Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы. фукус пузырчатый - fucus vesiculosus l. и его применение в современной медицинской и гомеопатической практике
1.1. Морские водоросли и их значение для медицины 9
1.2 Фукус пузырчатый и его применение 15
1.3 Современные требования к качеству настойки гомеопатической 19 матричной Фукус
1.4 Полисахариды, как основной компонент биологически активного 24 комплекса морских водорослей. Химическое строение, методы анализа
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ I 31
Экспериментальная часть. пояснение к эксперименту 32
ГЛАВА II. Определение показателей качества свежего и высушенного сырья фукуса пузырчатого
2.1 Макроскопический анализ 37
2.1.1 Определение макроскопических признаков слоевищ Фукуса пузырчатого свежих
2.1.2 Определение макроскопических признаков слоевищ Фукуса пузырчатого высушенных
2.2 Микроскопический анализ 38
2.3 Определение содержания сока в свежем сырье и влажности сухого сырья Фукуса пузырчатого
2.4 Определение содержания золы общей и золы, не растворимой в растворе 10 % хлористоводородной кислоты
2.5 Определение содержания допустимых примесей 44
2.6 Определение микробиологической чистоты 45
2.7 Радиационный контроль сырья 46
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ II 48
ГЛАВА III. Фотохимическое изучение сырья фукуса пузырчатого
3.1 Разработка критериев подлинности для сырья Фукуса пузырчатого 49
3.2 Разработка методик качественного и количественного определения биологически активных веществ
3.2.1 Методики качественного определения моносахаридов в сырье Фукуса
3.2.1.1 Исследование моносахаридов в соке и спиртовом извлечении из слоевищ Фукуса методом ВЭЖХ
3.2.1.2 Изучение мономерного состава полисахаридного комплекса, выделенного из сырья Фукуса пузырчатого
3.2.2 Методики количественного определения суммы полисахаридов и суммы моносахаридов в сырье Фукуса
3.2.2.1 Методика количественного определения суммы полисахаридов в сырье Фукуса гравиметрическим методом
3.2.2.2 Методика количественного определения суммы моносахаридов в пересчете на глюкозу спектрофотометрическим методом
3.2.3 Разработка методики количественного определения йода в сырье Фукуса
3.3. Исследование динамики накопления полисахаридов и соединений йода в слоевищах Фукуса пузырчатого в зависимости от стадии вегетации
Выводы к главе III 76
ГЛАВА IV. Фитохимическое исследование настоек гомеопатических матричных fucus
4.1 Технология настоек гомеопатических матричных Fiicus 11
4.2 Разработка методик качественного определения биологически активных веществ в НГМ Fucus
4.3 Разработка методик количественного определения действующих 84 веществ в НГМ Fucus
4.3.1 Методика количественного определения суммы моносахаридов 84
после гидролиза в НГМ Fucus
4.3.2 Количественное определение йода в НГМ Fucus 87
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ IV 90
ГЛАВА V. Оценка фармакологической активности настоек гомеопатических матричных fucus, их разведений и выделенных из них моно- и полисахаридных фракций
5.1 Современные подходы к использованию биотест-систем для оценки фармакологической активности настоек гомеопатических матричных и их разведений
5.2 Результаты исследований фармакологической активности Fucus 92
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ V 96
ГЛАВА VI. Разработка показателей качества и установление срока годности лрс, нгм fucus. анализ гомеопатических разведений
6.1 Разработка показателей качества ЛРС Фукуса. Установление срока 97 годности сырья.
6.2 Разработка показателей качества и установление сроков годности 102 НГМ Фукуса
6.3 Методика анализа гомеопатических разведений НГМ Fucus 108
vesiculosus
Выводы к главе VI
Общие выводы
Литература
- Фукус пузырчатый и его применение
- Определение макроскопических признаков слоевищ Фукуса пузырчатого свежих
- Методики качественного определения моносахаридов в сырье Фукуса
- Разработка методик качественного определения биологически активных веществ в НГМ Fucus
Введение к работе
Актуальность темы. В последние годы в отечественном практическом здравоохранении наблюдается устойчивая тенденция применения наряду с аллопатическим гомеопатического метода лечения, что в свою очередь, сопровождается появлением на фармацевтическом рынке России отечественных гомеопатических лекарственных средств (ГомЛС) [100,101].
Однако, их ассортимент существенно уступает таковому зарубежных гомеопатических препаратов, что обусловлено рядом причин как объективного, так и субъективного характера. К их числу следует отнести отсутствие Российской Государственной Гомеопатической фармакопеи, нормирующей качество отечественных ГомЛС, ограниченный перечень отечественных гомеопатических субстанций различного происхождения, в том числе настоек гомеопатических матричных (НГМ), производство которых может быть организовано на базе отечественных гомеопатических предприятий [2,3,4].
Наряду с этим, не менее актуальной задачей отечественной медицинской практики является увеличение ассортимента ГомЛС, назначаемых для профилактики и лечения, наиболее выраженных патологий, к числу которых следует отнести нарушение обменных процессов, протекающих в человеческом организме [79, 105].
Среди растительных объектов, используемых для этих целей в мировой гомеопатической практике, следует отметить различных представителей бурых водорослей. Наиболее часто используются представители рода ламинария - Laminariacae L., которые в настоящее время применяются в отечественной и зарубежной медицинской практике как лекарственные средства, так и биологически активные добавки (БАД) к пище [54,92,120,121,144,162]. Однако не менее интересен с этой точки зрения другой представитель бурых водорослей - Phaeophyta, фукус пузырчатый — Fucus vesiculosus L.
Благодаря высокому содержанию йода, полисахаридов и других биологически активных веществ (БАВ) различные виды бурых водорослей применяются при заболеваниях щитовидной железы, воспалениях лимфатических желез и различных видах алиментарного ожирения [19,76,77,80,123,146,148,162,191,195,196,197].
НГМ Fucus включена в руководство В. Швабе, а также в различные
отечественные и зарубежные гомеопатические рецептурные справочники и
фармакопеи, такие как гомеопатическая фармакопея России (1913 г.),
государственные гомеопатические фармакопеи Германии,
Великобритании, Франции, Индии и др. [44,46,47,49].
В связи с подготовкой гомеопатической фармакопеи России представляется актуальным проведение исследований, необходимых для разработки нормативной документации (НД) на лекарственное растительное сырье (ЛРС) и НГМ Fucus.
Цель и задачи исследования. Целью диссертационного исследования является фармакогностическое изучение слоевищ Фукуса пузырчатого, получение и фотохимическое исследование настоек гомеопатических матричных Fucus, препаратов Фукуса и их стандартизация.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Изучить фотохимический состав свежесобранного и высушенного сырья Фукуса пузырчатого и разработать методики качественного и количественного анализа основных групп БАВ.
Предложить технологию получения и провести исследования химического состава НГМ из свежесобранного и высушенного сырья Фукуса. Разработать методики контроля качества НГМ.
Разработать методики установления подлинности гомеопатических разведений Фукуса.
4. Провести предварительную оценку фармакологической активности
НГМ Фукус и ее разведений.
5. Оформить проекты Фармакопейных статей на «Фукуса пузырчатого
слоевища»; «Фукуса пузырчатого слоевища свежие»; «Fucus vesiculosus
настойку гомеопатическую матричную» и «Fucus vesiculosus Dl
настойку гомеопатическую матричную».
Научная новизна. Определены основные макро- и микродиагностические признаки сырья, его товароведческие показатели, установлены оптимальные сроки заготовки и условия сушки, для свежезаготовленного сырья - сроки использования и методы консервации.
С применением современных методов химического и физико-химического анализа установлен качественный и количественный состав БАВ свежих и высушенных слоевищ Фукуса пузырчатого. Определено, что в слоевищах Фукуса пузырчатого содержатся соединения йода и полисахариды. Так как полисахариды являются основной группой БАВ для этого растительного сырья, то с применением тонкослойной хроматографии (ТСХ), высоко-эффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и спектроскопии ядерного магнитного резонанса ( С) определен их компонентный состав. Показана необходимость стандартизации лекарственного растительного сырья Фукуса по содержанию в нем полисахаридов (гравиметрический метод), суммы моносахаридов после гидролиза в пересчете на глюкозу (метод УФ-спектроскопии) и йода (титриметрический метод).
Предложена технология и разработаны показатели качества, а также методы их оценки для НГМ Фукус из свежего и высушенного ЛРС и лекарственных препаратов на их основе. Установлено, что для препаратов Фукуса также целесообразно использовать в качестве основных показателей качества содержание в них свободных Сахаров, полисахаридов и йода.
Впервые проведено тестирование НГМ Фукус и их разведений,
свободных и связанных моносахаридов с использованием биотест-систем в
опытах in vitro, позволившая выявить выраженное антиоксидантное
действие анализируемых объектов.
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны проекты ФС:
«Фукуса пузырчатого слоевища свежие»;
«Фукуса пузырчатого слоевища»;
«Fucus vesiculosus (Fucus) настойка гомеопатическая матричная»;
«Fucus vesiculosus (Fucus) D1 настойка гомеопатическая матричная».
Связь задач исследования с проблемным планом развития фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГУ ВИЛАР РАСХН по «Программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса РФ на 2001-2005 и 2006-2010 г.г».
Основные положения, выносимые на защиту:
Результаты исследований химического состава свежесобранного и высушенного сырья Фукуса и НГМ Фукус, приготовленных из него,
в сравнительном аспекте;
Методики качественного и количественного анализа действующих веществ в ЛРС и НГМ Фукус, их разведениях;
Результаты оценки фармакологической активности НГМ Фукус, и их разведений, а также выделенных из них моно- и полисахаридных комплексов;
Проекты фармакопейных статей на ЛРС и НГМ Фукус.
Фукус пузырчатый и его применение
Лекарственным сырьем является высушенное слоевище, очищенное от приставших к нему раковин и других водорослей. В сырье содержится до 1 % органически связанного йода, что обуславливает в основном его фармакологическую активность, много слизи (бассарин), фикоксантин, фикодианин, маннит, в золе обнаружены хлористая и фосфорнокислая извести, соли натрия (йодистый и бромистый натрий), железо. В обугленном состоянии, под названием Aethiops vegetabilis (водорослевый уголь) уже в семнадцатом столетье известно было как средство против зоба и золотухи. В виде тинктуры принимали внутрь 2 — 3 раза в день по 20 капель и больше. Duchesne-Duparc рекомендовал пузырчатую водоросль, как средство против ожирения. Пациент должен выпивать ежедневно отвар из 20,0 водоросли и, кроме того, принимать по 1,0 - 2,0 вытяжки. Так как норвежцы употребляют пузырчатую водоросль как средство для откармливания свиней, то обезжиривающее действие ее пока представляется сомнительным. При употреблении пузырчатой водоросли в виде чая, последний приходится пить в горячем состоянии, причем в организм вносится большое количество растворившейся слизи, которая скорее поддерживает, чем задерживает образование жира; вкус такого чая, весьма неприятен. Поэтому пузырчатую водоросль следовало бы назначать против ожирения только в виде спиртового экстракта [19,37,146].
Широкое применение также находил густой экстракт Фукуса, полученный с использованием 45% спирта этилового, как средство против ожирения пассивной водянки. Помимо этого, использовался жидкий спиртовой экстракт Фукуса пузырчатого, а также сироп. Среди лекарственных форм, в которых наиболее широко использовались экстракт и порошок Фукуса пузырчатого, следует отметить пилюли и болюсы. Достаточно часто их сочетали с такими растительными объектами, как листья сенны, кора крушины, обладающих слабительным действием, а также корни алтея, характеризующиеся противовоспалительным и мягчительными свойствами. Суточный прием составляет от 3 до 12 пилюль по соответствующей схеме, однако, обязательным условием является соблюдение диеты. Фукус пузырчатый включен в British Herbs Pharmacopea как средство против ожирения, влияющее также на функцию щитовидной железы [148,156,162].
Как биологически активная добавка к пище Фукус перспективен тем, что содержит полисахариды (альгиновую кислоту — 24,8 %, фукоидан - 14,7 %, маннит - 9,3 %), микро- и макроэлементы, витамины А, Вь В2, Вб, В12, С, D, Е; йод в форме органических солей, а также связанные с белком полифенолы, обладающие антибактериальным действием. Альгинаты, кроме сорбирующей активности, обладают выраженным гипоаллергенным эффектом, стимулируют фагоцитоз, снижают риск возникновения сердечных заболеваний. У фукоиданов обнаружена антикоагулянтная, антивирусная (против ВИЧ - инфекции в том числе), гиполипидемическая, иммуномодулирующая активность и весь спектр биологического действия, характерный для сульфатированных полисахаридов, что делает их перспективными в лечении гастрита, хронического гепатита, язвенной болезни двенадцатиперстной кишки. Благодаря высокому содержанию йода Фукус использовался раньше преимущественно в форме галеновых препаратов при заболеваниях щитовидной железы. В настоящее время Фукус стал весьма популярным, как средство для снижения массы тела, из-за способности усиливать обмен веществ. В связи с этим он активно используется в виде различных пищевых добавок таких, как "Альга Люкс", "Экспресс", "Черный орех", "Натуральный чай", "Чай Индейская легенда" (США) [115,145].
Однако, наиболее широко в настоящее время Фукус пузырчатый и его препараты применяются в гомеопатии для регулирования функций щитовидной железы, при воспалении лимфатических желез, их затвердении, раковых поражениях желез, кожи, мошонки, легких и др., при ожирении [176,191,195,196,197,205].
Фукус широко используется в гомеопатической практике зарубежных стран, статьи на его препараты включены в гомеопатические фармакопеи Германии, Франции, Великобритании, Индии и др.
Фукус пузырчатый является основой ряда препаратов, выпускаемых гомеопатическими предприятиями России и зарубежья.
В частности, в качестве препаратов применяются Fucus vesiculosus-Injeel (forte) (D4), D12, D30, D200, как средство, показанное при увеличении лимфоузлов, зобе, ожирении, атеросклерозе. Fucus vesiculosus содержится в Strumeel (forte), Thyreoidea compositum [204].
В числе отечественных комплексных гомеопатических препаратов, уменьшающих повышенное чувство голода, нормализующих углеводный и липидный обмен следует отметить такие, как вес - норасан (Новосибирск), Фукус (Санкт-Петербург) а также гомеопатические лекарственные средства «ЭДАС»: капли ЭДАС-107, в состав которых входят: Fucus СЗ, Graphites Сб, Ignatia С12, а также гранулы ЭДАС — 907 следующего состава: Fucus СЗ, Grapites Сб, Ignatia С12, Cimicifuga Сб, Calcium carbonicum Сб [47,54].
Основное действие и показания к применению этих препаратов заключаются в том, что они влияют на нервную и эндокринную системы, на жировой и углеводный обмен. Применяются при нарушениях обмена веществ, предрасположенности к избыточной массе тела, ожирение.
Определение макроскопических признаков слоевищ Фукуса пузырчатого свежих
Олигосахариды (полисахариды 1 порядка) - (от греч. oligos-немногий) - низкомолекулярные полиозы, построены из небольшого числа остатков моноз (как правило, 2 - 4) и представляют собой кристаллические вещества, хорошо растворимые в воде. Полисахариды 2 порядка (высшие полиозы) биополимеры с большой молекулярной массой (молекулярная масса колеблется от нескольких тысяч до нескольких миллионов), дающие коллоидные растворы или вообще нерастворимые в воде и построенные из моносахаридов и уроновых кислот, соединенных друг с другом гликозидной связью. Это большей частью аморфные, реже кристаллические вещества, нерастворимые в спирте и неполярных органических растворителях, растворимость в воде варьирует: некоторые линейные гомополисахариды (ксиланы, маннаны, целлюлоза, хитин) в воде не растворяются из-за прочных межмолекулярных связей, сложные или разветвленные полисахариды либо растворяются в воде (гликоген, декстраны), либо образуют гели (пектины, агар-агар, альгиновые кислоты). Полисахариды подвергаются кислотному или ферментативному гидролизу с образованием моно- или олигосахаридов.
По степени кислотности полисахариды подразделяются на нейтральные и кислые; по характеру скелета на линейные и разветвленные; по степени однородности блоков на гомополисахариды и гетерополисахариды. Также как и в дисахаридах, связь между отдельными моносахаридными фрагментами может осуществляться по типу 1-4 , 1-6 , 1-3 , 1-2 , при а- и Р-конфигурациях гликозидного центра (за исключением варианта 1-1 гликозил-гликозидной связи).
Согласно классификации А. Е. Чичибабина гомополисахариды подразделяются на группы, представленные в табл. 1.4.2. Гетерополисахариды по той же классификации подразделяются на: 1. гемицеллюлозы; 2. камеди, слизи; 3. мукополисахариды - полисахариды, связанные с белками (например, в гликопротеинах). Наиболее часто встречающиеся полисахариды - целлюлоза, крахмал, инулин, слизи и камеди [87,88,133,135,155,138,158].
В фармацевтической практике при проведении анализа растительного сырья или фитопрепаратов на содержание в них полисахаридов обычно используются методики, которые разрабатываются по трем направлениям:
Кислотный гидролиз выделенной из растений полисахаридной фракции и количественное определение суммы образовавшихся моносахаридов по тем или иным цветным реакциям. Так, содержание водорастворимых полисахаридов в цветках липы сердцевидной и василька синего оценивают после гидролиза и взаимодействия полученных моно Сахаров с пикриновой кислотой с последующим спектрофотометрированием.
Определение суммы полисахаридов без проведения гидролиза, что уменьшает многостадийность и значительно сокращает время анализа. Такой способ качественной и количественной оценки выделенной из растений полисахаридной фракции предложен по реакциям образования комплекса полисахаридов с йодом (обратное йодометрическое титрование). Способ опробован для водорастворимых полисахаридов подорожника и мать-и-мачехи [19,161]. Проведение иммуноферментного анализа по реакции антиген-антитело. Метод позволяет оценить не только количество субстанции, но и ее иммунную активность, т.е. биологическое действие. Такой метод разработан для определения иммуноактивных полисахаридной и гликопротеиновой фракций в экстрактах Echinacea purpurea, Baptisia tinctoria и препарате Esperanto. [27,126,166,180].
К химическим методам определения полисахаридов относятся непосредственно реакции, проводимые в разных условиях (табл. 1.4.3). Полисахариды обладают низкой восстанавливающей способностью, поэтому чаще определение производят после их полного гидролиза при специально подобранных оптимальных условиях (концентрация кислоты, время гидролиза). При кислотном гидролизе восстанавливающие свойства определяются количеством освободившихся Сахаров [58,132].
Метод хроматографии на бумаге, широко употребляемый для разделения свободных полисахаридов, их производных, а также олигосахаридов, позволяет эффективно анализировать сложные смеси Сахаров, содержащихся в очень малых количествах.
Распределение Сахаров на хроматограммах определяется их строением: числом углеродных атомов, циклической формой, наличием тех или иных заместителей. Так, сахара с фуранозной формой быстрее движутся с фронтом растворителя, чем вещества с пиранозной формой; замена у альдогексоз оксиметильной группы на метальную повышает подвижность сахара, а удлинение углеродной цепи на формильную группу снижает ее. Следует подчеркнуть, что хроматография на бумаге не позволяет провести полную идентификацию вещества. Строение сахара устанавливают лишь после его выделения в чистом виде и определения целого ряда физико-химических характеристик (температуру плавления, удельного вращения, инфракрасного спектра и т. д.) [11,12,13,14,142,159,202,208]. С помощью метода хроматографии на бумаге определяют не только качественный состав смеси Сахаров, но и количественное содержание каждого из них. Сахара элюируют с бумаги, после чего их содержание в элюате определяют колориметрически по реакции сахара с фенолом и серной кислотой по сравнению с контрольным опытом.
Методики качественного определения моносахаридов в сырье Фукуса
Для проведения исследований свежего сырья использовали сок Фукуса пузырчатого, при анализе высушенного сырья готовили водные и спиртовые извлечения, которые изучали с применением методов химического и физико-химического анализа.
При исследовании качественного состава биологически активного комплекса Фукуса пузырчатого слоевищ были проведены испытания на присутствие моносахаридов и полисахаридов, а также йода [7,21,40,41,42,51,58,78,90,119,149,160].
Качественные реакции на группы биологически активных веществ проводили по приведенным ниже методикам.
Реакция с реактивом Фолина-Дениса (смесь фосфорно-молибденовой и фосфорно-вольфрамовой кислот): к 3 мл извлечения прибавляют 3 капли реактива Фолина-Дениса и небольшое количество натрия гидрокарбоната. Отсутствие устойчивой окраски свидетельствует об отсутствии дубильных веществ.
Проба Синода: К 1 мл извлечения прибавляют ОД г смеси порошков магния и цинка и 2 мл концентрированной хлористоводородной кислоты.
При нагревании на водяной бане наблюдают появление розовато-коричневого, переходящего в желто-коричневое окрашивание, свидетельствующее о наличии лишь следовых количеств флавоноидных соединений.
Реакция с диазотированной сулъфаниловой кислотой: К 1 мл извлечения добавляли 1-2 мл 0,1М раствора натрия гидроксида, охладили и смешали с 1 мл диазотированного раствора сульфаниловой кислоты. Отсутствие оранжево-красного окрашивания, свидетельствовало об отсутствии фенолкарбоновых кислот.
Определение йода проводилось в соответствии с методикой ГОСТ 26185-84 «Водоросли морские, травы морские и продукты их переработки». 0,5 г исследуемого образца Фукуса помещают в тигель, приливают 5 мл 33 % раствора натрия гидрокарбоната, высушивают и обугливают в муфельной печи при слабом калении (400 - 450С) до сероватого цвета.
Обугленную массу промывают от угля водой дважды по 25 мл. Промывные воды собирают в колбу, подкисляли концентрированной серной кислотой, прибавляют 2 капли 25 % раствора натрия нитрита и 1мл свежеприготовленного крахмала.
Раствор приобретает синее окрашивание, что свидетельствует о присутствии в слоевищах Фукуса пузырчатого йода. Для идентификации моносахаров были использованы следующие реакции: Реакция на восстанавливающие сахара (с реактивом Фелинга):
К 2 мл испытуемого раствора прибавляют 3-4 капли концентрированной хлористоводородной кислоты (для гидролиза полисахаридов) и 3 мл реактива Фелинга и нагревают в пламени горелки. Выпадает красный осадок закиси меди, что свидетельствует о присутствии восстанавливающих Сахаров. Реакция на кетогруппу в молекуле моносахара:
К 1 мл испытуемого раствора прибавляют 8-10 капель 20 % раствора дифениламина в этиловом спирте и 1 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и нагревают в течение 10-30 мин на кипящей водяной бане. Появление синего окрашивания характеризует наличие гексоз. Реакция на гексози:
К 0,2 мл исследуемой жидкости осторожно приливали 4 мл концентрированной серной кислоты и смешивают с 0,2 мл 5 % раствора галловой кислоты. Появление зеленого окрашивания свидетельствует о наличии в слоевищах Фукуса пузырчатого гексоз или полисахаридов, содержащих гексозы.
Полученные данные ориентировочного фитохимического анализа свидетельствуют о том, что в слоевищах Фукуса пузырчатого содержатся соединения йода, свободные моносахара и полисахариды. Эти результаты явились основанием к проведению более детального анализа качественного состава этих групп БАВ с помощью методов тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии, С - спектроскопии.
Разработка методик качественного определения биологически активных веществ в НГМ Fucus
Определение суммы моносахаров проводят после кислотного гидролиза полисахаридов. Аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц проходящих сквозь сито с отверстиями диаметра 2 мм. Около одного 1 г (точная навеска) помещали в колбу вместимостью 100 мл со шлифом, прибавляли 50 мл воды очищенной. Колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течении 2 часов. Извлечение фильтровали через бумажный фильтр в плоскодонную колбу вместимостью 50 мл и доводили объем раствора водой до метки. 10 мл полученного извлечения с помощью пипетки переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили объем раствора водой до метки (раствор А). 1 мл раствора А переносили в центрифужную пробирку, добавляли 2 мл 96 % этилового спирта, перемешивали и нагревали на водяной бане до выпадения полисахаридов в осадок, охлаждали. Через 1 час содержимое пробирки центрифугировали в течении 10 мин в центрифуги со скоростью вращения 3000 об/мин. Осадок промывали 5 мл спирта этилового 50 % и высушивали в сушильном шкафу при температуре 100 - 105С. Сухой образец полисахаридного комплекса помещали в ампулу и прибавляли 1 мл 1 М трифторуксусной кислоты. Ампулы запаивали и выдерживали при температуре 100 - 105 С в сушильном шкафу в течении 3 часов. По истечении времени гидролиза ампулы охлаждали, вскрывали, гидролизаты центрифугировали и упаривали на роторно-пленочном испарителе досуха, к сухому остатку прибавляли 5 мл этилового спирта и вновь упаривали досуха до исчезновения запаха трифторуксусной кислоты.
Сухой остаток количественно переносят в стакан вместимостью 50 мл; колбу промывают 5 мл 30 % раствора гидроксида натрия, а затем еще четыре раза по 5 мл воды очищенной. Промывные воды присоединяют к основному раствору, который нейтрализуют до рН 6,5-7,0 по универсальному индикатору с помощью 30 % раствора гидроксида натрия или 10 % раствора серной кислоты. Затем раствор переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят до метки водой очищенной, перемешивают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр «белая лента» диаметром 7 см, отбрасывая первые 15-20 мл фильтрата (раствор Б). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,5 мл 1 % водного раствора пикриновой кислоты, приливают 7,5 мл 20 % водного раствора натрия карбоната и перемешивают, затем приливают 5 мл раствора Б и погружают одновременно колбу с опытным образцом и колбу с раствором сравнения в кипящую водяную баню на 10 минут. После этого колбы охлаждают и доводят объем раствора водой до метки. Измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 455±5 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм (рис. 3.2.2.2.16). В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 2,5 мл 1 % водного раствора пикриновой кислоты, 7,5 мл 20 % раствора натрия карбоната, доведенный водой очищенной до метки. Параллельно измеряют оптическую плотность РСО глюкозы, приготовленного следующим образом: 5 мл раствора РСО глюкозы, 2,5 мл 1 % водного раствора пикриновой кислоты, 7,5 мл 20 % водного раствора натрия карбоната и доводят объем раствора до метки водой очищенной.
Определение проводилось согласно требованиям методики определения свободного и связанного йода в водорослях, приведенной в ГОСТ 26185-84.
Аналитическую пробу свежего или высушенного сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм.
Около 1 г сырья (точная навеска) помещают в фарфоровый тигель, смачивают 5-10 каплями 33 % раствора гидроксида натрия и осторожно обугливают на электрической плитке. Затем прокаливают в муфельной печи при слабом калении (400 - 450 С), периодически смачивая водой до появления черно-стального оттенка золы (т.е., до появления угля). Полученный уголь измельчают стеклянной палочкой в порошок, добавляют 10 мл горячей воды, затем перемешивают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр «белая лента» в цилиндр вместимостью 100 мл. Остаток на фильтре промывают 5-6 раз горячей водой таким образом, чтобы общий объем фильтратов в цилиндре не превышал 60 мл. После охлаждения фильтрата объем жидкости в цилиндре доводили водой очищенной до 60 мл и прибавляли 10 мл хлороформа, 6-7 капель кислоты серной концентрированной и 3-4 капли раствора 25% натрия нитрита. Смесь интенсивно взбалтывали в течение 2 минут, а затем проводили титрование выделившегося йода раствором натрия тиосульфата до обесцвечивания хлороформного слоя. Параллельно проводили контрольный опыт, в котором вместо фильтрата угля используют воду очищенную и все остальные реактивы, как при титровании опытного образца.
По предложенным нами методикам изучена динамика накопления полисахаридов и йода в лекарственном растительном сырья Фукуса пузырчатого в зависимости от стадии вегетации. Образцы сырья заготавливались с мая по сентябрь в одном и том же участке Чупинского .залива Белого моря. Определение суммы полисахаридов проводили гравиметрическим методом согласно методике ГФ XI изд.; определение содержания йода проводили титриметрическим методом после сжигания сырья в муфельной печи и последующего гидролиза и выделения свободного йода.
Содержание суммы полисахаридов и йода в лекарственном растительном сырье Фукуса в течение всего срока вегетации представлено соответственно нарис. 3.2.3.17 и 3.2.3.18.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что заготовку слоевищ Фукуса пузырчатого можно осуществлять в течении всего вегетационного периода, то есть с мая по сентябрь.
![Совершенствование методов стандартизации лекарственных средств на основе корневищ радиолы розовой [Электронный ресурс]](/i/i/4381/176171.png "Совершенствование методов стандартизации лекарственных средств на основе корневищ радиолы розовой [Электронный ресурс] Петрова Елена Сергеевна")