Введение к работе
Актуальность проблемы.
В настоящее время все большее внимание исследователей привлекают биорегуляторы местного и системного действия - цитокины, играющие важную роль в развитии иммунного ответа, воспаления и регенерации . В ряде работ получены данные об ускорении процессов заживления под действием рекомбинантных цитокинов (Jouce N. С, 1991; Nishida Т., Nakamura М., Otozi Т., 1992). Эффекты комбинации природных цитокинов, обусловленные плейотропностью, тандемностью, каскадностью, синергистично-стью и антагонистичностью воздействия на клетки-мишени, значительно отличаются от эффектов, вызываемых индивидуальными пептидами. В связи с этим, представляется перспективным использование комплексов цитокинов в качестве фармакологических средств при лечении различных заболеваний. Особую актуальность этот подход имеет в офтальмологии, так как даже незначительные нарушения в тканях глаза могут привести к необратимым последствиям.
На кафедре иммунологии РГМУ разработан новый лечебный принцип локальной цитокинотерапии (Ковальчук Л. В., Ганковская Л. В. и др., 1987 г.), основанный на местном применении комплекса цитокинов, вырабатываемых стимулированными клетками периферической крови пациентов in vitro. Данный метод был успешно применен при проникающих травмах глаза и способствовал более быстрому купированию воспалительной реакции, сокращению сроков полного очищения и рубцевания раны, снижению риска посттравматических осложнений, в том числе формирования грубых рубцов роговицы (Гундорова Р. А,. 1993; Слепова О. С, 1993). Получен положительный эффект применения естественного комплекса цитокинов (ЕКЦ) в ограниченных клинических испытаниях с целью профилактики избыточного рубцевания в группе больных первичной открытоугольной глаукомой в послеоперационный период (Образцова Е. Н., Васи-ленковаЛ. В., 1996).
Ожоговое повреждение роговицы приводит к массивной деструкции тканей глаза, воспалению, нарушению процессов репарации и возникновению осложнения трудно поддающихся лечению. В результате тяжелых ожогов глаз образуются грубые, интенсивно васкуляризованные бельма роговицы, представляющие неблагоприятную почву для пересадки роговицы с оптичесхой целью (Мороз 3. И., 1987).
Вышеизложенные данные свидетельствуют об актуальности разработки лекарственного препарата на основе естественного комплекса цитокинов и изучение его влияния на процессы постожоговой регенерации роговицы. Цель и задачи исследования.
Целью работы явилось изучение механизмов действия естественного комплекса цитокинов (ЕКЦ) на модели постожоговой регенерации роговицы, а также разработка стандартизированной формы препарата на основе комплекса цитокинов. В соответствие с поставленной целью были сформулированы следующие задачи:
1. Изучение механизмов влияния естественного комплекса цитокинов на процессы
- постожоговой регенерации роговицы в эксперименте.
-
Анализ содержания провоспалительных (ИЛ-ір, ФНО-а) и противовоспалительных (ТФР-рЧ, ТФР-Р2) цитокинов в слезной жидкости больных ожоговой болезнью глаза в сравнении со здоровыми донорами.
-
Получение, характеристика и стандартизация препарата на основе естественного комплекса цитокинов.
Научная новизна.
В настоящем исследовании впервые проведено изучение влияния аутологичного и гетерологичного комплексов цитокинов на течение постожоговой регенерации роговицы. Показано, что применение естественного комплекса цитокинов, секретируемого аутологичными или гетерологичными лейкоцитами периферической крови, изменяет состав мигрирующих клеток в очаг повреждения (макрофаги - в опытной группе, ней-трофилы - в контрольной). ЕКЦ способствует ускорению эпителазиции, восстановлению эндотелия и уменьшению отека стромы роговицы. Под действием ЕКЦ активизируется миграция и пролиферация фибробластических элементов, что способствует быстрому замещению некротизированных тканей и сохранению частичной пластинчатости роговицы.
Получены новые данные о содержании провоспалительных (ИЛ-lp и ФНО-а) и противовоспалительных (ТФР- рі, ТФР-Р2) цитокинов в слезной жидкости больных ожоговой болезнью глаза и выявлен их дисбаланс, смещенный в сторону провоспалительных цитокинов.
Разработана лабораторная технология получения лекарственного препарата на основе естественного комплекса цитокинов - "Суперлимф".
Практическая значимость.
В данной работе показано, что естественный комплекс цитокинов является перспективным лекарственным средством, способным регулировать постожоговую регенерацию роговицы и нормализовывать ее структуру, что создает благоприятные условия для последующей кератопластики.
Проведенный анализ содержания цитокинов в слезной жидкости больных ожоговой болезнью глаза позволяет уточнить иммунопатогенез этого заболевания, а также обосновывает применение цитокинов приданной патологии.
Полученные в работе данные, позволяют получить активный, стандартизированный лекарственный препарат на основе естественного комплекса цитокинов. Внедрение результатов исследования в практику.
Полученный стандартизированный препарат ("Суперлимф") был использован в комплексном лечении больных первичной открытоугольной глаукомой с целью предупреждения избыточного рубцевания в послеоперационный период. Была показана его эффективность. Разрешение на проведение клинических испьгганий "Суперлимфа" было получено в ГИСК им. Тарасевича (решение фарм. комитета от 14 февраля 1999 г, протокол №1).
Апробация диссертационного материала.
Основные положения по материалам диссертации доложены и обсуждены на: 4-ом Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1997), 5-ом Международном конгрессе "International Cytokine Society" (Lake Tahoe, Nevada , 1998), 5-ом Международном конгрессе "Иммунореабнлитация и реабилитация в меднци-не"(Тенерифе, Испания , 1999), совместной научной конференции кафедры иммунологии и отдела экспериментальной и клинической иммунологии МЛК РГМУ (1999 г.). Объем и структура работы.
Диссертация изложена на страницах машинописи и состоит из введения, трех глав: "Обзор литературы", "Материалы и методы исследования", Результаты исследований и их обсуждение", заключения и выводов. Список литературы содержит 150 источников. Диссертация иллюстрирована таблицами и рисунками.
