Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1 Эпидемиология и патогенетические аспекты формирования пороков развития сосудов головного мозга 10
1.2 Клиническое течение и патоморфологические изменения при аномалиях сосудов головного мозга 18
1.3 Методы диагностики и лечения ангиодисплазий головного мозга 27
Глава 2 Материалы и методы исследования 31
2.1 Общая характеристика больных 31
2.2 Клинические методы исследования ангиодисплазий 31
2.3 Морфологическое исследование ангиодисплазий 37
Глава 3 Клиническая характеристика больных с церебральными аневризмами и мальформациями 39
3.1 Социально демографическая характеристика больных 39
3.2 Клинико-неврологические данные больных с ангиодисплазиями до субарахноидального кровоизлияния
3.3 Клинико-неврологические данные больных с ангиодисплазиями после субарахноидального кровоизлияния . 51
3.4 Клинико-неврологические данные больных с ангиодисплазиями после оперативного лечения
Глава 4 Морфологические особенности артериальных аневризм и артериовенозных мальформаций 72
4.1 Морфологические изменения в стенке ангиодисплазий 72
4.2 Морфометрические данные и результаты специфических окрасок 81
4.3 Результаты иммуногистохимических методов исследования 86
4.4 Клинико-морфологическое сопоставление полученных результатов.. 92
Заключение 95
Выводы 100
Практические рекомендации 102
Список литературы
- Клиническое течение и патоморфологические изменения при аномалиях сосудов головного мозга
- Клинические методы исследования ангиодисплазий
- Клинико-неврологические данные больных с ангиодисплазиями после субарахноидального кровоизлияния
- Результаты иммуногистохимических методов исследования
Введение к работе
Актуальность исследования.
Цереброваскулярные заболевания широко распространены среди населения трудоспособного возраста и занимают третье место среди всех причин смерти населения после заболеваний сердца, травм и отравлений, составляя 11-12%, и не имеют тенденции к снижению (Скворцова В.И., Крылов В.В. 2005). Среди различных форм цереброваскулярной патологии артериальные аневризмы и артериовенозные мальформации головного мозга остаются значительным источником инвалидизации и смертности населения трудоспособного возраста (Свистов Д.В. 2002; Peters D.G. et al. 2001; et al., 2005), в связи с чем в национальном проекте «Здоровье» значительное внимание уделено профилактике и диагностике сосудистых заболеваний.
Наиболее частой причиной летального исхода и социальной дезадаптации больных при данной патологии являются массивные кровоизлияния в головной мозг (Stapf C., Mast H., Sciacca R.R. et al., 2006).
В настоящее время, несмотря на то, что заболевания данной группы усиленно изучаются и получено множество новых сведений, эта патология остается причиной споров исследователей. Во-первых, нет общего мнения о причинах их возникновения и механизмах развития. Во-вторых, до сих пор нет общепринятой терминологии и единой международной классификации данных образований, а также не установлены критерии их дифференциальной диагностики. Это связано, прежде всего, с тем, что недостаточно изучены морфологические особенности артериальных аневризм и сосудистых мальформаций разных типов, отсутствует информация о значении ангиогенных медиаторов и их взаимодействии в патогенезе ангиодисплазий. Кроме того, в литературе нет четких и детальных описаний функционально-морфологических особенностей структуры кровеносных сосудов при данной патологии (Дан В.Н., 2008; Мишнёв О.Д. и др., 2008; Mattassi R. et al., 2009).
Цель исследования:
Изучить качественные и количественные изменения в стенках сосудов, образующих артериовенозные мальформации и артериальные аневризмы, связать их с клиническими проявлениями и оценить риск развития осложнений на основании особенностей иммуногистохимического профиля.
Задачи исследования.
-
Проанализировать сочетание клинических симптомов и данных функциональных методов исследования при артериальных аневризмах и артериовенозных мальформациях.
-
Исследовать строение стенки артериальных аневризм и артериовенозных мальформаций с оценкой степени нарушения структуры коллагена средней оболочки этих образований.
-
Выяснить профиль, частоту обнаружения и распределения рецепторов в стенке артериальных аневризм и артериовенозных мальформаций, определить уровень экспрессии сосудисто-эндотелиального фактора роста, трансформирующего фактора роста, маркера пролиферации.
-
Сопоставить характер распределения рецепторов с клиническими проявлениями заболевания и соотнести их с прогнозом и механизмами развития осложнений.
Научная новизна.
-
-
Впервые установлены более тяжелые клинические проявления артериовенозных мальформаций по сравнению с артериальными аневризмами и закономерности строения сосудистой стенки в зависимости от клинических проявлений заболевания.
-
Выяснены комплексные структурные изменения (качественные и количественные) в стенках кровеносных сосудов при данной патологии.
-
Впервые оценено состояние коллагена в средней оболочке, как основного компонента обеспечивающего прочность артерий.
-
На основании данных гистологического и иммуногистохимического исследований впервые был установлен профиль рецепторов к факторам роста в эндотелиоцитах артериальных аневризм и артериовенозных мальформаций.
-
Впервые проведены сопоставления рецепторного профиля эндотелия кровеносных сосудов с риском развития неблагоприятного исхода.
Практическая значимость работы.
Результаты проведенного исследования расширяют представления о морфологическом строении артериовенозных мальформаций и артериальных аневризм сосудов головного мозга. Полученные данные предоставляют возможность прогнозирования развития осложнений и неблагоприятного исхода при наличии данной патологии. Выявленные факторы риска могут быть использованы для формирования групп риска с целью профилактики развития осложнений. Результаты исследования могут быть использованы в работе нейрохирургических и неврологических отделений с целью оптимизации лечения д пациентов с артериальными аневризмами и артериовенозными мальформациями сосудов головного мозга.
Основные положения, выносимые на защиту:
Комплексный анализ клинических проявлений заболеваний выявил более тяжелое и длительное течение артериовенозных мальформаций по сравнению с артериальными мальформациями, а особенности строения стенки кровеносного сосуда, в частности степени экспрессии факторов роста эндотелия при данной патологии влияет на прочность стенки кровеносного сосуда, что напрямую коррелирует с объемом кровоизлияния и степенью повреждения ткани головного мозга, а, следовательно, и с исходом патологического процесса.
Внедрение результатов исследования.
Результаты исследования внедрены в учебном процессе на кафедре патологической анатомии Нижегородской государственной медицинской академии, нейрохирургическом отделении областной клинической больницы им. Н.А. Семашко.
Апробация работы.
Основные положения диссертационной работы представлены на научно-практической конференции, посвященной 150-летию со дня рождения В.М. Бехтерева (Нижний Новгород, 2007), на конференции «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (Санкт-Петербург, 2007), совместном заседании кафедр: патологической физиологии, патологической анатомии, нормальной анатомии, нормальной физиологии, гистологии, лабораторной диагностике ФПКВ, биологии, общей и клинической фармакологии ГБОУ ВПО НижГМА Минздравсоцразвития России, анестезиологии, реаниматологии и трансфузиологии с курсами общей патологии и клинической лабораторной диагностики Нижегородского военно-медицинского института ФПС России, криминалистики Нижегородской Академии МВД России 24 января 2012 года (протокол №1).
Личный вклад автора заключается в изучении 119 историй болезни пациентов с артериальными аневризмами и артериовенозными мальформациями, проведении анкетирования 119 больных с артериовенозными мальформациями и аневризмами на протяжении 4-х лет, обработка операционного и секционного материала, изготовление гистологических препаратов, их изучение и оценка результатов гистологического исследования, проведение иммуногистохимических исследований.
Публикации.
По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.
Объем и структура и диссертации.
Диссертация изложена на 122 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы материалов и методов исследования, двух глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, состоящего из 43 работы отечественных и 166 работ зарубежных авторов. Работа содержит 19 рисунков и 21 таблицу.
Клиническое течение и патоморфологические изменения при аномалиях сосудов головного мозга
Большинство аневризм протекают бессимптомно до развития субарахноидального кровоизлияния [164].
Артериальные аневризмы могут проявляться сдавлением окружающих структур головного мозга. Наиболее частые симптомы при этом головная боль, а также очаговая неврологическая симптоматика, например паралич третьей пары черепных нервов при аневризме в области стыка сонной и задней соединительной артерии или аневризмы верхней части базиллярной артерии. В зависимости от расположения аневризмы могут быть и другие признаки, такие как дисфункция ствола головного мозга, выпадение полей зрения, невралгия тройничного нерва, судороги, гипоталамо-гипофизарная дисфункция. Неразорвавшиеся аневризмы с наличием данных признаков имеют повышенный риск разрыва, составляющий до 6% в год, так как указывают на большой размер патологического образования [202].
Кроме этого, артериальные аневризмы могут проявляться ишемией головного мозга. Появление очагов ишемии в сосудистом бассейне дистальнее патологического образования вызвано эмболией тромбами, образовавшимися в полости аневризмы [152,153,202].
Однако большинство аневризм клинически себя не проявляют и являются случайной находкой при проведении патологоанатомического вскрытия. Большинство исследователей считают, что риск кровотечения из бессимптомных аневризм составляет от 0,5 до 2% в год [84,102,202,203]. По данным Wiebers [202], высокий риск разрыва имеют аневризмы более 10 мм в диаметре. Однако размер, меньше которого риск кровоизлияния становится незначительным, не считается до конца решенным [59,102,160,166].
Артериовенозные мальформации стоят на втором месте среди причин, вызывающих геморрагический инсульт, после разрыва стенки артериальной аневризмы [ПО]. Риск смертельного кровотечения при кровоизлиянии, обусловленном разрывом артериовенозной мальформации сосудов мозга, - 10-35% при первом кровоизлиянии, а при рецидиве - около 20%, риск повторного кровотечения в течение месяца не менее 11%) [82,112,103]. Кроме субарахноидальных кровоизлияний, данная патология может проявляться эпилептическими припадками, однако при крупных артериовенозных мальформациях из-за большого сброса крови может возникать ишемия прилегающих участков мозга [131,141,191]. Симптомы как правило появляются в детском или юношеском возрасте. На артериовенозную мальформацию указывают наличие у ребенка или молодого человека сосудистого шума в области глазницы, сонной артерии или сосцевидного отростка, субарахноидальные кровоизлияния, возникшие в молодом возрасте, без предшествующей артериальной гипертензии, преходящая гемианопсия, офтальмоплегическая мигрень, эпилептические припадки [3,183,189]. При краниографии могут выявляться характерные тонкие кольцевидные тени, имеющие на снимках вид петрифицированных аневризм. Определенное значение имеет ЭЭГ. Поскольку артериовенозные мальформации часто проникают в глубь мозга, их разрыв может приводить к сочетанному внутримозговому и субарахноидальному кровоизлиянию [155]. Разрыву артериовенозной мальформации нередко предшествуют постоянные головные боли [142]. По данным литературы, артериовенозные мальформации по геморрагическому типу протекают у 50,4-70,2%, по эпилептическому - у 23,5-25%, по ишемическому - у 2,2-4,7%), по псевдотуморозному - у 2,6-3,3%. В части наблюдений тип течения был смешанным до 14,8%, в части случаев тип течения не определялся [1,7,33,39,207].
Морфологически артериовенозные мальформации представляют собой неправильное соединение артериальных и венозных сосудов, формирующих ядро, в виде клубка различного размера и формы, минуя капиллярную сеть [89,126,148]. Ядро представлено порочно развитыми сосудами различного диаметра [26,41]. Обычно артериовенозные мальформации, локализованные в поверхностных отделах больших полушарий, представляют собой конус, вершиной направленный к боковым желудочкам. При большом размере патологического образования вершина конуса может локализоваться в субэпендимальных отделах. Кора головного мозга, расположенная под артериовенозной мальформацией, как правило атрофируется, паутинная и особенно сосудистая оболочки склерозируются.
Клинические методы исследования ангиодисплазий
Следует отметить, что значительное снижение жалоб произошло во всех группах больных (уменьшились нарушения сна на 23.9% и 6.7% , метеозависимость на 27.3%о и 31.0%, лабильность АД на 18.7% и 17.0%о, гипестезии на 1.2% и 0.9% , нарушения зрения на 9.0% и 9.7%, судорожный синдром 1.8% и 28.4%о, синкопальные состояния на 2.6%о и 2.0%, тахикардии Все больные предъявляли жалобы на головную боль различной интенсивности. Частота встречаемости различных жалоб достоверно не различалась, однако следует отметить существенное преобладание судорожного синдрома у больных с артериовенозными мальформациями. Также проводился мультифакторный анализ симптомов. При этом нами было выявлено, значительное снижение больных с сочетаниями двух и более симптомов и практически равно у больных с артериальными аневризмами и артериовенозными мальформациями с незначительным преобладанием при артериовенозных мальформациях (рис. 3). Артериальные аневризмы Артериовенозные мальформации Из выше приведенных данных видно, что значительно снизилось количество больных двумя и большим количеством жалоб. Было определено, что сочетание симптомов практически равно в группах больных с артериальными аневризмами и артериовенозными мальформациями.
В связи с тем, что ведущей жалобой пациентов оставалась головная боль нами была проведена оценка тяжести цефалгического синдрома с использованием градаций по Вон Корффу с использованием опросника MIDAS (Табл. 16). Таблица 16 Разделение больных с артериальными аневризмами и артериовенозными мальформациями по степени тяжести головной боли с использованием градаций по Вон Корффу после оперативного лечения
Увеличилось число больных с IV степенью тяжести в 1.3 раза по сравнению с данными до операции, уменьшилось число больных с III степенью, незначительно увеличилось значение со И степенью. Основное число больных перешли из III группы в IV и незначительно во И. Это подчеркивает данные литературы о различиях в оценке результатов хирургического лечения нейрохирургами и больными. Опросники представляют субъективную оценку больного своего состояния.
Из приведенных данных видно, что тесты, исследующие состояние парасимпатического эфферентного пути (коэффициент глубокого дыхания, коэффициент 30:15) показывают пограничные результаты, которые у больных с артериовенозными мальформациями близки к нормальным показателям. Коэффициент Вальсальвы располагается в пределах нормы. Тесты, исследующие состояние эфферентного симпатического пути (проба с АД систолическим, проба с АД диастолическим) демонстрируют уменьшение симпатических влияний, достоверно более выраженное в группе больных с артериовенозными мальформациями (р 0,05). Данные показатели свидетельствуют в пользу нормализации функции вегетативной нервной системы после оперативного лечения.
Всем больным после операции проводилась ультразвуковая доплерография сосудов головного мозга и допл еро графическое исследование кровотока у больных с артериальными аневризмами и артериовенозными мальформациями. На основании полученных данных нами был высчитан коэффициент ассиметрии в группах больных с различной степенью тяжести цефалгического синдрома (Табл. 18). I
Результаты определения коэффициента асимметрии в каротидном и вертебробазилярных бассейнах в группах с различной тяжестью цефалгического синдрома после оперативного лечения
При этом выявлено, что степень асимметрии достоверно уменьшилась, однако, также как и после кровоизлияния, степень асимметрии напрямую связана со степенью тяжести цефалгического синдрома, чем выше коэффициент асимметрии, тем тяжелее цефалгический синдром, и также при артериовенозных мальформациях наблюдается преобладание коэффициента асимметрии в вертебро-базилярной системе, достоверно превышающее уровень коэффициента асимметрии в группе больных с артериальными № п/п Сосудистый бассейн Коэффициент асимметрии Артериальные аневризмы Артериовенозные мальформации IIстепень IIIстепень IVстепень IIстепень IIIстепень IVстепень 1 Переднийкаротидныйбассейн 11,6±2,3 12,9±2,8 17,9 ±3,0 11,2 ±2,1 13,6±3,2 15,6±2,5 2 Вертеброба-зилярнаясистема 8,2 ±2,5 10,0 ±3,0 12,6 ±3,0 18,5±2,4 22,8 ±3,0 25,3 ±2,8 аневризмами, а при артериальных аневризмах преобладание коэффициента асимметрии в каротидном бассейне, достоверно превышающее уровень коэффициента асимметрии в группе больных с артериовенозными мальформациями.
Электроэнцефалографическое исследование. При проведении ЭЭГ у больных с артериовенозными мальформациями и артериальными аневризмами выявлены неспецифические изменения в виде незначительной тенденции к десинхронизации, наличием единичных очагов медленно волновой активности что свидетельствует о уменьшении ишемии ткани головного мозга после оперативного лечения.
Реакция на фотостимуляцию больных с артериальными аневризиами и артериовенозными мальформациями после оперативного лечения При проведении ритмической фотостимуляции у больных с артериальными аневризмами нормэргический тип реагирования встречался в 40%о случаев, отмечалась депрессия основного ритма, которая была как Артериальные аневризмы Артериовенозные мальформации Преобладающийтипреактивности Реакция усвоения ритма Преобладающий тип реактивности Реакция усвоения ритма гиперергический 80% гиперергический 65% длительной у 1/3 больных, так и кратковременной 2/3 больных. Основным типом реактивности, наблюдаемым у пациентов с артериальными аневризмами, являлся гиперергический - реакция усвоения ритма была выявлена в 80% случаев. В группе больных с артериовенозными мальформациями также преобладал гиперергический тип реагирования, реакция усвоения ритма была выявлена в 65% случаев. Наблюдалось расширение синхронизации в сторону как высоких, так и низких частот (с преобладанием а-диапазона). Проведение гипервентиляции выявило у больных с артериальными аневризмами и артериовенозными мальформациями не выявило значительных отличий по сравнению с периодом до кровоизлияния.
Клинико-неврологические данные больных с ангиодисплазиями после субарахноидального кровоизлияния
При изучении тканевых соотношений в стенке определено, что основой средней стенки артериальной аневризмы является соединительная ткань, а в стенке артериовенозных мальформаций кроме соединительной ткани в значительном объеме представлены эластические волокна (Табл. 20).
Было установлено, что в стенке артериальных аневризм преобладает зрелый коллаген I типа, определяется небольшое количество коллагена II типа и практически отсутствует коллаген III типа. В группе артериовенозных мальформации было выявлено два варианта строения стенки: в первой группе стенка преимущественно содержит коллаген I типа, значительное количество коллагена второго типа и до 14% коллагена третьего типа, а во второй группе в стенке приблизительно в равных количествах определялся как коллаген I так и III типа (рис. 13). Стенка артериальной аневризмы
Для исследования функциональной активности рецепторов мембран нами были проведены иммуногистохимические реакции. Для проведения иммуногистохимических реакций использовали антитела к мембранному белку маркеру эндотелия (CD 34) и маркера пролиферации Ki 67.
Экспрессия CD 34 в эндотелии артериовенозных мальформаций. (Увел.хЮО) При этом были выявлены следующие особенности: экспрессия мембранного белка маркера эндотелия была умеренно выражена в эндотелиоцитах артериальных аневризм и выражена в эндотелиоцитах артериовенозных мальформаций, экспрессия маркера пролиферации была низкой в артериальных аневризмах, и незначительно повышенной в эндотелии артериовенозных мальформаций.
Также использовали антитела к эндотелиальному фактору роста, фактору роста фибробластов и трансформирующему фактору роста (3. фактора роста фибробластов была понижена в эндотелии и артериальных аневризм и артериовенозных мальформаций, экспрессия трансформирующего фактора роста (3 понижена в эндотелии артериальных аневризм и в ряде случаев повышена в эндотелии артериовенозных мальформаций, причем повышенный уровень экспрессии наблюдался преимущественно в мальформациях стенка которых содержала большое количество коллагена III типа (Табл. 21). Таблица 21
Экспрессия антигенов эндотелием артериальных аневризм и артериовенозных мальформаций
При сопоставлении результатов клинических, гистологических и иммуногистохимических исследований установлено, что на прогноз влияет содержание в стенке незрелого коллагена первого типа а также иммуногистохимический профиль артериовенозной мальформации, в частности, уровень экспрессии трансформирующего фактора роста-р\ Из 8-ми умерших больных с артериовенозными мальформациями у 7 в стенке определялось большое количество коллагена незрелого типа. В 70% случаев у умерших была повышена экспрессия трансформирующего фактора роста-(3, в группе больных с тяжелыми неврологическими нарушениями экспрессия фактора была повышена у 5,8%. В группе социально адаптированных лиц ни у одного больного повышенной экспрессии трансформирующего фактора роста Р не обнаружилось (рис. 18).
Патогенез неблагоприятного влияния на прогноз повышенной экспрессии трансформирующего фактора роста (3 связан, по-видимому, с тем, что при данном изменении в стенке кровеносного сосуда накапливается незрелый эмбриональный коллаген (коллаген III типа), что подтверждается частым сочетанием этих изменений. Даный вариант межклеточного вещества соединительной ткани обладает пониженной прочностью, по сравнению со зрелым, что приводит при нарушении целостности стенки кровеносного сосуда к более обширному дефекту и развитию массивного кровоизлияния [111], что обуславливает неблагоприятный прогноз, так как увеличивается объем и, соответственно, степень повреждения ткани головного мозга. При артериальных аневризмах неблагоприятный исход связан с более высоким давлением в просвете сосуда и, как следствие, массивным кровоизлиянием и значительным повреждением ткани головного мозга.
Результаты иммуногистохимических методов исследования
Ультразвуковое допплерографическое исследование у больных сосудистыми цефалгиями проводилось на базе кабинета ультразвуковой допплерографии ОКБ им. Н.А. Семашко. Транскраниальная ультразвуковая допплерография (ТКУДГ) проводилась с помощью аппаратов «Премьер» и «Ангиодин» (Россия), датчики на 2 и 4 МГц, исследовалась средняя линейная скорость кровотока в магистральных интракраниальных сосудах (средней мозговой артерии - СМА, передней мозговой артерии -ПМА, задней мозговой артерии - ЗМА, основной артерии - ОА, позвоночной артерии - ПА, сифоне внутренней сонной артерии - ВСА), определялся пульсационный индекс Гослинга. Pi - пульсационный индекс = (Vs-Vd)/Vm, где Vs- систолическая скорость, см/с, Vd - диастолическая скорость кровотока, см/с, Vm - средняя скорость кровотока, этот показатель отражает упруго-эластические свойства артерий [5].
Также изучались индекс циркуляторного сопротивления - RI (индекс Пурселло), RI = (Vs-Vd)/Vs, отражающий уровень периферического сопротивления кровотоку в бассейне лоцируемой артерии.
Исследовался коэффициент асимметрии (КА) - величина, характеризующая степень различия показателей допплеровских сигналов, полученных с симметричных участков одноименных артерий: КА(%) = X-Y/Y 100 , где X - наибольшее значение показателя, Y - наименьшее значение показателя. В норме допустимая величина асимметрии не превышает в среднем 15-20% [26].
Проводилось исследование цереброваскуляной реактивности, осуществлялась инсонация средней мозговой артерии из среднего височного ультразвукового окна.
Состояние тонуса резистивных сосудов головного мозга можно оценить с помощью каротидного компрессионного теста путем расчета коэффициента овершута (КО) области [32]. КО характеризует величину вазодилататорного резерва ауторегуляции мозгового кровообращения и состояние тонуса резистивных сосудов пиально-капиллярной системы. При величинах КО равных 1.39±0.11 имеет место нормальный тонус пиальных сосудов, состоянии тонуса резистивных сосудов пиально-капиллярнои системы, при КО 1.24 -тонус понижен (гипотонус), при КО 1.51 - тонус повышен (гипертонус). Расчет коэффициента овершута (КО): Ко= Vm2/Vml, где Vml - исходная средняя скорость кровотока до компрессии ипсилатеральной общей сонной артерии, Vm2 - средняя скорость первого-второго пиков после прекращения компрессии ОСА.
Динамика биоэлектрической активности у больных с артериальными аневризмами и артериовенозными мальформациями оценивалась посредством проведения электроэнцефалографии на базе кабинета нейрофизиологических исследований. ОКБ им. Н.А. Семашко. Состояние нейродинамики оценивалось с помощью ЭЭГ исследования на компьютерном комплексе "Энцефалан-131-01" версия 4.1М (Украина) с топографическим картированием и спектральным анализом БЭА мозга по основным ритмам по фоновой записи. Проводился визуальный анализ и ЭЭГ-картирование с определением типа ЭЭГ по Жирмунской Е.А.(1996г). Выполнялись функциональные пробы (ритмическая фотостимуляция, гипервентиляция): — Ритмическая фотостимуляция проводилась с помощью стандартного фотостимулятора с частотой от 2 до 36 Гц через один герц, сериями длительностью 5-7 с, с интервалами между ними 5-7 с. — Гипервентиляция провоцировалась интенсивным глубоким дыханием с частотой 20 дыханий в минуту в течении 3 минут [22].
Операционный и секционный материал в течение суток фиксировался в забуференном 10% растворе нейтрального формалина, после чего его проводили по спиртам восходящей крепости и заливали в парафиновые блоки, из которых изготавливали срезы толщиной 6 мм. с помощью микротома Leica RM2125 (Германия): — гистологические препараты, окрашенные гематоксилин эозином, пикрофуксином и сириус-ред изучали с помощью микроскопа Leica DM500 (Германия) — Иммуногистохимический метод проводился для выявления рецепторов к CD34, (DACO 1:50), сосудистому эндотелиальному фактору роста (ЭФР; "DBC", 1:50), трансформирующему фактору роста 3 (ТФР-(3; "DBC",1:100), основному фактору роста фибробластов ((3-ФРФ; "BioGenex", 1:30) и маркеру пролиферации Ki-67 ("BioGenex", 1:30) Данное исследование проводили иммуно-пероксидазным методом с докраской ядер гематоксилином. Полученные препараты изучали на микроскопе Leica DM500 (Германия). Результаты реакции с антителами к CD 34, факторам роста оценивали полуколичественным методом с учетом интенсивности окрашивания клеточной стенки и цитоплазмы эндотелиоцитов и выражали в баллах: 0 — отрицательная реакция, 1 балл — слабая реакция, 2 балла — реакция средней интенсивности, 3 балла — интенсивная реакция. Оценку числа Кі-67 позитивных клеток выражали в процентах к общему количеству эндотелиоцито в. — морфометрическим исследованием тканевых соотношений в 50-ти полях зрения при увеличении микроскопа 200Х. Проводилась статистическая обработка данных с использованием компьютерной программы Statistica 6.0. (2006г.).
Похожие диссертации на Клинико-морфологические особенности артериальных аневризм и артеориовенозных мальформаций сосудов головного мозга
-
