Введение к работе
Актуальность работы.
В настоящее время предложены различные технолоши замораживания спермы. Они имеют весьма существенные различия в составе консервирующих сред, технологических приемах подготовки объекта к замораживанию, техники замораживания и оттаивания. Замораживание спермы дает ощутимые экономические выгоды, существенно снижает транспортные расходы при перевозке криоконсервированного материала.
Развитие метода сохранения семени сельскохозяйственных животных открытого В.К. Миловановым, И.И. Соколовской и И.В. Смирновым (1972 г. с приоритетом 1947 г.) связано главным образом с поиском более эффективных биологически активных веществ и защитных сред для сохранения томеостаза и развития адаптивных процессов спермиев вне организма. В связи с этим в течение нескольких десятков лет проводились исследования над изучением структурно-функциональных изменений спермиев при замораживании-оттаивании, разработки защитных веществ и способов повышения резистентности спермиев при криоконсервации (О. Смит, 1963; А.Н. Успенский, 1965-1982; Н.П. Шергин, 1967; И.Ш. Шапиев, 1974; И.В. Смирнов, 1974; В.К. Милованов, и др., 1972-1985; Ф.И. Осташко, 1978; Е.М. Платов, 1978; Н.З. Жильцов, B.C. Голубь, 1984; В.Е. Недова, и др., 1990; А.С. Ерохин, и др., 1991; А.Г. Нарижный, и др., 2002; С.С. ГТаньшин, 2003; В.А. Наук, и др., 1983-2004; E.F. Grahatn, et all, 1971; Flesch, Gadclla, 2000). Поддержание гомеостаза спермиев вне организма реализуется путем применения различных синтетических сред, которые безвредны для спермиев, предохраняют их от холодового удара, имеют достаточную буферную емкость, определенную изотоничность и рН, обладают бактерицидными свойствами. Основными компонентами синтетических сред являются: неэлектролиты, электролиты, буферные соединения, антиоксиданты, протекторы липидной природы и антибактериальные вещества. В скотоводстве проблему криоконсервирования спермы можно считать вполне решенной, однако, технология замораживания непрерывно совершенствуется, определяя для исследователей новые вопросы и задачи.
Важным элементом технологии является криозащитная среда для разбавления, замораживания и оттаивания спермы. В последнее время возникла необходимость заняться усовершенствованием синтетических сред для замораживания семени быка с использованием новых веществ, которые бы обеспечили большую биологическую полноценность оттаянных сперматозоидов, и тем самым повышали оплодотворяющую способность заморожено-оттаянной спермы животных.
В настоящее время в различных областях медицины, в том числе гинекологической практике успешно применяется биологически активный препарат «Милайф» (И. В. Кучерова, 1997; В. И. Дилш ^a^qh]^aiM\ г-Макаркина и др., 2001; В. Б. Рудакова и др., 2001; Н. И. $^дед^«1(#Яш|- В составе этого препарата содержится сложный б|яохимі{ЯН^^»комшккс
\ 09 Ш^ШХ
ингредиентов, включающий: низкомолекулярные олигопептидные соединения, щелочные олигопешиды, 18 аминокислот, (в т.ч. незаменимые триптофан, лизин, метионин). Содержание аспарагиновой и глутаминовой аминокислої приближается к их содержанию в животных белках. Компонентами «Милайфа» являются ненасыщенные жирные кислоты, 50% из которых приходится на долю линоленовой кислоты; углеводы представлены гликанами, органическими кислотами (в т.ч. яблочной, лимонной, янтарной); в состав препарата входят также витамины группы В (В1, В2, В4, В6, В12), фолиевая, никотиновая, нантотеновая кислоты и убихиноны Q6, Q9, Q10. Минеральный состав представлен 22 жизненно важными микро- и макроэлементами. Учитывая данный состав препарата «Милайф» способный согласно теоретическим предпосылкам обеспечить сохранение структуры, функции и биоэнергетику сперматозоидов мы сочли целесообразным проведение исследований по его влиянию на биологические свойства спермиев.
Цель и задачи исследований.
Целью данной работы является изучение влияния препарата «Милайф» на физиологические свойства и жирнокислотный состав спермы быков. Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
Определение оптимальной концентрации биологически активного препарата, обеспечивающей физиологическую защиту при глубоком замораживании спермы быков.
Изучение жирнокислотного состава спермы быков в условиях глубокого замораживания.
Определение оплодотворяющей способности спермы с включением в разбавитель биологически активного препарата «Милайф».
Научная новизна исследований.
Разработан разбавитель для глубокого замораживания спермы быков на основе биологически активного препарата «Милайф» и установлена в биологически активном состоянии высокая оплодотворяющая способность спермы.
Определена оптимально-эффективная концентрация препарата «Милайф» для сохранения жизнеспособности сперматозоидов.
Впервые изучен и выявлен специфический состав высших жирных кислот общих липидов сперматозоидов в условиях глубокого замораживания и последующего оттаивания при подготовке к искусственному осеменению в специфической среде с использованием в составе разбавителя препарата «Милайф».
Практическая ценность работы.
Предложен разбавитель, позволяющий повышать качественные показатели сохранности оплодотворяющей способности спермы быков. Применение препарата «Мшщйф» позволяет исключить желток куриного яйца из наиболее
f W - ~
* f
А... - -„ ' - -
часто рекомендуемого в практике компонента синтешческой среды для длительного хранения спермы быков.
Дана оценка важнейших структурных компонентов спермы быков -высших жирных кислот общих липидов. Специфический состав кислот, включающий высокие уровни относительного содержания насыщенных кислот, в частности 5,8,11 - эйкозатриеновую кислоту и минорных полйеновых кислот, при одновременном уменьшении объема незаменимой 5,8,11,14-эйкозатетраеновой (арахидоновой) кислоты, позволяет рекомендовать его в качестве теста, характеризующего жизнеспособность спермы.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Оценка физиологических свойств спермы быков в условиях применения
биологически активного препарата «Милайф»;
2. Жирнокислотный состав общих липидов спермы быков в экспериментах,
включающих хранение и подготовку ее к практическому применению с
использованием биологически активного препарата «Милайф».
Апробация работы.
Материалы проведенных исследований были доложены, обсуждены на: научно-практических конференциях НГСХА (2001-2003 г); на международной научно-практической конференции «Роль и значение метода искусственного осеменения сельскохозяйственных животных в прогрессе животноводства XX и XXI веков» (ВИЖ, Дубровицы, 2004 г); на международной научно-практической конференции «Вклад молодых ученых в развитии аграрной науки XXI века» (Рязань, 2004 г); на заседаниях кафедры акушерства и зоогигиены сельскохозяйственных животных Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии (2002-2005 і).
Публикации материалов исследований.
По материалам диссертационной работы опубликовано 5 статей, в которых отражены основные результаты исследований.
Структура и объем работы.
Диссертация изложепа па 131 странице компьютерного текста и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, изложения полученных результатов и их обсуждения, выводов, практических предложений и списка цитируемой литературы. Работа содержит 15 таблиц, 13 рисунков. Список используемой литературы включает 266 источников, в том числе 120 иностранных.
