Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы 10
1.1. Дофаминергические системы мозга ...10
1.2. Современные представления о структуре и функциональ ной роли дофаминовых рецепторов 15
1.3. Неирофармакологическая и нейрохимическая характеристика атипичных нейролептиков. Роль дофаминовых рецепторовв механизме действия атипичных нейролептиков 26
1.4. Психофармакологические свойства ингибиторов каналов кальция 40
1.4.1. Антидепрессантные свойства ИКК 41
1.4.2. Противосудорожные свойства ИКК 42
1.4.3. Анксиолитические свойства ИКК 44
1.4.4. Взаимодействие ИКК с дофаминергической системой...46
Материалы и методы исследования 50
Материалы 50
2.1. Методика оценки локомоторной активности животных в «открытом поле» (Open- field test) 56
2.2. Определение содержания моноаминов и их метаболитов в структурах мозга крыс 56
2.3. Статистическая обработка полученных результатов 58
Результаты исследования и их обсуждение 59
3.1. Изучение эффектов нейролептиков различных групп и ингибиторов каналов кальция на поведенческие показатели крыс в тесте «открытое поле» 59
3.1.1. Исследование эффектов галоперидола, сульпирида, клозапина и оланзапина на поведение животных в тесте «открытое поле» 59
3.1.2. Изучение влияния верапамила на параметры двигательной активности крыс в «открытом поле» 61
3.1.3. Изучение влияния дилтиазема на поведенческие характеристики крыс в тесте «открытое поле» 63
3.1.4. Изучение влияния нифедипина на двигательную активность крыс в тесте «открытое поле» 66
3.1.5. Изучение влияния циннаризина на поведенческие характеристики крыс в тесте «открытое поле» 68
3.2. Нейрохимическое изучение эффектов нейролептиков различных групп и ингибиторов каналов кальция на содержание нейротрансмиттеров в структурах мозга крыс 70
3.2.1. Нейрохимическое изучение эффектов галоперидола, клозапина и оланзапина на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах мозга крыс 70
3.2.2. Нейрохимическое изучение эффектов ингибиторов каналов кальция на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах головного мозга крыс 15
3.2.3. Нейрохимическое изучение совместного введения верапамила и оланзапина на содержание нейротранс миттеров в структурах мозга крыс 80
Заключение 86
Выводы 92
Список литературы 93
- Современные представления о структуре и функциональ ной роли дофаминовых рецепторов
- Неирофармакологическая и нейрохимическая характеристика атипичных нейролептиков. Роль дофаминовых рецепторовв механизме действия атипичных нейролептиков
- Определение содержания моноаминов и их метаболитов в структурах мозга крыс
- Изучение влияния дилтиазема на поведенческие характеристики крыс в тесте «открытое поле»
Введение к работе
Актуальность проблемы. В настоящее время нейролептики прочно вошли в практическую медицину в качестве основных антипсихотических средств. По современным представлениям, основным свойством нейролептиков, определяющим их эффективность при лечении психозов, является способность снижать активность ДА-ергической нейропередачи [4,18,40,41, 268]. В то же время, серьезным недостатком большинства используемых в настоящее время в клинике нейролептических средств является развивающиеся при их длительном применении экстрапирамидные нарушения [101]. В связи с этим, одним из приоритетных направлений поиска новых антипсихотических средств является направленный поиск и создание нейролептиков атипичного профиля, обладающих антипсихотическим действием, но не вызывающих экстрапирамидной симптоматики [38,41,16], В настоящее время разработан и успешно применяется в клинике психотических состояний целый ряд таких лекарственных средств [128]. Экспериментальное и клиническое изучение этих препаратов позволило выявить оригинальный спектр их психофармакологического действия, существенно отличающийся от спектра классических представителей антипсихотических средств [20,21,71,113,128, 186]. К числу препаратов этой группы относятся такие достаточно хорошо изученные соединения, как сульпирид, клозапин, раклоприд, ремоксиприд и другие. К числу можно отнести и новый препарат оланзапин, разработанный фирмой Zyprexa (Eli Lilly) и успешно внедряемый в последние годы в клиническую практику [278]. Уникальный спектр психофармакологических свойств оланзапина, высокая клиническая эффективность соединения, стойкость его терапевтического эффекта, а также низкая частота возникновения его побочных эффектов позволяют относить данный препарат к числу наиболее перспективных на сегодняшний день атипичных нейролептиков.
Другой, не менее важной, проблемой современной психофармакологии является изыскание средств, не относящихся к числу нейролептиков, но спо-
6 собных корригировать побочные эффекты, развивающиеся при применении последних [186]. Подобные средства могут использоваться при проведении общеукрепляющей адъювантной терапии, а также при лечении сопутствующих заболеваний. К числу таких соединений, в первую очередь, следует отнести группу ингибиторов кальциевых каналов (ИКК), вазодилататорные и антиаритмические свойства которых изучены достаточно полно, что обуславливает их широкое клиническое применение в терапии как заболеваний сердечно-сосудистой системы (при гипертензии, фибрилляции предсердий, тахиаритмиях), так и ряда патологий неврологического генеза - инсульте, мигрени, сенильных расстройствах [2,7,8,186]. Накоплен также большой объем данных, свидетельствующих о том, что ИКК способны изменять активность ЦНС и, качестве психотропных агентов. Психофармакологический профиль этих соединений является уникальным, комплексным и многоплановым. В частности, известны и описаны антидепрессивные, анксиолитические и противосудорожные эффекты ИКК [3].
Имеющиеся в литературе данные об антидофаминергических эффектах некоторых представителей класса ИКК указанных эффектах, в частности, вера-памила и дилтиазема, достаточно противоречивы [8]. Так, способность оказывать антагонистическое действие в отношении эффектов, вызванных агониста-ми ДА, было обнаружено у соединений, относящихся к различным группам ИКК - никардипина, нифедипина, флунаризина, тогда как нимодипин, низолди-пин, нитрендипин, верапамил и дилтиазем антидофаминергических свойств, по сообщению ряда авторов, не проявляли [147,308]. В то же время, следует отметить, что в литературе практически отсутствуют сведения о механизмах взаимодействия ИКК с атипичными нейролептиками, в частности, с оланзапином.
Цель исследования. В связи со сказанным, основной целью нашей работы было комплексное нейрофармакологическое изучение механизмов возможного взаимодействия ингибиторов кальциевых каналов и нейролептиков атипичного профиля, в частности, оланзапина, с помощью набора поведенческих и нейрохимических методов.
В соответствии с указанной целью были поставлены следующие задачи:
Провести сравнительное изучение эффектов классических и атипичных нейролептиков на поведенческие показатели животных в тесте «открытое поле».
Исследовать влияние ингибиторов кальциевых каналов различной химической структуры на параметры поведения крыс в тесте «открытое поле».
Изучить эффекты совместного введения классических и атипичных нейролептиков с ингибиторами кальциевых каналов на поведенческие показатели животных в тесте «открытое поле».
4. Провести нейрохимическое изучение эффектов галоперидола, клоза-
пина и оланзапина на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах
головного мозга крыс.
Выполнить исследование эффектов ингибиторов кальциевых каналов на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах мозга крыс.
Исследовать влияние совместного введения верапамила и оланзапина на содержание нейротрансмиттеров в структурах мозга крыс.
Научная новизна. Впервые изучено влияние совместного введения нейролептиков, относящихся к различным фармакологическим группам (галопери-дол, сульпирид, клозапин, оланзапин) и ИКК на показатели двигательной, исследовательской и обстановочной активности крыс в тесте «открытого поля». Было обнаружено, что введение верапамила, дилтиазема, нифедипина, а также циннаризина на фоне галоперидола приводило к достоверному дозозависимому увеличению всех параметров поведения, что свидетельствует в пользу наличия у данных соединений дофаминстимулирующих свойств. При совместном введении галоперидола и дилтиазема наблюдалось значительное увеличение локомоторной активности животных, тогда как комбинация сульпирида и дилтиазема в обеих изученных дозах не оказывала влияния ни на один из параметров двигательной активности.
При нейрохимическом изучении эффектов совместного введения верапамила и оланзапина на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах мозга крыс впервые было обнаружено значительное увеличение содержания
метаболитов дофамина ДОФУК и ГВК в гиппокампе и прилежащем ядре, а также достоверное снижение уровня норадреналина, повышенного вследствие введения оланзапина, в последней структуре.
Практическая значимость. Полученные в работе данные расширяют существующие представления о нейрофармакологических и нейрохимических механизмах психотропного действия ингибиторов каналов кальция, а также вносят существенный вклад в понимание нейрохимических основ взаимодействия типичных и атипичных нейролептиков с ИКК. Результаты, полученные в работе, раскрывают новый аспект действия ИКК различных групп - их способность противодействовать седативным эффектам нейролептиков, усиливая до-фаминергическую передачу в мозге. Данные наших исследований могут быть использованы для разработки новых стратегий терапии психотических состояний.
Основные положения, выносимые на защиту
Повышение двигательной и исследовательской активности крыс в тесте «открытого поля», после введения верапамила, нифедипина, и циннари-зина на фоне галоперидола позволяет констатировать наличие дофамин-стимулирующих свойств у данных соединений.
Комбинация галоперидола и дилтиазема способствовала увеличению локомоторной активности животных. Сравнительная оценка влияния клоза-пина и оланзапина на содержание моноаминов и их метаболитов в сгриа-туме, прилежащем ядре и гипоталамусе мозга крыс свидетельствовала об усилении оборота дофамина в стриатуме и прилежащем ядре.
" При нейрохимическом изучении эффектов комбинированного введения верапамила и оланзапина было продемонстрировано достоверное снижение оборота дофамина и серотонина, а также повышение содержания норадреналина при введении верапамила во всех структурах мозга крыс. Апробация работы
Апробация работы состоялась 24.06 2004г. в г.Москве на межлабораторной научной конференции ГУ НИИ Фармакологии им.В.В.Закусова РАМН,
(протокол от 24.06.2004г.) и 28.01.2005г. в г.Баку на кафедре фармакологии Азербайджанского Медицинского Университета (протокол от 28.01.2005).
Публикации
Основные положения диссертации опубликованы в 10-ти научных работах.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 121 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, 2 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы. Список литературы включает 308 литературных источников, из них 41 отечественных и 267 зарубежных. Работа иллюстрирована 3 таблицами и 6 рисунками.
Современные представления о структуре и функциональ ной роли дофаминовых рецепторов
В настоящее время известно 28 различных эндогенных лигандов к ДА-Р [243], Известно, что ДА рецепторы относятся к большому семейству рецепторов нейромедиаторов и гормонов, сопряженных с G-белком, посредством которого осуществляется передача внутриклеточного сигнала [246]. Считают, что ДА-Р представляет собой полипептид, состоящий из 7 трасмембранных доменов, экстраклеточных и внутриклеточных петель с внеклеточным N-концом и с цитоплазматическим С-концом. Связывание молекул лиганда с ДА-Р приводит к активации клеточного ответа через G-белок и к образованию вторичных мессенджеров, отвечающих за передачу внутриклеточного сигнала.
Впервые систематика имеющихся данных о структуре и функциональной роли ДА-Р ЦНС проведена в 1979г. Исходя из фармакологических свойств различных модуляторов ДА системы была высказана гипотеза о существовании двух подтипов ДА-Р, условно названных Ді и Дд [155]. ДА-Р, имеющиеся в передней доле гипофиза млекопитающих, получили название Дг, а находящиеся на мембранах паренхиматозных клеток паращитовидных желез- Ді рецепторов. На базе этой классификации были установлены соединения, проявляющие сродство к тому или иному подтипу ДА-Р [90]. ДА проявляет большее сродство к Дг, нежели к Д[ рецепторам [154]. Такое же явление характерно и для апоморфина. Считается, что Дд рецепторы хорошо связываются со всеми антипсихотическими средствами, тогда как с Дг лишь классические нейролептики [241,282]. Показано, что стимуляция ДА-чувствительноЙ аденилатциклазы (Ді рецепторы) сопровождается усилением синтеза аденозина-3,5-цикломонофосфата (цАМФ), а активация Дд рецепторов на содержание цАМФ либо не влияет, либо ингибирует его синтез [154,290]. В настоящее время установлена физиологическая и биохимическая роль ДА стимулированного накопления цАМФ, характерного для Ді подтипа ДА-Р рецепторов [154]. В Ст, ПЯ, ОБ, а также на ДА-ергических нейронах черной субстанции обнаружена высокая плотность распределения мРНК Дг рецептора. В нейрохимическом аспекте показано, что высвобождение ДА в ответ на введение его агонистов в Ст связано с активацией Ді рецепторов [170]. Активация последних в ДА нейронах приводит к значительному снижению синтеза ДА, что выражается в усилении накопления дигидроксифенилуксусной кислоты (ДОФУК), одного из основных метаболитов ДА, в указанной структуре [68]. Полагают, что на высвобождение и метаболизм ДА оказывают большее влияние вещества, избирательно действующие на Дг подтип ДА-Р, чем соединения, преимущественно влияющие на Ді рецепторы [240]. По данным Altar et al. [44], Ді рецепторы отвечают за увеличение, а Дг - за снижение содержания цГМФ,
В настоящее время накоплен большой фактический материал, свидетельствующий о том, что как Ді, так и Дг рецепторы играют ведущую роль в реализации различных форм поведения, в том числе, условно-рефлекторной деятельности [58,89]. Согласно исследований Alajir et al. [430], Ді рецепторы черной субстанции опосредуют проконвульсивное действие ДА, а в регуляции аверсивных состояний важнейшую роль играют Д{ рецепторы, находящиеся в ПЯ [245]. Введение Ді антагониста SCH 23390 в вентральную область бледного шара предупреждает лицевую дискинезию, вызванную Ді агонистом SKP-38393, что свидетельствует о ведущей роли Ді рецепторов данного региона в формировании подобных нарушений [255]. По данным Srivastava и соавт. [256], в механизме гипертермического эффекта у кроликов существенную роль играют Ді рецепторы, тогда как Дг рецепторы ДА отвечают за развитии гипотермического эффекта. Выявленное участие Дг подтипа ДА-Р в контроле когнитивных, моторных, эмоциональных, нейроэндокринных функций, а также в патогенезе таких заболеваний, как шизофрения, болезнь Паркинсона, поздняя дискинезия и ряда других продолжает широко изучаться [146,229]. Так, обнаружено, что у мышей, не имеющих ген Дг рецептора, в ряде поведенческих тестов проявляются элементы акинетического поведения, характерные для болезни Паркинсона [62]. В то же время показано, что в осуществлении таких поведенческих феноменов, как зевательные движения, вертикализация, каталепсия, орофациональная дискинезия и других принимают участие оба подтипа ДА рецепторов [47,91,209,294].
В результате применения современных методов были выделены, идентифицированы и фармакологически охарактеризованы субпопуляции ДА рецепторов, в частности, Дь Д2, Дз, Д и Дз [39,218,246,258,251,252,277]. Учитывая схожесть структур и фармакологические свойства выделяют два основных рецепторных семейства: 1)Ді и Д5, 2)Дг, Дз и Дд рецепторы [38,40, 146]. Впервые Дз рецепторы обнаружены Sunahara и сотрудниками [264] в гене человека и, возможно, участвуют в трансформации генетической информации. Рецепторы Ді подтипа проявляют высокую аффинность связывания с бензазепинами (SCH-23390, SCH-23388, SKF-38393) и низкую- с бутирофенонами (спиперон, галоперидол) и бензамидами (сульпирид) [73]. При этом отмечено, что Дд рецептор проявляет на порядок более высокую аффинность к ДА, чем Д] рецептор. Исследование функциональной роли Ді и Дз подтипов ДА-Р встречает значительные затруднения, связанные с отсутствием веществ, специфически взаимодействующих с каждым из этих подтипов. Однако, создание в последние годы трансгенной линии мышей, у которых отсутствует ген Ді рецептора, позволило установить некоторые особенности данного подтипа ДА-Р [204]. К примеру, у таких животных не наблюдалось активирующего влияния агонистов Ді ДА-Р на локомоторную активность, выявлялось существенное нарушение процесса развития мозга, что выражалось в уменьшении его размеров, в частности, стриатума, у взрослых мышей. На основании этих данных авторы заключили, что Ді рецептор играет важную роль в онтогенезе мозга, в частности, НСС.
Вместе с тем несмотря на то, что предположение о существовании Дз и Д) подтипов ДА-Р было выдвинуто еще Seeman в 1980 [241], Дз рецепторы были изолированы и фармакологически охарактеризованы Sokoloff и его сотрудниками лишь в 1990 г, [251]. По химическому строению Дз рецепторы имеют большое сходство с Дд рецепторами, но отличаются от них по влиянию на аденилатциклазу. По имеющимся данным, Дз рецепторы преимущественно локализованы в лимбических структурах мозга, контролирующих эмоциональную и когнитивную сферы ([144,252].
Неирофармакологическая и нейрохимическая характеристика атипичных нейролептиков. Роль дофаминовых рецепторовв механизме действия атипичных нейролептиков
Нейролептики прочно вошли в практическую медицину в качестве основных антипсихотических средств. По современным представлениям, основным свойством нейролептиков, определяющим эффективность при лечении психозов, является их способность снижать активность ДА-ергической нейропередачи [4,269]. Серьезным недостатком большинства используемых в настоящее время в клинике нейролептических средств является развивающиеся при их длительном применении экстрапирамидные нарушения [101]. Исходя из этого, одним из приоритетных направлений поиска новых антипсихотических средств является создание нейролептиков атипичного профиля, обладающих антипсихотическим действием, но не вызывающих экстрапирамидной симптоматики [38,41]. Экспериментальное и клиническое изучение этих препаратов позволило выявить их оригинальный спектр психофармакологического действия, существенно отличающийся от спектра классических представителей антипсихотических средств [71,113,128,186]. Основными представителями атипичных нейролептиков являются представители трёх различных химических групп: бензамиды (раклоприд, сульпирид и др.), производные дибензазепина (клозапин, флуперлапин) и гамма-карболина (карбидин). В последние годы разработан и широко изучается препарат зипрасидон, относящийся к группе тиазолилпиперазинов и обладающий оригинальным спектром нейрофармакологической активности [271].
В свете данных о структурной и функциональной гетерогенности ДА-Р принципиальный интерес представляет вопрос о том, на какой именно из подтипов рецепторов или их комбинацию направлено антипсихотическое действие нейролептиков. Многие известные нейролептики проявляют активность в отношении рецепторов Ді подтипа (хлорпромазин, тиоридазин, в незначительной степени - клозапин и галоперидол). Предполагалось, что селективный антагонист Ді рецепторов SCH 23390 может рассматриваться в качестве потенциального антипсихотического вещества, однако, позднее было продемонстрировано, что это соединение обладает отчетливыми каталептогенными свойствами при отсутствии тропности к лимбическим системам мозга.
Интерес к ДА подтипу ДА-Р обусловлен прежде всего тем, что типичный нейролептик клозапин, не вызывающий экстрапирамидных нарушений, обладает высоким сродством в отношении Д4 рецепторов по сравнению с ДА-Р других подтипов. Это свойство клозапина послужило основанием для предположения о важной роли Д4 рецепторов в реализации эффектов атипичных нейролептиков [128]. Было также показано повышение плотности данного подтипа ДА-Р в мозге больных шизофренией [71], а также в стриатуме крыс при хроническом введении галоперидола [244]. Другими исследованиями было установлено, что клозапин проявляет одинаково высокое сродство как к Д1 рецепторам, так и к короткой изоформе Да подтипа ДА-Р. Таким образом, отсутствие избирательности и высокой степени сродства большинства клинически эффективных антипсихотических средств к Дд рецепторам не подтверждает гипотезу о ведущей роли данного подтипа ДА-Р в механизме действия нейролептиков [223].
Ранее предполагалось, что основной механизм действия нейролептиков связан с блокадой рецепторов Д2 подтипа, что характерно для веществ типа галоперидола. В настоящее время рассматривается гипотеза, согласно которой степень клинической эффективности нейролептиков, а также их способности вызывать экстрапирамидные расстройства зависит от плотности связывания с Дг рецепторами [243]. Антипсихотические средства, вызывающие экстрапирамидную симптоматику (например, галоперидол, хлорпромазин, раклоприд, рисперидон) связываются с Дг рецепторами более плотно, нежели нейролептики, не вызывающие подобных расстройств (клозапин, ремоксиприд, оланзапин, кветиапин, сертиндол). Тем же автором показано, что плотность связывания с Дг рецептором обуславливает скорость замещения ДА данного лиганда на рецепторе [244]. В частности, установлено, что клозапин и кветиапин, обладающие, по данным позитронной эмиссионной томографии (ПЭТ), наиболее низким среди атипичных нейролептиков сродством к Дд ДА-Р, вытесняются со своих мест связывания в течение минут, тогда как замещение галоперидола, хлорпромазина, или оланзапина, (т.е. веществ, плотно оккупирующих рецептор) требует времени, на два порядка большего.
Открытие Дз подтипа ДА-Р, сродство к которому у атипичных нейролептиков выше, чем у классических анти психотических средств, позволило говорить о новой мишени действия препаратов данного ряда [251]. Показано, что эти рецепторы локализованы в лимбических структурах мозга и функционально связаны с ДА-ергическим контролем когнитивных и эмоциональных функций [258].
Следует отметить, что Дз, равно как и Да рецептор рассматривается в качестве ауторецептора и, следовательно, может быть вовлечен в реализацию опосредуемых этими структурами эффектов нейролептиков. Ранее было показано, что типичные и атипичные нейролептики могут различаться по влиянию на высвобождение и метаболизм ДА в стриатуме свободноподвижных крыс [129]. Установлено, что атипичные нейролептики ремоксиприд, раклоприд, цис- и транс-изомеры карбидина вызывают более выраженное повышение уровня ДА, чем его метаболитов, в то время как классический антипсихотик галоперидол более эффективно усиливают метаболизм ДА [40]. Данный факт позволяет сделать предположение о том, что неодинаковые эффекты типичных и атипичных нейролептиков, проявляющих различное сродство к Да и Дз ДА-Р, на процессы высвобождения и метаболизма/биосинтеза ДА, опосредуются, по-видимому, различными подтипами ауторецепторов ДА.
Исходя из вышеизложенного можно заключить, что пресинаптическая регуляция высвобождения ДА модулируется, как принято считать в настоящее время, в основном Дз ауторецепторами, тогда как регуляция процессов биосинтеза и метаболизма связана с вовлечением Д2 ДА-Р.
Определение содержания моноаминов и их метаболитов в структурах мозга крыс
Опыты проводились на беспородных белых крысах-самцах массой 180-240 г и крысах линии Вистар массой 160-240 г. Для оценки ряда поведенческих показателей животных использовался тест «открытое поле». Для избежания влияния суточных ритмов на поведенческие показатели животных, эксперименты проводили в одно и то же время суток. Регистрация параметров поведения осуществлялась автоматически с помощью электронно-оптического прибора РОДЭО-2, в котором активность животных определяется путем подсчета количества пересечений световых лучей на четырех уровнях относительно рабочего поля (дна темной камеры). Оценивались следующие поведенческие показатели животных: 1) уровень горизонтального движения (УГ); 2) уровень вертикально-ориентировочной активности - число "стоек" (УС); 3) число обследованных отверстий в полу - показатель исследовательской активности (УН); 4) число отверстий, обследованных в крышке камеры (УВ).
Мониторинг поведения животных осуществлялся в течении 5 мин. Эксперименты проводились по следующей схеме: крыс до введения веществ сажали в экспериментальную камеру на 15 мин, после чего животным вводили одно из исследуемых соединений и в течение последующих 5 мин регистрировали показатели поведения.
Для избежания влияния суточных ритмов на ферментативную активность и уровни нейропередатчиков животных забивали путем декапитащш в период между 9 и 14 часами при температуре лабораторного помещения 22+1 С, (Warren et al.,1984). На льду быстро извлекали мозг и выделяли фронтальную кору, стриатум и прилежащее ядро (Glowinski, Iversen,1966). Затем выделенные структуры размельчали в гомогенизаторе «стекло-тефлон» (0,2 мм) при +10С при скорости вращения пестика 3000 об/мин. В качестве среды выделения использовали 0,Ш НСЮ4 с добавлением 100 нг/мл внутреннего стандарта диок-сибензиламина (ДОБА). Прилежащее ядро гомогенизировали в 40 объемах, а остальные структуры мозга - в 20 объемах среды выделения. Пробы центрифугировали при 10000 g в течение 10 мин. Супернатант использовался в дальнейшем для определения моноаминов и их метаболитов.
Содержание моноаминов и их метаболитов определялось методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимической детекцией (ВЭЖХ/ЭД) на хроматографе LC-304T (BAS, West Lafayette, США) с инжектором Rheodyne 7125 с петлёй на 20 мкл для нанесения образцов. Изучаемые вещества разделяли на обращённо-фазной колонке (3x150 мм, С 4100,5 мкм, МНПП «Элсико», Москва). Маточные стандарты готовили ежемесячно в 0,1 Н НС104 в концентрации 100 мкг/мл с добавлением 0,2 мМ метабисульфита натрия в качестве консерванта. Рабочие стандарты приготовляли из маточных растворов ежедневно. Все использовавшиеся для анализа реактивы были высокой степени чистоты: ОСЧ или analytical grade. Для калибровки хроматографа использовались смеси рабочих стандартов определяемых веществ в соотношении 100 нг/мл. Величины концентрации катехоламинов (КА) в опытных образцах рассчитывали, исходя из отношений высот пиков в стандартной смеси и в образце, по следующей формуле: фактор пересчета для концентрации Kai высота пика КАІ стандарта высота пика КАЇ, определяемого в пробе высота пика ДГБА в стандартном растворе высота пика ДГБА, определяемого в пробе концентрация КАі в стандарте концентрация КАІ, определяемого в пробе
Статистическая обработка полученных результатов Полученные результаты поведенческих экспериментов статистически обрабатывались с использованием непараметрических методов - Уилкоксона и Манна-Уитни, метода точной вероятности Фишера, данные нейрохимических опытов были статистически обработаны с помощью методов параметрической статистики - критерия Стьюдента и отношения дисперсии Фишера (Р.Б.Стрелков, 1986).
Изучение влияния дилтиазема на поведенческие характеристики крыс в тесте «открытое поле»
Нейрохимическое изучение эффектов галоперидола, сульпирида, клозапина и оланзапина на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах головного мозга крыс С целью сопоставления результатов поведенческих опытов, описанных в предыдущих разделах данной работы, с сопутствующими им изменениями нейрохимических параметров моноаминергической передачи мозга, изучено влияние классического нейролептика галоперидола и атипичных - сульпирида, клозапина и оланзапина, на содержание биогенных аминов и их метаболитов в различных структурах головного мозга крыс.
Результаты, полученные при системном введении галоперидола (1 мг/кг), сульпирида (50 мг/кг), клозапина (20 мг/кг) и оланзапина (20 мг/кг), приведены в Табл.3.1. Так, ни один из нейролептиков не вызывал значительного изменения концентрации НА ни в одной из изученных структур мозга. Максимальные изменения данного параметра, не достигавшие, в то же время, статистической достоверности, наблюдались при введении галоперидола и клозапина в гипоталамусе, в котором происходило уменьшение содержания НА. Оланзапин такого эффекта не вызывал. Сходное снижение уровня НА, вызванное сульпиридом, отмечалось в стриатуме и прилежащем ядре. Последние результаты противоречат известным из литературы сведениям, свидетельствующим о стимулирующем влиянии галоперидола на уровень НА в таламусе и в коре [268], однако, следует учесть, что они были получены при введении значительных доз нейролептика (10 мг/кг).
Полученные нами данные позволяют говорить о практически полном отсутствии влияния нейролептиков на содержание ДА. Исключение составлял сульпирид, который умеренно, но статистически достоверно повышал содержание этого нейротрансмиттера во фронтальной коре. Было обнаружено, что практически все изученные нами нейролептики в различной степени вызывали увеличение содержания одного из основных метаболитов ДА-ДОФУК во всех структурах мозга. Исключение составил лишь сульпирид, не влиявший на данный нейрохимический параметр во фронтальной коре и прилежащем ядре. С другой стороны, максимальное повышение содержания ДОФУК отмечалось в n.accurabens при введении галоперидола, а также оланзапина в стриатуме (в 3,5-4 раза). Аналогичным образом, нами было обнаружено повышение содержания другого метаболита ДА - ГВК во всех изученных структурах мозга при введении оланзапина, тогда как уровень ГВК в опытах с галоперидолом и сульпиридом увеличивался более умеренно в прилежащем ядре и стриатуме мозга крыс. Повышение содержания метаболитов ДА в опытах с классическим нейролептиком галоперидолом и препаратами атипичного спектра действия свидетельствует об ускорении оборота ДА в изученных структурах мозга, что хорошо согласуется с результатами других исследователей [142,153]. В частности, на модели внутримозгового микродиализа было установлено, что оланзапин вызывает дозозависимое увеличение содержания ДА и его метаболитов в стриатуме и прилежащем ядре, сходное с наблюдавшимся нами [82,278]. В то же время, в отличие от указанных авторов, обнаруживших увеличение внеклеточного содержания НА при введении оланзапина в тех же структурах, в наших опытах не обнаружено каких-либо достоверных изменений данного параметра ни в стриатуме, ни в коре.
Было показано, что все изученные нейролептики в той или иной степени увеличивали величину соотношений ДОФУК/ДА и ГВК/ДА, которые являются основными показателями скорости кругооборота ДА. Наибольшую эффективность при этом в стриатуме проявляли галоперидол и оланзапин по показателю ДОФУК/ДА (увеличение оборота на 400%), а по соотношению ГВК/ДА- сульпирид (рост до 600%). Оланзапин увеличивал последний показатель во всех изученных структурах в 4-5 раз.
Следует отметить различное влияние изученных классических и атипичных нейролептиков на содержание 5-ОТ и его метаболита 5-ОИУК. Так, было установлено, что клозапин снижал уровень серотонина в гипоталамусе, а галоперидол- во фронтальной коре, В то же время, некоторые соединения обладали разнонаправленностью эффектов. Например, сульпирид увеличивал содержание 5-ОТ в гипоталамусе и стриатуме, но достоверно снижал этот параметр во фронтальной коре. Последний факт может рассматриваться как возможное следствие изменения обмена пролактина, поскольку известно, что сульпирид вызывает увеличение уровня этого гормона в крови, а уровень секреции последнего коррелирует с интенсивностью обмена 5-ОТ в ЦНС [35]. Необходимо указать, что уровень 5-ОИУК возрастал при введении практически всех антипсихотических препаратов. На соотношение 5-ОИУКУ5-ОТ максимальное влияние оказывали галоперидол и сульпирид во фронтальной коре, увеличивая этот показатель на 50-60%. При введении атипичных нейролептиков клозапина и оланзапина возрастание данного показателя отмечалось только в стриатуме. Эти результаты согласуются с данными исследований in vivo, согласно которым оланзапин в дозе 10 мг/кг не изменял.
