Характеристика цитокинового статуса и регуляторных Т-клеток при физиологической беременности и гестозе [Электронный ресурс] Дударева Алла Витальевна

Содержание к диссертации

ВВЕДЕНИЕ :....... 5

ГЛАВА 1. РОЛЬ ЦИТОКИНОВ И РЕГУЛЯТОРНЫХ КЛЕТОК ВО
ВТОРОЙ ПОЛОВИНЕ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕРЕМЕННОСТИ И
НАРУШЕНИЕ МЕХАНИЗМОВ ИММУННОЙ РЕГУЛЯЦИИ ПРИ
РАЗВИТИИ ОСЛОЖНЕНИЙ ГЕСТАЦИИ (обзор
литературы).............. ...............12

1.1. медико-социальная значимость проблемы гестоза в

современном акушерстве 12

1.2: современные представления об этиопатогенезе

гестоза .:. 18

1.3. особенности продукции цитокинов при

физиологической и осложжннойбеременности: 20

1 .4. роль регуляторных т-клеток в формировании

физиологической толерантности.: ...:... 27

1.5. иммуномодулирующее влияние дюфастона. .31

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ: .35

2.1. ХАРАКТЕРИСТИКА БЕРЕМЕННЫХ, ВКЛЮЧЕННЫХ В ИССЛЕДОВАНИЕ 35

2:2. ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУНИТЕТА :....: 37

2.3. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА..... 40

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ. 41

1. БАЛАНС ТН1/ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХИ ТШ/ШОТИВО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЬГХ ЦИТОКИНОВ ПРИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ И ОСЛОЖНЕННОЙ ГЕСТОЗОМ БЕРЕМЕННОСТИ.. ......41

2. ХАРАКТЕРИСТИКА CD4⁺CD25⁺ РЕГУЛЯТОРНЫХ Т-КЛЕТОК ПРИ

ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ И ОСЛОЖНЕННОЙ ГЕСТОЗОМ БЕРЕМЕННОСТИ 53

3.3 ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ Т-ЛИМФОЦИТОВ ПРИ
ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ И ОСЛОЖНЕННОЙ ГЕСТОЗОМ БЕРЕМЕННОСТИ. 59

3.4.ВЛИЯНИЕ ДЮФАСТОНА НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ Т-КЛЕТОК И РАЗВИТИЕ ГЕСТАЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ У ЖЕНЩИН С УГРОЗОЙ

НЕВЫНАШИВАНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ 64

ОБСУВДЕНИЕ 78

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 91

ВЫВОДЫ 92

ЛИТЕРАТУРА 93

Список сокращений

ИКК - Иммунокомпетентные клетки

МНК- Мононуклеарные клетки

ИВконА - Индекс влияния КонА

КонА - Конканавалин А

ИСА - Индекс супрессорной активности

НК-клетки - Натуральные киллерные клетки

НКТ - Т-клетки с НК-подобным действием

Туб -Т-клетки с эмбриональной конфигурацией Т-клеточного рецептора

ЦТЛ - Цитотоксические Т-лимфоциты

CD- Кластердифференцировки

TNFa - Фактор некроза опухоли-а

EFNy - Интерферон- у

JL-2JL-4 и др. - Интерлейкин-2,интерлейкин-4 и др.

CM-CSF - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор

TGFJ3 - трансформирующий рост фактор-р

ThO,Thl,Th2 - Субпопуляпии Т-хелперных клеток

СА - спонтанные аборты

PIBF - прогестерон-индуцированный блокирующий фактор

ПЭ - преэклампсия

ШІФ - недостаточность лютеиновой фазы

Введение к работе

Гестоз является одним из наиболее тяжелых осложнений беременности; занимает 2-3 место в структуре материнской смертности и обусловливает наиболее высокий процент перинатальных осложнений [24- 53, 69, 86, 87]. Несмотря на пристальное внимание к данной проблеме, пусковые механизмы гестоза остаются до сих пор невыясненными. В силу многообразия клинических проявлений данное осложнение не всегда диагностируется-вовремя:, а существующие методы прогнозирования, профилактики и лечения гестоза недостаточно эффективны [11, 13, 29, 65; 67, 77, 81]. Вместе с тем своевременная и правильная диагностика, оценка степени тяжести гестоза имеют принципиальное значение для исхода беременности и родов [58; 13, 14, 77, 96, 97].

Согласно современным представлениям важную роль в развитии* патологии беременностиютаодят иммунным нарушениям. [5,16, 53; 63, 64., 82j 85]; Известно, что физиологическое течение беременности ассоциировано > с формированием иммунологической толерантности к аллоантигенам плодш. Одним из механизмов формирования толерантности является цитокин-опосредованная супрессия, которая обусловлена доминированием Th2/Th3 лимфоцитов; продуцирующихцитокины с иммуносупрессорной активностью: интерлейкин 4 (IL-4), интерлейкин 10 (П>10) и трансформирующий; фактор роста (TGF-P) [165,166,167,188; 189]..Феномен ТЫ->Th2/Th3 переключения представляется чрезвычайно важным, поскольку доминирование продукции ТЫ цитокинов сопряжено с патологическим характером гестации; в частности преждевременным прерыванием беременности [167, 169; 188]; Повышенный уровень ТЫ цитокинов отмечается и при гестозе [52, 82, 83, 123, 121, 195]. Причем преобладание продукции ТЫ/провоспалительных цитокинов задолго предшествует его клинической манифестации [129]. Вместе с тем, рядом авторов показано, что течение гестоза может быть

6 сопряжено не только с увеличением Thl цитокинов, но и повышенной продукцией Th2 цитокинов, а также с одновременным возрастанием уровня ТЫ и Тп2 цитокинов [214]. Таким образом, данные, характеризующие продукцию различных цитокинов при осложненном течении беременности, носят неоднозначный характері

Вместе с тем, ни у кого не вызывает сомнений, что цитокиновый дисбаланс оказывает непосредственное влияние на характер течения беременности. Поэтому комплексное исследование в периферической крови уровня Thl/Th2 цитокинов и их суммарной биологической активности при физиологической беременности и различных формах гестоза имеет принципиальное значение для понимания патогенеза гестоза, поиска иммунологических маркеров его прогноза; профилактики и лечения.

Наряду с цитокинами, важную роль в формировании и поддержании иммунологической толерантности могут играть регуляторные Т-клетки с супрессорной активностью. Среди них особый интерес представляют естественные супрессорные Т-клетки; (004*0025*) - Тгп. В последние годы их роль широко обсуждается в литературе в контексте подавления трансплантационных реакций при пересадках аллогенных органов и тканей. В экспериментальных исследованиях на мышах показано, что перенос С04⁺С025⁺-клеток от здоровых беременных мышей BALB/ самкам с угрозой невынашивания (DBA/2J) предотвращает у них выкидыши и способствует сохранению беременности. При этом, как выяснилось, ведущее значение в развитии выкидышей у DBA/2J мышей имеет дефицит GD4⁺CD25⁺-KneTOK в тимусе [113, 115]. Имеются единичные сообщения об увеличении содержания CD4⁺CD25⁺-iaieTOK при гестации у человека [189, 190, 191]. Тем не менее, значение естественных регуляторных Т-клеток в развитии физиологической беременности, и ее позднего осложнения - гестоза у человека остается практически не изученным.

Одной из важных задач является разработка эффективных методов профилактики и лечения гестоза, которое на сегодняшний день представляет

исключительно симптоматическую терапию. Развитие гестоза ассоциировано с неполноценной лютеиновой фазой (НЛФ) в результате недостаточной продукции прогестерона [77, 73, 88, 95, 260]. Следует отметить, что НЛФ является также причиной самопроизвольного прерывания беременности, которое успешно корригируется назначением аналога прогестерона -дюфастона [74, 75, 72]; Поскольку эффект дюфастона во многом связывают с его способностью индуцировать ТЫ—»Th2/Th3 переключение [166, 167]^ можно полагать, что данный препарат в силу иммуномодулирующего эффекта может предотвращать в последующем развитие гестоза. Однако исследование влияния дюфастона на уровень цитокинов во второй половине беременности и частоту развития гестоза у беременных из группы риска по прерыванию беременности до сих пор не проводилось.

Исходя из вышесказанного, была сформулирована цель настоящего исследования: Цель исследования:

На основе исследования баланса Thl/Th2 цитокинов и регуляторных Т-клеток изучить клеточно-молекулярные механизмы иммуносупрессии в течении физиологической и осложненной гестозом беременности. Для достижения поставленной; цели, были сформулированы следующие задачи:

1. Оценить биологическую активность сывороток крови и содержание Thl/Th2 цитокинов в супернатантах КонА-стимулированных клеток цельной крови при физиологической беременности и гестозе.

2. Охарактеризовать количественное содержание GD4⁺ CD25⁺ и CD4-*

CD25^bnsht Т-лимфоцитов в периферической крови у беременных в

исследуемых группах и оценить сопряженность показателей с тяжестью

гестоза.

3. Исследовать пролиферативный ответ Т-лимфоцитов в культурах анти-

СОЗ-стимулированных клеток, а также уровень спонтанного и

индуцированного апоптоза Т-клеток у беременных с осложненным и

физиологическим течением гестации.

4. Исследовать уровень продукции Thl/Th2 цитокинов и частоту развития гестационных осложнений (угрозы прерывания беременности, фетоплацентарной недостаточности, гестоза) в группах беременных, применявших и не использовавших гестаген дидрогестерон (дюфастон).

Научная новизна исследования.

В работе охарактеризованы особенности цитокинового баланса и естественных регуляторных Т-клеток с супрессорной активностью при физиологическом и осложненном течении беременности, что позволило сделать заключение о роли механизмов иммуносупрессии в процессе гестации и их нарушении при гестозе.

В результате комплексного исследования цитокинового статуса расширены представления о спектре Thl/Th2 цитокинов и их суммарной биологической активности при физиологической и осложненной гестозом беременности. Полученные результаты свидетельствуют о выраженной супрессорной активности сывороток крови и доминировании Th2-цитокинов при физиологической беременности. У беременных с тяжелым гестозом в периферической циркуляции регистрируется повышение продукции как ТЫ, так и Тп2-цитокинов. При этом оценка супрессорной активности сыворотки крови и соотношения отдельных Thl/Th2 цитокинов указывают на снижение содержания факторов/цитокинов с супрессорной активностью при развитии гестоза.

Впервые показано, что физиологическая беременность сопряжена не только с изменением баланса цитокинов, но и с увеличением в циркуляции естественных регуляторных CD4⁺CD25⁺T-KneTOK, в том числе с высокой экспрессией CD25 молекул (CD4⁺CD25^bright), причем возрастание численности CD4⁺CD25⁺ Т-клеток характерно именно для физиологической беременности и не регистрируется при беременности, осложненной гестозом.

Выявленные новые данные об обратной корреляционной зависимости между супрессорной активностью сыворотки крови, содержанием циркулирующих CD4⁺CD25⁺/CD4⁺CD25^brihtCD4 1-клеток и степенью тяжести гестоза подтверждают важность нарушения гестационной иммуносупрессии в развитии осложненной гестозом беременности.

На основе анализа уровня пролиферативного ответа и апоптоза Т-клеток в a-CD3-стимулированных культурах МНК охарактеризовано состояние функциональной активности Т-клеток при различных вариантах течения беременности.

В ркзультате исследования цитокинового статуса у женщин, принимавших гестаген дюфастон, впервые показано, что иммуномодулирующее влияние дюфастона во второй половине беременности; проявляется нормализацией продукции цитокинов и восстановлением функциональной активности Т-клеток у беременных из группы риска по невынашиванию гестации.

Практическая значимость.

На основе клинико-иммунологического анализа выявлены новые
иммунологические маркеры, которые могут служить дополнительным;
критерием при оценке степени тяжести гестоза. Характеристика иммунных
дисфункций при гестозе является основой для* разработки новых подходов к
коррекции осложненного течения беременности. Изучение

иммуномодулирующего эффекта гестагена дюфастон на продукцию Thl/Th2 цитокинов позволило разработать принципиально новый подход к профилактике гестоза в группах высокого риска, что имеет большое практическое значение для предотвращения репродуктивных потерь -снижения перинатальной и младенческой смертности, обусловленной хронической внутриутробной гипоксией плода, развивающейся на фоне гестоза.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Физиологическая иммуносупрессия второй половины беременности ассоциирована с преобладанием в сыворотке крови факторов с супрессорным действием^ доминированием Тп2/противовоспалительных цитокинов и увеличением относительного содержания естественных супрессорных клеток с фенотипом GD4⁺GD25⁺, в том числе с высокой экспрессией CD25⁺ молекул (CD4⁺CD25^tbri8ht).

2Развитие гестоза сопряжено со снижением супрессорной активности сыворотки крови, усилением продукции ТЫ- и ТЪ2 цитокинов и уменьшением содержания естественных супрессорных Т-клеток (Cm⁺CD2^,CIM⁺CD25^wt).-

3. Применение дюфастона у женщин с угрозой самопроизвольного
прерывания беременности характеризуется выраженным

иммунокорригирующим эффектом и приводит к снижению частоты развития гестоза в результате нормализации цитокинового баланса. Объем и структура диссертации.

Диссертация написана в традиционном стиле и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов и выводов: Материал изложен на 117 страницах машинописного текста, включающего 18 таблиц и 3 рисунка. Прилагаемая; библиография содержит ссылки на 222 литературных источника;, в том числе 121 иностранных. Апробация работы.

Основные результаты работы доложены и обсуждены на научно-практических конференциях врачей "Актуальные вопросы медициньі"(Новосибирск, 2004; Новосибирск, 2005), республиканской научной конференции "Иммунология репродукции" (Иваново, 2005),YH-Российском форуме "Мать и дитя" (Москва, 2005-2006) Публикации.

11 По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 1 обзорная статья в центральной печати, 5 статей и 5 тезисов.

Похожие диссертации на Характеристика цитокинового статуса и регуляторных Т-клеток при физиологической беременности и гестозе [Электронный ресурс]

Иммунный статус и структурно-функциональная характеристика иммунокомпетентных клеток у детей при пиелонефритахПрищепова, Елена Викторовна

Роль децидуальных лимфоидных клеток в иммунорегуляторных процессах при беременностиКрошкина, Наталья Владимировна

Популяционный состав лимфоидных клеток зрелой плаценты и их функциональная активность принеосложненной и осложненной беременностиМартенова, Анастасия Александровна

Морфофункциональные характеристики плацентарных макрофагов при различных исходах беременностиСелютин Александр Васильевич

Сезонная характеристика иммунного статуса у жителей аридной зоны Узбекистана в возрастном аспектеАбдуллаева, Зулхумор Мирзаевна

Характеристика иммунного статуса и иммуногенетические особенности населения КаракалпакстанаХудайбергенова, Зауре

Особенности иммунного статуса, генофенотической характеристики наркоманииШарокова Валентина Александровна

Популяция больших гранулярных лимфоцитов и нагрузочные тесты с биогенными аминами в характеристике иммунного статуса носителей вирусов гепатитов В и СКабанова Елена Валерьевна

Характеристика иммунного и цитокинового статуса мужчин с хроническим уретритом хламидийной и уреаплазменной этиологииЮцковская Ирина Александровна

Особенности иммунного статуса, гено-фенотипической характеристики наркоманииШаркова Валентина Александровна