Содержание к диссертации
Введение
Глава № 1. Обзор литературы
1.1. Современные представления об этиологии и патогенезе красного плоского лишая слизистой оболочки полости рта
1.2. Современные принципы и методы лечения эрозивно-язвенной формы красного плоского лишая
Глава № 2. Материалы и методы исследования .
2.1. Клинические методы исследования
2.1.1. Биохимические исследования .
2.1.1.1. Изучение степени переокисления в мембранах эритроцитов .
2.1.1.2. Изучение состояния антиоксидантной системы (АОС)
2.1.1.3. Определение концентрации суммарных метаболитов оксида азота в сыворотке крови
2.2. Получение электрохимически-активированных растворов и их применение .
2.3. Экспериментальная часть .
2.3.1. Методы изучения ферментов антиоксидантной системы организма
2.3.2. Исследование активности антиоксидантных ферментов в гемолизатах крови животных
Глава № 3. Динамика клинических данных у больных красным плоским лишаем слизистой оболочки полости рта
3.1. Влияние электрохимически-активированных растворов на состояние полости рта у больных КПЛ .
3.2. Результаты клинических исследований. Общая характеристика обследованных больных
3.3. Динамика показателей, характеризующих клиническое состояние слизистой оболочки полости рта .
Глава №4. Результаты биохимических исследований
4.1. Данные биохимических показателей сыворотки крови у больных КПЛ СОПР в динамике
4.2. Влияние электрохимически-активированных растворов на активность ферментов АОС у интактных кроликов
4.2.1. Влияние электрохимически-активированных растворов на активность каталазы эритроцитов кроликов при введении раствора in vivo и in vitro
4.2.2. Влияние электрохимически-активированных растворов на активность супероксиддисмутазы эритроцитов кроликов при введении раствора in vivo и in vitro
4.2.3.Влияние электрохимически-активированных растворов на активность пероксидазы эритроцитов кроликов при введении раствора in vivo и in vitro
Глава №5 Обсуждение результатов исследования
Заключение...
Общие выводы
Практические рекомендации
Список использованной литературы .
Приложение .
- Современные принципы и методы лечения эрозивно-язвенной формы красного плоского лишая
- Изучение степени переокисления в мембранах эритроцитов
- Результаты клинических исследований. Общая характеристика обследованных больных
- Влияние электрохимически-активированных растворов на активность ферментов АОС у интактных кроликов
Введение к работе
Актуальность исследования. К настоящему времени накоплены значительные клинические и экспериментальные данные литературы, свидетельствующие о том, что в генезе воспалительных проявлений слизистой оболочки полости рта, в том числе при эрозивно-язвенной форме красного плоского лишая (КПЛ), патогенетическую роль играют процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) и снижение активности ферментов антиоксидантной защиты (АОЗ) клеток (Самойлова О.П., 2007, 2008; Тиунова Н.В., 2009; Томас П. Хэбиф., 2008; Kuwahara R.T., Skinner R.B., Rosenberg E.W., 2000). Эти изменения стационарного равновесия в системе играют роль в дезорганизации гомеостатических механизмов микроваскулярного ложа, развитии хронической гипоксии тканей пародонта, изменении их проницаемости и развитии патологической воспалительной реакции (Канканян А.П., 1998; Абасканова П.Д., 2011). Система ПОЛ - АОС находится во взаимосвязи с имуннобиологическими свойствами организма, поскольку представители неспецифической защиты – полиморфноядерные лейкоциты и моноциты способны генерировать АФК и обеспечивать «презентацию» антигена в ходе индукции иммунных специфических реакций (Дмитриева Л.А., 2001). Продукты ПОЛ обладают антигенными свойствами, запуская аутоиммунные процессы повреждения тканей. Выраженные нарушения в гуморальном и клеточном звеньях системы иммунитета у больных КПЛ отмечают Рабинович О.Ф., Ханукова Л.М., Хамидулина К.Ф., 2009; Митронин А.В.. 2011. Наряду с существующими данными литературы (Девятов В.А. и др., 2001; Бабушкин О.С., Назин В.А., 2001; Резников К.М. и др., 2006), недостаточно изученным остается вопрос об оптимизации лечения новыми современными технологиями, в частности использованием комплексной терапии с электрохимически-активированными растворами (ЭХАР).
Цель работы: показать патогенетическую роль дисбаланса в системе ПОЛ-АОЗ в формировании дистрофически-воспалительной патологии слизистой оболочки полости рта при красном плоском лишае, обосновать и разработать новые методы повышения эффективности лечения путем включения электрохимически-активированных растворов в алгоритм этиопатогенетической терапии.
Задачи исследования:
-
Клинически оценить состояние слизистой оболочки полости рта, стоматологический статус у больных с эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая слизистой оболочки полости рта до и после комплексного этиопатогенетического лечения.
-
Изучить роль сопряженных систем ПОЛ и АОС организма в патогенезе эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки полости рта у этой категории больных.
-
Выявить влияние комплексного лечения с электрохимически-активированными растворами на морфологические и биохимические показатели крови пациентов, страдающих эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая слизистой оболочки полости рта. Оценить эффективность комплексного лечения на степень выраженности эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки полости рта.
-
Изучить влияние электрохимически-активированных растворов на активность ферментов АОС в эксперименте на интактных кроликах in vivo и in vitro.
Научная новизна
Установлена патогенетическая роль системы ПОЛ-АОЗ в развитии эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочке полости рта у больных КПЛ. Показано участие нарушений в клеточном звене иммунитета в развитии деструктивно-воспалительной патологии полости рта. Впервые доказана эффективность комбинированного лечения с ЭХАР на клинико-лабораторные данные у больных с эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая слизистой оболочки полости рта. На основании экспериментальных данных впервые установлено влияние ЭХАР на активность основных ферментов антиоксидантной защиты организма при введении раствора интактным кроликам in vivo и in vitro.
Научно-практическая значимость
Настоящая работа имеет как общефундаментальное, так и прикладное клиническое значение. Проведенные научные исследования позволили углубить наши представления о патогенезе дистрофически-воспалительного процесса слизистой оболочки полости рта у больных с эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая в клинике, установить роль сопряженных систем ПОЛ–АОС в дестабилизации клеточных мембран. На основании полученных экспериментальных, клинических и биохимических данных разработано индивидуальное, комплексное, этиопатогенетическое лечение красного плоского лишая слизистой оболочки полости рта, включающее местное применение ЭХАР (анолита и католита), что способствовало улучшению клинического состояния СОПР, ускорению эпителизации элементов поражения.
Комбинированное применение традиционных фармакологических средств и ЭХАР в исследовании, является дополнением к соответствующим разделам учебных курсов терапевтической стоматологии, фармакологии и патологической физиологии.
Основные положения, выносимые на защиту
-
В патогенезе эрозивно-язвенной формы красного плоского лишая играет роль дисбаланс в системе ПОЛ-АОЗ клеток. Установлено повышение концентрации вторичного продукта ПОЛ – МДА в эритроцитах и снижение активности фермента СОД, тогда как каталазы и концентрация церулоплазмина в острой фазе заболевания повышались. Одновременно отмечается снижение концентрации суммарных метаболитов оксида азота в сыворотке крови и угнетение клеточного звена иммунитета.
-
Комплексная терапия эрозивно-язвенной формы красного плоского лишая с применением электрохимически-активированных растворов вызывает угнетение интенсивности окислительного стресса: снижение концентрации МДА, повышение активности фермента СОД, снижение активности каталазы, концентрации церулоплазмина, повышение концентрации суммарных метаболитов NO и активация Т-клеточного звена иммунитета.
-
Включение анолита и католита в стандартную программу лечения эрозивно-язвенной формы красного плоского лишая позволяет, по сравнению с традиционным лечением, ускорить достижение лечебного эффекта, снизить сроки эпителизации и улучшить состояние слизистой оболочки полости рта у пациентов. Самостоятельное применение электрохимически- активированных растворов оказывает лечебное действие, близкое по эффективности к традиционному лечению.
-
В механизме эффективности комплексного лечения принимает участие окислительно-восстановительный потенциал, генерируемый электрохимически-активированными растворами, и способствующий повышению активности ферментов антиокислительной системы, что установлено в модельных экспериментах на интактных кроликах in vivo и in vitro.
Личный вклад автора
Автор самостоятельно разработала методические подходы к решению поставленной цели и задач, выполнила экспериментальные и клинические исследования, провела математическую и статистическую обработку с анализом и обобщением полученных результатов. Самостоятельно и в соавторстве подготовлены и опубликованы материалы работы.
Апробация работы
Материалы диссертации докладывались на: Х международном конгрессе «Здоровье и образование в ХХI веке» «Инновационные технологии в биологии и медицине» (Москва, 2009); Международной конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии, фармакологии и медицине» (Санкт-Петербург, 2012); III международной научно-практической конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки» (Владикавказ, 2012). Апробация диссертации проведена в ГБОУ ВПО СОГМА Минздрава России на совместном заседании кафедр патологической физиологии, стоматологии №1, №2, №3 и отделов ИБМИ ВНЦ РАН и Правительства РСО-Алания.
Публикации по теме диссертации
По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 2 в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации.
Внедрение результатов работы
Результаты работы внедрены в учебный процесс на кафедрах патологической физиологии, стоматологии №3 ГБОУ ВПО СОГМА Минздрава РФ. Разработан метод применения электрохимически-активированных растворов в комплексном лечении эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки полости рта больных красным плоским лишаем, практические рекомендации внедрены в клиническую практику кафедр стоматологии №1 и №3 ГБОУ ВПО СОГМА Минздрава России и Республиканского кожно-венерологического диспансера г. Владикавказа.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 123 страницах компьютерного текста и состоит из введения и 5-ти глав: обзора литературы, материалов и методов исследования, собственных данных – 3 главы, заключения и общих выводов, списка использованной литературы (120 источников отечественных и 62 зарубежных авторов), иллюстрирована 15 таблицами и 26 рисунками.
Современные принципы и методы лечения эрозивно-язвенной формы красного плоского лишая
Принимая во внимание частую хронизацию процесса и множество тяжелых и атипичных форм, сложность его патогенеза, успешное лечение возможно лишь при комплексном и индивидуализированном лечении с использованием современных средств и методов (Файзулин Р.А., 1992; Хамаганова И.В., 2004; Корсунская И.М., и др., 2008). После установления диагноза больного обследуют для выявления у него соматических заболеваний. (Гончаров С.В., 1984; Чернавина Г.С., 1987; Демина Т.А., 1993; Русак М.К. и др., 1996; Володина Е.В. и др., 1997; Гажва С.М. и др., 1997; Vescovi et al., 1996; Burkhart et al., 1997). Как при любом хроническом процессе, КПЛ требует местной и системной терапии (Томас П., 2008; Rebora A., 2008). Местное лечение начинают с проведения профессиональной гигиены полости рта, обучения рациональной гигиене, санации полости рта (Арунов Т.И., 2010; Гилева О.С., 2011). Во время санации проводят устранение местных раздражающих факторов, сошлифовывание острых краев зубов, ликвидацию очагов одонтогенной инфекции. Рекомендуется консультация врача-ортопеда для оценки имеющихся конструкций, устранения протезов из разнородных металлов и рационального протезирования. Больным красным плоским лишаем рекомендуется щадящая диета с исключением горячей, грубой, острой и пряной пищи. Особенно важно учитывать факторы, которые способствовали появлению болезни. Необходимо устранить факторы риска - бытовые и профессиональные вредности, очаги фокальной инфекции. Обращается внимание на предшествующее лечение и переносимость лекарственных веществ (Томас П. Хэбиф, 2008; Зюбр Т.П., 2009).
Учитывая изменения иммунологической реактивности организма цитологической направленности у лиц с этим заболеванием, было предложено включить в комплекс лечебных мероприятий больных эрозивно-язвенной формой КПЛ слизистой оболочки рта преднизалон (Carbone M., et al., 2003; Chen Z, 1999), по 5 мг 4 раза в день, каждые 5-6 дней суточная доза уменьшается на 5 мг, курсовая доза от 250-200 мг (Silverman S., 1997). Важная роль в патогенезе КПЛ отводится стрессу, пациентам КПЛ СОПР часто присущи психопатологические реакции, склонность к депрессии, чувство тревоги, что требует при всех формах назначения соответствующей фармакотерапии, гипнотерапия, электросон (Машкиллейсон А.Л., 1995; Скрипкин Ю.К. и др., 1997; Баранник Н.Г., 1995; Anderson, 1968; Colella et al., 1993; Bergdahl et al., 1995; McCartan, 1995; Ostman et al., 1996; Burkhart et al., 1997; Rаjo- Moreno et al., 1998).
У больных эрозивно-язвенной и экссудативно-гиперемической формой, а также при буллезной форме КПЛ СОПР при безуспешности указанной выше терапии применяют комбинированное лечение кортикостероидами, синтетическими противомалярийными препаратами и никотиновой кислотой (Антонова Т.А., Кутин С.А., 1981; Carbone et al., 1998, 2003), причем кортикостероиды назначают в снижающихся дозах до полной отмены в течение 4-5 недель. Отсутствие эффекта от длительного приема низких доз кортикостероидных гормонов отмечает Lu S.Y., et al., (1995).
В связи с тем, что материальной основой заболевания является иммунное воспаление, коррекция иммунитета приобретает особое значение, и само заболевание хорошо реагирует на иммуномодулирующую терапию (Перламутров Ю.Н., 2010; Оскольский Г.И., 2011). Отмечен положительный эффект от введения в комплексную терапию КПЛ СОПР иммуномодуляторов, в частности димоцифона, пирогенала, а также интерферона, иммуноферона (Файзулин Р.А., 1992; Ариф Мохаммад, 1996; Володина Е.В., 1997; Fellner М., 1980; Hildebrand А., et al, 1995; Doutre et al, 1996). В наши дни перспективной и новой группой иммуномодулирующих препаратов являются индукторы интерферона, сочетающие антибактериальные, противовирусные и иммуно-корригирующие свойства (Земсков А.М., и др., 2001). Среди индукторов интерферона по уровню безопасности, переносимости и диапозону терапевтических эффектов первое место занимает «Неовир» (Ломоносов К.М. и др., 2007).
Гистологически в мелких сосудах при эрозивно-язвенной форме КПЛ обнаруживают отложение фибрина, поэтому эффективным является введение гепарина по 5000-10000 ЕД подкожно 2 раза в день 10-дневными курсами (Машкиллейсон А.Л. и др.,1995).
Многие авторы считают необходимым включение в комплексное лечение больных КПЛ СОПР противогрибковой терапии, учитывая выявленные нарушения микробиоценоза полости рта с преобладанием C.albicans (Carbone М., et al, 1996; Libow L.F.,et al, 1998). Необходимо также назначение эубиотиков или других препаратов, нормализующих выявленные изменения микробиоценоза полости рта (Безрукова И.В., 1998).
При тяжелых формах эрозивного плоского лишая полости рта, которые не реагируют на традиционное лечение, может оказать положительное влияние ПУВА-терапия (0,6 мг/кг 8-метоксипсоралена внутрь за 2 ч до облучения длинноволновым ультрафиолетовым светом) (Файзулин Р. А., 1992; Rebora A., 2008).
Введение кортикостероидов внутрь очага применяли при плоском лишае слизистой оболочки полости рта. Предпочтительным препаратом является триамцинолона ацетонид, его назначают в дозе 5–10 мг/мл еженедельно или 2 раза в неделю в течение 3–4 нед. (Хамаганова И.В.,2004; Корсунская И.М., и др., 2008; Rebora A., 2008).
Благоприятное влияние на метаболические процессы оказывает витаминотерапия. На пролиферацию и дифференциацию кератиноцитов оказывает влияние витамин А (суточная доза для взрослых - 100 000 МЕ). Ретиноиды - дериваты витамина А (Тигазон, Неотигазон, Этретинат) уменьшают интенсивность воспалительной реакции, влияют на состояние клеточных мембран и нормализуют процессы пролиферации. Традиционно в комплексном лечении применяются кератопластические препараты. В последние годы комплекс терапевтических средств дополнен отечественными препаратами на основе природного биополимера коллагена – «Эмпаркол», «Эмалан» (Рабинович О.Ф., и др., 2003). Они не только способствуют эпителизации, но и сокращают продолжительность всех фаз воспаления, сохраняя свои свойства в присутствии слюны, улучшают микроциркуляцию, увлажняют слизистую оболочку полости рта (Тухватуллина Д.Н. и др., 2007). Для закрепления достигнутой ремиссии рекомендована противорецидивная терапия, которая включает повторные курсы витаминотерапии, гистаглобулина, санаторно-курортное лечение (Федоров С.М. и др., 1997).
Изучение степени переокисления в мембранах эритроцитов
Степень переокисления в гемолизате эритроцитов изучали по изменению концентрации конечного продукта ПОЛ – МДА по методу Аsacawa T. et аl. Метод основан на том, что при высокой температуре МДА реагирует с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), образуя окрашенный комплекс с максимумом поглощения при длине волны 532 нм. Для проведения метода раствором хлорида натрия (0,9%) эритроциты отмывали в течение 10 минут троекратным центрифугированием (1500 об/мин).
Метод основан на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс. Для проведения данного метода к 0,1 мл сыворотке крови добавляли 2 мл 0,03% раствора перекиси водорода, в пробирку с холостой пробой вместо сыворотки вносили 0,1 мл дистиллированной воды. Через 10 минут реакцию останавливали добавлением 1 мл 4% молибдата аммония. Интенсивность окраски измеряли спектрофотометрически при длине волны 410 нм против контрольной пробы.
Определение супероксиддисмутазной активности проводили методом аутоокисления адреналина (Макаревич О.П., Голиков П.П., 1983), который основан на способности СОД тормозит реакцию аутоокисления адреналина до адренохрома при рН=10,2 накопление, которого сопровождается увеличением оптической плотности и регистрируется на спектрофотометре при 480 нм. Расчет активности СОД производили по формуле: А – активность СОД в 1 мл пробы в кювете в условных единицах; 2 – в пробу взято 0,5 мл сыворотки; Т% - процент торможения реакции. Активность СОД выражали в усл.ед. оптической плотности. Определение церулоплазмина в сыворотке крови модифицированным методом Равина Принцип метода основан на окислении р-фенилендиамина при участии церулоплазмина. Реакцию останавливали добавлением NaF. По оптической плотности продуктов реакции судили об уровне ЦП (мг/л).
После удаления из сыворотки крови белков с помощью этилового спирта (депротеинизация) проводится одноэтапное количественное определение суммарных нитратов и нитритов, заключающееся в одновременном восстановлении нитратов в нитриты в присутствии хлористого ванадия (VCl3) и реакции диазотирования, образовавшимся нитритом сульфаниламида, с последующим развитием розовой окраски, соответствующей концентрации нитритов, интенсивность которой, определяется спектрофотометрически.
Для электрохимического синтеза растворов (анолита и католита) использовали слабоминерализованный раствор электролита (хлористого натрия - 1 г/л) в дистиллированной воде, который получали с помощью диафрагменного проточного электрохимического реактора «СТЭЛ». Растворы не опасны для наружного и внутреннего применения, что было подтверждено в 1988 г. Фармакомитетом СССР (Решение Мо.211-252 7791). Для клинических целей использовали нейтральные электрохимически-активированные растворы, которые по данным литературы обладают большими антибактериальными, регенерирующими свойствами. Полученные растворы имели соответствующие характеристики: анолит (АН) – рН 6,8±0,3 и ОВП +715±10мВ: католит (КН) рН 9,3±0,7 и ОВП -470±50мВ. Полученный раствор анолита использовался в течение недели. Хранили в закрытых стеклянных емкостях при t +100С, так как его параметры практически не изменялись. На момент применения для улучшения биоцидной активности раствор нагревался до 400С. Католит применялся свежеприготовленным, вследствии потери характеристик раствора в течение суток. Водный показатель и окислительно-восстановительный потенциал измеряли рН-метром и иономером, в соответствии с инструкцией по эксплуатации соответствующих приборов.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы Microsoft Excel 2003. Результаты представлены в виде среднего значения (Mean) и ошибки среднего (SEM). Статистическую достоверность различий между двумя группами животных проверяли с помощью t-критерия Стьюдента, подтвердив нормальность распределения. Уровнем статистической значимости считали р 0,05.
В экспериментальной части работы были использовано всего 16 здоровых интактных кроликов "Шиншилла" массой тела 2-2,5 кг, содержащиеся в течение всего опыта в виварии Московского государственного медико-стоматологического университета. 5 кроликов были интактными и служили контролем, а на 11 кроликах изучали влияние ЭХАР на активность ферментов АОС. При работе с животными использовались все международные этические нормативы, принятые в международной практике.
Кровь с соблюдением всех правил асептики и антисептики забиралась из ушной вены кроликов в стеклянные пробирки с физиологическим раствором (в соотношении кровь - физиологический раствор 1:10). Эритроциты трижды отмывались центрифугированием при 3000 об/мин на стационарной лабораторной центрифуге Элекон ЦЛМН-Р10-01, с последующим ресуспендированием в физиологическом растворе до 1% взвеси и гемолизом добавлением дистиллированной воды 1:100 в течение часа на холоде. Гемолизат эритроцитов использовали непосредственно или замораживали до использования при - 20С, на сроки не более 2-х недель. Активность ферментов при таком хранении, как показали предварительные исследования, не снижалась.
Для оценки активности антиоксидантной системы организма мы исследовали активность трех наиболее важных ферментов - каталазы, пероксидазы и супероксиддисмутазы (СОД), как in vivo в эксперименте у кроликов, так и in vitro при воздействии на гемолизат эритроцитов периферической крови животных ЭХАР (АН, КН). Определение каталазы Активность каталазы в сыворотке крови кроликов определяли по методу М.А. Королюка и соавт. (1988), описанному выше. Определение пероксидазы Пероксидазу определяли методом по Асатиани (1969), основанного на окислении индигокармина в слабокислой среде. Для исследования использовали следующие реагенты: 0,001 N раствор индигокармина, 2 N H2SO4, 0,2 N перекись водорода, ацетатный буфер с рН = 4,7 (смешиванием равных объемов 0,2 N уксусной кислоты и 0,2 N уксуснокислого натрия).
Результаты клинических исследований. Общая характеристика обследованных больных
Исследования проведены на 69 больных обоих полов с эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая (МКБ – 10, L 43) и 15 здоровых лицах. Обследуемые были распределены на следующие группы: 1. контроль - (15 чел.); 2. больные КПЛ на фоне монотерапии ЭХАР (18 чел.); 3. больные КПЛ на фоне традиционного лечения (26 чел.); 4. больные КПЛ на фоне комплексной терапии (традиционное лечение с включением ЭХАР) (25 чел.).
Распределение больных в группах было достаточно равномерным и идентичным. Пациентов распределяли методом слепого отбора. Анализ материала, полученный на основании учетных карт, позволил выяснить, что возраст обследуемых больных колеблется от 30 до 72 лет.
У подавляющего большинства пациентов – 65 человек (94%) в анамнезе была выявлена сопутствующая патология. Заболеваниями желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) страдали 22 человека (33,8%), эндокринными заболеваниями – 19 человек (29,2%), заболеваниями сердечно-сосудистой системы (ССС) – 20 человек (30,7%), нервной системы 11 человек (16,9%), аллергическими состояниями - 18 человек (27,6%). У 61 больного наблюдалось сочетание двух и более хронических заболеваний. Данные представлены на рисунке 3. Примечание: 1 – болезни желудочно-кишечного тракта; 2 – болезни сердечно-сосудистой системы; 3 – болезни эндокринной системы; 4 – болезни нервной системы; 5 – аллергические заболевания; 6 – сочетанные заболевания. Особое внимание при сборе анамнеза уделялось выяснению возможных причин возникновения заболевания. С определенной причиной начало заболевания связывали 39 пациента. Так на стрессовые ситуации указывали -16 чел., обострение хронических соматических заболевании – 9 чел., постановку или замену зубных протезов - 7 чел., прием лекарственных препаратов или пищевых продуктов – 5 чел., переохлаждение – 2 человека. Оценивая жалобы, предъявляемые пациентами в момент обращения по 3-х бальной системе и анализируя их, нами были выявлены основные симптомы. Так 90% больных жаловались на боли, которые их беспокоили не только во время приема пищи, но также во время разговора и в покое. Достаточно высокую распространенность среди жалоб имело чувство жжения - 97%; шероховатость слизистой полости рта - 73%; 53% пациентов отмечали чувство стянутости слизистой полости рта. Анализ жалоб был проведен как в основной (четвертой) группе, так и в группах сравнения (рис.4).
У обследуемых больных стоматологический статус выявил, что только 14 пациентов (20,3%) были санированы, остальные нуждались в стоматологической помощи лечении твердых тканей зубов, пародонта с последующим рациональным протезированием.
Отсутствие зубов в полости рта, обеспечивающих механическую обработку пищи, вероятно, служило причиной хронической механической травмы слизистой оболочки рта, а также наличие очагов хронической инфекции в полости рта (кариес, его осложнения и заболевания пародонта) могло провоцировать обострения заболевания и осложнить тяжесть его клинического течения, что наблюдалось у обследованных нами больных.
С помощью упрощенного индекса гигиены полости рта (УИГР,OHI-S) нами было оценено гигиеническое состояние полости рта пациентов. При этом было выявлено, что индекс УИГР,OHI-S в основной группе составил 2,1±0,14 балла, во второй и третьей группах - 1,81±0,13; 2,0±0,12 балла соответственно, что указывает на неудовлетворительное состояние полости рта. Во всех наблюдаемых группах проведенное исследование позволило установить достаточно высокую распространенность признаков поражения пародонта, при этом имелась тенденция к повышению с увеличением возраста. Анализ значений папиллярно-маргинально-альвеолярного индекса (РМА) на момент обращения во второй группе составил 35,44±1,38%, в третьей – 34,5±0,94%, а в основной - 34,4±1,02%, что соответствует критерию средней степени тяжести гингивита (приложение, таб. 4,5,6).
Аналогичные выводы были сделаны при анализе индекса кровоточивости десневой борозды (SBI). Наиболее высокий показатель отмечался во 2 группе – 25,17±2,58%, в третьей и четвертой группах этот показатель составил 24,0±2,24% и 24,72±1,98% соответственно, что превышает допустимый уровень данного индекса (рис 5).
Для уточнения обложенности языка использовался индекс налета языка - WTS (Winkel Tongue Coating). Так наибольший показатель индекса на момент обращения отмечался во второй группе – 8,78±0,61 балла, наименьший в основной группе – 8,28±0,49 балла, а в третьей группе индекс налета языка составил 8,46±0,54 балла.
По данным учетных карт, также было выявлено, что эрозивно-язвенные элементы поражения в полости рта чаще определялись на слизистой оболочке щек по линии смыкания зубов (77%), в ретромолярной области (54%), на боковой поверхности языка (38%), реже на красной кайме губ (14%) и небе (3%). Во время осмотра, внимание уделяли эрозивно-язвенным поражениям, их форме и размерам. Чаще эрозии имели неправильную форму или полигональные очертания, неодинаковые размеры, покрытые фибринозным налетом, при снятии, которого возникала кровоточивость. Вокруг эрозии на гиперемированном фоне определялись, характерные для плоского лишая папулы, образующие сетчатость (сетка Уикхема). С помощью метода планиметрии мы измеряли размеры пораженных участков. Для этого на целлофановой пленке очерчивали контуры очагов поражений, затем с помощью миллиметровой бумаги рассчитывали площадь эрозивных поверхностей у пациентов всех групп на момент обращения. В каждой группе был проведен анализ результатов и выведено среднее значение показателя.
Как видно на диаграмме (рис. 6) во второй группе площадь поражения составила – 3,11±0,2 см , в третьей – 2,99±0,17 см , а в основной - 3,07±0,13 см. У всех обследуемых на момент обращение были проведены биохимические исследования в сыворотке крови, при этом определяли: концентрацию вторичного продукта СРО МДА, активность СОД, каталазы, концентрацию церулоплазмина и суммарных метаболитов оксида азота в сыворотке крови.
При сравнительном анализе данных с уровнем контроля была выявлена активация процесса ПОЛ, повышение концентрации МДА в эритроцитах у всех больных до лечения (30,46±0,32 нмоль/мл). Одновременно мы выявили нарушение в системе АОЗ клеток: статистически достоверно снизилась активность СОД (р 0,001), по сравнению с уровнем контроля это понижение составило 53,75%. Компенсаторно произошло повышение активности каталазы и концентрации церулоплазмина. При сравнительном анализе с уровнем контроля эти показатели были изменены на 79,2% и 27,62%, соответственно. Развившийся окислительный стресс, сопровождался нарушением микроциркуляторной гемодинамики, о чем свидетельствовало в наших исследованиях снижение концентрации суммарных метаболитов оксидов азота. Так, во второй группе она составила 40,39±1,24мкМ, в третьей и основной группах 39,23±0,78 и 41,32±0,65мкМ, соответственно, тогда как в контрольной группе концентрация суммарных метаболитов NO соответствовала 68,45±0,6мкМ (рис.7).
После проведенных клинико-лабораторных исследований и постановки диагноза составляли индивидуальный план лечения для каждого пациента, учитывая при этом давность заболевания, наличие соматической патологии и клиническое состояние слизистой полости рта. Всем пациентам была рекомендована диета, исключающая острую, горячую и грубую пищу, а также прекращение курения. Пациенты были информированы о необходимости тщательного соблюдения назначений врача по уходу за полостью рта для закрепления клинического эффекта. В комплекс лечебных мероприятий включали общее и местное лечение. При наличии общесоматической патологии больной одновременно, проходил лечение у соответствующих специалистов.
Влияние электрохимически-активированных растворов на активность ферментов АОС у интактных кроликов
Стимулирующая роль ЭХАР на активность ферментов АОС: СОД, каталазы и пероксидазы установлено в наших экспериментальных исследованиях на интактных кроликах в условиях in vivo и in vitro.
Для изучения активности ферментов антиоксидантной защиты организма опытным кроликам в течение двух суток перорально вводили 300 мл КН. После чего определяли уровень активности ферментов - пероксидазы, каталазы и супероксиддисмутазы в крови. Затем исследовали реакцию этих ферментов на 10-минутную инкубацию АН in vitro. Из забираемой крови после центрифугирования трехкратным отмыванием физиологическим раствором выделили эритроциты, их гемолизировали дистиллированной водой. К гемолизату эритроцитов добавляли АН в условиях in vitro и в последующем судили об активности ферментов, которую определяли методами, описанными во 2-ой главе. 4.2.1. Влияние электрохимически-активированных растворов на активность каталазы эритроцитов кроликов при введении раствора in vivo и in vitro
Изучали индивидуальные вариации активности ферментов: супероксиддисмутазы, каталазы и пероксидазы, полученные данные обработали методом вариационной статистики. В контрольной группе активность каталазы, о которой судили по убыли субстрата перекиси водорода (экстинкции), в среднем составила 0,32±0,004 условных единиц, что пропорционально количеству ферментированного субстрата. Разброс данных составил от 0,302 до 0,341 у.е.
В опытной группе потребление субстрата за время реакции возрастало до 0,387±0,008 у.е., что свидетельствовало о повышении активности фермента, но при этом отмечалась индивидуальная вариация показателей активности каталазы, что составило от 0,342 у.е. до 0,418 у.е. Таким образом, в данной группе наблюдалось активирование каталазы на 21%.
Динамика показателя активности каталазы при введении раствора in vitro имело аналогичную тенденцию, то есть сохранялось стимулирующее влияние КН на активность данного энзима в лизате эритроцитов. Таким образом, активность каталазы в опытной группе (0,392±0,004 у.е) выше сравнительно с контрольной группой (0,304±0,001 у.е.) на 29%.
Об активности СОД в эритроцитах крови кроликов судили по количеству НСТ, защищенного от пероксида, генерированного в реакции НАД+Н с ФМС. Анализ данных, полученных in vivo на кроликах, показал, что происходит активация фермента супероксиддисмутазы, при этом чувствительность СОД эритроцитов к действию ЭХАР статистически достоверно возрастает. В опытной группе активность СОД составила 0,075±0,001 у.е., по сравнению с контрольной 0,059±0,001 у.е., то есть активность СОД повышается на 27%.
Полученные нами данные подтверждают, что более активная СОД, обеспечивающая реакцию дисмутации супероксиданион радикала, способствует более быстрой реакции перекиси водорода как менее реактивного соединения.
В другом варианте – исследования, проведенные в экспериментах in vitro, позволили выявить прямое влияние ЭХАР на активность СОД. Данные показали позитивные изменения, то есть активность СОД возросла статистически достоверно с 0,058±0,001 у.е. до 0,079± 0,001 у.е.
Активность пероксидазы определяли по скорости ферментативной реакции. Полученные результаты свидетельствуют, что активность пероксидазы в контрольной группе составила в среднем 43,6±0,99 сек. Разброс данных составил от 38сек до 48 сек. В опытной группе время реакции снижалось до 39,7±1,34сек., что указывает на активацию пероксидазы. При этом, отмечался индивидуальный разброс данных активности фермента от 33 сек до 45 сек.
Для выяснения характера влияния ЭХАР на активность пероксидазы мы предприняли проведение экспериментов на выделенные эритроциты кролика in vitro АН. Полученные данные воздействия ЭХАР на активность фермента в лизате эритроцитов кроликов, интактных и подвергшихся введению ЭХАР in vivo, оказалось, что в среднем имеет место тенденция к активации фермента как в контрольной, так и в опытной группах.
Влияние растворов индивидуально по каждому из животных позволяет выявить, что как при высоких, так и при низких значениях активности фермента влияние ЭХАР in vitro проявлялось в активации фермента, однако, у трех кроликов отмечалось подавление ферментативной реакции. Таким образом, анализ всех полученных экспериментальных данных позволил установить эффективность стимулирующего влияния электрохимически-активированных растворов на активность основных ферментов АОЗ.
Эрозивно-язвенные поражения характерны для различных заболеваний слизистой оболочки полости рта, в том числе для красного плоского лишая (КПЛ). Их изучению посвящен ряд работ отечественных и зарубежных исследователей (Барер Г.М., 2005, Банченко Г.В., Максимовский Ю.М., Гринин В.М., 2000, Л.М.Лукиных Л.М., 2000, Цепов Л.М., Цепова Е.Л., Цепов А.Л., 2011). Несмотря на сравнительно давнее изучение данного вопроса, совершенствование методов диагностики и использование большого количества лекарственных средств различных фармакологических групп, лечение их представляют значительные трудности.
Важное значение в развитии эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки полости рта имеют состояние местного иммунитета и кровотока, а также системы перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантной защиты, как составляющей общей защитной системы организма. Продукты ПОЛ вызывают дестабилизацию липидного матрикса мембраны эпителиоцитов, повышенную проницаемость сосудов, что и способствует развитию воспаления и нарушению клинического состояния полости рта.
