Введение к работе
Актуальность проблеми Важное значение в патогенезе аутомммун-заболевапнй играют аутоантитела к различным клеточным компонентам. Исследования больных системной красной волчанкой і СКВ) и ревматоидным артритом (РА) показали, что в сыворотках этих сольных со-. держатся характерные аутоантитела, в особенности анти-ДИК, типичные для больных СКВ (Dar et al., 1990; Laplanchs ot al., 1990: Carson, 1991) и анти-Ig антитела I ревматоидный фактор), типичные для больных ГА tLorber et al., 19S8; Jones et al., 1990). В настоящее время широкое распространение получила концепция идиотипи-
' ЧЄСКОЙ регулЯЦИИ ИММУННОЙ СИСТеМЫ И ВОЕЧО.ЧЄ1ШЄ идиотипических и антиидиотипических антител в аутоиммунные процессы (Hebert et al., 1990). Бозмо.пш, что антиидиотипические антитела могут индуцировать аутоиммунные заболевания (Mendlovlc et.al.. 1983; Mozcs et al., 1989); они могут быть вовлечены в регуляцию аутоиммунных заболеваний (Valderrarca Я. et al., 1963; Hossl et al., 1989); могут быть ценными в предот'вращении и лечении аутоиммунных заболеваний IHoltt et al., 19S3; Chanh et al., 1991).
Например СКВ можно вызвать у мишей, иммунизируя их анти-ДИК идиотнпическими антителами человека (Mendlovlc et al., 1060; Shoenfeld et al, 1989). Эти идиотипы играет важную роль в патогенезе СКВ.
Впервые аутоантитела к таким важным клеточным ферментам, как аминоацил-тРНК-синтетазы (КФ 6.1.1.1 обнаружили при миозите; от количества аутоантител к гистидил-тРНК-синтотазе в сыворотках больных зависит клиническая картина заболевания (Ramsden et al., 1909).
Аминоацил-тРНК-синтетазы играют важну» роль в организме, учас- . твуя в начальных этапах синтеза белков. Аутоантитела, обнаруженные к 5 аминсацйл-тРНК-синтетазам, ингиоируют их ферментативную активность (Mathews etal., 1984; Ramsden et al., 1989;. Tar go ff , 1990; Targoff and Arnett, 1990), что может привести к нарушении синтеза белков и углубить патологический процесс. В результате возможен синтез дефектных белков, которые,'как известно, могут играть роль аутоантигенов и аутоиммуниэация может принять генерализованный характер. Известно, что гистидил-тРНК-синтетаза вызывает и поддерживает аутоиммунное состояние (Miller et al., 1989).
Аутоантитела к треонил-тРНК-синтетазе были выявлены и при СКВ (Mathews et al,, 1934). '
Ни водном из приведенных случаев антиипиотипических антител
не искали, хотя известно, что они могут Оыть важным звеном в механизме формирования аутоиммунного процесса.
Вышесказанное свидетельствует об актуальности задач, связанных с выявлением аутоаитител к аминоацил-тРНК-синтетазам и антиидиотипических антител к ним у"Сольных системными аутоиммунными заболеваниями.
Цель работы. Получить моноклоналыше антитела к фенилаланил- и тирозил-тРНК-синтетазам и разработать на основе монсклональиых антител к фенилаланил-, тирозил- и триптофанил-тГНК-сшпетазам диагностических тест-систем иммуноферментного анализа (ИФАІ для выявления аутоантител и антиидиотипических антител в сыворотках больных СКВ и РА.
Основные .чдлзчк исследования:
-
) выделение высокоочищенного препарата фенилалаїшл-тРІІК-син-тетази из печшш быка;
-
1 получение моноклональных антител к фенилаланил- и тирозил-тІ'НІ'ч-синтетазам, их иммунохимическая характеристика;
3) разработка диагностической тест-системы ИФА на основе имеющихся антигенов для выявления аутоантител у больных СКВ и РА;
4 I разработка диагностической тест-системы ИФА на основе полученных моноклональных антител для выявления антиидиотипических антител в сыворотках больных СКВ и РА.
Научная новизна:1 і разработан быстрый метод выделения фе-нилаланпл-тРНК-синтетаэы, в результате которого получен гомогенный, очищенный в зООО раз препарат из печени оыка;2) впервые получены моноклинальные антитела методом гибридомнои технологии к. фенилаланил- и тирозил-тРПК-синтетазам и дана их иммунохимическая характеристика;3) отработана и опробирована новая диагностическая тест-система ИФА для выявления аутоантител к фенилаланил-, тирозил-и триптофанил- тРНК-синтетазам в сыворотках Сольных РА и СКВ; 4) отработана и опробирована новая диагностическая тест-система для вы-ления антиидиотипических антител к аутоантителам против трех син-тмаэ в сыворотках больных РА и СКВ. Впервые у этих больных выявлены антнидиотипичеекие антитела против аутоантител к синтетазаы. Практическая ценность. Разработан быстрый метод выделения фенил-аланил-трНК-еиптетаэы из тканей млекопитаммх, с помощью которого в короткие сроки можно получить необходимое количество фермента. С помощи) разработанных диагностических тест-систем ИФА можно выявить
аутоантитела и антиидиотипические антитела к ряду аминоашіл-тРИК-синтетаз в сыворотках больных СКВ и РА, а также установить закономерность формирования аутоантител и антиидиотипов.
Внедрение результатов работы. Диагностическая тест-система на основе иммуноферментного анализа для выявления аутоантител к ряду аминоацил-тРНК-еинтетаэ и аитиидиотипических антител к ним внедрена в отделе иммунологии 2-го МОЛГМИ им. И.И.Пирогова для тестирования сывороток больных аутоиммунными заболеваниями.
Апробация работы. Основные результаты диссертации доло.тени на 13-ом международном совещании по тРМК Санада, 1909) и на 15-ом международном биохимическом конгрессе (Израиль, 1991).
Диссертация апробирована на заседании научного коллоквиума лаборатории молекулярных основ онкогенеза ИМБ АН СССР 4 ноября 1991 года.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано б работ.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на J35~ страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, описание методов исследования, результаты работы и их обсуждение, заключение, выводы и список литературы, содержавши J.5-2. источника. Работа илюстрирована 7 таблицами и 22 рисунками.
