Введение к работе
Актуальность исследования. В настоящее время частота бесплодия в браке по данным различных эпидемиологических исследований колеблется от 8% до 29% и не имеет тенденции к снижению во всех странах мира [Овсянникова Т.В., 2009; Ingerslev, 2012]. Бесплодный брак значительно влияет на демографические показатели, в связи с чем данная проблема приобретает не только медико-биологическое, но и важное социальное значение. Кроме того, неспособность иметь детей изменяет психологическую адаптацию пациентов в обществе и ведет к снижению качества жизни [Шаршенов А. К., 2004].
Экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) является одним из наиболее современных и перспективных методов лечения бесплодия. В связи с широким распространением вспомогательных репродуктивных технологий особую актуальность приобретает вопрос повышения их эффективности. В европейских странах частота наступления беременности в программе ЭКО в расчете на перенос эмбриона в полость матки, согласно данным Европейского общества репродукции человека и эмбриологии (ESHRE), составляет около 30%. При этом пациентки с многократными неэффективными попытками ЭКО составляют около 30% от всех пациенток, которые получают лечение этим методом [Судома И.А., 2007].
К наиболее распространенным причинам неэффективности попыток ЭКО относятся: плохое качество эмбрионов, нарушение свертываемости крови, а также изменение кариотипа супругов и патология эндометрия [Феоктистов А.А., 2009]. Однако существует определенный процент циклов ЭКО, при которых причина ненаступления беременности остается неясной. В подобных ситуациях ряд исследователей в качестве возможной причины рассматривает нарушение имплантации плодного яйца в толщу эндометрия [Ширшев С.В., 2002].
Причин нарушения имплантации много, однако, одной из причин могут являться генетические особенности пациентки, в том числе и аллельный полиморфизм некоторых генов. Носительство тех или иных аллелей определенных генов может изменять течение биохимических процессов в организме пациентки и способствовать нарушению процесса имплантации. Имплантация плодного яйца — сложный многоступенчатый процесс с вовлечением большого числа клеточных и гуморальных факторов, в том числе белков эндотелиальной дисфункции, цитокинов и факторов ангиогенеза. Таким образом, большой интерес представляет изучение полиморфизма генов, принимающих участие в процессах имплантации, к которым относятся гены белков, вовлеченных в патогенез эндотелиальной дисфункции, цитокинов и факторов ангиогенеза.
Цель исследования
Определение генетических предикторов нарушения процесса имплантации у пациенток с многократными неудачными попытками ЭКО.
Задачи исследования:
1. Изучить и сопоставить встречаемость аллельных вариантов генов белков, связанных с эндотелиальной дисфункцией (MTHFR (677C/T), eNOS (894G/T), p22-phox NADPH (242C/T)), генов цитокинов (IL-1 (-511C/T), IL-6 (-174G/C), IL-10 (-1082G/A), TNF- (-238G/A)) и генов факторов ангиогенеза (VEGF (-1154G/A), KDR (1719A/T и -604T/C) и Ang-2 (735G/A)) у пациенток с неудачными попытками ЭКО и у фертильных женщин.
2. Сопоставить частоту встречаемости аллельного полиморфизма генов ангиогенеза и нарушений внутриматочной перфузии.
3. Разработать метод оценки степени риска нарушения имплантации.
Научная новизна
На основании многофакторной оценки генотипа пациенток с неудачными попытками ЭКО и фертильных женщин определены гены, аллельные варианты которых ассоциированы с нарушением имплантации.
Впервые выявлена прямая взаимосвязь между носительством мутантных аллелей в гене ангиогенеза (VEGF) и нарушением внутриматочной перфузии.
Практическая значимость работы
Для прогноза эффективности ЭКО и возможной терапевтической коррекции при исключении других причин нарушения имплантации обоснована целесообразность проведения генотипирования пациенток с неудачными попытками ЭКО по генам IL-1b, TNF- и VEGF, поскольку аллельный полиморфизм этих генов является фактором риска нарушения имплантации.
На основе проведенного многофакторного анализа разработан метод оценки риска нарушения имплантации и прогнозирования эффективности ЭКО. Наличие определенных комбинаций генотипов С(-511)Т гена IL-1b, A(-238)G гена TNF- и G(-1154)А гена VEGF позволяет отнести пациентку к группе без риска, с низким, средним или высоким риском нарушения имплантации.
Положения, выносимые на защиту
-
Аллельный полиморфизм генов IL-1b, TNF- и VEGF является фактором риска нарушения имплантации плодного яйца.
-
Наличие определенных комбинаций генотипов С(-511)Т гена IL-1b, A(-238)G гена TNF- и G(-1154)А гена VEGF является основанием для отнесения пациентки в группу без риска, с низким, средним или высоким риском нарушения имплантации плодного яйца.
-
При наличии у пациенток полиморфизма генов ангиогенеза чаще выявляются нарушения внутриматочной перфузии на уровне базальных и спиральных артерий.
Внедрение результатов исследования в практику
Результаты исследования внедрены в работу отделения ЭКО «Центра планирования семьи и репродукции» ДЗ г. Москвы; используются в учебном процессе при подготовке студентов, ординаторов и аспирантов на кафедре акушерства и гинекологии, кафедре биохимии и молекулярной медицины Факультета фундаментальной медицины ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова»; а также при выполнении государственного контракта № 16.512.11.2030 от 14 февраля 2011 г. с Министерством образования и науки России по теме: «Разработка метода дифференцированного выявления генетических маркеров аллельных вариаций генов материнской и фетальной ДНК, ведущих к нарушению роста и развития плода, в крови матери».
Апробация работы
Основные положения работы доложены и обсуждены на совместной научно-практической конференции сотрудников кафедры акушерства и гинекологии Факультета фундаментальной медицины МГУ имени М.В. Ломоносова, кафедры акушерства и гинекологии педиатрического факультета ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, кафедры биохимии и молекулярной медицины Факультета фундаментальной медицины МГУ имени М.В. Ломоносова и сотрудников ГБУЗ «Центр планирования семьи и репродукции» ДЗ г. Москвы 20 сентября 2012г., протокол №3.
Публикации
По материалам диссертационной работы опубликовано 5 печатных работ в отечественной и зарубежной печати, из них 3 – в журналах, включенных в перечень ВАК Минобрнауки России.
Личное участие автора
Автором лично проведена работа по отбору и клиническому обследованию тематических больных, изучению аллельных вариантов исследуемых генов у данных пациенток; статистическая обработка полученных данных и анализ результатов исследований.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ
