Содержание к диссертации
Стр.
ВВЩЕНИЕ 4
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8
1. Дифференцировка Т-лимфоцитов 8
-
Основные этапы дифференцировки .... 8
-
Антигенные поверхностные маркеры Т-лимфоцитов 14
-
Биохимические маркеры Т-лимфоцитов . . 21
-
Онтогенез Т-лимфоцитов 35
-
Старение и аутоиммунитет 41
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 48
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 59
Глава I. Изоферментныи спектр ЛДГ на различных
стадиях дифференцировки Т-лимфоцитов . 59
Глава 2. Изоферментныи спектр ЛДГ в Т-лимфоци-
тах мышей линии G57B1/6 в онтогенезе . 90
2.1. Изоферменты ЛДГ в клетках
тимуса 90
-
Изоферменты ЛДГ в клетках тимуса в зависимости от соотношения субпопуляций тимоцитов . 101
-
Изоферменты ЛДГ в клетках селезенки 108
-
Изоферменты ЛДГ в клетках лимфоузла 122
Глава 3. Изоферментныи спектр ЛДГ в Т-лимфоци-
тах мышей Swiss в онтогенезе 137
3.1. Изоферменты ЛДГ в клетках
тимуса ;.: 137
Стр.
-
Изоферменты ЛДГ в клетках тимуса в зависимости от соотношения субпопуляний тимощтов . 147
-
Изоферменты ЛДГ в клетках селезенки 151
-
Изоферменты ЛДГ в клетках лимфоузла 158
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ . . . 164
ВЫВОДЫ 183
СЛИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 185
Введение к работе
Установлено, что разнообразие функции лтдфоидных клеток реализуется спектром их субпопуляций, неоднородность которых особенно велика среди Т-^яимфоцитов. T-^їШмфoциты разделяются на множество категорий, характеризующихся различиями по времени жизни, способности к регуляции, чувствительности к облучению и различным биологическим агентам, подвижностью в электрическом поле, рецепторами клеточной поверхности и, что особенно важно, антигенными и биохимическими маркерами (Б.Д.Брондз, О.В.Рохлин, 1978).
В последние годы делаются попытки найти взаимосвязь между некоторыми ишунодефицитными состояниями посредством рассмотрения "биохимической анатомии" иммунной системы человека с учетом особенностей пуринового метаболизма в различных популяциях лимфоцитов, на разных стадиях их онтогенеза и функционального развития (Ma et ai, 1983). В этом отношении перспективным является изучение ферментативного профиля популяций лимфоцитов.
В настоящее время накоплено значительное количество фактов о цитоиммунологических особенностях лимфоцитов. Они характеризуют как состояние клеточной популяции в целом (М.В.Робинсон, 1982), так и отдельных субпопуляций лимфоцитов (З.А.Бутенко, Д.Ф.Глузман, К.П.Зак и др., 1974). Кроме того, ферментативный профиль популяций лимфоцитов оценивается при выявлении одного фермента,например, по активности АТФазы ( Muller-Hermelink, 1974), кислой фосфатази (Lisiewiez et al., 1976), щелочной фос-фатазы (Ruuskanen, Kouvalainen, 1974), неспецифической Гэсте-разы (Mueller et al, 1976), лактатдегидрогеназы (Plum, Ringoir, 1975), так и на основании совокупного комплексного подхода по сопоставимости активностей нескольких ферментов (Р.П.Нарциссов, Л.К.Котосова, 1971). И наконец, изучение ферментативного профиля лимфоцитов широко используется при изучении аутоиммунных, имму-нодефицитных и лимфопролиферативных заболеваний (В.А.Труфакин, 1983, Д.Ф.Глузман и др., 1982). Среди комплекса цитохимического ферментативного анализа особое место занимает изучение изофер-ментного спектра.
Изоферменты, как специфические продукты определенных генов, являются хорошими маркерами: с их помощью можно определять тип клетки по молекулярному составу, что значительно точнее, чем по морфологическим признакам. Соотношение изоферментов, как правило, более надежный показатель развития, чем степень изменения абсолютной концентрации определенного фермента или других белков (К.Райдер, К.Тейлор, 1983).
При этом внимания заслуживает определение изоферментов лак-татдегидрогеназы, которое широко используется при изучении процессов дифференцировки различных тканей (Markert, Muller, 1959; Л.И.Корочкин и др., 1977). Наряду с этим, имеются только отдельные указания, что Т- и В-пЛимфоциты периферической" крови человека (Ringoir, Plum, 1975) и селезенки мышей (Plum et al, 1978) различаются набором изоферментов лактатдегидрогеназы, что спектры изоферментов лактатдегидрогеназы характеризуют тимоциты мышей с различной степенью зрелости (Plum et al, 1978; М.В.Робинсон, и др., 1980). Указанный метод еще недостаточно применяется для анализа различных популяций как в онтогенезе, при старении, так и при изучении различных иммунодефицитных состояний.
Открытие Т и В систем иммунитета и дальнейшее разделение Т- и В-клеток по функциональным признакам на отдельные субпопуляции позволило установить, что аутоиммунные процессы и старение сопровождаются нарушением оптимального соотношения Т- и В-лим-фоцитов и их субпопуляции ( De Heer, Edgington,I976; Т.Макино-дан, Э.Юнис, 1980; В.П.Лозовой, С.М.Шергин, 1981). Так, с возрастом снижается клеточно-опосредованный и гуморальный иммунный ответ на чужеродные антигены, увеличивается ответ на собственные антигены. Эти дефекты могут быть отражением инволюции тимуса, нарушением баланса среди регуляторних Т-лимфоцитов и нарушением баланса между идиотипической и антиидиотипической активностями (Weksler, 1983). Обнаружено, что аутоиммунные реакции и состояния развиваются в результате уменьшения численности популяций T-^лимфoнитoв (Dacie, 1975; Kruger et al, 1976) и дисбаланса между хелперной и супрессорной субпопуляциями Т->яимфо-цитов (Lewin, 1975; Schwartz, 1977) с уменьшением активности Т-супрессоров (Allison, 1974; Waldman et al, 1977) и последующим рассогласованием процессов взаимодействия и кооперации между Т-И В-ЛИМфоцитами (Сох, Keast, 1973; De Heer, Edgington, 1976). Показано, что к дисбалансу популяций лимфоцитов и развитию аутоиммунного состояния может привести рассогласование процессов пролиферации и дифференцировки лимфоцитов (В.А.Труфакин, 1983). Однако, многие стороны популяционных перестроек и нарушений в иммунной системе в динамике развития аутоиммунного процесса, а также при старении, до сих пор не известны. В то же время использование метода определения изоферментного спектра лактат-дегидрогеназы позволит не только вскрыть некоторые особенности дифференцировки лимфоидных популяций, но и выявить популяцион-ные перестройки в иммунной системе. Тем более, что эти изофер-менты являются "чистым" результатом ферментативной дифференцировки клеток и посредством анализа изменения их спектров в течение развития могут быть обнаружены основные механизмы клеточ-
НОЙ дифференцировки (Markert, Ursprung, 1962).
Цель работы.
Цель проведенных исследований заключалась в изучении перестройки популяций Т-^гимфопитов мышей в онтогенезе и при развитии аутоиммунной патологии путем исследования спектра изоферментов лактатдегидрогеназы различных стадий дифференцировки Т-клеток.
Задачи исследования.
Описать изоферментный спектр ЛДТ Т-лимфоцитов в процессе дифференцировки.
Определить активность изоферментов ЛДТ различных лимфо-идных популяций в онтогенезе интактной линии мышей С57В1/6.
Выявить изменение изоферментного спектра ДЩ? различных лимфоидных популяций в онтогенезе аутоиммунных мышей SWISS.
Научная новизна.
Впервые показано, что в процессе дифференцировки Т-^шмфоци-тов, начиная от стволовой кроветворной клетки и заканчивая имму-нокомпетентными т-ляимфоцитами периферических лимфоидных органов, происходит изменение спектра изоферментов ЛДТ.
Впервые выявлены изменения спектров изоферментов ЛДТ в популяциях клеток тимуса, селезенки и лимфатических узлов в онтогенезе, включая эмбриогенез, интактной линии мышей С57В1/6 и аутоиммунных мышей Swiss. Определены особенности указанных спектров изоферментов ЛДТ при развитии аутоиммунного процесса.
Впервые установлено, что спектр изоферментов ЛДТ отражает популяционные перестройки в иммунной системе.
Практическое значение работы заключается в том, что использованный метод изоферментного анализа может быть применен в экс- периментальной иммунологии для характеристики популяционных перестроек в лимфоидных органах. Результаты и методические подходы проведенных исследований могут служить основой для дальнейшего использования изоферментного анализа периферической крови и биопсииного материала у человека с целью диагностики, прогноза и контроля за лечением аутоиммунных, иммунодефицитных и лимфо-пролиферативных заболеваний.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
I. Дифференцировка Т-лимфоцитов I.I. Основные этапы дифференцировки Т-лимфоцитов
Иммунологическое распознавание начинается с контакта анти-. гена с соответствующими рецепторами иммунокомпетентных лимфоцитов. Однако, прежде чем стать таковыми, лимфоидные клетки проходят многоэтапный путь дифференцировки. Каждый из этих этапов протекает в определенном микроокружении того или иного лимфоид-ного органа и связан с приобретением или утратой предшественником определенных свойств клеточной поверхности. Последние могут служить маркерами соответствующего этапа дифференцировки (Брондз, Рохлин, 1978).
Различают три фазы развития Т-лимфоцитов: раннюю (претими-ческую), центральную (тимусную) и периферическую (посттимическую) (Muller-Hermelink, Steinmann, 1982). Ранняя фаза имеет место в костном мозгу или кроветворных очагах в ходе эмбрионального развития. На этой стадии происходит развитие от полипотентной кроветворной стволовой клетки до Т-коммитированной лретимической клетки-предшественника. Последние, являющиеся предшественниками всех тимусных лимфоцитов, мигрируют в тимус из печени у эмбри-
ОНОВ и КОСТНОГО мозга у взрослых (Moore, Owen, 1976; Le Douarin, Joterean, 1975).
