Введение к работе
Актуальность темы исследования В 2004-2007 гг проявления эпидемического процесса гепатита В (ГВ) и гепатита С (ГС) в Российской Федерации приобрели принципиально новый качествсігньїй характер, продолжающееся снижение заболеваемости острыми формами сочетается с увеличением регистрации клинически выраженного хронического ГВ (ХГВ) и ГС (ХГС) и сохранением высокого уровня и активно выявляемых скрытых форм инфекции Важнейшим из маркеров ВГВ и ВГС является вирусная нагрузка данных вирусов в плазме или сыворотке крови пациентов Определение вирусной нагрузки вирусов гепатита В и С (ВГВ и ВГС), т. е концентрации вирусной ДНК и РНК в плазме или сыворотке крови, крайне важно в клинической практике, поскольку широкомасштабные когортные исследования показали роль высоких значешій вирусной нагрузки ВГВ и ВГС как прогностического маркера неблагоприятного исхода заболевания - цирроза пречени (ЦП) и гепатоцеллюлярной карциномы - ГЦК (С J Chu с соавт, 2002; С J Chen с соавт, 2006, U Н Hoeje с соавт, 2006) Количественное определение ДНК ВГВ и РНК ВГС, наряду с биохимическими показателями, служит основным инструментом мониторинга противовирусной терапии и оценки ее эффективности (W О Cooksley с соавт, 2004, Е В Keeffe с соавт, 2004), а также прогноза успеха лечения (Л Lot с соавт, 2004, А Л Van der Ецк с соавт, 2006) Величина вирусной нагрузки ВГВ и ВГС также является важным фактором, определяющим риск перинатальной передачи этих вирусов (А Soderstrom, 2003), и критерием допуска инфицированных медицинских работников к инвазивиым процедурам (EJ Buster, 2003) Учитыва» важность определения вирусной нагрузки ВГВ и ВГС в клинической практике, одним из основных требований к диагностикам для количественного определения ДНК ВГВ и РНК ВГС явадется точность и воспроизводимость анализа В лабораторной практике используется целый ряд тестов для количественного определения ДНК ВГВ и РНК ВГС, преимущественно основанных на методе полимеразной реакции (ПЦР) в реальном времени и методе разветвленных цепей ДНК (рДНК) Однако не установлен единый алгоритм определения вирусной нагрузки ВГВ и ВГС с помощью данных тестов Показано, что заболеваемость ЦП и ГЦК у среди лиц, проживающих в гиперэндемпчных по ВГВ н ВГС территориях, значительно превышает аналогичные показатели в общей популяции Так, среди коренного населения Аляски заболеваемость ГЦК в 5 раз превышает заболеваемость среди белого населения США (В J McHalon с соавт, 2001) Более высокие уровни заболеваемости ЦП и ГЦК связаны с высокой распространенностью ВГВ и ВГС в данных популяциях При этом установлено, что с повышенным риском карщшогенеза связаны определенные факторы
организма и вируса - генотип вируса, возвращение к HBeAg-позитивному статусу после периода сероконверсии по анти-НВе и старший возраст (S Е Livingston с соавт, 2007) Однако недоказанным остается предположение о том, что с повышенным риском развития ЦП и ГЦК при ГВ и ГС могут быть связаны определенные генетические факторы Учигывая, что связь между высокими значениями вирусной нагрузки ВГВ и ВГС и риском развития ЦП и ГЦК в настоящее время подтверждена, вполне возможным представляется существование различий между уровнями вирусной нагрузки ВГВ и ВГС среди инфицированных этими вирусами лиц, принадлежащих к различным генетическим группам и проживающих в регионах с разными уровнями эндемичности по ВГВ и ВГС
Цель исследования
Целью настоящего исследования являлось определение значимости количественного выявления ДНК ВГВ и РНК ВГС в регионах с различными уровнями эндемичности по гепатитам В и С
Задачи исследования: 1 сравнить методы и диагностические препараты для количественного определения ДНК
ВГВ и РНК ВГС, 2. разработать алгоритм применения тестов для определения вирусной нагрузки ВГВ и
ВГС,
-
определить уровни вирусной нагрузки ВГВ и ВГС в разных группах населения - у пациентов с ХГВ и ХГС, проживающих в регионах с умеренным (Московская область) и высоким (Республика Тыва) уровнями эндемичности,
-
проанализировать клиническое значение количественного определения ДНК ВГВ и РНК ВГС
Научная новизна
-
Впервые показана более высокая воспроизводимость результатов определения вирусной нагрузки, полученных методом анализа разветвленные цепей ДНК (рДНК) по сравнению с методом ПЦР в реальном времени
-
Впервые в России предложен алгоритм определения вирусной нагрузки ВГВ и ВГС, основанный на последовательном применении иммунологических и молекулярно-биологических тестов
-
Впервые в России показано отсутствие значимых различий между средними значениями вирусной нагрузки ВГВ и ВГС и долей лиц с высокими и низкими уровнями виремии среди пациентов с ХГВ и ХГС, проживающими в регионах с высокой и низкой степенью эндемичности по данным инфекциям
4 Впервые в России на основании когортного исследования и разбора клшпиеских случаев установлена роль уровней виремии ВГВ и ВГС в прогрессировании заболевания печени и их влияния на степень гистологической активности при ВГВ- и ВГС-ассоциированном ХГ
Практическая значимость полученных новых научных знаний
1 Предложенный алгоритм определения вирусной нагрузки ВГВ и ВГС
может применяться как в клинической практике, так и при исследованиях, посвященных значимости определения вирусной нагрузки при вирусных ГВ и ГС
2 Установленное влияние уровней виреміш ВГВ и ВГС на степень гистологической
активности при ВГВ- и ВГС-ассоциированном ХГ и на прогрессирование заболевания
печени доказывает необходимость применения тестов для количественного определения
ДНК ВГВ и РНК ВГС в клинической практике
3 Доказанное отсутствие влияния на уровни вирусной нагрузки ВГВ и ВГС генетического
(этнической принадлежности) и эпидемиологического (степени зпдемігчности территории
проживания по ГВ и ГС) факторов позволяют унифицировать подходы к мониторингу
вирусной нагрузки у пациентов с ГВ и ГС, что имеет большое значение для клинической
практики
Апробация работы и публикации по теме диссертации Основные положения, выводы и практические рекомендации представлены на V Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», Москва, 2006 г, VII Российской международно-практической конференции с международным участием «Вирусные гепатиты - эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика», Москва, 2007 г, IV съезде российского общества биохимиков и молекулярных биологов, Новосибирск, 2008 г Апробация работы проведена на заседании отдела вирусных гепатитов Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им М П Чумакова РАМН
По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, из них статей в центральной печати - одна, тезисов - четыре
Структура и объем диссертации
