.
В задачи работы входило:
1) выяснить особенноеш реїуляцми апопгошческих процессов в
мопонуклеарач периферической крови человека;
-
піучпіь влияние нмуно(|іапа па ііролпфераіпвпміі ответ лпмфоцпіов человека, сінмулнроііаііпі.іх Г-клеючными миіоіенамн конканавалппом Л и фитогемагглю шинном;
-
исследован, влияние имунофапа па сосюяние Ca2t,Mg2+-)aBiicnMoii лідонуклсаіьі п ііролік|)ерацніо лнмфоцпіон человека па фоне действия гліококоріпкопдньїх гормонов;
-
выясншь значение свободных иопов ("а'* ;иіи реалії іаціїн лффскіов имунофапа п акіїиіііроваїнп.іх пм клеюк па сосиміппе Ca2t,Mg2+-3aiincnMoii зндонуклеазы, пролиферацию, и индуцированную липоіюлисахаридом продукцию факюра пекроіа опухоли;
5) исследовать некоіорьге клеіочпг.іе и молекулярные мехаппімьі действия имунофапа.
В результате проведённых исследований бі.ию yciuiioiuicno, чю разнообразные апоіпотческие аг спім (глюкокоргикоиды, пніііПпіор сіпнеш белка цпклогексіїмпд, хелаюр номов Ся-* > і іілсш ликольїеіраанстаї, піп ибміор протеппкиназы С Н-7), а также синтетический гексапсптпд нмупофам вьш.іваюг активацию Ca-+,Mg;+-4aBiienMofi шдонуклеазьт в лимфоцитах периферическом крови человека. Активация фермента не зависит о і дополіппелі.иоіо син і ста белка и не сопровождаете я фраї мешаппей хромаїипа и і ибстыо клеї ок. Обнаружено, чю иммупомодуляюр нмунофап шачнчо снижаеі иролпферашшний оівеї MonoiiVKJieapoii человека на І-ктсіочіп.іе мніоіеш.і (і|іпкчемаі і діоіппип II конканавалип Л). Покаїано, чю препараї существенно усиливает чувствніельность лимфоцитов человека к иііішіролііфсрашіііюму деіісівию і люкокоріикоидов. При изучении влияния имунофнпа на анопіоіические пронесем выяснилось, чю препараї способен модулирован, акіиниосм. ('a:\Mg-f-ківисимой тіідоііуклеам.і - одного пі основных с|)ер\іенюв. уіастиутопгнх в реализации программы клеючпоіі інбелгі. Установлено, чіо піп пбируюіпее влияние имупофапа, а также обрабоїапнг.іх ігм клеюк. па акіивпосп. шдопуклеазы и иролиі|)ераціио лимфоцитов человека существенно записні or присуїствіїя свободных понов Са:* в іінкубаціїоііноіі среде. В ю же время наличие свободных понов Са2* п период ппінмодсііствіїя лимфоцитов є ішуиофаном не являемся обяіательным для ппгибпруюшеїо действия препарата и активированных тім клеюк на индуцированную лппополнеахаридом продукцию фактора некроіа опухоли. При исследовании молекулярных механиімон действия имупофапа выяснилось, чго обрабоїка дішфопиіов нммупомодуляюром вызывает продукцию растворимых факюрон. коюрые обнаруживаю і ся в плдосадочноп жидкости уже мерсі 2-4 часа после обрабоїкп клеюк препараюм п моїут опосредован. зффекты имупофапа на состояние ('a:*.Mg;*"-ianiicnMoii нідопукдсазі.і и пролиферацию лимфоцп гон периферической крови человека.
Представленные в работе результаты расширяют имеющиеся представления о мехаїїиімах иммуномодулирукинст о действия нммюфапа, что имеет важное практическое іпачение для раїрабоїкп адекватных схем пммупокоррекции в клинике.
ОПІОІШЬІі: ГІОЛОЖКІШЯ, ВЫИОСИМЫТ. ИЛ ЗАЩИТУ
1. І Іммупомодулятор іімуііоі]іап сіюсоГк'іі существенно снижать
ііролм(|ісраііішіі,ііі оівсі лимфоцитов периферическом кропи человека па Т-
клсючпмс миюіеім.і конканавалпн Л и фшоїемаї і люїиипп, а также повьііпаїї.
чуисішіїелі.ііоеіі. моііоііуклеаріи,і\ клсіок к аніппродпфсраіивпому деіісівіпо
гліококоріикоидньїх гормонов.
2. Воідспспшс самых pa інообра ііп.іх аіспіоіі, включая
іліококорінкоидьі. іііппбпіор спи іС"ііі белка никлої ексимнд, ПІ1ПЄ7ІІЧССКМІІ
гексанепгпд іімупофал, сумк'спіепло усиливает активность ("a-+,Mg:+-)ai!Mcii\)oii
нідопуклслтьт в лмм(|юніпа\ иериферпческоіі кроїш человека. Лкіивмосп.
фермента леї ко ньіяпляеіся in viiro нулем инкубации п котированных ядер в
присутствии попов Ся-+ и Mg-+ її не іавпсмі о і дополнительного синтеза белка.
3. ')(|)(|)екп,і имуиофана па акпівпосп, Ca:+,Mg2t-jaBiicnMoii
эндонуклеагы и ііролнферіїг ішпьііі оівеї лпмфониюв, обработанных
піюкокоріпкопдамп, опосредованы расіморпммип факторами, коюрые
обнаруживаюіея в ііадосадочиоіі жидкости уже мере і 2-4 часа после препнкубаніш
клеток с пммуномодуля тором.
АПРОБАЦИЯ ДИССИПАЦИИ. Основные положения работы были обсуждены на XII Нвронеискои конференции но имхіуполоіпи (Барселона, 1994), на IX Международном конгрессе по нммуполої ип (США, 1995), на конгрессе "Человек н лекарстио"(Москна, 1У95).Мл терпнлы диссеріапип апробированы па межлабораюрпоіі научной конференции Мсдпко-іспеїнчсскоіо научною центра І'ЛМІІ І5окіября 14% і ода. Дііссеріання рскохіепдоііана к іаїцпіе.
ПУБЛИКАЦИИ. По теме дпссеріации опубликовано 3 научные работ, и том числе и к тарубежноп печаш.
ОБЪКМ 11 СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация написана но традиционному плану, сосіоїн ні введения, об юра лиіераіурі.і (глава I), описания материалов и методов (і лава 2), п шожеппя рсіу.іьіаюв собственных исследовании (їлава 3), обсуждения полеченных данных (і лава 4). выполов. Библиографический укаїаіслі. литературы включает 4 источника отечественных, и 240 тарубежпых
авторов. Работа изложена на 99 страницах машинописного текста, содержит 7 таблиц и 28 рисунков.
Имф - имунофан
Кон Л - конканавалин Л
J1 ПС - липополисахарид
MIIK - мононуклеарные клетки
МІГ -3-(4,5-диметшшіазол-2-мл)-2,5-дмфениліеіраіолііумбромпд
РФимф - растворимые факюрі.і, полученные и і суперна і ан і ом обрабоїаішмх
имупофаном лммфоімпоіі І'Фн - растворимые факторы, полученные ні сунері іаі аі і юн ишакшых
лимфоцитов рФНО - рекомбинантный фактор нскроіа опухоли CMD - Ca2+,Mg2*-3aBiiciiMafl чнлонуклеача <1>1 Л - фшоїемап люїпннн ФИО - фактор некроза опухоли
![Состав и функциональные особенности прилипающей фракции пуповинной крови человека [Электронный ресурс]](/i/i/4250/195028.png "Состав и функциональные особенности прилипающей фракции пуповинной крови человека [Электронный ресурс] Бархатов Ильдар Мунерович")
