Содержание к диссертации
Список используемых сокращений 5
ВВЕДЕНИЕ 6
ГЛАВА 1 ОСОБЕННОСТИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ РАЗЛИЧНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ
(Обзор литературы) 11
1.1 Этиология и патогенез туберкулеза 11
1.2 Иммунологические аспекты туберкулеза 13
Роль фагоцитов в туберкулезном процессе 15
Состояние клеточного иммунитета при туберкулезе 22
Изменения гуморального иммунитета при туберкулезном процессе 25
Особенности диагностики туберкулеза на современном этапе 28
Оценка активности воспалительного процесса у больных туберкулезом 42
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 47
2.1 Характеристика контингента обследуемых 47
2.2. Методы оценки показателей врожденного иммунитета— 53
2.2.1. Получение исследуемых биоматериалов 53
Получение сыворотки крови 53
Получение перитонеальной жидкости Дугласова пространства~53
2.3. Тестирование системы нейтрофильных гранулоцитов и макрофагов~53
Выделение чистой взвеси нейтрофилов и моноцитов 53
Выделение перитонеальных макрофагов 54
2.3.3. Реакция бактериального фагоцитоза нейтрофилов и
моноцитов\макрофагов с определением степени завершенности 54
2.3.4. Оценка оксидазной биоцидности фагоцитов -55
2.3.4.1. Спонтанный NBT-тест 55
2.3.5.1. Стимулированный NBT-тест 55
2.4. Тестирование гуморального звена иммунитета —56
2.4.1. Определение содержания иммуноглобулинов
основных классов методом радиальной иммунодиффузии 56
Определение содержания противотуберкулезных антител 57
Определение содержания церулоплазмина в
сыворотке крови 57
2.4.4. Определение концентрации цитокинов (ИЛ-1а и ИЛ-lb) —58
2.5. Статистические методы исследования 58
ГЛАВА 3 ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕИТРОФИЛОВ ПРИ
ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЖЕНСКИХ ГЕНИТАЛИЙ 59
3.1 Фагоцитарная активность нейтрофилов при туберкулезе
женских гениталий 60
3.2 Кислород-зависимый метаболизм нейтрофилов при
туберкулезе женских гениталий 66
ГЛАВА 4 ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ МОНОЦИТОВ \МАКРОФАГОВ ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЖЕНСКИХ ГЕНИТАЛИЙ——77
4.1 Фагоцитарная активность моноцитов\макрофагов при
туберкулезе женских гениталий 78
4.2 Кислород-зависимый метаболизм моноцитарно-макрофагальных
клеток при туберкулезе женских гениталий 84
ГЛАВА 5 ОСОБЕННОСТИ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ
ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЖЕНСКИХ ГЕНИТАЛИЙ - 93
5.1 Содержание иммуноглобулинов основных классов при
туберкулезе женской репродуктивной системы 93
5.2 Изучение содержания противотуберкулезные антител при
туберкулезе женской репродуктивной системы 98
5.3 Противотуберкулезные антитела при туберкулезе женских гениталий
на фоне сегментарных проб 103
ГЛАВА 6 СОДЕРЖАНИЕ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА И ИНТЕР ЛЕИКИНА-1 В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЖЕНСКИХ ГЕНИТАЛИЙ-
Содержание церулоплазмина в сыворотке больных ТЖГ 108
Оценка уровня содержания ИЛ-1а и ИЛ-1(3 в сыворотке крови больных туберкулезом женских гениталий 109
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 112
ВЫВОДЫ- 132
ЛИТЕРАТУРА 134
ПРИЛОЖЕНИЯ 155
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
Ig А - иммуноглобулин А
Ig G - иммуноглобулин G
Ig М- иммуноглобулин М
АТЖГ - активный туберкулез женских гениталий
ИЛ-1(ос,Р) -интерлейкин-1(сс,Р)
ИП - индекс переваривания
ИФА - иммуноферментный анализ
КМ - коэффициент мобилизации
МФ - макрофаги
НГ- нейтрофильные гранулоцити
НТЖГ - неактивный туберкулез женских гениталий
ПЖ - перитонеальная жидкость
ПК - периферическая кровь
ПТАТ - противотуберкулезные антитела
ФИ - фагоцитарный индекс
ФЧ - фагоцитарное число
ХНЗГ - хронические неспецифические заболевания гениталий
ЦП - церулоплазмин
% ФАН (%ФАМ) - процентное содержание активных фагоцитов
%ФПК - процент формазан-позитивных клеток
Введение к работе
проявляется в виде гиперчувствительности замедленного типа и опосредуется системой макрофагов и Т-лимфоцитов. Наряду с макрофагами в генезе и исходе инфекционно-воспалительных заболеваний существенную роль играют нейтрофилы. Однако их значимость при туберкулезном процессе не достаточно изучена. В связи с этим изучение состояния фагоцитарного звена иммунной системы больного туберкулезом имеет не только диагностическое, но и прогностическое значение.
Наличие в крови циркулирующих противотуберкулезных антител, независимо от выраженности (или невыраженности) специфического клеточного ответа, является одним из характерных, диагностически значимых признаков туберкулеза [А.В. Васильев, 2000].
Современные представления о роли патологического очага в конкретных органах (местный иммунный ответ) делают патогенетически обоснованными обнаружение противотуберкулезных антител (ПТАТ) и изучение функций макрофагов в биологических жидкостях из анатомических зон поражения. Особенно повышается эффективность такой диагностики на фоне туберкулиновых проб. При оценке очаговой реакции существует определенная степень субъективизма, которого можно избежать с помощью ряда конкретных функциональных показателей. В литературе имеются единичные сведения об изучении биохимических показателей в зоне, максимально приближенной к очагу поражения, на фоне сегментарных проб. Так А.Н. Олейник [2001] определяла уровень активности аденозиндезаминазы в биологических жидкостях. Однако этот фермент, участвующий в обмене пуринов и катализирующий гидролитическое дезаминирование аденозина, очень нестабилен, поэтому процедура его определения достаточна трудоемка.
В то же время сведений об изучении иммунологических показателей в зоне, максимально приближенной к очагу поражения, на фоне сегментарных проб, для дифференциальной диагностики туберкулеза внелегочной локализации и оценке степени его активности, в доступной
литературе нами не найдено, что и обуславливает актуальность настоящего исследования.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: изучить показатели врожденного иммунитета на системном и местном уровне у больных туберкулезом женских гениталий и определить критерии его активности ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:
1. Провести сравнительное изучение местного и системного иммунитета
у больных активным и неактивным туберкулезом женских гениталий:
1.1 Оценка фагоцитарной функции нейтрофильных гранулоцитов,
моноцитов и макрофагов;
1.2 Оценка активности микробицидной оксидазной системы
нейтрофильных гранулоцитов, моноцитов и макрофагов;
1.3 Оценка содержания иммуноглобулинов основных классов (G,A,M) и
специфических противотуберкулезных антител в сыворотке крови и
перитонеальной жидкости;
1.5 Оценка концентрации интерлейкина-1 (ИЛ-1а, ИЛ- IP) и острофазного белка - церулоплазмина в сыворотке крови;
2. Систематизировать выявленные нарушения показателей системного и
местного врожденного иммунитета при генитальном туберкулезе с
определением наиболее значимых дифференциально-диагностических критериев
активности воспалительного процесса.
3.Определить диагностическую значимость исследуемых показателей врожденного иммунитета, а также общих и специфических иммуноглобулинов при их оценке после постановки туберкулиновых проб.
НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Впервые показана диагностическая и прогностическая значимость показателей местного иммунитета (активность нейтрофильных гранулоцитов,
моноцитов крови и макрофагов в очагах местного воспаления) у больных активным и неактивным туберкулезом женских гениталий.
2. Впервые определен характер изменения активности фагоцитов, а также
содержания интерлейкина-1 на системном и местном уровне после постановки
пробы Манту у практически здоровых лиц и при туберкулезном процессе.
3. Установлены новые критерии оценки активности воспалительного
процесса при туберкулезе женских гениталий.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
При туберкулезе женских гениталий выявлены специфические изменения показателей врожденного иммунитета в виде существенных дефектов функциональной активности нейтрофилов и моноцитов на системном (периферическая кровь) и местном (перитонеальная жидкость) уровне, выраженность которых усиливается после дополнительной нагрузки туберкулином in vivo (проба Манту).
Выявленные специфические изменения в системе фагоцитов позволяют не только дифференцировать туберкулезное воспаление от нетуберкулезного (хронические неспецифические заболевания), но и определить диагностически-значимые маркеры активности туберкулезного процесса.
При туберкулезе женских гениталий, в отличие от здоровых лиц и больных хроническими неспецифическими заболеваниями, наблюдается достоверное увеличение содержания сывороточного церулоплазмина, наиболее выраженное - при активном туберкулезном процессе.
Маркерами активности туберкулеза гениталий следует считать достоверно более высокое содержание сывороточных иммуноглобулинов основных классов, чем при неактивном туберкулезе. Нагрузка туберкулином in vivo угнетает IgA- и IgG-синтез у больных туберкулезом гениталий и усиливала продукцию IgM при активном туберкулезе гениталий. В
перитонеальной жидкости их содержание возрастает относительно контроля и по сравнению с исходными данными после пробы Манту при АТЖГ.
5. При активном туберкулезе женских гениталий имеет место значительное увеличение содержания ПТАТ с соответствующим усилением их синтеза после пробы Манту, а также резкое увеличение концентрации ИЛ-1 (ИЛ-ІаиИЛ-ip) с преобладанием содержания ИЛ-1а над уровнем ИЛ-1р.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ
Предложен новый способ более ранней и достоверной диагностики активности туберкулеза женских гениталий по результатам оценки показателей врожденного иммунитета на местном и системном уровне.
Данные проведенного исследования могут быть использованы в научно-исследовательском и учебном процессах на профильных кафедрах медицинских ВУЗов.
ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ В ПРАКТИКУ:
Материалы по диагностике туберкулеза женских гениталий и
определения его активности внедрены в практику работы ГУЗ «Клинический противотуберкулезный диспансер» департамента здравоохранения Краснодарского края, а также на кафедрах Кубанской государственной медицинской академии (аллергологии, клинической иммунологии и лабораторной диагностики; фтизиопульмонологии).
Результаты проведенных исследований опубликованы в центральной печати и доложены (всего 12 научных печатных работ). Получен патент Российской федерации на изобретение «Способ диагностики туберкулеза женских гениталий» №2002125787/14(0227344).
