Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител Моисеенкова Людмила Геннадиевна

Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител
<
Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител
>

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Моисеенкова Людмила Геннадиевна. Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител : диссертация ... кандидата медицинских наук : 14.00.29 / Моисеенкова Людмила Геннадиевна; [Место защиты: ГУ "Гематологический научный центр РАМН"].- Москва, 2008.- 110 с.: ил.

Содержание к диссертации

СОДЕРЖАНИЕ 2

ВВЕДЕНИЕ 3

Глава 1. Обзор литературы. Особенности антиэритроцитарных антител и
методов их выявления 9

  1. Структура антител 9

  2. Классы Ig 10

  3. Характеристика классов Ig 13

  4. Функциональная активность субклассов IgG 17

  5. Клиническое значение антител 19

  6. Методы исследования антиэритроцитарных антител 21

  7. Факторы, влияющие на реакцию антиген-антитело 28

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 32

Глава 2. Материал и методы исследования 32

  1. Материал исследования 32

  2. Методы исследования 34

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 40

Глава 3. Сравнительная характеристика антиэритроцитарных антител и
методов их выявления 40

  1. Оценка серологических параметров сывороток 40

  2. Частота антиэритроцитарных антител IgGl и IgG3 у аллосенсибилизированных лиц русской национальности 51

  3. Частота субклассов IgG антиэритроцитарных антител, не выявляемых в каком-либо из методов 57

Глава 4. Гемолизирующая активность антител 61

ЗАКЛЮЧЕНИЕ 71

ВЫВОДЫ 76

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 78

Введение к работе

Актуальность темы. Аллоиммунизация является одной из причин возникновения посттрансфузионных осложнений и гемолитической болезни новорожденных. Выявление аллоиммунных антиэритроцитарных антител имеет большое значение для пациентов, нуждающихся в многократных трансфузиях эрит-роцитсодержащих компонентов (Walker et al., 1989 [191]; Regan et al, 1997 [159]). Кроме того, наличие аллоиммунных антител к эритроцитарным антигенам у реципиента существенно снижает лечебный эффект проводимой гемо-трансфузионной терапии (Ю. М. Зарецкая 1983 [26]; Е. В. Бутина и соавт., 1998 [8]). Таким образом, аллоиммунизация антигенами эритроцитов представляет собой глобальный популяционный процесс (С. И. Донсков и соавт., 2001 [19]).

До настоящего времени сравнительная оценка (валидация) методов исследования антиэритроцитарных антител, применяемых в Российской Федерации, в полном объеме не проводилась. Рядом авторов осуществлялись работы по сравнению отдельных методов, предназначенных в основном для определения резус-фактора. Так, А. Г. Башлай в 1960 году [5, 6] провела сравнение усовершенствованного ею желатинового метода Фиска-Мак Ги [88] с методом агглютинации в солевой среде Винера [197]. Метод А. Г. Башлай, получивший название: «реакции конглютинации в пробирках с 10% желатином при температуре 46-48С», до сих пор с успехом используется в учреждениях службы крови Российской Федерации.

А. Я. Ашкенази в 1962 году [3, 4] сравнивала два метода: разработанный ею экспресс-метод определения резус-фактора на предметных стеклах с использованием гепаринизированных сывороток и широко применяемый в то время метод определения резус-фактора в сывороточной среде на чашках Петри, предложенный Н. И. Блиновым и Н. С. Дробышевой [7]. Результаты исследования обоими методами практически совпали за исключением редких случаев трудноопределимого антигена Du.

О. В. Успенская в 1966 году [60] привела данные сравнения метода на пластмассовых тарелках с желатиной, на чашках Петри и ускоренного метода с

4 применением желатины. А. А. Михайлова [36] проводила сравнительную оценку предложенной ею реакции конглютинации в пробирках с 33% полиглюкином при комнатной температуре и чашечного метода Н. И. Блинова и Н. С. Дробышевой. Результаты обоих методов были в достаточной степени воспроизводимы.

Имеются данные сравнительной оценки чувствительности методов с 10% желатином, с 33%) полиглюкином и антиглобулиновым тестом (Н.В. Минеева, 1991 г. [33]), поликатионного метода выявления антиэритроцитарных антител (Г. В. Скосырев, 1998 [52]), альбуминового метода (С. И. Донсков, 1968 [14, 15]), двухэтапной модернизированной пробы с использованием антиглобулина (Н. И. Васильев, 2002 [9]), гелевой технологии (М. Элламаа и соавт., 1998 [63]), ферментных (С. И. Донсков, 1969 [16]; Р. С. Сахаров, 1968 [48]) и других методов выявления антител.

Упомянутые авторы проводили сравнение воспроизводимости и чувствительности разработанных или модифицированных ими методов лишь с некоторыми, отдельно взятыми методами, применяемыми в РФ. В целом же сопоставление одновременно всех используемых в РФ методов, как уже указывалось выше, не проводилось.

Вторым побудительным мотивом, продиктовавшим необходимость проведения настоящей работы, послужили накопленные в литературе последних лет многочисленные данные о различном химическом строении и своеобразии пространственной структуры антиэритроцитарных антител. Указанные особенности антител, по-видимому, обусловливают неодинаковое их клиническое значение, а также неодинаковую возможность детекции тем или иным методом.

Антиэритроцитарные антитела дифференцируются на три основных класса: IgM, IgA, IgG, и несколько субклассов (Furukawa et al., 1991 [89]). Однако не все классы и субклассы иммуноглобулинов способны вызвать in vivo разрушение эритроцитов (Giblett, 1977 [93]; Walker et al., 1989 [191]). Shaw et al. (1988) [170], Lynen et al. (1994) [131] отметили, что в трансфузиологической и акушерской практике имеют значение антитела, относящиеся к классам М и G и суб-

5 классам IgGl и IgG3, что связано с некоторыми особенностями их строения, способностью активировать комплемент.

Morell et al. (1971) [145] и другие авторы (Nieuwenhuys et al., 1989 [148]; Lynen et al., 1994 [131]) показали, что антитела всех субклассов IgG проходят через плаценту, однако, не все вызывают гемолитическую болезнь новорожденных. Последняя обусловлена IgGl и IgG3, причем гемолиз эритроцитов зависит от количества только IgGl. Авторы объясняют это тем, что, по-видимому, только IgGl и IgG3 реагируют с Fc-фрагментами Ig-рецепторов лимфоцитов и в большей степени, чем IgG2 и IgG4, активируют комплемент. По данным Van der Winkel et al., (1991) [186], наибольшую активность при этом проявляют антитела, относящиеся к IgG3. В то же время большинство антител независимо от их класса и субкласса, включая антитела, не имеющие клинического значения, детектируются применяемыми в настоящее время методами.

Имеется и иная точка зрения. По мнению классиков современной трансфу-зиологии Mollison et al., (1997) [143], Voak (1999) [190], Gustafsson et al., (2004) [100] не существует универсального метода выявления всех клинически значимых антител. Очевидно, что методы, детектирующие неполный спектр транс-фузионно опасных антител, неприемлемы, поскольку не исключают риска по-сттрансфузионных осложнений. Так же, по-видимому, неприемлемы и чрезмерно чувствительные методы, выявляющие параллельно с клинически значимыми клинически незначимые антитела. В этом случае дозы эритроцитов, которые фактически являются совместимыми с кровью реципиента, выбывают из арсенала средств трансфузионной помощи, что для некоторых реципиентов может оказаться фатальным, поскольку исключает возможность трансфузион-ного лечения.

В связи с выше перечисленным возникает ряд актуальных для клинической трансфузиологии вопросов. Какую степень чувствительности иммуносерологи-ческих методов следует считать достаточной для детекции антител в клинической практике? Насколько клинически значимы антиэритроцитарные антитела, не детектируемые некоторыми методами? Имеется ли взаимосвязь между час-

рыми методами? Имеется ли взаимосвязь между частотой распределения антител в популяции и их принадлежностью к тому или иному субклассу иммуноглобулинов? Какова частота субклассов иммуноглобулинов среди антител разной специфичности?

В отечественной литературе отсутствуют данные о частоте антиэритроци-тарных антител IgGl, IgG2, IgG3 и IgG4 у аллосенсибилизированных лиц. Нет сведений о гемолизирующей активности антиэритроцитарных антител, несмотря на то, что именно это свойство антител, как считается, обусловливает гемолиз эритроцитов in vivo и, соответственно, тяжесть посттрансфузионных осложнений.

В 2004 году Гематологическим научным центром РАМН совместно с другими учреждениями службы крови начаты кооперированные исследования под общим названием: «Валидация методов определения антиэритроцитарных антител». Цель этих исследований - оценить эффективность скрининга антиэритроцитарных антител в лечебно-профилактических учреждениях РФ, сравнить на большом материале чувствительность методов выявления антиэритроцитарных антител, дать научно обоснованные рекомендации по совершенствованию проб на индивидуальную совместимость донора и реципиента при переливании эритроцитов.

Целью настоящего исследования в рамках упомянутой программы явилась сравнительная оценка (валидация) методов выявления антиэритроцитарных антител, применяемых в Российской Федерации.

Задачи исследования:

  1. Исследовать серологические параметры сывороток (активность, специфичность, титр и др.) семью методами, применяемыми в лечебно-профилактических учреждениях Российской Федерации.

  2. Установить частоту антиэритроцитарных антител, относящихся к IgGl, IgG2, IgG3 и IgG4, у аллосенсибилизированных лиц, а также

7 распределение субклассов иммуноглобулина G в зависимости от специфичности антител.

  1. Установить возможную связь между субклассами, к которым относятся антиэритроцитарные антитела, и их способностью детектироваться разными серологическими методами.

  2. Исследовать гемолизирующую активность антител в зависимости от их активности, специфичности и принадлежности к тому или иному субклассу IgG.

Научная новизна. Показано, что антиэритроцитарные антитела в силу структурного полиморфизма проявляют неодинаковую способность реагирования при их детекции разными методами. Установлена частота распределения антиэритроцитарных антител IgGl, IgG2, IgG3 и IgG4 среди сенсибилизированных лиц исследуемой популяции.

Установлена частота антител, обладающих гемолизирующей активностью, а также зависимость этого свойства от принадлежности антител к субклассам IgG. Показано, что уровень гемолизирующей активности антител не коррелирует с их специфичностью и титром, однако зависит от принадлежности антител к IgGl, IgG3 или IgG2, IgG4 субклассам.

Научно-практическая ценность. Установлена частота встречаемости субклассов IgG и частота распределения их в зависимости от специфической направленности и гемолизирующей активности антиэритроцитарных антител.

Пути практической реализации. Полученные данные показывают реальные возможности серологических методов детекции антиэритроцитарных антител и могут быть использованы в системе обеспечения иммунологической безопасности гемотрансфузий, в частности, при подборе совместимых пар донор - реципиент, прогнозировании степени риска посттрансфузионных осложнений.

8 Положения, выносимые на защиту.

  1. Полиморфизм антиэритроцитарных антител обусловливает неодинаковую их способность детектироваться разными серологическими методами.

  2. С помощью какого-либо одного из методов скрининга антиэритроцитарных антител не всегда удается выявить антитела, относящиеся к IgGl и IgG3.

  3. Антитела, имеющие относительно низкую активность и титр, представляют собой не меньший фактор риска посттрансфузионных гемолитических осложнений, чем антитела с высокой серологической активностью.

Апробация работы. Основные положения работы доложены на заседания проблемной комиссии «Проблемы донорства, производства и контроля компонентов и препаратов крови» (13.03.08) в ГНЦ РАМН; материалы диссертации представлены на научно-практической конференции «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии» (13-15 июня 2007 г.) С.-Петербург; на научно-практической конференции «Современная гематология. Проблемы и решения» (29-30 ноября 2007) Москва.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 113 траницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», 2 глав собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, приложения. Библиография включает 63 отечественных и 139 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 22 таблицами, 5 рисунками.

Работа выполнена в ГНЦ РАМН (г. Москва) и ОГУЗ - СЦК (г. Смоленск).

Отдельные разделы работы выполнены совместно с канд. мед. наук Н. И. Васильевым, канд. мед. наук Н. М. Михайловой, докт. мед. наук, проф. С. И. Донсковым, за что автор выражает им свою признательность.

Похожие диссертации на Сравнительная оценка методов выявления антиэритроцитарных антител