Влияние растительных сборов с противовоспалительной активностью на процессы свободно-радикального окисления [Электронный ресурс] Замятина Светлана Владимировна

Содержание к диссертации

Введение

Глава 1. Обзор литературы 11

1.1 Антиоксидантная активность, полифенольных соединений (флавоноидов, дубильных веществ, сложных эфиров, кумаринов) ...11

1.2 Краткая характеристика растений, включенных в состав изучаемых сборов 24

Глава 2. Материалы и методы 43

2.1 Приготовление водных извлечений из исследуемых сборов 43

2.2 Определение влияния водных извлечений из исследуемых сборов на прооксидантную и антиоксидантную активность в экспериментах in vitro 46

2.3 Определение показателей оксидантного и антиоксидантного статуса крови крыс в экспериментах in vivo 48

2.4 Моделирование оксидативного стресса у экспериментальных животных 55

2.5 Изучение влияния длительного введения водных извлечений из сборов на показатели оксидантного и антиоксидантного статуса крови крыс с экспериментальным воспалением 55

Глава 3. Результаты исследования ...57;

3.1 Влияние водных извлечений из сборов на показатели прооксидантной и антиоксидантной активности в экспериментах in vitro 57

3.2 Изменение показателей оксидантного и антиоксидантного статуса крови крыс в условиях оксидативного стресса, индуцированного экспериментальным воспалением 61

3.3 Влияние длительного применения водных извлечений сборов на показатели оксидантного и антиоксидантного статуса крови крыс с экспериментальным воспалением 69

3.3.1 Динамика показателей оксидантного статуса 70

3.3.2 Динамика показателей антиоксидантного статуса 89

Заключение 119

Выводы і.133

Список литературы 134

• Краткая характеристика растений, включенных в состав изучаемых сборов
• Определение влияния водных извлечений из исследуемых сборов на прооксидантную и антиоксидантную активность в экспериментах in vitro
• Изучение влияния длительного введения водных извлечений из сборов на показатели оксидантного и антиоксидантного статуса крови крыс с экспериментальным воспалением
• Изменение показателей оксидантного и антиоксидантного статуса крови крыс в условиях оксидативного стресса, индуцированного экспериментальным воспалением

Введение к работе

Актуальность темы: В настоящее время большое внимание уделяется проблеме токсичности кислорода, которая обусловлена его частично восстановленными формами. Наиболее важными из них являются: супероксид 02 , перекись водорода Н2Ог и гидроксильный радикал "ОН, именуемые активными формами кислорода (АФК). Эти атомы или молекулы имеют на внешней оболочке неспаренные электроны, что определяет их реакционноспособность и постоянное стремление ликвидировать электронную неспаренность за счет взаимодействия с электронами других веществ. В организме АФК выполняют позитивные функции, связанные с продуцированием энергии, участием в фагоцитозе, регулированием клеточного роста и межклеточной сигнализации, а также с биосинтезом биологически активных веществ [66]. В случае гиперпродукции они могут оказывать деструктивное действие. При этом нарушается структурно-функциональная организация фосфолипидов клеточных мембран, что является одним из ведущих универсальных механизмов повреждения клетки [1, 9]. В организме имеется ряд систем антиоксидантной защиты, разделяющиеся на энзимную и метаболическую. В ферментативной системе главными являются супероксиддисмутаза (СОД), каталаза (КАТ), метионинсульфоксидредуктаза, а также глутатионпероксидаза (ГПО) и глутатионредуктаза. Метаболическая система включает мочевую кислоту, сс-токоферол, аскорбат, Р-каротин. Если в организме сбалансированный механизм образования свободных радикалов и антиоксидантной защиты выходит из-под контроля, то инициируется развитие патологического процесса за счет активации свободно-радикального окисления (СРО). Выяснено, что при действии на организм человека различных неблагоприятных факторов химической, физической и биологической природы, а также стрессорных ситуаций увеличивается активность СРО. В силу цепного лавинообразного характера СРО при нарушении контроля над этим процессом имеет место эффект многократного усиления первичного повреждающего воздействия. СРО способствует развитию различных заболеваний: ишемической болезни сердца, инфаркта миокарда, инсульта, атеросклероза и его тромбонекротических осложнений, диабетических ангиопатий, катаракты, нейродегенеративных, аутоиммунных и воспалительных заболеваний, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, гепатитов, стресса, артрита, пародонтита, лучевой болезни; рассматривается его роль в онкогенезе, хронизации ряда болезней и старении организма [11, 82, 96, 104]. В этой связи вполне объясним большой интерес к средствам, в том числе и растительного происхождения, обладающим антиоксидантными свойствами. Известно, что синтетические лекарственные средства обладают рядом серьезных недостатков. В то же время, препараты растений, как правило, обладают меньшими токсическими эффектами, не приводят к развитию толерантности, не вызывают сдвигов кислотно-основного равновесия в организме, значительно более дешевы в производстве по сравнению с синтетическими. Кроме того, следует учитывать многообразие флоры Алтайского края, которая насчитывает более 2000 видов и с давних времен применяется в народной медицине для лечения различных заболеваний. При этом особый интерес вызывает изучение не отдельных растений, а их композиций, которые содержат целый комплекс биологически активных веществ (БАВ) и могут оказывать комплексное и многостороннее воздействие на организм. Длительное время на кафедрах фармакологии и фармакогнозии АГМУ изучаются сборы лекарственных растений Алтайского края. Установлены выраженные противовоспалительные, противомикробные, мочегонные свойства некоторых из них [14, 17, 18, 33, 42, 64, 74, 76, 85]. Эти положительные свойства раскрыты на феноменологическом уровне без достаточных обоснований механизмов действия. В связи с этим представлялось важным выяснить, обладают ли сборы, проявляющие противовоспалительную активность, антиоксидантными свойствами.

Цель исследования: Установить возможность влияния сборов из лекарственных растений Алтайского края на процессы свободно-радикального окисления как одного из важнейших механизмов их противовоспалительного действия.

Задачи исследования: Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Выяснение возможного антиоксидантного действия исследуемых сборов в условиях in vitro.

2. Определение показателей оксидантного и антиоксидантного статуса крови интактных крыс.

3. Моделирование активации свободно-радикального окисления в условиях экспериментального воспаления у животных.

4. Определение влияния сборов лекарственных растений на оксидантный и антиоксидантний статусы при длительном введении крысам.

5. Сравнение возможной антиоксидантной активности изученных сборов с выявлением наиболее перспективных композиций.

Научная новизна работы:

1. Впервые изучено влияние ряда сборов лекарственных растений Алтайского края на процессы свободно-радикального окисления в экспериментах in vitro и in vivo.

2. Исследованы механизмы антиоксидантной защиты в норме, а также на фоне экспериментального воспаления.

3. Получены данные относительно антиоксидантного действия изученных сборов в условиях их длительного введения животным.

4. Дана сравнительная оценка антиоксидантной активности 6 изученных лекарственных сборов и выяснены наиболее эффективные из исследуемых композиций.

Теоретическая и практическая значимость работы:

Наличие антиоксидантной активности у исследуемых сборов лекарственных растений приостанавливает прогрессирующее развитие процесса свободно-радикального окисления, что способствует скорейшему восстановлению поврежденных функций организма. Сравнение механизмов антиоксидантной активности лекарственных композиций позволяет предположить, что сборы, содержащие ортилию однобокую, душицу обыкновенную, календулу лекарственную и рябину обыкновенную, могут быть рекомендованы для изучения в клинике при патологиях, связанных с активацией процесса свободно-радикального окисления. Сборы, включающие бруснику обыкновенную и грушанку круглолистную, могут быть испытаны как профилактические средства при возможном развитии свободно-радикальных повреждений.

В теоретическом плане результаты исследования расширили знания научной и практической фитотерапии об антиоксидантних свойствах лекарственных растений.

Основные положения, выносимые на защиту:

.1. Доказано, что в условиях in vitro сборы, содержащие ортилию однобокую, душицу обыкновенную, календулу лекарственную и рябину обыкновенную, оказывают прямое антиоксидантное действие. Сборы, включающие бруснику обыкновенную и грушанку круглолистную, подобным эффектом не обладают.

2. Создана адекватная модель активации процесса свободно- радикального окисления в условиях экспериментального воспаления у подопытных животных.

3. Исследовано влияние 6 композиций лекарственных растений на оксидантный и антиоксидантный статус крови при их длительном введении экспериментальным животным. Выяснено, что в опытах in vivo все исследуемые сборы обладают выраженным антиоксидантным действием.

4. Установлено, что антиоксидантная эффективность сборов, содержащих ортилию однобокую, душицу обыкновенную, календулу лекарственную и рябину обыкновенную, обусловлена их прямым воздействием на процесс свободно-радикального окисления, а сборов, включающих бруснику обыкновенную и грушанку круглолистную, связана с их способностью опосредованно стимулировать механизмы антиоксидантной защиты организма через первичную активацию параметров оксидантного статуса.

Публикации: По теме диссертации опубликовано 9 работ, 2 из которых - в центральной печати.

Апробация материалов диссертации: Материалы диссертации доложены на XII съезде физиологического общества им. И.П.Павлова (г. Санкт-Петербург, 2004 г.), на конференции, посвященной 50-летию АГМУ (г. Барнаул, 2004 г.), на Всероссийской научно-практической конференции "Болезни почек: эпидемиология, диагностика, лечение", посвященной 60- летию вхождения Тувинской Народной Республики в состав Российской Федерации (г. Кызыл, 2004 г.), на VI городской конференции "Молодежь - Барнаулу" (г. Барнаул, 2004 г.), на совместной научно-практической конференции АГМУ и фармацевтической компании "Эвалар" (г. Бийск, 2004 г.), на VI конгрессе молодых ученых и специалистов (г. Томск, 2005 г.), на Всероссийской научно-практической конференции (г.Новосибирск, 2005 г.).

Объем и структура работы: Диссертация изложена на 154 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 129 источников, и приложения. Диссертация иллюстрирована 28 рисунками и 10 таблицами.

Краткая характеристика растений, включенных в состав изучаемых сборовq

Для исследования возможной антиоксидантной активности было составлено 6 композиций, в состав которых вошли широко распространенные на Алтае лекарственные растения, обладающие различными видами фармакологической активности. Длительное время на кафедрах фармакологии и фармакогнозии АГМУ изучались данные лекарственные сборы. Было установлено наличие у них выраженной противовоспалительной активности, противомикробного действия, а также мочегонного эффекта. В состав лекарственных композиций вошли следующие растения.

Ортилия однобокая (Orthilia secunda (L.) Housed: Содержит арбутин (3,3%), флавоноиды (до 11,06%), галловую кислоту, гидролизуемые и конденсированные дубильные вещества (12%), тритерпеноиды: урсоловая и олеаноловая кислоты, тараксерол, аскорбиновую кислоту (53 мг/%), иридоиды [12, 16, 44, 65, 83].

Листья ортилии однобокой применяются в народной медицине в качестве диуретических, антимикробных, дезинфицирующих средств при заболеваниях почек и мочевого пузыря, простатите. Она обладает кровоостанавливающими и вяжущими свойствами. Настойку используют при эпилепсии, а в виде спринцеваний - при эрозии шейки матки. Также ортилия однобокая применяется при бесплодии воспалительного генеза, спаечных процессах, аднекситах [13, 64, 87]. Зверобой продырявленный ("Hypericum perforatum L.): Содержит конденсированные антраценпроизводные — гиперицин и псевдогиперицин, флавоноиды (кверцетин, кверцитрин, изокверцитрин, рутин, гиперин, кемпферол, мирицетин), катехины, лейкоантоцианидины, антоцианы, кумарины, фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества конденсированной группы (2,8-12,3%), марганец, цинк, эфирные масла (0,09-0,3%), состоящие из а-пинена, цинеола, мирцена, витамины Си Е, каротиноиды, органические кислоты, каротин [8, 49, 86, 89, 97]. Отвар травы зверобоя продырявленного применяют для лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы, желудочно кишечного тракта, верхних дыхательных путей, печени, почек, мочевого пузыря; как успокаивающее и обезболивающее средство при головных болях, истерии; как вяжущее, противовоспалительное и антисептическое - при колитах, гингивитах, стоматитах. Настойка и масляная вытяжка используется при кожных заболеваниях и как ранозаживляющее средство [55, 61, 62].

Ромашка аптечная fChamomilla recutita (Т.) Rauschert): Содержит эфирное масло (0,2-0,8%), которое включает хамазулен (7%), сесквитерпеноиды (до 50%), монотерпен мирцен; а также значительные количества флавоноидов (производные апигенина, лютеонина, кверцетина), кумарины, органические кислоты, аскорбиновую кислоту, каротин, полисахариды, горечи, слизь [23, 72, 89]. Цветки ромашки аптечной применяют в виде настоя, а также в составе желудочных и мягчительных сборов; в качестве спазмолитических средств при спазмах кишечника, метеоризме, диарее, гастритах, колитах. Ромашка аптечная обладает противовоспалительными, регенераторными и антивирусными свойствами [61, 93].

Череда трехраздельная (Bidens tripartita L.V. Содержит каротиноиды (до 60-70 мг%), флавоноиды лютеонин-7-глюкозид, халкон бутеин, аурон сульфуретин, сульфуреин, цинарозид и др. (более 10 видов), кислоту аскорбиновую (60-70 мг%), кумарины, полисахариды, дубильные вещества, эфирное масло, горечи [93].

Траву череды трехраздельной применяют внутрь в виде настоя как мочегонное, желчегонное и потогонное средство, при почечнокаменной болезни, воспалительных заболеваниях легких, гипертонической болезни, артритах, радикулите; а также наружно в виде ванночек, компрессов, примочек как ранозаживляющее, антимикробное, регенераторное средство. Обладает антиаллергическими свойствами [62, 81]. Бадан толстолистный (Bergenia crassifolia (Т.) Fritsch.): Содержит полифенольный комплекс, который включает простые фенолы (гидрохинон (2-4%), арбутин (до 22%)), флавоноиды (кверцетин, кемпферол, рутин, апигенин, лютеолин), изокумарин (бергенин), дубильные вещества гидролизуемой (до 30%, эфиры оксикоричных и оксибензойных кислот - о пирокатехиновой, ванилиновой, эллаговой, о-кумаровой, феруловой, флороглюцинкарбоновой, синаповой, кофейной) и конденсированной групп (катехинами), а также сахара (глюкоза); имеющаяся липофильная фракция представлена хлорофиллами, каротиноидами, ретинолами, токоферолами, также содержатся макро- и микроэлементы, аскорбиновая кислота (до 260 мг%) [8, 24, 47, 90, 100]. Отвар листьев бадана толстолистного применяют в качестве мочегонного, антимикробного, вяжущего, местного противовоспалительного средства, в стоматологической, гинекологической практике, при заболеваниях желудочно кишечного тракта. Также бадан толстолистный эффективен как адаптогенный, иммуностимулирующий, антигипоксический препарат; возможно его применение в комплексном лечении острых респираторно-вирусных инфекций, острых бронхитов, фолликулярных ангин [29, 30, 36, 80, 85].

Определение влияния водных извлечений из исследуемых сборов на прооксидантную и антиоксидантную активность в экспериментах in vitro

Общая прооксидантная активность (ОПА) рассматривалась как показатель суммарной концентрации всех прооксидантов и свободно-радикальных метаболитов в плазме крови. Ее оценивали по накоплению в модельной системе продуктов перекисного окисления ТВИН-80, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК). Основную часть этих продуктов, как известно, составляет малоновый диальдегид [84].

Для проведения данной методики использовались следующие реактивы: 1. 1% раствор моноолеата сорбитана (ТВИН-80) (ICN Biomedicals Inc.); 2. 40% раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ) (Sigma); 3.0,25% раствор тиобарбитуровой кислоты (ТБК): 0,87; (водного) ТБК (Sigma) + до 100 мл 0,13% раствора гидроксида натрия (Sigma). Определение ОПА проводилось следующим образом: В посуду из темного стекла с притертыми пробками объемом 200 мл вносили: как в опытную, так и в контрольную пробы по 2 мл раствора ТВИН-80, в опыт добавляли 0,2 мл отвара исследуемого сбора, а в контроль - соответствующий объем дистиллированной воды. После инкубирования при температуре 40 в течение 48 часов содержимое исследуемых проб переливали в пластиковые контейнеры. Как к опытной, так и к контрольной пробам добавляли по 1 мл раствора ТХУ и оставляли при комнатной температуре на 60 минут. После центрифугирования при 6000 оборотов в течение 15 минут 2 мл супернатанта смешивали с 1 мл раствора ТБК и инкубировали на кипящей водяной бане в течение 15 минут. При этом ТБК реагировала с малоновым диальдегидом с образованием триметинового комплекса розового цвета. Пробы охлаждали и измеряли оптическую плотность на спектрофотометре при 532 нм против дистиллированной воды. Расчет ОПА проводили по формуле: ОПА(%)=Е Ек Л00, Ео где Е0 - экстинкция опытной пробы; Ек — экстинкция контрольной пробы. Общая антиоксидантная активность (ОАА) оценивалась как интегральный показатель активности ферментных и неферментных факторов нейтрализации свободных радикалов. Она определялась по степени ингибирования Fe/аскорбат — индуцированного окисления ТВИН-80 гемолизатом [84]. Для проведения данной методики использовались следующие реактивы: 1. 1% раствор моноолеата сорбитана (ТВИН-80) (ICN Biomedicals Inc.); 2. 1 мМ раствор сульфата железа (ЗАО "Мосреактив"); 3. 10 мМ раствор аскорбиновой кислоты (Sigma); 4. 40% раствор ТХУ (Sigma); 5. 0,25% раствор ТБК: 0,87 (водного) ТБК (Sigma) + до 100 мл 0,13% раствора гидроксида натрия (Sigma).

Определение ОАА проводилось следующим образом: В посуду из темного стекла с притертыми пробками объемом 200 мл вносили: как в опытную, так и в контрольную пробы по 2 мл раствора ТВИН-80, по 0,2 мл раствора сульфата железа и по 0,2 мл раствора аскорбиновой кислоты, в опыт добавляли 0,1 мл исследуемого сбора, а в контроль — соответствующий объем дистиллированной воды. После инкубирования при температуре 40 в течение 48 часов содержимое исследуемых проб переливали в пластиковые контейнеры. Как к опытной, так и к контрольной пробам добавляли по 1 мл раствора ТХУ и оставляли при комнатной температуре на 60 минут. После центрифугирования при 6000 оборотов в течение 15 минут 2 мл супернатанта смешивали с 1 мл раствора ТБК и инкубировали на кипящей водяной бане в течение 15 минут. Пробы охлаждали и измеряли оптическую плотность на спектрофотометре при 532 нм против дистиллированной воды.

Расчет ОАА проводили по формуле: ОАА(%) = Ек Е-100, Ек где Ек — экстинкция контрольной пробы; Е0-экстинкция опытной пробы. Полученные результаты здесь и далее обрабатывали статистически методом вариационных рядов с использованием критериев Стьюдента. Всего было поставлено 137 опытов in vitro. 2.3 Определение показателей оксидантного и антиоксидантного статуса крови крыс в экспериментах in vivo Эксперименты проводились на белых крысах обоего пола массой около 230 г. Кровь для анализа брали путем декапитации. Определяли показатели оксидантного статуса: ОПА и тиобарбитурат-реактивные продукты (ТБРП). Рассматривались также показатели антиоксидантной системы: ОАА и активность антиоксидантных ферментов - каталазы (КАТ), супероксиддисмутазы (СОД) и глутатионпероксидазы (ГПО).

Общая прооксидантная активность (ОПА): определялась по методике описанной выше (пункт 2.2). За исключением того, что в опытную пробирку вместо исследуемого сбора добавляли по 0,2 мл плазмы крови. Расчет ОПА проводили, как описано в пункте 2.2.

Тиобарбитурат-реактивные продукты (ТБРЩ - продукты окисления жирных кислот. Основную часть этих продуктов составляет малоновый диальдегид (МДА). МДА образует с ТБК флюоресцентный комплекс, интенсивность света которого прямо пропорциональна концентрации МДА [84, 88].

Изучение влияния длительного введения водных извлечений из сборов на показатели оксидантного и антиоксидантного статуса крови крыс с экспериментальным воспалением

Для моделирования состояния оксидативного стресса в экспериментах in vivo исследовалась кровь белых крыс обоего пола средней массой 230 г. Сравнительное исследование проводилось на интактных животных, а также на крысах, у которых индуцировалось формалиновое воспаление. В плазме крови определяли показатели оксидантного статуса - общую прооксидантную активность (ОПА) и содержание малонового диальдегида (показатель ТБРП). В гемолизате эритроцитов — общую антиоксидантную активность (ОАА) и содержание антиоксидантных ферментов - каталазы (КАТ), супероксиддисмутазы (СОД) и глутатионпероксидазы (ГПО). Показатели, полученные у животных, пребывавших в условиях оксидативного стресса, сравнивали с таковыми у интактных животных.

Как известно, субплантарное введение раствора формалина в обе задние конечности приводит к развитию выраженного двустороннего воспалительного отека. При этом наблюдалось последовательное развитие процесса с достижением пика воспалительной реакции на 3 сутки после инъекций флогистика, когда объем конечностей превосходил исходные показатели в среднем на 85%. После этого происходило постепенное ослабление экссудативного воспалительного процесса, и через 5 суток объем задних лап уже практически не отличался от исходных показателей, хотя и был все еще несколько выше последних [32].

Изменения параметров оксидантного статуса,

зафиксированные нами в этих условиях, представлены на рисунке 3, из которого видно, что в результате введения формалина происходило быстрое увеличение показателей оксидантного статуса. Наиболее выраженный рост параметра оксидантной системы — ОПА приходился на 2 сутки после введения флогистика. Так, ОПА достоверно увеличилась с 45,1±1,06% у интактных животных до 52,8±2,56% - на 1 сутки после введения формалина (р 0,01) и до 60,1±1,25% - на 2 сутки (р 0,001). На 3 сутки с момента индуцирования оксидативного стресса ОПА достоверно снижалась, составляя 48,9±1,18%. К 5 суткам показатель ОПА нормализовался и был равен 45,8±1,56%, что соответствовало таковому параметру у интактных животных.

Что касается ТБРП, то его показатель увеличивался на 1 сутки после введения флогогенного агента по сравнению с интактными животными. Так, содержание малонового диальдегида на 1 сутки составляло 4,2±0,18 мкМ (р 0,001) по сравнению с 2,5±0,18 мкМ в контроле. На 2 сутки формалинового отека данный параметр снижался. При этом концентрация продуктов перекисного окисления в плазме крови крыс достигала 3,4±0,16 мкМ (р 0,001). На 3 сутки экспериментального отека значения ТБРП практически не изменялись по сравнению с данным параметром предыдущих суток. Так, на 3 сутки ТБРП составил 3,4±0,18 мкМ. Однако, показатель был достоверно выше такового по сравнению с интактными животными (р 0,001). На 5 сутки после развития оксидативного стресса показатель ТБРП снижался до уровня интактных крыс и был равен в среднем 2,3±0,18 мкМ, что свидетельствует о прекращении дальнейшего повреждения клеточных мембран и, как следствие, патологического процесса.

Таким образом, можно сделать вывод, что содержание тиобарбитурат-реактивных продуктов в плазме крови крыс на фоне формалинового воспаления достигало максимума уже на 1 сутки после введения флогистика. В последующие сутки показатель ТБРП постепенно снижался и уже на 5 сутки параметр ТБРП соответствовал норме. Изменения показателей антиоксидантной системы представлены на рисунках 4 и 5. Анализируя данные рисунка 4, видно, что после введения флогистика происходит постепенный рост показателей антиоксидантных ферментов каталазы (КАТ) и супероксиддисмутазы (СОД) в ответ на увеличение в крови количества свободных радикалов. Пик активации антиоксидантных механизмов приходился на 3 сутки после возникновения воспаления. Так, активность каталазы (КАТ) с 12,2±1,27% в контроле достоверно увеличивалась до 15,2±0,44% на 1 сутки (р 0,05), до 16,8±0,50% на 2 сутки (р 0,01) и до 22,4±1,02% (р 0,001) на 3 сутки после возникновения воспаления. Активность супероксиддисмутазы (СОД), которая у интактных-животных составляла Г6,9±0,81%, на 2 сутки имела тенденцию к увеличению и была равна 18,6±0,67%, но уже на 3 сутки была достоверно выше и составляла 28,3±1,05% (р 0,001).

Изменение показателей оксидантного и антиоксидантного статуса крови крыс в условиях оксидативного стресса, индуцированного экспериментальным воспалением

Исследования проведены на белых крысах обоего пола массой около 230 г. Животным в течение 14 дней перорально вводили отвары сборов, а затем по методике, описанной выше, вызывали формалиновое воспаление обеих задних конечностей. В результате проведенных экспериментов оказалось, что на фоне длительного введения всех исследуемых сборов масса тела подопытных крыс несколько увеличилась и составила в среднем 260 г, что не отличалось от динамики показателей контрольных животных и косвенно свидетельствует о том, что исследуемые сборы не обладают токсическим воздействием на организм. Кровь для анализа брали через 3 суток после введения флогистика, т. е. на пике оксидативного стресса, в тот период времени, когда происходит максимальная активация параметров антиоксидантного статуса, что, вероятно, обеспечивает снижение оксидантных показателей. В плазме крови определяли параметры оксидантной системы - ОПА и ТБРП. В гемолизате эритроцитов — антиоксидантные показатели - ОАА, КАТ, СОД и ГПО. Полученные результаты сравнивали с данными, полученными у контрольных животных, которым на протяжении 14 дней вводили равнообъемное количество воды, субплантарно инъецировали формалин и на 3 сутки после этого определяли показатели оксидантного и антиоксидантного статусов.

Изменения показателей оксидантного статуса крови крыс с экспериментальным воспалением на фоне длительного применения водных извлечений исследуемых сборов отражены в приложении 3.

Изменения показателя общей прооксидантной активности (ОПА) при применении сбора, содержащего ортилию однобокую, представлены на рисунке 6. Как видно из рисунка, этот параметр на фоне введения отвара исследуемого сбора был достоверно ниже такового у контрольных крыс на пике формалинового воспаления. Так, данный показатель для исследуемого сбора составил 32,8±1,29% против 48,9±1,18% в контроле (р 0,001). Кроме того, данный параметр был достоверно ниже такового у интактных животных, который составлял 45,1±1,06% (р 0,001).

Что касается показателя ТБРП (данные представлены на рисунке 7), то его величина у крыс, получавший сбор, содержащий ортилию однобокую, практически соответствовала таковому показателю в контроле. Так, при применении исследуемого отвара лекарственных растений данный параметр был равен 3,5±0,15 мкМ при 3,4±0,16мкМ в контрольной группе. Хотя этот показатель был выше, чем у интактных животных, что является закономерной реакцией на введение флогогенного агента. У интактной группы крыс параметр, ТБРП составлял 2,5±0,18 мкМ (р 0,001). Нужно отметить, что содержание малонового диальдегида при введении животным отвара сбора, включающего ортилию однобокую, было достоверно ниже по сравнению с 1 сутками оксидативного стресса, т. е. с тем периодом времени, который сопровождается максимальной активацией показателей оксидативного статуса. Содержание тиобарбитурат-реактивных продуктов на пике оксидативного стресса составляло 4,2±0,18 мкМ (р 0,001).

Такие изменения оксидантных показателей на фоне введения животным лекарственного сбора, содержащего ортилию однобокую, подтверждает предположение о том, что в крови подопытных крыс количество свободно-радикальных производных значительно меньше, чем у контрольных.

Примечание. Здесь и на рисунках 8, 9, 11, 13 и 15 по оси абсцисс - И - интактная группа; К - контрольная группа; О -опытная группа, получавшая исследуемый сбор; по оси ординат -прооксидантная активность, %.

Здесь и далее отмечены достоверные изменения к показателям контрольных животных, - к параметрам интактных крыс. 6-І 5- 4- П на фоне длительного эжащего ортилию однобокую унках 10, 12 и 14 по оси абсцисс -:онтрольная группа; О - опытная ЇМЬІЙ сбор; по оси ординат -ггида, мкМ.

Примечание. Здесь и на рис И - интактная группа; К - і группа, получавшая исследу содержание малонового диальд При применении сбора, содержащего бруснику обыкновенную, показатель ОПА был достоверно ниже соответствующего параметра у контрольных животных (данные представлены на рисунке 8). Так, его величина составляла 40,8±1,08% против 48,9±1,18% в контроле (р 0,001). Кроме того, данный параметр был достоверно ниже такового у интактных животных, который соответствовал 45,1±1,06% (р 0,001). Это может свидетельствовать о том, что применение сбора, включающего бруснику обыкновенную, способствует уменьшению в крови количества свободно-радикальных метаболитов по сравнению с животными, не получавшими отвар исследуемых лекарственных растений.

Изменения показателя ТБРП представлены в таблице 3, из которой видно, что при применении сбора, содержащего бруснику обыкновенную, содержание малонового диальдегида было достоверно выше по сравнению с контролем. Так, на фоне введения исследуемого отвара лекарственных растений показатель ТБРП составлял 4,0±0,14 мкМ против 3,4±0,16 мкМ в контроле (р 0,02). Но, этот параметр был ниже по сравнению с значениями ТБРП на пике воспалительного процесса. В этом случае содержание малонового диальдегида соответствовало 4,2±0,18 мкМ (р 0,5). Как и в случае со сбором, включающим ортилию однобокую, при применении данной лекарственной композиции показатель ТБРП был достоверно выше по сравнению с интактной группой животных. У здоровых крыс тиобарбитурат-реактивные продукты составляли 2,5±0,18 мкМ (р 0,001). Такая картина изменений показателя ТБРП может свидетельствовать о том, что в крови произошло некоторое накопление продуктов пероксидации мембран под действием свободных радикалов. Рисунок 8 - Показатели общей прооксидантной активности (ОПА) на фоне длительного введения сбора, содержащего бруснику обыкновенную

Здесь и далее отмечены достоверные изменения к параметрам контрольных животных, подчеркнутые показатели, достоверно отличающиеся от значений интактных крыс. На фоне введения подопытным животным сбора, содержащего душицу обыкновенную, также отмечались изменения показателей оксидантного статуса. Так, показатель ОПА был достоверно ниже соответствующего параметра у контрольных животных (данные представлены рисунке 9). Этот параметр на фоне длительного введения исследуемого сбора лекарственных растений составлял 31,9±0,9б% против 48,9±1,18% в контроле (р 0,001). Также данный показатель был достоверно ниже такового у интактных животных, который соответствовал 45,1±1,06% (р 0,001).

Похожие диссертации на Влияние растительных сборов с противовоспалительной активностью на процессы свободно-радикального окисления [Электронный ресурс]

Влияние фуросемида на активность изосомальных ферментов ишемизированных почек крыс и процессы перекисного окисленияПетренко, Наталья Александровна

Влияние некоторых сердечно-сосудистых препаратов на процессы перекисного окисления липидов при миокардиодистрофии в экспериментеВолкова Юлия Владимировна

Фармакологическая активность сборов лекарственных растений из флоры Алтая и их влияние на функцию почекКривова Ольга Шукурулловна

Фармакологическая коррекция процессов перекисного окисления липидов при длительном иммобилизационном стрессеГераськина, Марина Александровна

Коррекция фенюльсом анемического синдрома и процессов перекисного окисления липидов в эритроцитах при клещевых нейроинфекцияхКощевец Екатерина Сергеевна

Влияние аэрионов кислорода на перекисное окисление дипидов и некоорые антиоксидантные ферменты при комплексной фармакотерапии острого панкреатитаМельников, Владимир Михайлович

Исследование влияния препаратов железа с антиоксидантами на показатели перекисного окисления липидов в тканях различных органов экспериментальных животныхМинеичева Юлия Вячеславовна

Влияние димефосфона, мексидола и вамина на гемостаз и перекисное окисление липидов при длительном иммобилизационном стрессеВинтин, Николай Александрович

Влияние комбинированного применения препаратов железа с антиоксидантами на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в крови экспериментальных животныхАйвазян Гарик Гагикович

Влияние препаратов ионного и неионного железа на состояние иммунитета и показатели перекисного окисления липидов рта у беременных с железодефицитной анемиейПетрова Екатерина Александровна