Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Механизмы резистентности полости рта в норме и патологии (обзор литературы)
1.1. Полость рта как локальная экологическая система 12
1.2. Белки теплового шока (БТШ, HSP) в резистентности организма 18
1.3. Роль гомоцистеина в патологии 22
1.4. Эффект отдачи моноцитами тканевого фактора 28
1.5. Роль функциональной активности нейтрофилов в местной резистентности полости рта 31
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования
2.1. Клиническая характеристика обследованных лиц 34
2.2. Материал и лабораторные методы исследования 37
2.3. Статистическая обработка результатов 43
ГЛАВА 3. Состояние резистентности полости рта у здоровых и пациентов с острым гнойным периоститом (собственные данные)
3.1. Уровень цитокинов и аутоантител к ним у доноров и больных острым гнойным периоститом челюстей 44
3.2. Изменения уровня цитокинов и аутоантител к ним в исследуемых субстратах до и после терапии острого гнойного периостита челюстей 48
3.3. Содержание иммуноглобулинов в исследуемых субстратах 51
3.4. Содержание эндотелина и аутоантитела к нему в исследуемых субстратах 52
3.5. Содержание белка теплового шока-70, антител и аутоантител к нему при остром гнойном периостите челюстей 54
3.6. Содержание гомоцистеина в сыворотке крови, ротовой и десневои жидкостях и аутоантител к S-аденозилгомоцистеину при остром гнойном периостите челюстей 59
3.7. Секреция тканевого фактора из моноцитов при одонтогенной инфекции 62
3.8. Активность нейтрофилов, инкубированных с ротовой и десневои жидкостями при остром гнойном периостите челюстей
ГЛАВА 4. Заключение 72
Выводы 86
Литература 88
- Белки теплового шока (БТШ, HSP) в резистентности организма
- Роль функциональной активности нейтрофилов в местной резистентности полости рта
- Изменения уровня цитокинов и аутоантител к ним в исследуемых субстратах до и после терапии острого гнойного периостита челюстей
- Содержание белка теплового шока-70, антител и аутоантител к нему при остром гнойном периостите челюстей
Введение к работе
Актуальность проблемы. Значительное число пациентов лечебных учреждений стоматологического профиля занимают больные с одонтогенными заболеваниями челюстно-лицевой области (Тер-Асатуров Г.П., 2005; Робустова Т.Г., 2007; Долгушин И.И., 2009; Кабанова С.А., 2009). Более того, в последние десятилетия, несмотря на увеличение объема и качества стоматологической помощи, число больных с воспалительными заболеваниями не уменьшается, а остается на неизменно высоком уровне ( Цеймах Е.А. и др., 2004; Ямуркова Н.Ф., 2007; Коротких Н.Г., 2008; 2009). Тенденция к увеличению таких пациентов стала наблюдаться еще в 60-70-х годах и, несмотря на принимаемые меры, остановить этот процесс не удается ( Левенец А.А., 2006; Робустова Т.Г., 2006).
Уникальность одонтогенного воспаления обусловлена, по крайней мере, взаимодействием двух защитных механизмов: местного (собственно в полости рта) и системного (всего организма), которые с одной стороны являются самостоятельными, а с другой представляют систему антимикробной защиты в целом. Интенсивность течения патогенеза одонтогенного воспаления зависит от слаженного взаимодействия всех факторов иммунитета.
В последние годы накопилось достаточно много информации о роли про- и противовоспалительных цитокинов в механизмах формирования воспалительных реакций (Мустафаев М.Ш. и др., 2007, Сидякова Е.В. и др., 2008; Момот А.П., 2009). Однако, в большинстве работ, как правило, исследуются либо смешанная слюна, либо сыворотка крови, и лишь в единичных работах отображается цитокиновый профиль зубодесневой жидкости (ДЖ) (Петрова Т.Г. и др., 2007). При наличии такой информации чрезвычайно сложно интерпретировать результаты разрозненных исследований. До настоящего времени остаются неизвестными отдельные звенья патогенеза, связанные с возможностью формирования иммунных комплексов прямо в полости рта, роли белков теплового шока (БТШ), гомоцистеина, S-аденозилгомоцистеина в патогенезе одонтогенных воспалительных заболеваний. Практически не изучен эффект отдачи тканевого фактора моноцитами, инкубированных с ротовой (РЖ) и десневой жидкостями в норме и патологии.
Безусловно, решение поставленных вопросов позволило бы расшифровать новые звенья патогенеза одонтогенных воспалительных заболеваний, и увеличить возможность диагностики и прогноза, а, следовательно, профилактики и лечения.
Цель настоящего исследования: установить роль иммунных и аутоиммунных механизмов в развитии острого гнойного периостита челюстей.
В ходе работы нами решались следующие задачи:
-
Определить уровень цитокинов и аутоантител к ним у доноров и пациентов до и после лечения острого гнойного периостита челюстей в сыворотке крови, ротовой и десневой жидкостях.
-
Исследовать уровень эндотелина-1, белка теплового шока 70, гомоцистеина и аутоантител к ним в сыворотке крови, смешанной слюне и десневой жидкости у здоровых лиц, а также у больных с острым гнойным периоститом челюстей до и после лечения.
-
Изучить эффект отдачи тканевого фактора моноцитами, инкубированными с различными субстратами (ротовой и десневой жидкостями, гомоцистеином, иммунными комплексами) в динамике воспалительного процесса.
Научная новизна. Установлено, что в РЖ и ДЖ доноров и больных с острым гнойным периоститом челюстей регистрируются про- и противовоспалительные цитокины, уровень которых регулируется преимущественно аутоантителами класса sIgA.
Впервые показано, что при развитии острого гнойного периостита челюстей в РЖ и ДЖ возрастает абсолютное содержание БТШ-70, а также уровень антител к нему, особенно класса sIgA.
Доказано, что при остром гнойном периостите челюстей увеличивается содержание гомоцистеина в ротовой и десневой жидкостях, а также возрастает содержание антител класса sIgA к коньюгату S-аденозилгомоцистеин-альбумин с последующим образованием иммунных комплексов в смешанной слюне.
Установлено, что инкубация интактных моноцитов с РЖ и ДЖ как здоровых, так и, особенно, пациентов сопровождается эффектом отдачи тканевого фактора. Последняя реакция дозозависимая, выявляется при инкубации с гомоцистеином, S-аденозилгомоцистеин-альбумином и иммунными комплексами S-аденозилгомоцистеин-альбумин+ sIgA.
Теоретическая и практическая значимость. Полученные факты раскрывают новые звенья патогенеза течения острого гнойного периостита челюстей, реализуемые про- и антивоспалительными цитокинами, эндотелином-1, БТШ-70, S-аденозилгомоцистеином, а также антителами к ним в сыворотке крови, РЖ и ДЖ. Результаты исследований могут быть полезными при расшифровке механизмов воспалительных процессов, связанных с эффектом отдачи тканевого фактора моноцитами при течении воспалительных процессов полости рта.
Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедр патологической физиологии и хирургической стоматологии и ЧЛХ Читинской государственной медицинской академии.
Апробация диссертации. Основные результаты исследования неоднократно докладывались на научно-практических конференциях кафедры патофизиологии ГОУ ВПО ЧГМА. Апробация работы была проведена на совместном заседании кафедр патофизиологии, хирургической стоматологии и ЧЛХ, отоларингологии, госпитальной педиатрии, терапии факультета постдипломного образования ЧГМА (Чита, 2010).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 работ, в т.ч. 1 статья – в издании, определенном ВАК Министерства образования и науки РФ для публикации результатов диссертационных исследований.
Структура и объём и работы. Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций; иллюстрирована 21 таблицей, 1 рисунком. Указатель литературы включает 168 работы, из которых 88 отечественных и 80 зарубежных.
Положения, выносимые на защиту
-
У здоровых лиц максимальное количество цитокинов регистрируется в смешанной слюне по сравнению с сывороткой крови и десневой жидкостью. При развитии острого гнойного периостита челюстей в смешанной слюне возрастает уровень ИЛ-6, ИЛ-8 и уменьшается содержание ИЛ-1. Параллельно увеличивается концентрация цитокинов в десневой жидкости, а также закономерно меняется уровень аутоантител классов IgG и sIgA у больных в динамике течения воспалительного процесса.
-
При развитии острого гнойного периостита челюстей во всех исследуемых субстратах возрастает концентрация БТШ-70 и уровень аутоантител к нему различных классов.
-
Развитие острого гнойного периостита челюстей сопровождается повышением концентрации гомоцистеина в сыворотке крови, смешанной слюне и десневой жидкости и появлением аутоантител класса IgG и sIgA к коньюгату S-аденозилгомоцистеина.
-
Ротовая и десневая жидкости доноров и, особенно, пациентов с острым гнойным периоститом челюстей, способны усиливать эффект отдачи тканевого фактора моноцитами.
Белки теплового шока (БТШ, HSP) в резистентности организма
Открытие белков теплового шока связывают с исследованиями F. Ritossa в 1962 году [152], впервые обнаружившего пуф на слюнных железах дрозофилы, перенесшей тепловой шок. Но лишь в 1974 году A. Tissieres et al. [165] связали образование обнаруженных пуфов с усилением экспрессии генов, кодирующих образование белков, получивших наименование:белков теплового шока или HSP (от слов Heat shock proteins).
В настоящее время не подлежит сомнению, что превалирующее большинство заболеваний начинается с местного поражения клеток.и тканей, в том- числе и в полости рта, и- нередко сопровождается повышением температуры, что приводит к появлению HSP. Но-синтез HSP1 отмечается не-только при воздействии высоких температур, но и под влиянием токсических продуктов, аноксии, гипоксии-, ишемии; хемотерапевтических агентов, канцерогенов и даже при дифференцировке и развитии клеток и тканей. Интенсивный синтез HSP проявляется, при инфекционных заболеваниях, воспалении, лихорадке, ультрафиолетовом облучении, воздействии электромагнитных полей, солей тяжелых металлов, алкалозе и ацидозе, действии липополисахарида; атаке, цитокинами, токсинами животного и растительного происхождения. Вот почему эти протеины носят второе название — стресс-белки. Локализуются HSP не. только чвнутриклеточно, но и непосредственно на мембране клетки [35, 49, 53, 102, 132].
HSP принадлежит далеко не последняя роль в. деятельности иммунной системы. При действии патогенных возбудителей из микроорганизмов или зон аутологичного воспаления слизистой полости рта высвобождаемые HSP могут узнаваться поверхностными рецепторами иммунной системы - TLR-2, TLR-4, CD14, CD91, CD94, LOX-1 и др. При этом происходит передача информации о наличии в организме патологического процесса и вовлечение иммунной системы в защитную реакцию [48].
Согласно общепринятой классификации, все HSP распределяются на 6 семейств в соответствии с их молекулярной массой, выраженной в килодальтонах. При этом белки теплового шока, имеющие ММ до 40 кД, объединяются в так называемые малые HSP (small HSP- sHSP). Остальные представлены семействами HSP70, HSP80, HSP90, HSP100, HSP110 кД и выше. Представители каждого из семейств выполняют строго возложенные на них функции. Но особое внимание из-за более высокой насыщенности тканей стрессированного организма привлекают HSP с молекулярной массой 70 кД. Эти белки в настоящее время наиболее хорошо изучены и установлена их роль в деятельности органов и тканей. Оказалось, что HSP70 является, ведущим белком, выполняющим функцию молекулярных шаперонов и участвующим в утилизации необратимо поврежденных белков или фолдинге.
Одной из важнейших функций HSP70 и HSP90 является участие в регуляции синтеза NO; что способствует вазодилатации сосудов полости рта, антиагрегационному эффекту и повышению, фибринолитической активности крови, что сопровождается улучшением микроциркуляции и повышением местной резистентности.
Установлено, что при стрессорных воздействиях (введение бактериального ЛПС, форбол-12-миристат-13-ацетата, влияние на тимоциты физиологических медиаторов стресса — катехоламинов) вначале наблюдается в различных клетках снижение HSP70. Действие на лимфоидные клетки линии EL-4 сильного окислительного стресса- (внесение Н2О2)охарактеризуется вначале существенным снижением HSP70 с последующим этапом быстрого роста, а затем медленным снижением его цитоплазматического пула. Авторы высказывают мнение, что такая реакция носит универсальный характер. Обусловлена, она тем, что вначале происходит выброс части цитоплазматического пула указанного белка в окружающую среду. Будучи долгоживущим протеином, HSP70 не может быть быстро элиминирован и оказывает антигенный стимул [1].
Следует заметить, что с возрастом у людей в моноцитах и лимфоцитах увеличивается содержание HSP70. Но особенно резко концентрация этого белка в моноцитах и лимфоцитах возрастает при острых: одонтогенных заболеваниях, когда развивается гиперкоагуляция и нередко тормозится фибринолиз. При тепловом шоке содержание-HSP70-вІ моноцитах-значительно повышается;- а в лимфоцитах снижается., У людей; с инфекционными заболеваниями выявляютсяшрямые-корреляционныегсвязшмеждусодержанием; С-реактивного белкадаШ-б вплазмеиHSP32 в;клеткахкрови [й 17]:
Показано, что у. больных с осложненным? аппендицитом; острым абсцессом лёгкого и обострением; хронического остеомиелита в; плазме и сыворотке значительно-возрастает содержание аутоантителк,Н8Р70; Так, если в норме в сыворотке, содержание антител к HSP70 соответствует всего5 лишь. 32,2±1,2нг/мл, то при осложнённом; аппендиците оно:»возрастает до-540;3±30j2 нг/мл в сыворотке и 860,3±50;3 нг/мл- в плазме.1: Прй : абсцессе лёгкого концентрация» антител в сыворотке: достигает 330;2ї20;1? нг/мл, а1 ВЇ плазме -640;2±50,3 нг/мл. При обострении .хронического остеомиелита; эти; цифры соответствуют 450;5±24,7нг/мл в; сыворотке и 720,3+47,6? нг/мл. в плазме. Следует обратить внимание на то, что уровень аутоантител в плазме оказался в Г,5: - 2 раза выше, чем в; сыворотке. Безусловно, это явление отчасти может быть объяснено тем, что в процессе образования, фибринового сгустка лейкоцитами- и тромбоцитами могут дополнительно экспрессироваться? белки теплового шока, которые способны связать находящиеся в сыворотке аутоантитела. Из сказанного вытекает, что определение антител к HSP следует всегда проводить в плазме, а не в сыворотке [26, 29, 81].
Нет никакого сомнения, что при гнойной хирургической инфекции, в том числе одонтогенной, наступает коагулирование цитоплазматических белков, что является мощнейшим стимулом активации генома HSP, сопровождающегося резким увеличением продукции белков теплового шока ядерными клетками хозяина. В особо тяжёлых случаях протекания патологического процесса синтез собственных белков клетками практически прекращается, а уровень шаперонов резко возрастает и достигает 15-20% всех белков цитоплазмы [132].
Однако, только этими фактами объяснить столь значительные сдвиги в содержании аутоантител к HSP70 невозможно.1 При-кналичии гнойного воспаления теряется так называемая «оральная толерантность» и микробы-сапрофиты включают новое звено патогенеза деструктивного воспаления и хронизации процесса. Известно, что под влиянием факторов естественной резистентности (действие антител, сенсибилизированных лимфоцитов, активированных нейтрофилов, стимуляции системы комплемента бактерицидной активности сыворотки, лизоцима и др.), а также под действием антибиотиков сапрофитная микрофлора входит в состояние стресса и гиперпродуцирует белки теплового шока. Последние экспрессируются на поверхности как самих микроорганизмов, так и клетою хозяина, включённых в патологический процесс. Обладая выраженной антигенностью, белки теплового шока микроорганизмов и клеток хозяина индуцируют образование антител, а также сенсибилизируют лимфоциты, и тем самым замыкают порочный круг, усиливающий и пролонгирующий воспалительный процесс [27, 81].
Роль функциональной активности нейтрофилов в местной резистентности полости рта
Известно, что острый воспалительный процесс протекает с резкими изменениями микроциркуляции, сопровождающимися как вазодилатациеи, так и вазоконстрикцией. Не исключено, что в последней реакции важная роль принадлежит эндотелину-1. Однако, до сих пор имеются лишь единичные сообщения по изучению его уровня только в сыворотке крови при одонтогенных инфекциях челюстно-лицевой области [18]. Нам представлялось интересным оценить содержание эндотелина-1 как в сыворотке крови, так и в ротовой и десневой жидкостях у здоровых и больных острым гнойным периоститом. Полученные данные представлены в таблице 8. Оказалось, что у доноров максимальное содержание эндотелина-1 регистрировалось в сыворотке крови, на порядок ниже — в ротовой жидкости, и минимальный уровень этого пептида зарегистрирован в зубодесневой жидкости. Вместе с тем, при развитии одонтогенной инфекции содержание эндотелина-1 в сыворотке крови снижалось (р 0,001), в ротовой жидкости -возрастало (р 0,001) и практически не изменялось в жидкости зубодесневой бороздки. Аутоантитела класса IgG к этому, цитокину у,здоровых.в РЖ и ДЖ значительно ниже, чем в сыворотке крови (р 0,001). Аналогичная закономерность сохранялась и при развитии острым гнойным периоститом.
Нами показано, что после оперативного лечения и последующих лечебных мероприятий уровень эндотелина-1 в десневой жидкости возрастал (р=0,05), что, вероятно, является причиной и свидетельством ликвидации воспалительной гиперемии (таблица 9). Следует сказать, что при этом уровень аутоантител к эндотелину-1 во всех исследуемых субстратах не изменялся.
Таким образом, содержание эндотелина-1 является максимальным в сыворотке по сравнению с ротовой и зубодесневой жидкостями, а при развитии воспалительного процесса снижался в крови, но возрастает в смешанной слюне. Уровень аутоантител к эндотелину-1 в слюне и жидкости зубодесневой бороздки у здоровых всегда ниже, чем в сыворотке крови, а при развитии одонтогенной инфекции уровень аутоантител снижался во всех исследуемых субстратах.
Известно, что в клетках, вовлеченных в воспалительный; процесс, происходит обязательное накопление белков теплового шока, реализующих фолдинг и тем самым повышающих резистентность клеток. В; подавляющем. большинстве случаев БТШ экспрессируются на мембране клеток и. способны переходить, в жидкие среды» организма. Исходя из; сказанного, представлялось интересным оценить уровень.антител к; белкам теплового;шока в исследуемых» субстратах;при остром гнойном периостите челюстей.
Как: следует из г таблицы 10 антитела; закономерно) регистрировались в сыворотке крови у здоровьгхслиці.Причем максимальнышуровень Ат; к БТШ1? -определялся- в; ротовош жидкости; в несколько меньшей» СТЄПЄНИЇ — в жидкостш десневошбороздкиішв минимальномжоличестве;— в сыворотке крови. Высокий; уровень антител к-, БТШт7(Н в; смешанной слюне наЕ наш взгляду, вероятно;, отражает высокую; «стрессированность» как фагоцитов;; так-: ш микробов; полости рта. Вместе: с тем; у больных происходит значительное; увеличение уровня антител к белкам теплового шока как.в сыворотке крови; такшюсобенно резко;, в? ротовош и десневой: жидкостях: Несомненно эта закономерность указывает на увеличение количества! .ПИОГЄННЬІХІ-.микробові. щ-усиление фагоцитарных реакций; что проявляется5 избыточной продукцией стресс-белков.
К нашему удивлению через 7 дней после лечения острого гнойного периостита челюстей уровень антител к БТШ становился еще выше во всех исследуемых субстратах, несмотря на исчезновение симптомов заболевания. Вероятно, клетки, принимающие участие в эфферентной фазе воспаления и интенсивно регенерирующие, продолжают генерировать БТШ. В отдельных исследованиях определяли аутоантитела класса slgA, входящих в общий пул антител, направленных против БТШ-70;Детали этих исследований описаны в главе «Материалы и методы исследования». Необходимость этого фрагмента исследований обусловлена тем, что белки теплового шока являются антигенными белками, и появление аутоантител к ним ожидаемо. Максимальный интерес представляют аАт класса slgA, так как они образуются местно в слизистой и подслизистой, ротовой полости. Полученные данные представлены в таблице 11.
Оказалось, что у здоровых лиц аАт к БТШ-70 обнаруживались как в сыворотке крови, так и в ротовой и десневой жидкостях. Максимальный уровень slgA зарегистрирован в РЖ. При развитии воспалительного процесса концентрация аутоантител возрастала и, несмотря на проводимые лечебные мероприятия, не снижалась до исходных цифр. Последнее свидетельствует о продолжающемся процессе местной иммунизации в пролиферативную фазу воспаления. Следует указать, что среди всего пула антител к- БТШ-70 аутоантителаKnaccasIgA составили от60 до 70%. В последней серии экспериментов этого раздела мы определяли концентрациюБТШв сыворотке крови ротовойидесневбйіжидкостях; Оказалось, что в сыворотке здоровых людей, а также больных после лечения БТШ-70 не обнаруживался (таблица=12).
Изменения уровня цитокинов и аутоантител к ним в исследуемых субстратах до и после терапии острого гнойного периостита челюстей
Оказалось, что во всех исследуемых . субстратах- закономерно образовывались аутоантитела класса IgG к эндотелину-1. Однако, их уровень в ротовой жидкости здоровых людей был ниже, чем в сыворотке крови, чтоь соответствует низкой концентрации антигена в смешанной слюне. Вместе с тем, в десневой жидкости уровень аАт в 2 раза превосходил их содержание в ротовой, несмотря на низкое содержание антигена в зубодесневой бороздке. Такое несоответствие объяснимо с позиций транссудации аутоантител из плазмы в жидкость десневой бороздки. При развитии острого гнойного периостита в ротовой жидкости уровень аутоантител повышался, что, на наш взгляд, является отражением стимулирующего эффекта возросших концентраций эндотелина-1. Легкое снижение уровня аутоантител в десневой жидкости, опять же, пропорционально снижению концентрации эндотелина-1 в зубодесневой бороздке.
Таким образом, описанная нами динамика уровня аутоантител к различным антигенам при воспалении и остром1 гнойном-периостите челюстей в частности, может свидетельствовать о достаточно сложных взаимоотношениях аутоантител и аутоантигенов в различных средах организма, а также являться диагностическим и прогностическим критерием течения патологических процессов. Открытие белков-шаперонов в 1962 году F. Ritossa [49] привело к совершенно новым представлениям формирования механизмов резистентности клеток при различных стрессовых воздействиях. Так, было показано, что синтез БТШ в клетках нарастает при термотравме, токсическом, физическом, вирусном и других видах повреждения. Основная функция белков теплового шока — фолдинг - реконструкция поврежденного белка. В своей сути фолдинг — физико-химический процесс, направленный с одной стороны на «раскручивание» полипептидных цепей поврежденного белка, а с другой — контроль за правильной сборкой третичной и четвертичной структуры белковой молекулы [26, 27, 35, 49]. Нами было показано, что антитела к БТШ-70 достаточно закономерно выявляются во всех исследуемых субстратах. У доноров максимальное содержание этих соединений оказалось в ротовой жидкости, несколько ниже - в десневой и минимальным - в сыворотке крови. Достаточно высокие концентрации БТШ-70 в смешанной слюне и десневой жидкости вполне объяснимы. Это обстоятельство является отражением взаимодействия микрофлоры полости рта с факторами местной резистентности. Следует полагать, что все виды микроорганизмов в ротовой.полости постоянно атакуются бактериоцидными факторами (лизоцим, ферменты, система комплемента, антитела, фагоцитоз и т.д.). В ответ на стрессовое воздействие микроорганизмы синтезируют, экспрессируют и секретируют белки теплового шока в жидкости ротовой полости [163].
Наряду со сказанным, требует пояснения методологическая корректность определения различных БТШ (микробного и клеточного происхождения) антителами, направленными против белков теплового шока человека. Этот вопрос неоднократно обсуждался в литературе и решается положительно с учетом высокой стабильности геномов всех семейств..БТШ [26, 168]. При развитии острого гнойного периостита челюстей уровень антител к БТШ-70 во всех исследуемых субстратах повышался и этот сдвиг является ожидаемым. С одной стороны, при развитии воспаления увеличивается количество патогенных микроорганизмов, а с другой — возрастает количество факторов резистентности. Поэтому, как со стороны микро-, так и макроорганизма возрастает количество стрессированных клеток, а, следовательно, и уровень белков теплового шока. Вместе с тем, после удаления «причинного» зуба и проведения комплекса лечебных воздействий уровень антител к БТШ возрастал в еще большей степени. Как объяснить этот факт? На наш взгляд, развитие эффективных саногенетических реакций, рекрутация новых групп фагоцитов, привлечение фибробластов, развитие реакций адаптивного иммунитета сопровождаются более эффективным киллингом її "микроорганизмов, а, следовательно, гиперпродукцией БТШ. Предполагается логичным заключить, что белки теплового шока, с одной стороны, безусловно, являются маркером повреждения клеток как макроорганизма, так и микробов, а с другой — свидетельствуют о реальном резистивном потенциале организма. Поэтому не случайно- рассматривается вопрос о локальном использовании БТШ при патологических процессах как одного из факторов резистентности [1, 3, 37].
Уровень аутоантител класса slgA к БТШ-70 постоянно регистрировался во всех исследуемых субстратах. Следует сразу указать, что к белкам теплового шока различных семейств ожидаема продукция і :аАт всехпклассов, так как шапероны в силу филогенетической древности являются чрезвычайно аутоантигенными для человека. У здоровых лиц в ротовой жидкости содержание аутоантител оказалось максимальным, несколько ниже - в десневой и минимальным - в сыворотке крови. При развитии острого гнойного периостита челюстей концентрация аАт в ротовой и десневой жидкостях увеличивалась более, чем в 2 раза, что, в принципе, не должно вызывать удивления, так- как усиливалось формирование местных иммунных реакций. Однако, после лечения уровень аутоантител возрастал в еще большей степени, что свидетельствует об усилении аутоиммунных реакций, направленных на элиминацию высокого уровня БТШ-70.
Наконец, в специальной серии экспериментов мы определяли абсолютное содержание БТШ-70 при остром гнойном периостите челюстей. Следует сразу указать, что этот белок не выявлялся в сыворотке крови здоровых и больных после лечения абсцесса, однако всегда регистрировался в ротовой и десневой жидкостях. Как и следовало ожидать, при развитии острого гнойного периостита БТШ-70 в минимальных количествах в сыворотке крови возрастал при развитии острого гнойного периостита челюстей и несколько снижался после лечения. Хотелось бы, отметить. некоторые несоответствия между уровнем абсолютного содержания БТШ-70, антител и аутоантител к нему в динамике воспалительного процесса. Так, послеюкончанияшеченияходержание белка в ротовой и десневой. жидкостях снижалось, а.концентрация антител и аутоантител, наоборот, возрастала. На наш взгляд такое несоответствие. обусловлено продолжающимся иммунным ответом.на антигенную стимуляцию4 шаперонов в разгаре воспалительного процесса.
Содержание белка теплового шока-70, антител и аутоантител к нему при остром гнойном периостите челюстей
Известно, что моноциты содержат в составе мембраны Fc-рецепторы к Fc-фрагментам антител, и связывание любых лигандов обязательно сопровождается возбуждением клеток, одним из проявлений которого является гиперсекреция тканевого фактора. И действительно, инкубация цитратной крови с различными концентрациями иммунного комплекса S-аденозилгомоцистеин+sIgA сопровождается сокращением времени свертывания плазмы, а при высоких дозах иммунных комплексов — сокращением и АЧТВ. Последнее прямо свидетельствует о гиперпродукции тканевого фактора. Очевидно, что в цитратной крови продуцентами тканевого фактора могли быть моноциты. И действительно, в специальных экспериментах было показано дозозависимое освобождение тканевого фактора моноцитами при инкубации их с иммунными комплексами З-аденозилгомоцистеин+БІ А.
Таким образом, очевидно, что высокий коагуляционный потенциал смешанной слюны в значительной степени обусловлен синтезом, экспрессией и секрецией тканевого фактора моноцитами ротовой полости, которые активируются различными компонентами слюны, включая гомоцистеин, S-аденозилгомоцистеин и комплексом 8-аденозилгомоцистеин+8ІА. Описанные реакции являются дозозависимыми, и с углублением патологического процесса описанный эффект возрастает.
Наконец, необходимо проанализировать реакции нейтрофилов, инкубированных с ротовой и десневой жидкостями;.;.при. ..остром гнойном периостите. Нами показано, что инкубация интактных нейтрофилов, выделенных из цитратной крови доноров, сопровождается изменением биологических свойств лейкоцитов. Зарегистрированное увеличение фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса нейтрофилов отражает стимулирующий эффект различных компонентов слюны. Безусловными активаторами фагоцитарных реакций являются цитокины, компоненты комплемента, активированные факторы свертывания крови, антитела, включенные в состав иммунных комплексов [40, 41, 42]. У больных одонтогенными абсцессами фагоцитарная активность нейтрофилов возрастает в еще большей степени. На наш взгляд, доминирующими причинами усиления поглотительной способности нейтрофилов являются ЛПС патогенных микроорганизмов, а также опсонизирующий эффект антител, особенно slgA, включенных в состав иммунных комплексов. В принципе, последнее предположение уже доказалось нами при стимуляции интактных моноцитов комплексом 8-аденозилгомоцистеин+8ІА. Наряду со сказанным, стимулирующая активность ротовой и. десневой жидкостей проявляется и в переваривающей способности нейтрофилов, в частности, в стимуляции синтеза лизосомальных катионных белков и супероксид-аниона [43]. Как было показано нами, в цитоплазме инкубированных нейтрофилов увеличивается процент ЛКБ- и формазанпозитивных клеток. У больных эта способность нейтрофилов возрастала в еще большей степени. Безусловно, стимулирующими агентами в переваривающей способности нейтрофилов являются интерлейкины, иммунные комплексы и другие компоненты слюны.
Таким образом, в настоящем исследовании описаны новые звенья патогенеза острого гнойного периостит челюстей, реализуемых аутоантителами к цитокинам, эндотелину-1, БТШ-70, коньюгату S-адеденозилгомоцистеин-альбумин+sIgA. 1. У здоровых лиц максимальное содержание цитокинов регистрируется в смешанной слюне по сравнению с сывороткой крови и десневой жидкостью. При развитии острого гнойного периостита челюстей концентрация провоспалительных цитокинов увеличивается в десневой жидкости, а в смешанной слюне возрастает уровень ИЛ-6, ИЛ-8 и не изменяется содержание ИЛ-1р. После лечения в ротовой жидкости увеличивается концентрация ИЛ-ір, ИЛ-6, ИЛ-8. 2. При остром гнойном периостите челюстей в сыворотке крови увеличивается содержание аутоантител класса IgG к ИЛ-10, в десневой жидкости возрастает концентрация аутоантител класса slgA к ИЛ-8, а в ротовой и десневой жидкостях - уровень аутоантител этого класса к ИЛ-10 снижается, а после лечения — увеличивается. 3. Эндотелии-1 в низких концентрациях регистрируется в ротовой и десневой жидкостях доноров. При воспалении его содержание в сыворотке и десневой жидкости уменьшается, а в смешанной слюне — возрастает. После лечения уровень эндотелина-1 увеличивается в десневой жидкости. Во всех исследуемых субстратах закономерно регистрируются аутоантитела к эндотелину-1. 4. БТШ-70 не выявляется в сыворотке крови доноров и в низких концентрациях регистрируется в ротовой- и десневой жидкостях. При одонтогенном воспалении уровень БТШ-70 резко возрастает в жидкостях полости рта, а после лечения — снижается. Концентрация антител к БТШ-70 возрастает во всех исследуемых субстратах при развитии острого гнойного периостита челюстей, а после лечения их концентрация увеличивается в еще большей степени. Аналогичную закономерность претерпевают аутоантитела класса- slgA к БТШ-703в .смешанной слюне и десневой жидкости. 5. У доноров гомоцистеин в минимальной концентрации регистрируется в смешанной слюне и не выявлялся в десневои жидкости. При развитии воспаления уровень гомоцистеина увеличивается в ротовой и десневои жидкостях, а после лечения - снижается. Аутоантитела slgA к S-аденозилгомоцистеину возрастают при развитии воспаления и уменьшаются после его завершения. 6. Ротовая и десневая жидкости доноров, и особенно пациентов с острым гнойным периоститом челюстей вызывают эффект отдачи тканевого фактора интактными моноцитами, который является дозозависимым при инкубации моноцитов с гомоцистеином.
