Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Климактерические расстройства и методы их коррекции 9
1.1. Климактерический синдром 9
1.2. Заместительная гормональная терапия 15
1.3. Альтернативные методы коррекции климактерических рас-стройств 21
1.4. Биологические свойства изофлавоноидов 24
1.5. Спектр фармакологической активности маакии амурской 34
ГЛАВА II. Материалы и методы исследования . 40
2.1. Объекты исследования 40
2.2. Методы исследования 41
2.3. Техника проведения экспримента 48
ГЛАВА III. Результаты собственных исследований 50
3.1. Исследование антитромбоцитарной и гемореологической активности суммарного экстракта маакии амурской и его отдельных фракций на модели гипервязкости крови ex vivo 50
3.2. Влияние экстракта маакии амурской и этинилэстрадиола на гемореологические показатели у крыс после овариоэк-томии 59
3.3. Влияние экстракта маакии амурской и этинилэстрадиола на процессы перекисного окисления липидов и липидный состав мембран эритроцитов у крыс после овариоэктомии 70
3.4. Влияние экстракта маакии амурской и этинилэстрадиола на формирование внутрисосудистого тромба и функцио-нальное состояние эндотелия у крыс после овариоэктомии 78
3.4.1. Влияние экстракта маакии амурcкой и этинилэстрадиола на формирование тромба у крыс после овариоэктомии 78
3.4.2. Влияние экстракта маакии амурской и этинилэстрадиола на антитромбоцитарную активность сосудистой стенки у крыс после овариоэктомии 80
3.4.3. Влияние экстракта маакии амурcкой и этинилэстрадиола на вазодилятационную функцию эндотелия у крыс после овариоэктомии 81
3.4.4. Влияние экстракта маакии амурской и этинилэстрадиола на уровень нитритов в сыворотке крови крыс после ова-риоэктомии 83
3.5. Влияние экстракта маакии амурcкой и этинилэстрадиола на показатели гемостаза у крыс после овариоэктомии 85
ГЛАВА IV. Обсуждение результатов исследования 88
Выводы 105
Список литературы 106
- Заместительная гормональная терапия
- Влияние экстракта маакии амурской и этинилэстрадиола на гемореологические показатели у крыс после овариоэк-томии
- Влияние экстракта маакии амурской и этинилэстрадиола на формирование внутрисосудистого тромба и функцио-нальное состояние эндотелия у крыс после овариоэктомии
- Влияние экстракта маакии амурской и этинилэстрадиола на уровень нитритов в сыворотке крови крыс после ова-риоэктомии
Введение к работе
Актуальность проблемы. По статистике средняя продолжительность жизни женщин неуклонно растет и более 1/3 своей жизни женщина находится в периоде пери- и постменопаузы, т.е. в условиях возрастных изменений гомеоста-за, сопровождающихся глубокой перестройкой гормонального профиля и психофизиологических реакций на эти изменения. По прогнозам ВОЗ к 2015 г. 46% женщин окажется в возрасте старше 45 лет. Проблема сохранения здоровья женщин 45-65 лет актуальна и для России в XXI веке, где данная возрастная группа составляет почти одну пятую часть населения (29,6 млн) [2, 94]. В связи с этим более пристального внимания заслуживает вопрос адекватного лечения климактерических проблем, возникающих более чем у 70% женщин в указанный период жизни [38, 91, 98].
У женщин на фоне эстрогенного дефицита, вызванного естественной или хирургической менопаузой, помимо вегетативных и психоэмоциональных симптомов, снижающих качество жизни, отмечен значительный рост сердечнососудистых заболеваний [38, 47, 59, 72, 93, 94, 98], важным звеном патогенеза которых являются нарушения реологических свойств крови, гемостатический дисбаланс, эндотелиальная дисфункция [1, 66, 27, 192, 212, 222, 233]. Гормональная заместительная терапия уменьшает проявления климактерического синдрома, но, в силу наличия серьезных побочных эффектов, не рекомендуется для длительного применения с целью уменьшения риска возникновения сердечно-сосудистых заболеваний [31, 32, 42, 46, 154, 192, 213, 240].
Естественная и послеоперационная эстрогенная недостаточность протекают на фоне ярко выраженного оксидантного стресса [46, 119]. В этих же клинических ситуациях наблюдаются гемореологические расстройства, приводящие к формированию синдрома повышенной вязкости крови, причем в процесс самым непосредственным образом вовлекаются эритроциты — возрастает их агрегация и снижается деформируемость [7, 66, 233]. Следовательно, существуют основания считать активацию перекисного окисления липидов фактором, уча-
ствующим в повреждении клеточного звена реологии крови. Сведения о возможности предотвращать негативное влияние липидной пероксидации на реологические функции эритроцитов с помощью антиоксидантов [162, 199] побудили нас к поиску перспективных гемореологических препаратов при гипоэст-рогенемии среди природных антиоксидантов - экстрактов изофлавоноидсодер-жащих растений, поскольку изофлавоноиды относятся к фитоэстрогенам [5, 69, 100, 101,125,216].
Фитоэстрогены, являясь избирательными модуляторами эстрогеновых рецепторов [38, 52, 69, 101], могут быть реальной альтернативой ЗГТ в условиях эстрогенной недостаточности. Несмотря на высокую потребность, фитоэстро-генные препараты на фармацевтическом рынке представлены весьма скромно. Разработаны фитоэстрогенные препараты из экстракта растения Cimicifnga га-cemosa [5, 90, 128]. Отечественных лекарственных препаратов, обладающих фитоэстрогенной активностью нет. Объектом исследования выбран полифе-нольный комплекс из древесины эндемичного приморского растения семейства бобовые маакии амурской {Maackia amiirensis Rupr. et. Maxim.), который был зарегистрирован в 2004 г. в Российской Федерации в качестве фармакологической субстанции (Р №003309/01) для изготовления лекарственного препарата «Максар таблетки, покрытые оболочкой, 60 мг» (Р №003294/01). Максар разрешен для клинического применения в качестве гепатопротектора. Высокое содержание изофлавоноидов в экстракте древесины маакии амурской явилось основанием для изучения его эффектов в условиях гипоэстрогенемии.
Цель исследования. Изучить влияние экстракта маакии амурской в сравнении с действием этинилэстрадиола на реологические свойства крови, гемостаз и функциональную активность эндотелия в условиях экспериментальной оварио-эктомии.
Задачи исследования.
1. На модели гипервязкости крови in vitro выявить наиболее эффективный экстракт маакии амурской по его влиянию на вязкость крови и агрегацию тром-
7 боцитов.
Оценить влияние экстракта маакии амурской в сравнении с действием этинилэстрадиола на реологические свойства крови и эффективность доставки кислорода тканям у крыс при экспериментальной овариоэктомии.
Исследовать влияние экстракта маакии амурской в сравнении с действием этинилэстрадиола на перекисное окисление липидов и фосфолипидный состав мембран эритроцитов у крыс после овариоэктомии.
Изучить влияние экстракта маакии амурской на эндотелийзависимые эффекты у овариоэктомированных крыс в сравнении с терапией этинилэстра-диолом.
Оценить влияние экстракта маакии амурской и этинилэстрадиола на гемостаз крыс с экспериментальной гипоэстрогенемией.
Научная новизна. В условиях экспериментальной гипоэстрогенемии впервые выявлена способность экстракта маакии амурской ослаблять выраженность синдрома повышенной вязкости крови и улучшать эффективность доставки кислорода тканям. Получены приоритетные данные о способности экстракта маакии амурской улучшать реологические свойства эритроцитов и уменьшать агрегацию тромбоцитов. Впервые показано, что у крыс после овариоэктомии экстракт маакии амурской эффективнее, чем этинилэстрадиол снижает процессы липидной пероксидации в мембранах эритроцитов и предупреждает их окислительную модификацию. Новыми являются данные о наличии у экстракта маакии амурской эндотелийпротективной активности, выявленной в условиях экспериментальной овариоэктомии. Установлено, что экстракт маакии амурской, в отличие от этинилэстрадиола, уменьшает активность свертывающей системы крови при экспериментальной гипоэстрогенемии.
Научно-практическая значимость. В результате проведенного исследования получены новые данные фундаментального характера о механизмах формирования синдрома повышенной вязкости крови при овариоэктомии и способах их коррекции с помощью эстрогенов и фитоэстрогенов — изофлавоноидов
8 экстракта маакии амурской. Установлены принципиальные различия в действии гормональной терапии и фитоэстрогенов на реологические свойства крови, гемостаз и эндотелий сосудов в условиях экспериментальной гипоэстрогене-мии. Материалы доклинических исследований специфической активности экстракта маакии амурской вошли в комплект документов для представления в Министерство здравоохранения и социального развития Российской Федерации с целью получения разрешения на клинические исследования препарата по новому показанию в качестве противоклимактерического средства.
Публикации: По теме диссертации опубликовано 12 работ, из них 3 — в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК.
Объем и структура работы: Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста. Состоит из введения, четырех глав, выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает 244 источника, из них 111 отечественных и 133 зарубежных. Иллюстративный материал представлен 8 рисунками и 18 таблицами.
Апробация работы. Материалы диссертации представлены на VI международной конференции «Микроциркуляция и гемореология» (Ярославль, 2007); II международной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (Алматы, 2007); конференции НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН «Создание новых лекарственных препаратов» (Томск, 2007); IV Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008); IX конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2008); XII международной научной конференции «Здоровье семьи — XXI век» (Израиль, 2008); V Всероссийской конференции-школе «Химия и технология растительных веществ» (Уфа, 2008); симпозиуме «Результаты фундаментальных и прикладных исследований для создания новых лекарственных средств» (Москва, 2008).
Заместительная гормональная терапия
Патогенетическим методом коррекции климактерических нарушений является заместительная гормональная терапия (ЗГТ). Цель ЗГТ – восполнение дефицита половых гормонов с помощью фармакологических препаратов, содержащих гормоны в минимально-оптимальных дозах, которые реально улучшают состояние больных, обеспечивают профилактику поздних обменных нарушений и не оказывают побочных эффектов [2, 5, 42, 91]. Отмечен положительный эффект ЗГТ при лечении больных климактерическим синдромом в отношении как нейро-вегетативных расстройств, так и метаболических сдвигов в виде гиперлипидемии и остеопороза [38].
Эстрогены обладают положительным влиянием на показатели липидного спектра крови, что проявляется снижением уровня общего холестерина, а также липопротеинов низкой плотности, повышением содержания липопротеинов вы-сокой плотности, снижением индекса атерогенности, увеличением продукции желчных кислот. Эстрогены и их основные метаболиты тормозят окисление вы-сокоатерогенных липопротеинов низкой плотности [2, 47, 52, 56, 59, 80, 91, 227, 239]. Кроме того, ЗГТ улучшает чувствительность к инсулину клеток печени, по-ложительно воздействует на уровень гликозилированного гемоглобина и глике-мии [56, 80].
Естественные эстрогены регулируют процессы вазодилатации, пролиферации гладкомышечных клеток и фибробластов, ангиогенеза, препятствуют развитию эндотелиальной дисфункции и ремоделированию сосудов – процессов, лежащих в основе патогенеза атеросклероза и тромботических осложнений [52, 59, 197]. Гипотеза о кардиопротективных свойствах эстрогенов основывалась на знаниях об их благоприятном влиянии на липидный спектр и вазомоторный то-нус. Влияние эстрогенов на тонус сосудов может быть связано с активацией син-теза NO, простациклина, цГМФ, цАМФ, эндотелиального гиперполяризующего фактора и снижением уровня вазоконстрикторных агентов (ангиотензина II, эн-дотелина-1). Эстрогены, взаимодействуя со специфическими эстрогеновыми -рецепторами, обеспечивают негеномную активацию эндотелиальной NO-синтазы, что обусловливает практически моментальную вазодилатацию. Кроме того, NO может оказывать противовоспалительное и антитромботическое дейст-вие за счет ингибирования агрегации тромбоцитов, процессов пролиферации миоцитов, угнетения апоптоза эндотелиоцитов и связывания свободных радика-лов кислорода [19, 47, 59, 80, 91]. Выявлено вазодилатирующее действие эстро-генов по отношению к коронарным и периферическим артериям. Эстрогены че-рез специфические рецепторы активируют экспрессию генов, отвечающих за синтез NO [96, 190, 243]. Вазодилатирующее и антиатерогенное действие жен-ских половых гормонов также обусловлено тем, что они обладают свойствами антагонистов кальция [46, 239]. Следует отметить, что эстрон и эстриол не только не ингибируют пролиферацию гладкомышечных клеток, но и блокируют антимитогенный эффект эстрадиола. Учитывая ведущую роль пролиферации и миграции клеток сосудистой стенки в патогенезе атеросклероза, можно сделать вывод, что не все эстрогены обладают вазопротективным эффектом [59].
Одним из серьезных побочных эффектов ЗГТ является повышенный риск тромбозов и тромбоэмболических осложнений. Рядом исследований было выявлено, что при применении ЗГТ риск венозных тромбозов увеличивается в 2–4 раза. Высокий риск артериальной тромбоэмболии связан с такими сопутствую-щими факторами, как возраст, курение, наличие диабета, артериальной гипертен-зии, гиперлипидемии, гипергомоцистеинемии, мигрени и семейного анамнеза ар-териальных тромбозов. Несомненным фактором риска развития артериальных и венозных тромбозов является ожирение. Жировая ткань является источником провоспалительных цитокинов (ФНО-, ИЛ-1, ИЛ-6), тканевого фактора, ингиби-тора активатора плазминогена и непосредственно участвует в активации воспа-ления и коагуляции. При воспалении выявляется повышенный уровень С-реактивного белка, что объясняется активацией системного острофазового ответа под действием провоспалительных цитокинов. Таким образом, при наличии оп-ределенного преморбидного фона, изначально обусловливающего развитие эндо-телиальной дисфункции, системного воспалительного ответа и повышенной го-товности к свертыванию крови, прием гормональных препаратов может оказаться триггерным фактором для развития тромботических осложнений [59].
При длительном введении эстрадиола первоначально активируются тромбо-циты, а затем коагуляционный компонент гемостаза. Изменения, вызываемые этинилэстрадиолом, более выражены в тромбоцитах, чем в коагуляционном ком-поненте [108]. Полифункциональные клетки – тромбоциты ранее других компо-нентов гемостаза реагируют на разного рода воздействия и служат инициатором гемокоагуляционных сдвигов. Выявленная последовательность изменений при введении эстрогенов позволяет предполагать, что это вообще закономерное явле-ние, поскольку клеточный гемостаз эволюционно более древний, и еще потому, что тромбоциты обладают чрезвычайно развитой способностью реагировать на многочисленные изменения в среде. Вполне возможно, что многие воздействия, активирующие гемостаз, инициируют это первоначально за счет повышения про-коагулянтной активности тромбоцитов. Основанием для такого предположения являются сведения о полифункциональности тромбоцитов, обусловленной нали-чием большого числа разновидностей рецепторов у этих клеток [108, 131]. Установлено, что этинилэстрадиол увеличивает прокоагулянтную активность тромбоцитов и ускоряет внутрисосудистое свертывание крови, снижая в малой степени интенсивность ПОЛ в тромбоцитах. Угентение ПОЛ антиоксидантами ограничивает прокоагулянтный эффект этинилэстрадиола [108]. Хотя в некоторых иссле-дованиях для эстрадиола обнаружены антиагрегационные свойства. Отмечено снижение степени и скорости АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов на краткосрочное введение эстрогенов (12-недельная терапия). Причем установлена корреляционная связь межу антиагрегационной активностью и антиоксидантными свойствами эстрадиола [46, 47, 65].
У женщин в менопаузе повышается количество фибриногена в крови. Известно, что высокий уровень фибриногена повышает риск развития инфаркта
Влияние экстракта маакии амурской и этинилэстрадиола на гемореологические показатели у крыс после овариоэк-томии
Эксперименты по изучению влияния экстракта маакии амурской на рео-логические показатели крови и уровень половых гормонов проведены на 26 овариоэктомированных и 8 ложнооперированных самках крыс Вистар массой 320–380 г. Забор крови у ложнооперированных крыс осуществляли в фазу эст-руса, когда в мазках влагалищной жидкости видны лишь безъядерные эпители-альные клетки. В пробах крови определяли содержание половых гормонов и реологические показатели. Овариоэктомия приводила к исчезновению половых циклов у самок крыс. Клеточный состав в мазках влагалищной жидкости в группе контроля и группе животных, получавших экстракт маакии амурской, соответствовал стадии диэ-струса (сплошь лейкоциты и единичные эпителиальные клетки). Во влагалищ-ных мазках животных, получавших этинилэстрадиол видны безъядерные эпи-телиальные клетки, что соответствует стадии эструса (семь случаев), в двух случаях наблюдали переход из проэструса в эструс (в мазках присутствовали как ядерные эпителиальные клетки, так и безъядерные чешуйки) [30, 106]. Уровень эстрадиола и прогестерона в крови ложнооперированных поло-возрелых самок крыс составил соответственно 43,8±1,3 пг/мл и 65,8±6,4 нмоль/л. В группе овариоэктомированных крыс, получавших крахмальную слизь (контроль), к 21 суткам после овариоэктомии произошло значительное снижение в крови уровней эстрадиола и прогестерона – на 60% и 66% соответ-ственно (табл. 6). В группе овариоэктомированных крыс, получавших в течение 14 суток этинилэстрадиол, уровень эстрадиола в крови был значимо выше, чем в группе контроля (в 2,5 раза) и достигал значений этого гормона у ложнооперирован-ных крыс. В данной группе животных произошло значительное снижение уровня прогестерона: на 82% – по сравнению со значениями у ложноопериро-ванных животных и на 47% – по сравнению с величиной этого показателя в группе контроля (табл. 6). В группе овариоэктомированных крыс, получавших в течение 14 суток суммарный экстракт маакии амурской, содержание эстрадиола в крови было ниже уровня этого гормона у ложнооперированных животных на 54%. Уровень прогестерона в отличие от ложнооперированных животных в данной группе снижался на 67%. Различий между значениями уровня гормонов в этой группе и группе контроля не выявлено (табл. 6). Таким образом, овариоэктомия приводила к исчезновению половых цик-лов у самок крыс и вызывала значительное снижение содержания эстрадиола и прогестерона в крови крыс. Введение этинилэстрадиола овариоэктомирован-ным крысам приводило к увеличению уровня эстрадиола в крови овариоэкто-мированных крыс, при этом уровень прогестерона значительно снижался. Экс-тракт маакии амурской при его курсовом введении не вызывал изменений уровня половых гормонов у крыс после овариоэктомии. Удаление яичников у крыс вызывало также и изменения гемореологиче-ских параметров.
У животных контрольной группы через 21 день после оварио-эктомии вязкость цельной крови по сравнению с показателями у ложноопери-рованных животных увеличилась на 7–18% во всем диапазоне скоростей сдвига (табл. 7, рис. 5). Рост вязкости крови, вызванный овариоэктомией, был обу-словлен изменением как макро- так и микрореологических параметров. Так, на-блюдалось достоверное повышение гематокрита и содержание фибриногена в плазме крови на 7% и 38% соответственно (табл. 9). Кроме того, отмечено дос-товерное усиление агрегационной активности эритроцитов на 35% (табл. 9) и уменьшение их деформируемости при высоких скоростях сдвига на 10–18% (табл. 8, рис. 6). При этом индекс эффективности транспорта кислорода тканям при низких скоростях сдвига (5–50 с-1) достоверно снижался на 5–7% (табл. 10). Таким образом, прирост гематокрита у животных после овариоэктомии не обеспечивал увеличение доставки кислорода в ткани из-за выраженного по-вышения вязкости крови, возникающего как вследствие гемоконцентрации, так и нарушения реологических характеристик эритроцитов. Следовательно, ова-риоэктомия у крыс вызывала гипоэстрогенное состояние, сопровождающееся нарушением гемореологического статуса с формированием СПВК и уменьше-нием эффективности доставки кислорода тканям. Условия эксперимента – мо-дель овариоэктомии на линейных животных, исключающие влияние на гемо-реологический статус возраста, индекса массы тела, сопутствующих заболева-ний, курения, позволяют считать гипоэстрогенемию основным фактором, вы-зывающим выявленные нами сдвиги параметров реологии крови и формирую-щим СПВК. У овариоэктомированных животных, получавших этинилэстрадиол, вяз-кость крови снижалась на всех скоростях сдвига на 4–11% по сравнению со значениями у контрольных животных. Показатели вязкости крови у овариоэк-томированных крыс, получавших экстракт маакии амурской, также снижались при всех скоростях сдвига на 4–13% по сравнению с контролем (табл. 7, рис. 5). Следовательно, повышенная вязкость крови у крыс после овариоэктомии сни-жалась при курсовом введении как экстракта маакии амурской, так и этинилэ-страдиола.
При оценке вклада различных гемореологических параметров в измене-ние вязкости цельной крови под действием экстракта маакии амурской и замес-тительной гормональной терапии было установлено, что у крыс после овариоэк-томии, получавших этинилэстрадиол, ИДЭ при всех исследованных скоростях сдвига (за исключением скорости сдвига 90 с-1) был достоверно выше, чем в кон-троле на 14–19%. У крыс после овариоэктомии, получавших суммарный экс-тракт маакии амурской, ИДЭ на скоростях сдвига 90 с-1 и 180 с-1 не отличался от значений в контрольной группе, тогда как на высоких скоростях сдвига (360 и 890 с-1) был выше соответственно на 19% и 12%. В группах получавших ле-чение экстрактом маакии амурской и этинилэстрадиолом, показатели ИДЭ во всем исследованном диапазоне скоростей сдвига не отличались от значений у ложнооперированных животных, что свидетельствует о практически полной нормализации эластичности мембран эритроцитов овариоэктомированных крыс под действием препаратов. Говорить о преимущественном влиянии какого-либо из исследованных препаратов на данный показатель не представляется возмож-ным, поскольку показатели ИДЭ между опытными группами также достоверно не отличались (табл. 8, рис. 6). Повышение ИДЭ, вероятно, приводило Рис 6. Индекс деформируемости эритроцитов у ложнооперированных крыс, у крыс на 21-е сутки после овариоэктомии (контроль), у овариоэктомированных крыс, получавших экстракт маакии амурской (200 мг/кг в течение 14 дней) и этинилэ-страдиол (25 мкг/кг в течение 14 дней). Примечание: – р 0,05 по сравнению со значениями у ложнооперированных животных; + – р 0,05 по сравнению со значениями у животных контрольной группы. к отмеченному выше ограничению роста вязкости крови на высоких скоростях сдвига, поскольку в этом диапазоне скоростей сдвига вязкость крови преиму-щественно зависит от деформируемости эритроцитов [24]. Второй показатель, характеризующий состояние клеточной реологии – полупериод агрегации эритроцитов в группе овариоэктомированных животных был существенно ниже этого параметра у ложнооперированных крыс. Введение как этинилэстрадиола, так и экстракта маакии амурской овариоэктомирован-ным крысам увеличивало полупериод агрегации эритроцитов на 35%, что ха-рактеризует нормализацию агрегационной активности эритроцитов исследуе-мыми препаратами (табл. 9). Этот эффект, вероятно, обеспечивал отмеченное нами ограничение роста вязкости крови на низких скоростях сдвига под дейст-вием экстракта маакии амурской и этинилэстрадиола (табл. 7, рис. 5), посколь-ку агрегация эритроцитов играет определяющую роль в величине вязкости кро-ви на участках кровеносного русла с низкими скоростями сдвига – в сосудах крупного и среднего диаметра [57]. Индекс эффективности доставки кислорода
Влияние экстракта маакии амурской и этинилэстрадиола на формирование внутрисосудистого тромба и функцио-нальное состояние эндотелия у крыс после овариоэктомии
В серии опытов по изучению вазодилятационной активности эндотелия у крыс контрольной и опытных групп оценивали реакцию артериального давле-ния на введение ацетилхолина и натрия нитропруссида, вызывающих соответ-ственно эндотелийзависимое и эндотелийнезависимое расширение сосудов. Из-вестно, что ацетилхолин может стимулировать выброс эндотелием окиси азота, поэтому он широко используется в клинике и эксперименте для тестирования эндотелиальной дисфункции. Маркером эндотелиальной дисфункции является ослабление сосудорасширяющей реакции на введение ацетилхолина или ее из-вращение, за счет уменьшения продукции и высвобождения окиси азота. Вме-сте с тем, при различных патологических состояниях, в том числе и при эндок-ринной патологии, может меняться реакция гладких мышц сосудов на действие и других гуморальных и нейрогенных факторов. Поэтому для оценки эндоте-лийнезависимой вазодилатации, то есть для определения чувствительности гладких мышц сосудов к действию вазоактивных агентов, использовали натрия нитропруссид. Рассчитывали площади над кривой реакции артериального дав-ления на введение анализаторов. Коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД) оценивали как отношение реакции артериального давления на натрия нитропруссид к реакции на ацетилхолин [26, 102].
КЭД у животных после овариоэктомии был на 66% выше, чем у ложно-оперированных крыс. Следовательно, недостаточность половых гормонов, вы-званная овариоэктомией у крыс, как и у женщин с гипоэстрогенемией [230] способствует развитию дисфункции эндотелия артерий. Проведение терапии этинилэстрадиолом уменьшало КЭД на 28% по сравнению с овариоэктомиро-ванными крысами без лечения. КЭД в группе животных, получавших экстракт маакии амурской, снижался еще более существенно – на 38% по сравнению со значением в контрольной группе. Величина этого показателя практически дос-тигала соответствующего уровня у ложнооперированных крыс, свидетельствуя о способности препарата восстанавливать баланс эндотелийзависимой и эндо-телийнезависимой вазодилятации в условиях сниженной при овариоэктомии способности эндотелия продуцировать окись азота (табл. 16). Таким образом, экстракт маакии амурской обладает эндотелийпротектив-ной активностью при овариоэктомии у крыс, не уступая этинилэстрадиолу в способности восстанавливать эндотелийзависимую вазодилятацию и потенци-ровать антиагрегантную активность сосудистой стенки в этих условиях. Результатом формирования эндотелиальной дисфункции при различных патологических состояниях являются изменения продукции синтезируемых эн-дотелиальными клетками биологически активных соединений, среди которых наибольшее значение, с точки зрения рассматриваемой проблемы, имеет окись азота – NO [63]. NO, синтезируемая эндотелиальной NO-синтазой, является од-ним из главных регуляторов тонуса кровеносных сосудов [73]. Снижение отме-ченной нами эндотелийзависимой вазодилатации у крыс после овариоэктомии может быть следствием уменьшения продукции и высвобождения окиси азота (NO) в условиях гипоэстрогенемии [102]. В связи с этим для оценки степени эндотелиальной дисфункции помимо косвенных показателей (антиагрегантная и сосудорасширяющая активность эн-дотелия) было изучено влияние овариоэктомии и исследуемых препаратов на уровень в крови стабильных метаболитов окиси азота – нитритов. В крови лож-нооперированных животных уровень нитритов составил 0,62±0,10 мкг/мл. У овариоэктомированных животных этот показатель уменьшался на 53%, то есть эстрогенная недостаточность приводила к значительному снижению нитритов в плазме крови. Введение этинилэстрадиола крысам после овариоэктомии вос-станавливало уровень нитритов до показателей у ложнооперированных живот-ных, а курсовое применение экстракта маакии амурской увеличивало этот по-казатель на 62% по сравнению с крысами, не получавшими лечение (табл. 17).
Известно, что одним из основных побочных эффектов ЗГТ являются на-рушения в системе гемостаза, что приводит к развитию гиперкоагуляционного синдрома и повышению риска возникновения тромбозов [47, 59, 108]. Потен-цирующий эффект этинилэстрадиола на формирование внутрисосудистого тромба, инициированного аппликацией раствора хлорида железа на артерию крыс, был описан нами выше. В связи с этим представляло интерес изучить влияние экстракта маакии амурской в сравнении с этинилэстрадиолом на гемо-стазиологические свойства крови у крыс после овариоэктомии. При изучении сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза было установ-лено, что амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов у ложно-оперированных животных в стандартизованной плазме составила 38±4%. У крыс после овариоэктомии (контроль) амплитуда агрегации тромбоцитов в стандартизованной плазме существенно не отличалась от показателя у ложно-оперированных животных и составила 41±1%. Амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в группе овариоэктомированных крыс, получавших этинилэстрадиол, составила 43±3%, что также значимо не отлича-лось от показателя контрольной группы, но отмечена тенденция к повышению агрегации тромбоцитов. Курсовое введение овариоэктомированным крысам экстракта маакии амурской вызывало достоверное снижение амплитуды агре-гации тромбоцитов на 28% по сравнению с показателем у овариоэктомирован-ных крыс не получавших лечения (рис. 8). При изучении коагуляционного звена гемостаза было отмечено, что ова-риоэктомия вызывала достоверное изменение только одного показателя – по-вышение содержания в плазме крови уровня фибриногена на 38% по сравнению с показателями в группе ложнооперированных животных (табл. 18). Курсовое введение этинилэстрадиола в этих условиях, не влияя на такие показатели как АЧТВ и ПВ, вызывало достоверное снижение фибриногена на 24% по сравне-нию с контролем.
Влияние экстракта маакии амурской и этинилэстрадиола на уровень нитритов в сыворотке крови крыс после ова-риоэктомии
Важным звеном патогенеза сердечно-сосудистых заболеваний в условиях естественной или хирургической менопаузы могут быть нарушения реологиче-ских свойств крови [7, 233]. В частности, у женщин в постменопаузе выявлены следующие гемореологические нарушения: увеличение гематокрита, повышение вязкости крови и уровня фибриногена, усиление процессов агрегации эритроци-тов и ухудшение их деформируемости, увеличение вязкости плазмы [7, 66, 233]. Эти изменения формируют неспецифический «синдром повышенной вязкости крови» (СПВК), который в свою очередь повышает предрасположенность к сер-дечно-сосудистых заболеваний. Впервые термин «синдром повышенной вязкости крови» предложил L. Dintenfass [148]. Специфических проявлений этот синдром не имеет, поэтому его диагностика возможна только при проведении специальных лабораторных исследований [82]. Вязкость крови определяется состоянием макрореологиче-ских показателей – объемной концентрацией клеток крови (гематокритом), вяз-костью плазмы (зависит от типа и концентрации белков) и параметрами кле-точной реологии – деформируемостью (зависит от вязкости мембраны и внут-реннего содержимого) и агрегацией эритроцитов. Вязкость крови может повы-шаться в результате увеличения гематокрита, повышения вязкости плазмы (преимущественно за счет возрастания в ней фибриногена и других белков с большой молекулярной массой), увеличения агрегации и снижения деформи-руемости эритроцитов (за счет возрастания вязкости содержимого эритроцитов и/или вязкости мембран клеток) [82, 83]. СПВК является одним из факторов риска в развитии и течении кардиова-скулярных заболеваний [18, 36, 134, 232]. Нарушение реологических свойств крови вызывает замедление потока крови, создавая ишемию органов и способ-ствуя развитию тромбоза [83], приводит к расстройству микроциркуляции [228], повышению общего периферического сопротивления и артериального давления [107, 172]. Очевидно, что гемореологические расстройства значитель-но осложняют течение таких сердечно-сосудистых заболеваний, как нарушения мозгового кровообращения, ишемическая болезнь сердца, артериальная гипер-тензия. Недостаточная эффективность существующих способов фармакологиче-ской коррекции расстройств реологии крови диктует необходимость поиска но-вых эффективных препаратов, способных снижать выраженность гемореологи-ческих нарушений. Поэтому, изучение возможности фармакологического воз-действия на показатели, формирующие СПВК у женщин в менопаузальный пе-риод, поиск эффективных гемореологических средств являются неиспользо-ванным резервом для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболева-ний при гипоэстрогенемии.
В качестве объекта исследования нами были вы-браны изофлавоноидсодержащие экстракты из ядровой древесины дальнево-сточного растения маакии амурской. Основанием для выбора данного объекта исследования в качестве корректора СПВК при гипоэстрогенемии явились дан-ные о высокой антиоксидантной активности экстрактов маакии амурской [61, 62] и сведения о том, что изофлавоноиды обладают аффинитетом и связывают-ся с эстрогенными рецепторами в различных органах, то есть проявляют эстро-генные свойства [38, 45, 69, 100, 101, 125]. Для первичной оценки гемореологической активности суммарного экс-тракта маакии амурской, а также его отдельных фракций, содержащих изофла-воноиды или димерные стильбены, была использована модель гипервязкости крови in vitro, при которой инкубация проб крови в течение часа сопровожда-лась повышением вязкости крови за счет усиления агрегации эритроцитов и снижения их деформируемости [77]. Характер и выраженность сдвигов отдель-ных гемореологических показателей на этой модели сопоставимы с изменения-ми, возникающими при ряде патологических состояний, что позволяет исполь-зовать ее для отбора средств, проявляющих гемореологические свойства [77, 78]. При инкубации крови наблюдалось повышение ее вязкости во всем ис-следуемом диапазоне скоростей сдвига. Изофлавоноидный экстракт маакии амурской ограничивал рост вязкости крови преимущественно на высоких ско-ростях сдвига, а стильбеновый экстракт – преимущественно на низких. Сум-марный экстракт маакии амурской, содержащий в своем составе как изофлаво-ноиды, так и стильбены проявил максимальную гемореологическую актив-ность, ограничивая рост вязкости крови во всем изучаемом диапазоне скоро-стей сдвига. Антитромбоцитарная активность всех вышеперечисленных экстрактов была практически равнозначной. Следовательно, суммарный экстракт маакии амурской в отличие от дру-гих экстрактов ограничивал рост вязкости крови на модели гипервязкости кро-ви in vitro во всем исследованном диапазоне скоростей сдвига. Можно предпо-ложить, что суммарный экстракт маакии амурской уменьшает вязкость крови на низких скоростях сдвига благодаря наличию в своем составе стильбенов, а на высоких скоростях сдвига реализует свою активность преимущественно за счет изофлавоноидов.
Полученные результаты явились основанием для выбора суммарного экстракта маакии амурской в качестве объекта для дальнейшего углубленного исследования у крыс с моделью гипоэстрогенемии. Комплексный анализ изменения гемореологического статуса у женщин в постменопаузе по сравнению с пременопаузальным периодом весьма затруд-нен, так как помимо гипоэстрогенемии на реологические свойства крови могут оказывать влияние возраст (наступление естественной менопаузы колеблется в пределах 10 лет), индекс массы тела, курение, наличие или отсутствие сопутст-вующих заболеваний (диабет, гиперлипидемия и др.) [233]. В связи с этим представляло интерес оценить изменения гемореологического статуса у линей-ных крыс после овариоэктомии по сравнению с ложнооперированными живот-ными одинакового возраста и массы тела. Наряду со снижением уровня половых гормонов у овариоэктомирован-ных крыс наблюдалось формирование СПВК, который характеризовался значи-тельными сдвигами макро- и микрореологических показателей по сравнению с ложнооперированными животными. У животных после овариоэктомии наблю-далось существенное повышение вязкости крови в результате увеличения гема-токрита, фибриногена в плазме крови, а также нарушения вязкоэластических свойств эритроцитов и возрастания их агрегационной активности. Выявленные изменения гемореологических параметров приводили к уменьшению эффек-тивности доставки кислорода тканям, что является фактором риска сердечно-сосудистых заболеваний [228]. Таким образом, овариоэктомия у крыс вызывала гипоэстрогенное состояние, сопровождающееся нарушением гемореологиче-ского статуса с формированием СПВК и уменьшением эффективности доставки кислорода тканям. У женщин в постменопаузальный период отмечены анало-гичные изменения ряда гемореологических параметров [7, 233]. Это свидетель-ствует о схожести процессов, лежащих в основе нарушения гемореологическо-го статуса у женщин при эстрогенной недостаточности и при модели овариоэк-томии у животных. Условия эксперимента позволяют считать гипоэстрогене-мию основным фактором, вызывающим выявленные нами сдвиги параметров реологии крови и формирующим СПВК. Гемореологические изменения являются существенным фактором риска как гипертонической болезни, так и ишемической болезни сердца в климакте-рическом периоде [7, 66, 101, 120, 233] и нуждаются в соответствующей кор-рекции. Поскольку основным фактором нарушения реологических свойств кро-ви является гипоэстрогения, то адекватной коррекцией может быть назначение ЗГТ или веществ, обладающих способностью модулировать активность эстро-генных рецепторов – фитоэстрогенов, в частности, изофлавоноидов. Таким об-разом, сравнительное исследование влияния эстрогенов и избирательных моду-ляторов
![Влияние экстрактов ольхи клейкой на развитие перевиваемых опухолей в условиях цитостатической терапии [Электронный ресурс]](/i/i/4449/188653.png "Влияние экстрактов ольхи клейкой на развитие перевиваемых опухолей в условиях цитостатической терапии [Электронный ресурс] Шилова Наталья Владимировна")
