Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Современное состояние и перспективы разработки препаратов для лечения заболеваний почек
1.1. Физиология и патология мочевыделительной системы
1.2. Нефропротекторы на фармацевтическом рынке России
1.3. Современные методы консервативного лечения заболеваний МВС
1.4. Характеристика изучаемых объектов
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Объекты исследования
2.2. Методы фармакологических исследований
2.2.1. Определение острой токсичности
2.2.2. Определение антигипоксической активности
2.2.3. Определение мембранопротекторного действия
2.2.4. Определение противовоспалительной активности
2.2.5. Определение иммуномодулирующего действия неф-ропротекторов
2.2.6. Изучение нефропротекторной активности на модели острой интоксикации сулемой
2.2.7. Определение нефропротекторного действия на модели сулемового нефрита
2.2.8. Определение нефропротекторного действия на модели нефрита Хейманна
2.3. Иммунологические и биохимические методы
2.3.1. Определение циркулирующих иммунных комплексов
2.3.2. Определение криоглобулинов
2.3.3. Определение С-реактивного белка
2.3.4. Определение титра гемагглютининов
2.3.5. Определение псевдохолинэстеразы
2.3.6. Определение креатинина
2.3.7. Определение сульфгидрильных групп
2.3.8. Определение церулоплазмина
2.3.9. Определение олигопептидов
2.3.10. Определение ТБК-реактивных продуктов
2.4. Патоморфологические методы
2.5. Статистические методы
Глава 3. Экспериментальные модели патологии почек
3.1. Аутоиммунная патология почек
3.1.1. Аутоиммунный гломерулонефрит Хейманна
3.2. Модели патологии почек, вызываемой нефротоксинами
3.2.1. Модель сулемового нефрозонефрита
Глава 4. Результаты исследования 83
4.1. Результаты оценки острой токсичности 83
4.2. Результаты определения антигипоксической активности 84
4.3. Результаты изучения мембранопротекторной активности 87
4.4. Результаты изучения противовоспалительной активности 89
4.4.1. Результаты изучения антиэкссудативной активности 90
4.4.2. Результаты изучения антипролиферативных свойств 91
4.5. Результаты оценки иммуномодулирующего действия 93
4.6. Результаты скрининга нефропротекторов 98
4.7. Результаты изучения на модели сулемового нефрита 99
4.8. Результаты изучения на модели аутоиммунного гломе-рулонефрита 108
Обсуждение результатов 121
Выводы 125
Научно-практические рекомендации 126
Список литературы 127
- Нефропротекторы на фармацевтическом рынке России
- Определение нефропротекторного действия на модели нефрита Хейманна
- Модели патологии почек, вызываемой нефротоксинами
- Результаты изучения противовоспалительной активности
Введение к работе
Актуальность исследования. Терапия заболеваний мочевыделительной системы имеет много сложностей и нерешенных задач Общий рост заболеваемости населения из-за неблагоприятного влияния техногенных факторов и ухудшения экологической обстановки во многом объясняет увеличение продаж лекарственных средств лечения этих заболеваний сегодня (Мониторинг продаж , 2005) Однако, ассортимент препаратов нормализующих функциональную активность почек очень мал Среди средств, назначаемых больным с пиелонефритами, гломерулонефритами, циститами и мочекаменной болезнью 64% составляют антибиотики и химиотерапевтические препараты (РЛС, 2005), большинство из которых нефротоксичны Для коррекции побочных эффектов и для устранения токсического действия на почки в терапию этих заболеваний необходимо включать средства, защищающие почки от повреждения - нефропротекторы (Лесиовская Е Е, Пастушенков Л В, 2003) Нефропротекторы устраняют кислородную недостаточность и улучшают обменные процессы в почках, препятствуют развитию патологических изменений при различных состояниях и воздействии на почки эндо- и экзотоксинов
Касатик молочно-белый содержит комплекс полифенольных соединений Результаты исследований, проведенных на кафедрах фармакогнозии и фармакологии СПХФА, позволили установить антигипоксическую и иммунотропную активность экстракта касатика (Пряхина НИ, 1984, Мельникова ТИ, 1994) Побеги кустарника караганы колючей служат исходным сырьем для получения ряда фармакологически активных извлечений Доминирующими свойствами экстрактов караганы являются их иммунодепрессивная активность (Николаев В О , 2003) Трава верблюжьей колючки достаточно недавно стала предметом детального химического изучения, а также установления основных видов фармакологической активности (Гончаров М Ю , 2002, Сидибе А , 2003) Расширенное фармакологическое изучение экстракта касатика молочно-белого, экстракта
караганы колючей и травы верблюжьей колючки является перспективным направлением, позволяющим разрабатывать новые препараты на их основе
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось фармакологическое изучение нефропротекторов растительного происхождения - экстрактов касатика молочно-белого, караганы колючей и травы верблюжьей колючки
В задачи исследования входили
Разработка методологии оценки нефропротекторной активности изучаемых извлечений и препаратов на различных моделях патологии почек
Определение острой токсичности экстрактов касатика молочно-белого, караганы колючей и травы верблюжьей колючки
Изучение специфической нефропротекторной активности экстрактов касатика молочно-белого, караганы колючей и травы верблюжьей колючки на моделях сулемового нефрита и аутоиммунного гломерулонефрита
Оценка антигипоксической активности экстрактов касатика молочно-белого, караганы колючей и травы верблюжьей колючки
Изучение мембранопротекторных, противовоспалительных и иммуномо-дулирующих свойств экстрактов касатика молочно-белого, караганы колючей и травы верблюжьей колючки
Диссертационная работа выполнена в лаборатории лекарственной токсикологии ФГ УН Института токсикологии ФМБА России в рамках федеральной целевой программы «Национальная система биологической и химической безопасности Российской Федерации» и на кафедре фармакологии ГОУ ВПО СПХФА Росздравсоцразвития
Научная новизна. Разработан новый методический подход к поиску и изучению потенциальных нефропротектров с учетом степени выраженности их антигипоксической активности Впервые проведено сравнительное исследование экстрактов касатика молочно-белого, караганы колючей и травы верблюжьей колючки, на основных моделях нефропатологии, позволившее оценить степень
5 их влияния на концентрационную и выделительную функции почек, а также динамику морфологических изменений в условиях аутоиммунной и токсической патологии почек
Теоретическая и практическая значимость Выявлены и обоснованы основные критерии, позволяющие определить степень нефропротекторной активности в эксперименте Доказана связь между антигипоксическими свойствами и нефропротекторным действием применяемых в практике препаратов (леспефлана и канефрона Н) и новых извлечений из лекарственного растительного сырья - экстрактов касатика молочно-белого, караганы колючей и верблюжьей колючки
Доказано, что для полного выявления профиля нефропротективных свойств необходимо поэтапное исследование препарата в условиях острой и хронической патологии почек токсического и аутоиммунного генеза В результате сравнительного исследования различных по составу растительных препаратов выявлены перспективные для дальнейшей разработки экстракты При этом важным для изучения клинической эффективности являются выявленные в экспериментах различия в действии растительных средств при поражении почек различного генеза при токсических поражениях, моделирующих преимущественно канальцевую патологию, наиболее эффективными оказались извлечения из травы верблюжьей колючки, а при аутоиммунном варианте поражения - экстракт караганы Универсальным нефропротекторным эффектом обладал только экстракт касатика молочно-белого
Модифицированы две модели поражения почек аутоиммунного гломеру-лонефрита и сулемового нефрита, что позволило более адекватно оценивать степень нефропротекторной активности препаратов Проведены доклинические испытания специфической фармакологической активности экстрактов касатика молочно-белого, караганы колючей и травы верблюжьей колючки, что позволяет создавать на их основе комплексные фитопрепараты, обладающие нефропротекторной активностью
У изученных экстрактов выявлены противовоспалительные, иммуномодули-рующие и мембранопротективные свойства, что также определяет перспективность их клинического применения при острых и хронических заболеваниях почек
Положения, выносимые на защиту:
При поиске потенциальных нефропротекторов обязательными являются исследования их антигипоксических и мембранопротекторных свойств, оценка профилактического и лечебного действия на моделях клубочковой и ка-нальцевой патологии почек
Экстракты касатика молочно-белого, караганы колючей и извлечения из травы верблюжьей колючки обладают выраженной нефропротекторной активностью
3 При преимущественном поражении клубочков почек наряду с канефроном
Н высоко эффективны экстракты касатика и караганы, а при патологии ка
нальцев - извлечения из травы верблюжьей колючки и экстракт касатика
Апробация и публикация материалов исследования. Материалы диссер
тации доложены на юбилейной конференции, посвященной 60-летию факульте
та промышленной технологии лекарств Санкт-Петербургской государственной
химико-фармацевтической академии (Санкт-Петербург, 2005), XIII конгрессе
«Человек и лекарство» (Москва, 2006), I Международном съезде фитотерапевтов
(Москва, 2006) Апробация диссертации прошла на заседании секции фитотера
пии Санкт-Петербургского Общества терапевтов имени С П Боткина (Санкт-
Петербург, 2006)
Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 151 страницах машинописного текста, иллюстрированы 30 таблицами и 11 рисунками Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 2-х глав собственных исследований, главы с обсуждением результатов исследований, выводов, списка использованной
7 литературы Библиографический указатель содержит 249 наименований, в том числе 162 отечественных и 87 иностранных источника
Нефропротекторы на фармацевтическом рынке России
На современном фармацевтическом рынке доля препаратов для лечения заболеваний мочевыделительной системы (МВС) составляет около 18 млрд. долларов США в год. Это составляет примерно 6 % от мирового фармрынка. Фармацевтический рынок Северной Америки, Европы и Японии составляет 2/3 всего мирового фармрынка [144, 145]. Продажи препаратов данной терапевтической категории в этих странах отражены в таблице 1.
Анализ данных литературы позволяет сделать заключение, что лекарственные средства для лечения заболеваний МВС пользуются спросом, и, следовательно, имеет место высокая заболеваемость населения патологией мочевыделительной системы.
Фармацевтический рынок России составляет около 1 % от мирового фармрынка (6,5 млрд. долларов США/год). По сравнению с 2000 годом доля отечественной продукции на фармрынке снизилась до 27 %, в основном за счёт роста импорта: он увеличился почти в 2,5 раза. Среди препаратов для лечения заболеваний МВС более 60 % зарегистрированных импортных лекарств.
Рост продаж лекарств, используемых для лечения заболеваний МВС, обусловлен многими причинами, одной из которых является общий рост заболеваемости из-за неблагоприятного влияния техногенных факторов и ухудшения экологической обстановки. Структура препаратов для лечения этих заболеваний включает такие фармакологические группы как антибиотики и химиотерапевтические средства, иммуномодуляторы, иммунодепрессанты, диуретики, литолитики, простато тропные и другие. Долевой вклад фармакологических групп препаратов в разрезе данной терапевтической категории представлен в таблице 2.
Анализ структуры препаратов данной категории показывает, что основной группой ЛС являются антибиотики и химиотерапевтические средства. Учитывая частоту заболеваемости населения инфекционными заболеваниями почек (например, пиелонефритом), эти препараты весьма гармонично вписываются в рамки стандартных схем лечения. Однако, для лечения гломерулярной патологии почек данный список препаратов не актуален. Так, использование иммунодепрессантов должно происходить под прикрытием средств, восстанавливающих функции неспецифической резистентности организма, а применение антибиотиков или химио-терапевтических средств - под защитой почек и печени от токсических побочных эффектов.
Фитопрепараты для лечения заболеваний МВС представлены на российском фармрынке достаточно скромно. Это, прежде всего, импортные относительно дорогостоящие препараты Канефрон Н, Леспенефрил, Пилозурил, Цистон, Фитоли-зин. Они представляют собой стандартизированные галеновые препараты, широко известные в странах Европы. Отечественная промышленность выпускает один дженериковый препарат Леспефлан и ряд фитосборов для приготовления настоев и отваров. Обзор фитопрепаратов на отечественном фармрынке и в Германии представлен в таблице 3.
Таким образом, доля фитопрепаратов, а также их количество среди средств для лечения заболеваний мочевыделительной системы на российском фармрынке ничтожно малы. А среди имеющихся препаратов 70 % импортируются. В связи с этим является актуальным создание новых эффективных, безопасных и доступных фитопрепаратов на основе отечественного сырья для целей импортозамещения.
Одной из наиболее важных проблем современной медицины является терапия заболеваний мочевыделительной системы. Гиподиагностика этих болезней, несвоевременное начало лечения, а также нерациональный выбор лекарственных препаратов часто приводят к хронизации патологии. Особенно это касается выбора иммунотропных препаратов, когда до начала терапии необходимо определить основные показатели иммунной системы больного. По современным представлениям аутоиммунные заболевания надо лечить не иммунодепрессивными средствами, а препаратами восстанавливующими функциональную активность Т-клеточного звена [143]. Неправильный выбор антибиотической терапии также может служить основой развития резистентности патологической флоры при пиелонефрите, а в тяжелых случаях также увеличивает метаболическую нагрузку на почки, вызывая нефротоксические эффекты и дисбиоз мочевыделительного тракта.
Органопротекторные препараты находят применение в коррекции побочных эффектов ЛС. В классификаторе ЛС [126] можно наблюдать такую фармакологическую группу как гепатопротекторы. Это средства, восстанавливающие функциональную активность печени и защищающие гепатоциты от токсического повреждения. Их назначают при агрессивной химиотерапии, после операций и при работе с профессиональными вредностями. В клинике имеется потребность в нефропротекторах и препаратах с нефропро-текторной активностью. Для целей нефропротекции используются как синтетические, так и природные ЛС. К первым относят ингибиторы АПФ, блокаторы кальциевых каналов, антагонисты рецепторов ангиотензина-2. Ко вторым - галеновые препараты, полученные на основе лекарственного растительного сырья (канефрон, леспенефрил, леспефлан, пилозурил и др.).
Определение нефропротекторного действия на модели нефрита Хейманна
С целью изучения влияния исследуемых препаратов на диурез, иммунологические и биохимические показатели в условиях патологии у животных моделировали экспериментальный гломерулонефрит. Аутологичный иммунокомплексный нефрит Хейманна (мембранозно-пролиферативный гломерулонефрит) воспроизводили у молодых крыс линии BD-9 с массой тела 80-100 г по Albini путём однократной иммунизации животных. Иммунотоксин (гомогенат коры почек крыс, полный адьювант Фрейнда и масло оливковое -1:1:25 по массе) вводили из расчёта 1 мл на 100 г массы тела крысы внутрибрюшинно. Через 10 дней всех проиммунизированных животных помещали в обменные клетки и оценивали нагрузочный диурез. По результатам анализа мочи и выявления протеинурии и эритроцитурии животных разделяли на две группы: отвечающие крысы и толерантные. Толерантных крыс в дальнейшем не использовали. Отвечающим крысам внутрижелудочно вводили изучаемые извлечения и препараты (глутоксим вводили подкожно). Общее время эксперимента - 2 месяца. В крови животных определяли показатели иммунной реакции - уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), криоглобулинов; выраженность нефротического синдрома - по уровню общего холестерина, триглицеридов, креатинина, мочевины, альбумина; степень гипоксии и антиоксидантный статус - по активности лактатдегидрогеназы, уровню общей антиоксидантной активности. Определяли диурез после водной нагрузки. В моче определяли уровень МДА, креатинина, белка, натрия, калия, кальция и хлора, активность псевдохолинэстеразы, а также проводили микроскопическое исследование мочевых осадков. По окончании введения препаратов животных забивали под лёгким наркозом путём мгновенной декапитации. Почки быстро промывали в физиологическом растворе и фиксировали в 10 % растворе формалина. Проводили морфологическое исследование после окраски срезов гематоксилин-эозином.
Для проведения биохимических исследований получали сыворотку после полного сворачивания крови или плазму. При необходимости сыворотки и плазмы хранили в замороженном виде. Мочу для определения маркёров повреждения почек также центрифугировали и хранили в холодильнике.
В исследованиях пользовались унифицированными методами лабораторной диагностики, приборами и стандартными наборами реактивов фирмы «Ольвекс Диагностикум», Санкт-Петербург.
Активность лактатдегидрогеназы определяли оптимизированным кинетическим методом. Содержание креатинина определяли по реакции Яффе псевдокинетическим методом, концентрацию мочевины - уреазным фенолгипохлоритным методом. Общий белок определяли биуретовым методом, альбумин - по связыванию бромкрезолового зеленого; альбумин мочи - по реакции с сульфосалициловой кислотой; холестерин - фенольным энзиматическим методом. Триглицериды определяли энзиматическим методом по конечной точке. Содержание натрия и калия - методом пламенной фотометрии. Концентрацию сульфгидрильных групп определяли по реакции с реактивом Эллмана [174, 186, 195], содержание церулоплазмина - по методу Ревина. Глюкозу определяли глюкозооксидазным фотометрическим методом. Малоновый диальдегид и общую антиоксидантную активность крови определяли по образованию окрашенного комплекса с 2-тиобарбитуровой кислотой [5, 27, 61, 90, 91, 137, 205, 237, 240].
Для определения циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) использовали ПЭГ-метод [99]. Полиэтиленгликоль с молекулярной массой 6000 дальтон в низкой концентрации преципитировал растворимые комплексы антиген-антитело с различной молекулярной массой (агрегация ЦИК). Степень помутнения сыворотки в присутствии ПЭГ-6000 определяли на спектрофотометре при 450 нм по отношению к соответствующему контролю.
Около 3 мл крови инкубировали при 37С в течение 2 часов для осаждения грубодисперсных белков. Затем пробы центрифугировали при 2000 об/мин 15 мин. Полученную сыворотку разводили боратным буфером (0,2 мл сыворотки + 0,4 мл буфера). В контрольную пробирку вносили 0,2 мл разведённой сыворотки и 1,8 мл боратного буфера. В опытную пробирку - 0,2 мл разведённой сыворотки и 1,8 мл раствора ПЭГ-6000 в боратном буфере. Обе пробы инкубировали при комнатной температуре 2 часа и определяли пропускание Т % при 450 нм в 1 см кюветах. Рассчитывали показатель 100 - Т, % как уровень циркулирующих иммунных комплексов.
Для исследования необходима сыворотка крови или плазма, полученная на трилоне. Метод полуколичественный, выражается в % пропускания. Чувствительность около 10 мкг/мл агрегированного иммуноглобулина крови [249]. 2) раствор комплемента морских свинок (содержимое ампулы количественно растворяют в 10 мл ФСБ) 1:5 на фосфатно-солевом буфере рН 7,4; 3) 2,5 % раствор полиэтиленгликоля (ПЭГ-6000) на боратном буфере рН 8,4; Процедура анализа
В сухие пробирки раскапывали по 20 мкл насыщенного раствора ЭДТА, а затем по 200 мкл сыворотки или плазмы крови. Пробы встряхивали и помещали на водяную баню для инактивации собственного комплемента на 1 час.
По прошествии инактивации в лунки планшета раскапывали по 10 мкл не содержащей комплемента сыворотки или плазмы и в эти же лунки прибавляли по 10 мкл раствора комплемента 1:10. Планшет закрывали крышкой и инкубировали при комнатной температуре или в термостате (1 час или 30 мин соответственно).
После инкубации сывороток с комплементом в лунки приливали по 180 мкл 2,5 % раствора ПЭГ-6000 и оставляли для седиментации комплексов антиген-антитело-комплемент. Через 60 мин измеряли абсорбцию растворов на планшетном спектрофотометре при длине волны 450 нм.
Модели патологии почек, вызываемой нефротоксинами
Способность многих промышленных химикатов, веществ природного происхождения и лекарственных средств вызывать поражение почек явилось предметом детальных экспериментальных работ. Нефротоксичность тяжелых металлов была установлена очень давно, однако, механизмы повреждения структур почек конкретными ионами и металлорганическими соединениями открыты лишь в 20-м столетии.
Как указывалось выше, среди тяжелых металлов наиболее избирательными нефротоксинами являются соединения ртути, кадмия, хрома, платины. Эти токсины объединены в группу тиоловых ядов, в связи с особенностями механизма действия. Выраженность патологических изменений, тяжесть почечной недостаточности и исход отравления солями кадмия и хрома подробно описаны в работах зарубежных и отечественных авторов [63, 64,160].
В практической медицине наиболее часто встречаются отравления ртутью. В большинстве случаев острых и хронических отравлений этим элементом ведущим является развитие нефропатологии [78]. Из соединений ртути наиболее токсичны соли двухвалентной ртути и, особенно сулема или дихлорид ртути. Способность сулемы поражать почки многократно превышает таковую других солей ртути: нитрата, сульфата и ацетата. Это связано с природой химических связей в молекуле дихлорида ртути - все связи являются ковалентными, и поэтому молекулы этого яда полностью абсорбируются из желудочно-кишечного тракта. Другие соли ртути, попадая в слабощелочную среду кишечного содержимого, диссоциируют на ионы и образуют нерастворимый гидроксид, а затем оксид ртути.
Соединения урана являются весьма токсичными в отношении почек. Механизм повреждения канальцев совершенно противоположный таковому при отравлении тиоловыми ядами. Для отравления соединениями урана характерны длительный латентный период, появление признаков гипергликемии и глюкозурии [10].
Среди лекарственных препаратов, используемых для моделирования патологии почек, отмечены нестероидные противовоспалительные средства: фенацетин, парацетамол и его главный метаболит 4-аминофенол [217]. Эти вещества являются индукторами нитрозативного и оксидативного стресса в просвете канальцев нефрона и активируют апоптоз нефротелиоцитов, образуют ковалентные сшивки с макромолекулами ткани почек и формируют лекарственные антигены, запускающие каскад иммунологических реакций, приводящих в большинстве случаев к развитию токсико-аллергических тубулоинтерстициальных нефритов [117].
Сулема часто служит модельным токсином, введение которого в организм животных приводит к развитию почечной патологии различной степени тяжести в большей степени, чем патологии других органов. Большая вариабильность возникающих изменений делает модель не очень удобной для экспериментальных целей, но, все же сулемовый нефрозонефрит весьма часто служит моделью патологических процессов в почках при экспериментальных исследованиях [93, 156,157].
Токсическую нефропатию лёгкой, средней и тяжёлой степени моделировали при однократном введении сулемы крысам в дозах 0,1, 1,0 и 5,0 мг/кг. Через 24 часа после начала эксперимента у всех животных определяли значения изучаемых показателей с целью оценки степени интоксикации. Результаты сопоставляли с таковыми интактных крыс. У 70 % животных, которым вводили сулему в дозе 0,1 мг/кг, была установлена лёгкая степень интоксикации, а у 30 % - средняя. В группе, получавшей 1,0 мг/кг, у 70 % крыс определили среднюю степень интоксикации, у 20 % - лёгкую, у 10 % - тяжёлую интоксикацию. При введении сулемы в дозе 5,0 мг/кг отмечали тяжёлую степень интоксикации, заканчивающуюся летальным исходом [28].
Для оценки гипоазотемического действия экстракта десмодиума канадского и его комбинации с другими фитоэкстрактами животным моделировали острую почечную недостаточность. Сулему вводили однократно внутрибрюшинно в дозе 2,0 мг/кг. Изучаемые препараты вводили предварительно и в течение 7 дней после затравки перорально. В качестве препарата сравнения использовали леспенефрил в дозе 1,5 мл/кг. На 1-е, 3-е и 7-е сутки эксперимента определяли уровень азотистых метаболитов в крови. Результаты эксперимента свидетельствовали о развитии выраженной азотемии при отравлении сулемой в данной дозе. Так, через 24 часа содержание мочевины увеличивалось с 5 мМ/л до 30 мМ/л, на третьи сутки до 58 мМ/л, а на седьмые снижалось до 16 мМ/л. Содержание креатинина существенно увеличивалось с 70 мкМ/л до 421 мкМ/л через 24 часа, 942 мкМ/л на третьи сутки и снижалось до уровня 251 мкМ/л на седьмые сутки. Как изучаемый экстракт, так и препарат сравнения значимо снижали выраженность азотемии [156,157].
При анализе имеющихся в литературе данных было установлено, что использование доз сулемы более 1,0 мг/кг у молодых животных часто приводило к необратимой почечной недостаточности и гибели большинства животных. При введении доз порядка 1-5 мг/кг взрослым крысам отмечали почечную недостаточность средней степени тяжести, с трудом поддающуюся лечению [25, 80]. Введение малых доз сулемы сопровождалось обратимыми временными изменениями почек, а затем развитием аутоиммунного гломерулонефрита [167, 168,202,214].
С целью разработки воспроизводимой модели сулемового нефрита были проведены несколько серий экспериментов на крысах обоего пола с различной массой тела от 120 до 240 г. В качестве нефротоксина использовали раствор сулемы на физиологическом растворе, который вводили внутрибрюшинно. Тест-дозой сулемы была выбрана доза 0,5 мг/кг. Через 24, 72 часа и на седьмые сутки проводили биохимический анализ крови. На седьмые сутки определяли содержание ртути в плазме крови, нагрузочный диурез и также проводили биохимическое исследование мочи. Результаты представлены в таблице 12.
Результаты изучения противовоспалительной активности
Воспаление играет ключевую роль в патогенезе заболеваний почек и мочевыводящих путей. При гломерулонефритах развивается хроническое пролиферативное, аутоиммунное воспаление клубочков и других отделов нефрона, а при пиелонефрите - острое или хроническое инфекционное воспаление канальцев и мочевых путей. Пролиферация соединительной ткани при воспалении являтся основой патологического фиброзирования и склероза при хронических гломерулонефритах. Поэтому было актуально изучить антипролиферативную активность препаратов, используемых в клинике в качестве нефропротекторов, и новых препаратов растительного происхождения.
Противовоспалительную активность нефропротекторов изучали на двух моделях, позволяющих оценить влияние препаратов на процессы экссудации и пролиферации.
Изучение противовоспалительного действия нефропротекторов и их влияния на фазу экссудации проводили на модели формалинового отёка лап крыс. Опыты поставлены в двух сериях на 570 крысах самцах массой тела 180-220 г. Исследуемые препараты и экстракты вводили перорально в виде растворов на воде очищенной за 24 часа до субплантарного введения флогогена. Определяли исходный объём лап животных и объём отёчных лап через 24 часа после введения формалина. В качестве препарата сравнения использовали диклофенак натрия. Ставили контрольный эксперимент: животные получали внутрь воду очищенную.
Эффективность снижения экссудации на данной модели отёка оценивали исходя из того, что под влиянием изучаемых препаратов происходило уменьшение объёма лап, измеряемого при помощи онкометра. Результаты экспериментов представлены в таблице 18. Препарат сравнения диклофенак натрия в дозе 8,5 мг/кг значительно снижал отёчность лап крыс, вызванную введением формалина.
Анализ полученных данных свидетельствует, что для всех изученных препаратов характерна антиэкссудативная активность. При увеличении доз наблюдается повышение антиэкссудативной активности, причём эти дозы для официнальных препаратов не превышали среднесуточные дозы, рекомендуемые в инструкциях по применению этих препаратов.
В группе животных, получавших ЭК, увеличение антиэкссудативной активности до 58 % наблюдали при введении дозы 70 мг/кг, а при введении дозы 210 мг/кг - до 69 %. СЭКК также проявлял антиэкссудативную активность, которая была максимальной. НВК обладал высокой антиэкссудативной активностью при введении в дозах 7 и 14 мл/кг. В дозе 14 мл/кг по эффективности настой был сравним с препаратом сравнения диклофенаком натрия. Леспефлан проявлял слабую антиэкссудативную активность при введении в дозах 0,2 мл/кг и 1,0 мл/кг. Значительное увеличение активности наблюдали при увеличении доз. В дозе 5,00 мл/кг леспефлан по активности превосходил препарат сравнения диклофенак натрия.
Активность нефропротекторов изучали на модели неиммунного воспаления, вызванного имплантацией в подкожную клетчатку стерильного хлопкового шарика. Опыты поставлены в двух сериях на 380 крысах самцах массой тела 180-220 г. Исследуемые препараты вводили в течение 7 дней перорально в виде растворов, приготовленных на воде очищенной. На 8-е сутки определяли массу влажной и сухой гранулёмы. Рассчитывали антипролиферативную активность по отношению к активности препарата сравнения, активность которого была принята за единицу. Результаты экспериментов представлены в таблице 19.
Диклофенак натрия в эффективной дозе значительно замедлял пролиферативные процессы в очаге воспаления. Изученные препараты обладали умеренной антипролиферативной активностью. Масса грануляционно-фиброзной ткани была существенно меньше, чем в контрольной группе.
В группе животных, получавших ЭК, антипролиферативная активность проявлялась при введении всех исследованных доз. В дозе 210 мг/кг ЭК наиболее выражено подавлял пролиферативную реакцию.
