Иммунологическая реактивность, плоидность и кинетика клеточного цикла клеток периферической крови при различных патологических состояниях у детей Хисамова Назиля Фагильевна

Содержание к диссертации

Список сокращений
Глава Обзор литературы
1.1. ДНК - цитометрия как один из методов изучения клеточного цикла
1.2. Жизненный цикл клетки
1.3. Факторы, влияющие на клеточный цикл
Собственные исследования
Глава Материалы и методы исследований
2.1 Обследованный контингент
2.2 Методы исследований
Глава Результаты комплексного обследования детей контрольной группы
Глава Результаты комплексного обследования детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы
Глава Результаты комплексного обследования детей с хроническими гломерулонефритами
Глава Результаты комплексного обследования детей с доброкачественными и злокачественными опухолями головного мозга и острыми лейкозами

Введение к работе

Актуальность проблемы Комплексный подход к изучению процессов протекающих в иммунокомпетентных клетках и характеристика взаимосвязей между различными звеньями системы иммунитета определяют перспективные направления клинической иммунологии. Физиологическое состояние клеток, способность к осуществлению присущих им функций характеризуется, в частности, уровнем ДНК (плоидностью) и показателями кинетики клеточного цикла. Для объективной оценки этих параметров широкое распространение получает проточная цитофлуориметрия, разделом которой является ДНК-цитометрия [Saha I. et al., 2000]. По прогнозам специалистов [Шмаров Д.А., Козинец Г.И., 2004], в самом ближайшем будущем можно ожидать внедрения проточной ДНК-цитометрии в практику работы клинико-диагностических лабораторий.

Согласно консенсусу по стандартизации методов проточной цитометрии, созданному по инициативе Совета Европейского Общества Целлюлярной Аналитической Патологии, материалом для определения плоидности клеток и кинетики клеточного цикла могут быть клетки крови, костный мозг, хирургические биоптаты, жидкости тела [Ormerod M.G., Tribukait В., 2001]. К настоящему времени большое количество научных работ посвящено изучению особенностей плоидности и клеточного цикла в биоптатах органов и тканей [Rytwinski К., Wnuk A. et al., 1999; 2000; Tsuji Y. et al., 2000; Garcfa-Escudero A. et al., 2001; Both C.T. et al., 2001; Wnuk A. et al., 2001; Takes R.P. et al, 2002; Driemel O. et al.,2005].

Наряду с ДНК-цитометрией биоптатов развивается направление, включающее оценку функционального состояния иммунной системы с использованием качественных параметров клеток, участвующих в иммунном ответе. Так, методом проточной ДНК-цитометрии исследовалось функциональное состояние иммунокомпетентных клеток и пролиферативная активность лимфоцитов цельной крови при сочетанной травме. В условиях инкубации с митогенами и специфическими антигенами было установлено угнетение функции лимфоцитов в первые дни и восстановление пролиферативной активности к четвёртой неделе после травмы [Бычкова Н.В. и др., 2004].

В методическом плане наименьшие сложности возникают при работе с периферической кровью, но исследования в этой области носят фрагментарный характер и в литературе отражены результаты ДНК-цитометрии клеток периферической крови лишь в условиях профессионального длительного радиационного воздействия [Ястребов А.П., Сазонов СВ., 1995].

В отделении клинической иммунологии РДКБ с 2002 года внедряется в практику изучение иммунного статуса и функционального состояния клеток на проточном цитофлуориметре, включающее ДНК-цитометрию клеток периферической крови. Комплексные исследования проводятся при хронических инфекционно-воспалительных процессах, новообразованиях, хронических гломерулонефритах на фоне иммуносупрессии, врождённых пороках развития, то есть состояниях, так или иначе оказывающих влияние на уровень ДНК и клеточный цикл. Несмотря на возможности проточной цитометрии (высокую точность, быстроту анализа), множество вопросов возникает при разработке подходов к изучению функциональной активности клеток периферической крови и особенно процессов пролиферации. В связи с этим, весьма актуальным является определение роли и места проточной ДНК-цитометрии в диагностике и прогнозе различных патологических состояний в педиатрической практике.

Цель исследования Определить диагностическое и прогностическое значение ДНКцитометрии периферической крови в комплексной оценке иммунного статуса и функционального состояния клеток при различных патологических состояниях у детей.

Задачи исследования 1 Провести клинико-иммунологическое обследование, ДНК-цитометрию клеток периферической крови у здоровых детей, определить корреляционные взаимосвязи между изучаемыми параметрами.

2 Оценить иммунологическую реактивность у детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы, хроническими гломерулонефритами, опухолями головного мозга и острыми лейкозами.

3 Методом ДНК-цитометрии охарактеризовать плоидность и кинетику клеточного цикла клеток периферической крови у детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы, хроническими гломерулонефритами, опухолями головного мозга и острыми лейкозами.

4 Оценить корреляционные взаимосвязи между параметрами, характеризующими иммунный статус и показателями ДНК-цитометрии клеток периферической крови при различных патологических состояниях у детей.

Научная новизна Впервые дана характеристика плоидности и кинетики клеточного цикла клеток периферической крови методом проточной ДНК-цитометрии и установлена взаимозависимость между иммунологическими параметрами, показателями ДНК-гистограмм у практически здоровых детей, при хронических инфекционно-воспалительных процессах на фоне врожденных пороков развития мочеполовой системы и хронических гломерулонефритов, иммуносупрессивной терапии, при опухолевой трансформации.

Научно-практическая значимость работы Определены области применения ДНК - цитометрии клеток периферической крови при различных патологических состояниях у детей в качестве показателей:
1) выраженности деструктивно-дистрофических изменений в почках при хронической почечной недостаточности на фоне врождённых пороков развития мочеполовой системы;
2) степени активности процесса и эффективности иммуносупрессии при хроническом гломерулонефрите;
3) агрессивности течения заболевания при острых лейкозах.

Установлены особенности иммунологической реактивности, проявляющиеся у здоровых детей активацией, а при хронических инфекционновоспалительных процессах супрессией клеточных эффекторных механизмов иммунной защиты, которые необходимо учитывать при разработке адаптационных норм и назначении иммунокоррекции.

Внедрение результатов исследования в практику Материалы комплексных исследований, включающих показатели ДНКцитометрии клеток периферической крови и иммунного статуса, используются в работе отделений клинической иммунологии, нефрологии, урологии, онкогематологии, нейрохирургии, отделении гемодиализа и трансплантации почки Республиканской детской клинической больницы, на циклах повышения квалификации врачей клинической лабораторной диагностики Института последипломного образования Башкирского государственного медицинского университета.

Основные положения, выносимые на защиту 1 ДНК-гистограммы клеток периферической крови практически здоровых детей соответствуют диплоидному содержанию ДНК. Основная масса клеток находится в G0/1 фазе клеточного цикла. Иммунный статус характеризуется высоким уровнем цитотоксических Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток.

2 При врождённых пороках развития мочеполовой системы у детей развивается комплекс иммунопатологических реакций в виде депрессии показателей противовирусной защиты (CD8+; CD16+56+), высокого содержания циркулирующих иммунных комплексов. Компенсированная стадия хронической почечной недостаточности характеризуется диплоидным типом гистограмм, в терминальной стадии выявляется анеуплоидия.

3 Иммунологическая реактивность у больных хроническим гломерулонефритом характеризуется снижением уровня естественных киллерных клеток, высоким содержанием клеток, несущих маркёры активации (0025*) и циркулирующих иммунных комплексов. При хроническом гломерулонефрите на фоне базисной терапии отмечаются достоверные различия с контрольной группой по показателям кинетики клеточного цикла (фазы пролиферации).

4 К особенностями иммунологической реактивности при опухолях головного мозга относится высокое содержание в крови В-лимфоцитов и клеток, несущих маркеры ранней активации (CD25 ), при остром В-лимфобластном лейкозе - В-лимфоцитоз. Доброкачественные и злокачественные новообразования головного мозга характеризуются диплоидным типом гистограмм, анеуплоидия выявляется при остром В-лимфобластном лейкозе.

5 Корреляционным анализом взаимосвязей между параметрами иммунного статуса и показателями ДНК-цитометрии установлены различные типы межклеточной кооперации.

Апробация работы Основные положения диссертации обсуждены на научно-практической конференции «Педиатрия в Приволжском Федеральном Округе» (Казань, 2004); научно-практической конференции «Дни иммунологии в СанктПетербурге», (СПб., 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты оказания стационарной медицинской помощи детям, новые технологии специализированной медицинской помощи. Роль стационарных детских учреждений в выполнении федеральных программ» (Уфа, 2007).

Апробация диссертации проведена на расширенном межкафедральном заседании кафедр лабораторной диагностики ИПО, педиатрии и детской хирургии ИПО, госпитальной педиатрии с курсом поликлинической педиатрии, детской хирургии, ортопедии и анестезиологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава (протокол № 1 от 11.12.2008), на заседании Объединенного совета ДМ 208.006.05 (протокол № 1 от
29.01.2009).

Публикации
По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 3 в изданиях журналов, рекомендованных ВАК. Объём и структура диссертации Диссертация изложена на 123 страницах компьютерного текста и состоит из обзора литературы, пяти глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций. Работа содержит 28 таблиц, 25 рисунков.

Список литературы включает 204 источника (106 отечественных и 98 иностранных авторов).