Введение к работе
1.1. Актуальность темы. Одним из основных условий для проведения
фундаментальных и прикладных исследований в области экспериментальной
морфологии, биологии развития, биотехнологии молочной железы животных
является знание особенностей ее строения и развития. Молочная железа
представляет собой уникальную модель для изучения роста и
дифференцировки клеток в динамике, так как ее становление близко к
процессам, протекающим при органогенезе эмбрионов животных.
С точки зрения биоинженерии, научный интерес к маммогенезу кроликов обусловлен тем, что на сегодня это практически единственный вид сельскохозяйственных животных, на котором многочисленные попытки клонирования с использованием соматических клеток оказываются неудачными. Вполне вероятно, что именно клетки молочной железы найдут применение в качестве доноров кариопласта.
Актуальной в настоящее время является проблема получения так называемых соматических трансгенных животных. Так как молочная железа обладает огромным потенциалом синтеза протеинов, а секрет железы, содержащий белки, может быть легко извлечен традиционными технологиями, перспективным является ее использование в качестве продуцирующего органа рекомбинантных белков. Широкое распространение в работах по локальной трансформации молочной железы получили ретровирусные векторные системы [Эрнст. Л.К. и др., 2003]. Одной из особенностей ретровирусов является возможность их репликации и интеграции лишь в интенсивно делящиеся клетки. Поэтому с целью достижения оптимальных результатов необходимо четко представлять динамику развития исследуемого органа.
Если маммогенез мышей и большинства сельскохозяйственных животных охарактеризован достаточно полно, то о развитии молочной железы кроликов в литературных источниках имеется лишь незначительная информация.
1.2. Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы являлось
изучение гистологических и цитологических особенностей развития молочной
железы кроликов как объекта для генно-инженерных манипуляций.
Для достижения цели были поставлены и решены следующие задачи:
РОС НАЦИОНАЛЬНА! БИБЛИОТЕКА
!. пя?и#
^--11 ' чаи1
получить гистологические препараты молочной железы кроликов на разных физиологических стадиях (до полового созревания, во время беременности, лактации, в послеотьемный период);
определить сроки активной пролиферации маммоцитов;
выделить и охарактеризовать первичную культуру клеток молочной железы кроликов на разных физиологических стадиях;
определить эффективность трансформации клеток молочной железы крольчих ретровирусными генными конструкциями in vitro;
изучить возможность трансформации секреторного эпителия молочной железы крольчих ретровирусными конструкциями in vivo.
13. Научная новизна работы. В ходе выполнения диссертационной
работы впервые детально изучено развитие молочной железы крольчих в динамике. Изучен морфологический состав клеток молочной железы in vitro. Впервые дана количественная оценка наличия в популяции клеток молочной железы крольчих, культивируемых in vitro, клеток, обладающих свойствами стволовых- Исследована эффективность трансформации маммоцитов кролика in vitro и in vivo с использованием ретровирусной конструкции pLN-a. Показана возможность переноса чужеродных генов в клетки, молочной железы посредством рекомбинантных аденовирусов.
1.4. Практическая значимость. Установлены сроки наибольшей
пролиферативной активности клеток молочной железы крольчих. Показано
наличие в молочной железе крольчих популяции стволово-подобных клеток.
1.5. Основные положения, выносимые на защиту:
Пролиферативная активность клеток молочной железы зависит от физиологического состояния крольчих.
В молочной железе крольчих присутствует популяция клеток с характерными признаками стволовых элементов.
Малодифференцированные клетки сохраняются в первично-перевиваемой культуре маммоцитов.
С помощью ретровирусной векторной системы pLN-a возможна трансформация клеток молочной железы кролика in vitro.
1.6. Апробация работы. Материалы диссертационной работы были
доложены и обсуждены на конференции аспирантов и молодых ученых, ВИЖ,
п. Дубровицы, 2003 год; на научно-практической конференции «Повышение
5 конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения», п. Быково, 2003; на научном отчете отдела биотехнологии, ВИЖ, п. Дубровины, 2003; на конференции отдела биотехнологии, ВИЖ, п. Дубровицы, 2004 год.
1.7. Публикация результатов исследований. По материалам
диссертации опубликовано 5 работ.
1.8. Структура и объем работы. Диссертация написана на 114
страницах, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы,
материалы и методы, результаты исследований, обсуждение, выводы,
практические предложения, список литературы, который включает 187
источников, в том числе 80 на иностранных языках. Работа содержит 6 таблиц
и 32 рисунка.
