Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Исследование ноотропных эффектов фрагмента семакса - гексапептида EHFPGP 58
1.1. Изучение влияния EHFPGP на ориентировочно-исследовательское поведение животных . 58
1.2. Изучение ноотропных эффектов EHFPGP при введении пептида за 15 мин до сеанса обучения. 60
1.3. Изучение ноотропных эффектов EHFPGP при введении пептида за 1 час до сеанса обучения. 64
1.4. Изучение ноотропных эффектов EHFPGP при введении пептида за 20 часов до сеанса обучения. 71
1.5. Обсуждение полученных результатов 74
Глава 2. Влияние модификации N-концевой области молекулы на ноотропные эффекты аналогов семакса . 78
2.1 Зависимость выраженности ноотропного действия аналогов семакса от N- концевого аминокислотного остатка. 78
2.1.1 Изучение нейротропной активности аналога семакса rMEHFPGP 79
2.1.2 Изучение нейротропной активности аналога семакса KEHF PGP 87
2.1.3 Изучение нейротропной активности аналогов семакса WEHFPGP и SEHFPGP. 91
2.1.4 Изучение нейротропной активности аналогов семакса GEHFPGP, TEHFPGP и AEHFPGP. 98
2.2 Влияние модификации N-концевой области молекулы на длительность ноотропного действия аналогов семакса. 101
2.2.1 Исследование нейротропных эффектов аналогов семакса rMEHFPGP и KEHFPGP при введении пептидов за 1 час до обучения. 103
2.2.2 Изучение нейротропных эффектов аналога семакса rMEHFPGP при введении за 20 часов до обучения. 112
2.3 Обсуждение полученных результатов. 119
Глава 3. Изучение ноотропных эффектов продуктов ферментативной деградации семакса . 121
3.1 Сравнение ноотропных эффектов фрагментов АКТГ4-ю и AKTrs.jo. 121
3.2 Исследование ноотропной активности пептидов EHFPGP, HFPGPH FPGP . 123
3.3 Обсуждение полученных результатов 126
Глава 4. Исследование кардиотропных эффектов семакса и аналогов фрагментов АКТГ . 130
4.1 Изучение влияния ряда аналогов фрагментов АКТГ на частоту сердечных сокращений у крыс в покое. 131
4.2 Влияние аналогов фрагментов АКТГ на изменения параметров сердечного ритма крыс в ответ на повторяющиеся стрессирующие воздействия низкой интенсивности . 133
4.3 Влияние семакса и ERP на частоту сердечных сокращений у крыс при действии повторяющихся стрессогенных стимулов ВЫСОКОЙ интенсивности. 139
4.4 Обсуждение полученных результатов 148
Приложение к Главе 4 149
Заключение 158
Выводы 163
Список литературы 164
- Изучение влияния EHFPGP на ориентировочно-исследовательское поведение животных
- Изучение нейротропной активности аналога семакса rMEHFPGP
- Исследование ноотропной активности пептидов EHFPGP, HFPGPH FPGP
- Влияние аналогов фрагментов АКТГ на изменения параметров сердечного ритма крыс в ответ на повторяющиеся стрессирующие воздействия низкой интенсивности
Введение к работе
В настоящее время показано, что вещества пептидной природы являются прямыми или опосредованными регуляторами многих важных физиологических процессов в организме. Область биологической активности регуляторных пептидов чрезвычайно широка. Вещества этой группы определяют состояние кровеносной, иммунной и других систем. Важную роль играют пептиды в регуляции состояния центральной нервной системы. Механизм действия большинства известных нейропептидов сложен и недостаточно изучен.
Одним из активно исследуемых классов эндогенных пептидных регуляторов являются АКТГТМСГ-подобные пептиды, объединяемые в настоящее время термином меланокортины. Исследования эффектов меланокортинов, проводившиеся на протяжении последних 40 лет, показали, что спектр физиологической активности этих пептидов очень широк. Соединения этого класса, помимо ранее известной гормональной активности, оказывают влияние на процессы обучения и памяти, рост и регенерацию нервов, иммунную регуляцию, сердечно-сосудистую систему, болевую чувствительность, пищевое и половое поведение и ряд других функций организма. Использование коротких фрагментов природных гормонов позволяет отделить гормональные (кортикотропные и меланотропные) свойства исходных молекул от их экстрагормонального действия. Доказательство широкого спектра физиологической активности меланокортинов и открытие семейства их рецепторов предоставило новые возможности для исследования веществ, потенциально применимых в клинике при различных патологиях.
Существенным недостатком природных меланокортинов является малая продолжительность их действия. Многими исследователями были предприняты попытки создания высокоэффективных аналогов фрагментов АКТГ путем различных модификаций первичной структуры молекулы. В ходе таких экспериментов были получены аналоги природных пептидов, лишенные гормональных эффектов и обладающие выраженной биологической активностью. В результате многолетних исследований был разработан аналог
7 AICnYio пролонгированного действия - семакс. Исследования активности этого пептида в экспериментах на животных показали, что он улучшает память и внимание, обладает антигипоксическим и антигеморрагическим эффектами, способствует уменьшению тяжести клинических и нейрофизиологических проявлений экспериментального ишемическиго инсульта. Клинические исследования показали высокую эффективность семакса при лечении интеллектуально-мнестических расстройств различного генеза, а также при профилактике и лечении постнаркозных мнестических нарушений. Введение семакса оказывает выраженное позитивное действие при лечении инсульта. На сегодняшний день этот пептид является единственным широко используемым в клинике лекарственным нейротропным препаратом, разработанным на основе фрагментов АКТГ. Исследования физиологических эффектов семакса, направленные на выяснение механизмов его действия и на расширение спектра клинического применения этого препарата, продолжаются.
Несмотря на то, что семакс уже более десяти лет используется в клинической практике, до настоящего времени не раскрыты механизмы, лежащие в основе его пролонгированного действия, не выявлено значения отдельных структурных элементов молекулы для сохранения его ноотропных эффектов, не определен спектр физиологической активности этого пептида.
Настоящая работа посвящена исследованию зависимости «структура -активность» в ряду синтетических аналогов фрагментов АКТГ и оценке влияния модификации N-концевой области молекулы семакса на выраженность и длительность его ноотропного действия, а также изучению кардиотропных эффектов ряда синтетических меланокортинов. Полученные данные позволяют выявить минимальную последовательность, необходимую для сохранения иейротропного действия меланокортинов, определить роль отдельных структурных элементов молекулы в сохранении активности. Кроме того, проведенные исследования способствуют определению зависимости спектра физиологической активности меланокортинов от их структуры. На основании проведенного исследования могут быть созданы аналоги природных фрагментов АКТГ с заданным спектром физиологической активности.
Изучение влияния EHFPGP на ориентировочно-исследовательское поведение животных
Выработка условного рефлекса пассивного избегания. Условный рефлекс пассивного избегания болевого раздражителя (УРПИ) вырабатывали в камере размером 30x22x35 см. Экспериментальная камера, подсоединенный к источнику тока (стимулятор ЭСЛ-2), разделялась на 2 равных отсека, соединенных переходом. Один отсек ярко освещался, второй был затемнен. В первый день эксперимента крысу помещали в освещенный отсек камеры и регистрировали время перехода в затемненный отсек (латентный период перехода). Затем переход закрывали и крысу подвергали неизбегаемому электроболевому раздражению в течение 3 секунд. Напряжение подбиралось индивидуально для каждого животного по вокализации (в диапазоне 60-90 В), частота составляла 50 Гц, длительность - 10 мсек. После отключения тока крысу оставляли в затемненном отсеке на 20 секунд. Через 3 суток проводили проверку выработки навыка пассивного избегания. Животное вновь помещали в светлый отсек камеры на 3 минуты и регистрировали латентный период перехода в затемненный отсек и общее время, проведенное крысой в светлой части камеры. Инъекции препаратов проводили только в первый день эксперимента.
Выработка условного рефлекса активного избегания. Условный рефлекс активного избегания болевого раздражения (УРАИ) вырабатывали в камере (размер 30x22x35 см) с решетчатым полом, в углу которой на высоте 25 см находилась полка. На пол камеры подавали электрический ток со стимулятора ЭСЛ-2. Условным раздражителем служил звук звонка; безусловным - удар тока (напряжение подбиралось индивидуально для каждого животного в диапазоне 70-100 В, частота составляла 200 Гц, длительность - 1 мсек). Продолжительность звучания звонка составляла 3 сек. Через 2 сек после его выключения подавался безусловный раздражитель. Условной реакцией являлся прыжок на полку. Если избавление не наступало в течение 30 сек, то напряжение отключали. Длина временных интервалов между сочетаниями колебалась случайным образом в пределах 15-25 секунд. В работе использовали четырехдневную схему выработки У РАИ. Каждое животное получало по 10 сочетаний условного и безусловного раздражителей в течение 4 дней. Инъекции препаратов проводили ежедневно перед сеансом обучения. В качестве показателей выработки У РАИ использовали: 1) количество выполненных реакций (КВР) - число избеганий болевого раздражителя, т.е. число прыжков на полку до включения тока, в ответ на условный сигнал; 2) число межсигнальных реакций (МСР) - число прыжков на полку до включения условного раздражителя. Кроме того, подсчитывались среднее КВР и среднее число МСР за весь период обучения. Кроме исследования влияния пептидов на поведение животных, исследовалось их действие на параметры сердечного ритма в покое и в ответ на стрессирующее воздействие различной интенсивности. Регистрация ЭКГ крыс Для регистрации ЭКГ животным под кожу вводили два проволочных электрода. Операция проводилась под легким эфирным наркозом за трое суток до основного эксперимента. Электроды изготавливались из мягкой стальной проволоки диаметром 1 мм. Они размещались на брюшной стороне крысы: один - на уровне верхних грудных позвонков ближе к передней левой конечности, другой — на уровне верхних поясничных позвонков ближе к правой нижней конечности. Электроды пропускались под кожей животного на участке около 5 мм, их концы загибались на наружной поверхности кожи. Подкожное введение отрезков проволоки не вызывало воспалительных явлений, и после окончания серии измерений электроды легко удалялись. На следующий день после операции крысы адаптировались в камере регистрации в течение 30 минут при свете красной лампы в тишине. Животное помещалось в экранированную камеру размером 15x25x30 см, на дно которой были насыпаны опилки из клетки, где оно содержалось. Над камерой размещались красная лампа мощностью 15 Вт и яркая лампа мощностью 200 Вт. Через двое суток после операции исследовалось влияние препаратов на ЭКГ крыс в покое. Регистрация ЭКГ проводилась с помощью программы CON AN на ЭВМ IBM РС/АТ-386, обработка данных осуществлялась с помощью программы для анализа и записей ЭКГ "RR". Крыса помещалась в экранированную камеру. Электроды через усилитель соединялись с аналого-цифровым преобразователем компьютера. Оцифровка аналоговых сигналов проводилась с частотой 300 Гц. Регистрация ЭКГ начиналась через 5 минут после помещения крысы в экранированную камеру, условия регистрации были аналогичны условиям адаптации. Фоновая запись повторялась 3 раза с интервалом в 15 минут, при этом животное каждый раз извлекалось из камеры. После третьей записи животным вводили исследуемые пептиды: MEHFPGP, EHFPGP, R-MEHFPGP или ERP. Спустя 15, 30, 45 и 60 минут после инъекции вновь регистрировали ЭКГ. Длительность каждой записи составляла 150 сек.
На следующие сутки после записи ЭКГ в покое проводили исследование изменения ЭКГ в ответ на стрессирующее воздействие низкой интенсивности на фоне действия пептидов. В качестве стрессирующего воздействия использовали включение яркой лампы на 6 сек. До введения веществ трижды регистрировали фоновые значения ЭКГ. После третьей регистрации крысам вводили исследуемые пептиды (MEHFPGP, EHFPGP, R-MEHFPGP или ERP) и регистрировали ЭКГ еще 4 раза с интервалом в 15 минут. В ходе каждой регистрации запись ЭКГ проводилась в течение 150 сек, при этом в течение первых 6 секунд запись проводилась в тишине и при свете красной лампы, затем на 6 секунд включали яркий свет, после выключения которого регистрация продолжалась в бесстрессорных условиях. При обработке данных анализировались интервалы записи длительностью 3 сек.
Изучение нейротропной активности аналога семакса rMEHFPGP
В течение длительного времени в нашей лаборатории изучалась нейротропная активность как природных, так и синтетических пептидов -аналогов фрагментов АКТГ. Были исследованы эффекты таких пептидов, как MEHFGPP, MEHFPRP, MEHHPGP, EHHPGP [Пономарева-Степная и др., 1984; Пономарева-Степная и др., 1986]. Однако модификации (замены, изменение длины молекулярной последовательности пептида) затрагивали только С-концевую область молекулы. Исследование физиологической активности целого ряда аналогов АКТГ(4-10) и АКТГ(4-9) и позволило выявить пептид MEHFPGP, структура которого включает в себя природный фрагмент АКТГ(4-7) и трипептид Pro-Gly-Pro. Последовательность этого гептапептида в дальнейшем послужила основой для создания лекарственного препарата семакс.
Несмотря на то, что проводилось множество экспериментов по изучению влияния модификации С-концевой области молекулы на физиологическую активность фрагментов АКТГ, N-концевой участок оставляли без изменения, хотя, на наш взгляд, изучение нейротропных эффектов аналогов фрагментов АКТГ с модифицированной N-концевой областью позволило бы сделать заключения о зависимости активности пептидов этого класса от структуры.
Зависимость выраженности ноотропного действия аналогов семакса от N-концевого аминокислотного остатка.
Поскольку фрагмент семакса EHFPGP обладает выраженной поведенческой активностью, то возникает вопрос - аминокислотный остаток, находящийся в первом положении семакса (метионин), необходим только в качестве защиты (для замедления протеолитического расщепления), или он оказывает влияние на ноотропную активность препарата? Для того, чтобы ответить на этот вопрос, в данной части нашего исследования мы изучали ноотропное действие ряда пептидов — аналогов семакса, в которых N-концевой метионин модифицирован или заменен на другие аминокислоты. Модификация N-концевого метионина заключалась в присоединении остатка глюконовой кислоты, что, по нашим предположениям, должно было увеличить способность пептида проникать через ГЭБ, т.к. при этом возрастает гидрофобность молекулы. Выбор аминокислот, на которые был заменен остаток метионина, определялся по отношению частоты встречаемости этой аминокислоты на N-концах физиологически активных пептидов к доле этой аминокислоты в белках. Этот показатель в какой-то степени отражает устойчивость данных аминокислотных остатков к действию N-концевых протеаз. Доля аминокислот в белках оценивалась по банку аминокислотных последовательностей белков SWISS-Prot(33)02/96. Доля аминокислот на N-концах физиологически активных пептидов оценивалась по банку физиологически активных пептидов [Замятнин, 2003]. В первом разделе работы представлены результаты сравнительного исследования активности пептидов при введении препаратов за 15 минут до обучения.
В первой серии экспериментов нами изучалась ноотропная активность аналога семакса, в котором N-концевой метионин модифицирован присоединением остатка глюконовой кислоты (rMEHFPGP).
Исследование влияния rMEHFPGP на двигательную активность и ориентировочно-исследовательскую реакцию животных показало, что введение пептида за 15 минут до начала тестирования в «открытом поле» вызывает достоверное увеличение длины пробега с 30 по 60 и с 90 по 120 секунды регистрации (рис. 14). Количество стоек также выше у опытных животных, чем у контрольных, в последние 30 сек опыта. Другие параметры поведения, такие, как выходы в центр арены, количество умываний и число дефекаций, не изменялись при введении rMEHFPGP (рис. 14).
Исследование действия гептапептида с модифицированным N-концевым метионином на обучение крыс в Т-образном лабиринте показало, что ежедневное введение пептида в дозе 0,05 мг/кг за 15 минут до сеансов обучения вызывает достоверное снижение латентного периода реакции в 1-ый и 2-ой дни обучения, а также среднего ЛГТ за весь период обучения относительно контроля. Кроме того, в группе крыс, получавших инъекцию rMEHFPGP, зарегистрировано значимое снижение числа ошибок как в первые три дня обучения, так и суммарного числа ошибок относительно контрольного уровня.
Исследование ноотропной активности пептидов EHFPGP, HFPGPH FPGP
Ранее было показано, что первичным актом деградации АКТГ4-10 и семакса при действии протеаз сыворотки крови является отщепление N-конце огометионина. Но если АКТГ4.10 довольно быстро деградирует далее, то семакс образует достаточно стабильный интермедиат - гексапептид EHFPGP, В ходе дальнейшего расщепления AKTXVio и семакса образуются пента- и тетрапептиды соответствующей структуры [Potaman et al., 1991 A; Potaman et al., 1993]. Исследования физиологических эффектов фрагментов АКТГ5_іо и AKTTV ю показали, что их активность составляет 0,5 и 0,1 активности АКТГ4.ю соответственно [De Wied, Witter, Greven, 1975], Как нами было показано в первой части работы фрагмент семакса, лишенный N-концевого метионина, -гексапептид EHFPGP обладает выраженной ноотропной активностью. В наших дальнейших исследованиях мы решили сопоставить нейротропную активность семакса и продуктов его ферментативной деградации: EHFPGP, HFPGP и FPGP.
В первой серии экспериментов мы проводили сравнение влияния фрагментов АК ІТ4.10 и АКТГ5.ю на выработку пищедобывательного рефлекса на место в Т-образном лабиринте. На рис. 40 представлена динамика изменения количества выполненных реакций (КВР) в опытных и контрольной группах. Препараты вводили в дозе 50 мкг/кг за 15 мин до сеанса обучения. Как видно на графике, в группе животных, получавших инъекцию AKTTV ю, КВР достоверно превышает контрольные значения со 2-го по 4-ый дни опыта. Введение АКТТ5.10 приводило к достоверному увеличению КВР только в 4-ый день эксперимента, причем во 2-ой день обучения КВР в этой группе животных было значимо ниже, чем в группе крыс, получавших АКТГ4_ю. Таким образом, в использованной нами экспериментальной модели нейротропкая активность АКТГ4.ю значимо выше, чем АКТГ5.10, что согласуется с литературными данными [De Wied, Witter, Greven, 1975].
В следующих экспериментах нами проводилось сравнительное исследование ноотропных эффектов семакса и продуктов его ферментативной деградации - гексапептида EHFPGP, пентапептида HFPGP и тетрапептида FPGP.
При исследовании действия пептидов на обучение животных в Т-образном лабиринте было показано, что введение семакса в данной экспериментальной серии приводило к достоверному увеличению КВР во 2-ой и снижению ЛП реакции в 1-ый день обучения (рис. 41, табл. 5). Кроме того, отмечалась тенденция к увеличению КВР в 3-ий день и суммарного КВР за весь период обучения, но это отличие не достигало уровня значимости (р 0,07). Наибольшей активностью в данном опыте обладал гексапептид EHFPGP, что согласуется с данными, представленными в первой главе нашей работы. В группе животных, получавших этот пептид, наблюдалось достоверное увеличение КВР во 2-ой и 3-ий дни обучения и суммарного КВР относительно контроля. Введение EHFPGP приводило также к снижению ЛП реакции в 1-ый день и среднего ЛП за весь период обучения по сравнению с контролем (рис. 41, табл. 5). В группе животных, получавших гексапептид, КВР во 2-ой день и суммарное КВР было достоверно выше, а ЛП и число ошибок во 2-ой день обучения значимо ниже, чем в группе крыс, которым вводили семакс. В группе животных, получавших инъекцию пентапептида HFPGP, наблюдалось значимое увеличение КВР в 3-ий день опыта относительно контроля, однако при этом количество ошибок в 1-ыЙ день и за весь период обучения превышало как контрольные значения, так и значения в группе с введением семакса (рис. 41, табл. 5). Введение тетрапептида FPGP не вызывало достоверных изменений параметров обучения животных. Следует отметить, что в данной серии экспериментов наблюдались высокие показатели обучения в группе контрольных животных по сравнению с данными, представленными на рис. 40. На фоне такого контроля эффекты семакса менее выражены, чем эффекты АКТГ4.ю в первой серии экспериментов. Однако ранее было показано, что при введении АКТГ4-10 и семакса за 15 минут до тестирования эти пептиды одинаково эффективно улучшают обучение, а при введении за 1 час до опыта эффекты семакса значительно более выражены [Ashmarin et al., 1995].
Исследование влияния пептидов на выработку рефлекса пассивного избегания показало, что семакс и гексапептид EHFPGP улучшают обучение животных в этом тесте. Латентный период перехода в темный отсек был достоверно выше в группах животных, получавших инъекцию этих пептидов, чем в контроле (рис. 42), В группе крыс, которым вводили пентапептид HFPGP, величина латентного периода была достоверно ниже, чем в контроле и группе крыс, получавших семакс, т.е. введение этого пептида затрудняло выработку условного рефлекса. В группе крыс, получавших инъекцию тетрапептида FPGP, показатель обучения животных в этом тесте достоверно не отличался от контрольных значений (рис. 42).
При исследовании влияния семакса и его аналогов на выработку рефлекса активного избегания болевого раздражителя было показано, что семакс вызывает увеличение количества выполненных реакций во 2-ой и 4-ый дни обучения, а также суммарного КВР относительно контрольных значений (рис. 43, табл. 5). Наибольшую активность в этой серии опытов проявлял гексапептид EHFPGP. В группе животных, получавших инъекции этого пептида, КВР со 2-го по 4-ый дни обучения и суммарное КВР было достоверно выше, чем в контроле. При этом КВР во 2-ой день и суммарное КВР в этой группе было значимо выше, чем в группе с введением семакса. При введении пентапептида HFPGP также наблюдалось улучшение обучения - КВР в 4-ый день обучения значимо превышало контрольные значения. Однако во 2-ой день эксперимента КВР в группе с введением HFPGP было достоверно ниже соответствующих значений в группе крыс, получавших инъекции семакса. Введение тетрапептида FPGP не приводило к достоверному изменению параметров обучения животных в этом тесте относительно контрольных значений (рис. 43, табл. 5).
Влияние аналогов фрагментов АКТГ на изменения параметров сердечного ритма крыс в ответ на повторяющиеся стрессирующие воздействия низкой интенсивности
В группе крыс с введением ERP 4-ое предъявление стимула вызывает снижение длительности КИ. После выключения стимула величина КИ у животных превышает фоновые значения, однако это отличие не достогает уровня значимости (рис. 51, табл. 18). На рис. 52 отражена динамика реакции животных на повторяющееся сильное стрессирующее воздействие. На верхнем графике отмечены средниезначения изменения КИ во время стрессирующего воздействия (24-36 сек регистрации). В этот период в контрольной группе на фоне первого стрессорного воздействия наблюдается реакция тахикардии, выраженность которой уменьшалась от 1-ого воздействия к 4-ому (значимые отличия от первого предъявления стимула зарегистрированы при всех трех последующих воздействиях). В группе с введением семакса во время стрессогенного воздействия наблюдалось учащение сердечного ритма в ответ на каждое предъявление стимула. Реакция на стимул менее выражена, чем при первом предъявлении стимула в контроле, однако сохраняется на одном уровне при всех воздействиях. У животных, получивших инъекцию ERP, динамика ответа на стрессирующий стимул сходна с контролем: постепенное снижение степени тахикардии от 1-ого воздействия к последнему (значимые отличия от 1-го предъявления зарегистрированы при 3-ей и 4-ой записи). Реакция тахикардии в группе крыс, получавших ERP, несколько более выражена, чем в контроле (рис. 52, А).
На среднем графике отмечены изменения КИ после выключения стимула (интервал записи 42-60 сек). В этот период регистрации у контрольных животных зарегистрировано значимое увеличение длительности КИ. Выраженность изменений ЧСС сохраняется при всех воздействиях. В группе животных, получавших инъекцию семакса, максимальные значения изменения КИ после выключения стимула наблюдались при 1-ом воздействии. При последующих трех предъявлениях значения КИ на этом временном интервале были достоверно ниже по сравнению с 1-ым воздействием. В группе крыс с введением ERP после выключения стимула при всех 4-х воздействиях наблюдалось увеличение длительности КИ менее выраженное, чем в контроле. Достоверных отличий от реакции на первое предъявление стимула не обнаружено (рис. 52, Б).
На нижнем графике отмечены изменения длительности КИ через 60 сек после выключения стрессирующего воздействия (интервал записи 100-120 сек). В экспериментальных группах в этот период регистрации при первом предъявлении стимула отмечено значимое увеличение длительности КИ. В ходе дальнейшего эксперимента в контроле наблюдается постепенное снижение выраженности ответа (при 3-ем и 4-ом предъявлении стимула), однако достоверных изменений относительно реакции на первый стимул отмечено не было. В группе животных с введением семакса наблюдается достоверное снижение выраженности брадикардической реакции животных на последующие предъявления стимула. У животных, получавших инъекцию ERP, при втором предъявлении стимула изменения длительности КИ не наблюдалось, однако при 3-ем и 4-ом воздействиях зарегистрировано достоверное увеличение длительности КИ.
Таким образом, при предъявлении стрессирующего воздействия в контроле наблюдается учащение сердечного ритма, достоверно ослабляющееся при многократном предъявлении стимула. После выключения воздействия отмечена реакция брадикардии, выраженность которой при последующих воздействиях незначительно снижается. При введении семакса не наблюдается угасания тахикардической реакции на стрессирующее воздействие. Наблюдаемые нами эффекты пептида согласуются с известным влиянием АКТГ-подобных пептидов на процесс привыкания, который представляет собой постепенное угащение реакции на повторяющиеся стимулы. Показано, что фрагменты АКТГ замедляют привыкание у животных и человека [Endocsi et al, 1970]. Подобные эффекты фрагментов АКТГ связывают с усилением ориентировочно-исследовательской реакции и внимания к стимулам окружающей среды [Bonus, De Wied, 1981]. В группах животных, получавших инъекцию семакса, также наблюдается значительное подавление брадикардической реакции в ответ на выключение стимула. Таким образом, как и в первой серии экспериментов введение семакса усиливает тахикардическую фазу ответа на стрессирующее воздействие и ослабляет реакцию брадикардии. В группе крыс с введением ERP в период стрессорного воздействия наблюдается более выраженная реакция тахикардии чем в контроле, однако, так же как в контрольной группе происходит ослабление этой реакции при повторяющемся стрессорном воздействии. В этой группе животных не наблюдается угашения брадикардической реакции в ответ на повторяющиеся стимулы, однако выраженность реакции сразу после выключения стимула значительно ниже, чем в контроле. В последние интервалы записи наблюдается некоторое усиление брадикардической реакции в группе с введением ERP.
В проведенных нами экспериментах введение семакса усиливало тахикардическую фазу ответа на изменения окружающей обстановки и ослабляло фазу урежения сердечных сокращений. Можно предположить, что наблюдаемые нами эффекты семакса связаны с усилением активной реакции животного на изменение окружающей среды. Одним из механизмов действия АКТГ-подобных пептидов на выработку условных рефлексов является усиление внимания, влияние на восприятие стимулов внешней среды, повышение уровня arousal. Такое увеличение реакции животных на стимулы внешней среды облегчает выделение биологически значимых сигналов, что приводит к ускорению выработки целенаправленного поведения.
Введение антагониста поведенческих эффектов семакса трипептида ERP приводит к усилению брадикардической фазы ответа на изменение освещенности, что может соответствовать поведенческой реакции затаивания. Наблюдаемые нами эффекты, возможно, связаны со снижением активной реакции животных на внешние стимулы. Именно снижением реакции животных на стимулы внешней среды и объясняются отрицательное влияние ERP на процесс обучения. При исследовании реакции животных на стрессогенные стимулы высокой интенсивности эффекты ERP не однозначны, однако можно отметить незначительное усиление брадикардической реакции на последней минуте регистрации.
