Введение к работе
Система гемостаза - совокупность реакций, позволяющая поддер-швать нормальное функционирование организма С одной стороны, она сохраняет кровь в жидком состоянии и предупреждает возникновение тромбозов и эмболии, с другой, вызывая стаз, способствует остановке сровотечений ( КМ. Лакин, 1985; 3.С. Баркаган, 1988; Д. М. Зубаиров і соавт. , 1991; Е. В. Аббакумов и соавт., 1992 и др.).
Все это возможно только при наличие тесной взаимосвязи между :вертывающей, противосвертыващей, нервной, эндокринной и иммунной :истемами.
Лекарственная регуляция гемостаза может осуществляться путем грямого или косвенного воздействия: а) на сосудистую стенку, б) [лазменный гемостаз, в) тромбоциты. При этом, наиболее значимым для аинической практики является возможность подавлять его активность [.тем самым,предотвращать и лечить такие тяжелые и широко распрост-іанекние заболевания, как инфаркт миокарда, нарушение мозгового :ровообращения, отторжение пересаженных органов и тканей и т. д.
Из лекарстве!;ных средств, влияющих на сосудистую стенку, ис-ользуются клофиїфат, цетамефин,политлюкин, колестинол, пробукол и Р.
Свертываемость плазмы понижают гепарин, анкрод. антикоагулянты епрямого действия ( фепромарон, нитрофарин, варфарин, фенилин и р.), активаторы фибринолиза (стрептокиназа, урокиназа, стрептоде-аза и др.).
Угнетение функции тромбоцитов достигается ацетилсалициловой ислотой, тренталом, дипиридомолом, тиклидом и, может быть, пираце-
тамом. Естественно, практическую медицину вышеуказанный перечень препаратов и, в первую очередь, действующих на тромбоцитарное звено гемостаза, не удовлетворяет.
В свяви с изложенным,дальнейший поиск высокоэффективных и малотоксичных веществ, способных подавлять агрегационную способность кровяных пластинок, является актуальным.
Настоявся работа выполнена в соответствии с планом научноисс-ледовательских работ Московского медицинского стоматологического института по проблеме: " Лекарственная регуляция гемостаза " N Гос. регистрации 0190006І170 .
Целью настоящих исследований является поиск и создание новых высокоэффективных антиагрегационных средств.
Для осуществления намеченной цели нами были поставлены следующие задачи:
-
В сравнительном аспекте изучить влияние^ индукторов агрегации-аденозиндифосфорной кислоты(АДФ), коллагена, адреналина, серото-нина, арахидоновой кислоты( АА), фактора, активирующего тромбоцить (ФАТ) на функцию кровяных пластинок, и,в дальнейшем - выбрать соединения для создания оптимальных моделей гиперагрегации.
-
Исследовать влияние новых веществ из разных химические групп и лекарственных средств, взятых в качестве препаратов сравнения, на агрегацию тромбоцитов в условиях in vitro.
-
Отобрать наиболее активные антиагреганты и изучить их способность подавлять функции тромбоцитов в условиях живого организма.
-
Определить способность высокоэффективных веществ ВЛИЯТЬ Hi уровень свободного кальция в цитоп^^зме форменных элементах крови і целью уточнения их возможного механизма действия.
-
Изучить острую токсичность наиболее активных соединений.
Впервые изучена антиагрегационная активность 61 нового химического соединения.
Выявлены вещества, обладающие выраженной способностью подавлять функцию тромбоцитов.
Установлено, что ингибировать агрегацию тромбоцитов способны новые производные имидазола, ксантина, пантотеновой кислоты, прос-тагландиноподобные соединения и др. При сравнительной оценке действия новых химических веществ установлено, что наиболее выраженное антиагрегационное действие присуще синтезированному по оригинальной технологий отечественному дисульфиду коензиму ацетилирования (КоА) и комплексу полиненасыщенных жирных кислот с условным названием "Эпаден".
Впервые показано, что дисульфид КоА и "Эпаден" восстанавливают сниженный кальциевый ответ в клеточных элементах крови больных сердечно-сосудистой патологией.
Установлена низкая острая токсичность перспективного ангиагре-ганта - дисульфида КоА.
Учитывая ограниченное число лекарственных препаратов,угнетающих функцию кроглных пластинок, нами было проведено фармакологическое исследование более 60 новых химических веществ в сравнении с известными лекарственными препаратами.
Результаты нашей работы позволили выявить вещества с антиагре-гационньш эффектом среди производных малоновой кислоты, ксантина, бензимидазода, доноров К+ и Jfe++ и др. Анализ этих данных и соответствующие рекомендации химикам-синтетикам позволят продолжить синтез новых химических соединений с заданными фармакологическими эффектами.
Важным для практической медицины является способность дисульфида КоА и эпадена эффективно угнетать агрегацию тромбоцитов, сочетающуюся с их низкой токсичностью. Кроме того, эпаден улучшает микроциркуляцию, повышает физическую работоспособность и уменьшает перекисное окисление липидов (ПОЛ).
Итоги наших исследований легли в основу пакета документов, предоставленного в Минздравмедпром Российской Федерации с целью получения разрешения на клинические испытания эпадена в качестве средства, улучшающего микроциркуляцию.
Позитивные результаты при изучении специфической активности и острой токсичности дисульфида КоА свидетельствуют о целесообразности продолжения исследований его по параметрам безвредности с перспективой выхода на клинику.
Результаты работы -были доложены и обсуждены на совместном заседании кафедр фармакологии и патофизиологии ЫМСИ лаборатории спектрофлюометрии НПО "Биотехнология".
Материалы проведенных исследований по теме диссертации опубликованы в 58 статьях и тезисах.
Работа изложена на 2Jy страницах машинописного текста, содержит Р, і таблиц, 88 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, о глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего Щ отечественных и 1*ll зарубежных источников.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ на ЗАЩИТУ.
- Изучена антиагрегационная активность новых производных бен-зимидазола, ксантина, пиразолидона, малоната и др.
Исследованы некоторые аспекты механизма действия перспективных антиагрегационных соединений
Установлена выраженная способность дисульфида КоА и эпадена угнетать агрегацию тромбоцитов
Определены специфическая активность и некоторые параметры безвредности дисульфида КоА
Выявлены свойства зпадена улучшать микроциркуляцию, уменьшать перекисное окисление липидов и повышать физическую работоспособность
Изучена специфическая активность и параметры безвредности зпадена в соответствии с требованиями Министерства здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации; материалы переданы в экспертные комитеты МЗ МП РФ для получения разрешения на клинические испытания.
Эксперименты по изучению новых химических соединений и лекаре-гвенных веществ были проведены на 1185 кроликах породы "Шиншилла" массой 2,5-3,5 кг , 150 крысах массой 150-180 г и 250 белых беспородных мышах массой 20-22 г.
1. Определение агрегационной способности тромбоцитов по Born [1962) проводили на агрегометре фирмы Chrono-log (США). Регистрацию степени изменения оптической плотности плазмы, богатой тромбоцитами, при добавлении к ней индуктора агрегации (АДФ, коллаген, АА) ірзводили с нативной плазмой (контроль) и после введения исследуемых веществ через определенные промежутки времени (опыт).
При графической регистрации процесса агрегации тромбоцитов по-г/чали кривые, отражавшие изменение оптической плотности плазмы, іогатой тромбоцитами, (100 %) по сравнению с оптической плотностью 5естромбоцитарной плазмой (0 %).
-
Изучение тканевой микроциркуляции. Интенсивность микроцир-куляторного кровотока измеряли с помощью лазерного доплера Periflux Qd, оснащенного регистрирующим устройством. Лазерный датчик фиксировали на депилированном участке кожи передней брюшной стенки крысь и регистрировали изменения частоты отраженного от движущихся форменных элементов крови лазерного сигнала прибора Значения эффективности кровотока выражались в вольтах.
-
Изучение интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ) проводили в экспериментах in vitro, используя микросомальную фракцию гомогената печени крыс. Концентрацию малонового диадьдегидг (МДА) определяли с помощью реакции с тиобарбитуровой кислотоі спектрофотометрически на аппарате СФ-16.
-
Определение степени физической работоспособности определял! по тесту вынужденного плавания крыс с дополнительным грузом (10 % і массе тела) до полной невозможности удерживаться на поверхности воды и регистрацией времени плавания. Исследования проводили до начала введения вещества (контроль) и через 3 и 6 месяцев введения крысам изучаемого соединения.
-
Определение свободного кальция[Са++]і в цитоплазме лимфоци тов человека проводили с использованием флуоресцентного зонда ФУРА 2АМ. Проникновение ФУРА-2АМ в клетки и степень гидролиза до кислот контролировали по увеличению интенсивности флуоресценции эфира помощью спектрофлюориметра Hitachi F-4000 (Япония).
-
Острую токсичность определяли при внутрибрюшинном введени исследуемых веществ интактным мышам массой 20-22 грамма. Результат учитывали спустя сутки. Расчет средней смертельной дозы (LD50) про водили по методу Litchfield, Wilcoxon (1949).
Статистическую обработку всех данных осуществляли по Стьюдент с использованием ' машинной обработки данных по программе "Vindou
3.1".
![Агрегация тромбоцитов и некоторые регуляторные механизмы тромбоцитарного гемостаза у больных нестабильной стенокардией [Электронный ресурс]](/i/i/4318/212066.png "Агрегация тромбоцитов и некоторые регуляторные механизмы тромбоцитарного гемостаза у больных нестабильной стенокардией [Электронный ресурс] Знаменская Илона Александровна")