Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Синтез, свойства и биологическая активность производных цинхониновой кислоты 8
1.1. Хинолин-4-карбоновая (цинхониновая) кислота, методы синтеза 9
1.2. Амиды цинхониновых кислот 12
1.3. Кислоты и амиды 2-замещенных цинхониновых кислот 14
1.4. Синтез на основе 2-замещенных цинхониновых кислот 24
1.5. Биологическая активность производных хинолин-4-карбоновых кислот 27
1.6. Общие выводы по синтезу и биологической активности цинхони новых кислот. Постановка задач исследований 33
Глава 2. Синтез и свойства амидов 2-замещенных цинхониновых кислот 35
2.1. Замещенные амиды 2-хлор-, 2-К-амино-, 2-((3-арилгидразино)-цинхониновых кислот 35
2.2. Изопропиламиды 2-алкоксицинхониновых кислот 45
2.3. Изопропиламиды 2-(4-сульфамиланилино)цинхониновых кислот 53
2.4. Амиды (4-карбамоилхинолил-2)циануксусной кислоты 58
2.5. Амиды 2-гидразино-, 2-(Р-илиденгидразино)цинхониновых кислот 60
2.6. Изопропиламиды 2-(Р-ацилгидразино)цинхониновых кислот
и их продукты циклизации 74
2.7. Изопропиламиды 2-(Р-ароилпирувоилгидразино)- и 2-(р-антраноилгидразино)цинхониновых кислот 81
2.8. Замещенные амиды 3-оксо-1,2,4-триазоло-, 1,2,3,4-тетразоло-, 1,2,4-триазоло-, 3-К-1,2,4-триазоло[4,3-а]хинолин-9-карбо-
новых кислот 91
Глава 3. Экспериментальная химическая часть 99
Глава 4. Биологическая активность синтезированных соедишний 108
4.1. Острая токсичность 108
4.2. Противовоспалительная активность 109
4.3. Анальгетическая активность 110
4.4. Противомикробная активность 118
4.5. Антикоагулянтная активность 131
Общие выводы 135
Список литературы 137
Приложение
- Амиды цинхониновых кислот
- Биологическая активность производных хинолин-4-карбоновых кислот
- Изопропиламиды 2-алкоксицинхониновых кислот
- Противовоспалительная активность
Введение к работе
Актуальность темы. Одной из важных задач фармацевтической науки является поиск новых биологически активных веществ, обладающих высокой эффективностью и малой токсичностью. Актуальной задачей настоящего времени является синтез новых противовоспалительных, анальгетических, против'омикробных соединений, которые могут найти применение в медицинской практике в качестве лекарственных средств.
Хинолин-4-карбоновая (цинхониновая) кислота и её производные являются весьма перспективным классом химических соединений для синтеза на их основе биологически активных веществ. Алкиламид 2-(51-нитрофурил-21-винил)цинхониновой кислоты (хинифурил) проявляет противомикробную активность и применяется в медицине. В качестве лекарственных средств использовались атофан и совкаин.
В ранее проведенных исследованиях на кафедре биологической химии ПГФА было установлено, что некоторые синтезированные амиды
2-хлор-, 2-оксо-, 2-ариламиноцинхониновой кислоты обладают противовоспалительной и/или анальгетической активностью. В то же время,
2-хлор-, 2-гидразинопроизводные цинхониновой кислоты могут быть использованы для синтеза других биологически активных соединений на их основе. Потенциал исследования производных хинолин-4-карбоновых кислот еще далеко не исчерпан.
В развитие предыдущих исследований по поиску новых биологически активных соединений представляют определенный интерес амиды 2-замещенных цинхониновых кислот с предполагаемой противовоспалительной, анальгетической, противомикробной активностью. Целенаправленный синтез соединений, обладающих данными видами активности, остается актуальным и в настоящее время.
Наше внимание привлекли ранее неизученные амиды, замещенные в положении 2 цинхониновых кислот, т.к. среди этих соединений имеются биологически активные вещества.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научноисследовательских работ ПГФА в комплексной целевой программе МЗ РФ (номер государственной регистрации 01.9.50 007421).
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является синтез новых биологически активных производных амидов цинхониновых кислот, изучение их физико-химических свойств и выявление зависимости между структурой и биологической активностью.
Задачи исследования. Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи:
1. Осуществить синтез амидов 2-хлорцинхониновой кислоты, изучить их взаимодействие с различными нуклеофилами и получить амиды
2-замещенных цинхониновых кислот.
2. На основе амидов 2-замещенных цинхониновой кислоты получить новые потенциально биологически активные, в т.ч. гетероциклические системы.
3. Изучить физико-химические свойства синтезированных соединений и установить их структуру с помощью ИК-, и ЯМР 'Н-спектров.
4. Провести анализ результатов биологической активности полученных соединений в сравнении с препаратами-эталонами и их структурными аналогами с целью установления взаимосвязи «структура-активность», выявить наиболее перспективные вещества для дальнейших исследований.
Научная новизна исследования. Осуществлен синтез ранее неизвестных амидов 2-хлор-, 2-ариламино-, 2-алкокси-, 2-гидразино- и др. производных цинхониновых кислот.
Изучено взаимодействие амидов 2-хлорцинхониновой кислоты с сульфаниламидными соединениями, в результате чего получены неизвестные ранее амиды 2-(4-сульфамиланилино)цинхониновых кислот.
Изучена реакция амидов 2-хлорцинхониновой кислоты с замещенными амидами циануксусной кислоты, протекающая в среде ДМФА в присутствии безводного карбоната калия.
Установлено, что в реакции амидов 2-гидразиноцинхониновой кислоты с альдегидами или кетонами с хорошими выходами образуются амиды
2-(р-илиденгидразино)цинхониновых кислот.
Впервые показано, что изопропиламид 2-гидразиноцинхониновой кислоты вступает в реакцию с циклическими ангидридами дикарбоновых кислот, 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионами или ангидридами изатовых кислот с образованием соответствующих ацильных производных.
Реакцией амидов 2-гидразиноцинхониновой кислоты с мочевиной, нитритом натрия, ортоэтилформиатом, уксусной кислотой получены соответственно амиды 3-оксо-1,2,4-триазоло-, 1,2,3,4-тетразоло-, 1,2,4-триазоло-, 3-К-1,2,4-триазоло[4,3-а]-хинолин-9-карбоновой кислоты.
На основании результатов биологических испытаний выявлены некоторые закономерности между биологическим действием и структурой синтезированных соединений.
Практическая значимость работы. Для препаративной органической и фармацевтической химии усовершенствованы или предложены новые методики синтеза амидов 2-замещенных цинхониновых кислот.
В процессе работы осуществлен синтез 88 новых соединений, из них 73 были подвергнуты биологическим испытаниям. Из апробированных выявлено: 2 соединения с противовоспалительной, 7-анальгетической, 57-протиивомикробной, 1-антикоагулянтной активностью. Определена токсичность у 15 соединений, показавших в опытах хорошую биологическую активность.
Установлены закономерности биологического действия и структуры в отдельных рядах соединений, которые могут быть использованы для поиска новых эффективных противовоспалительных, анальгетических, антибактериальных соединений в рядах амидов цинхониновой кислоты.
Выявлены соединения, проявляющие биологическую активность, не уступающую таковой препаратов-эталонов, и представляющие интерес для дальнейших исследований: изопропиламид 2-[4-(4,6-диметил-2-пиримидилсульфамил)анилино]цинхониновой кислоты, проявляющий противовоспалительную и анальгетическую активности; изопропиламид
2-((3-2,4-динитрофенилгидразино)цинхониновой кислоты, обладающий противомикробной активностью.
Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на: областной научно-практической конференции «Молодежная наука Прикамья», ПГТУ (Пермь, 2007, 2008); IV Всероссийской конференции «Енамины в органическом синтезе» ИТХ УрО РАН (Пермь, 2007); X Молодежной конференции по органической химии (Уфа, 2007); 63-й Региональной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции», ПятГФА (Пятигорск, 2008); XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008); областной конференции «Фармация и общественное здоровье» УГМА (Екатеринбург, 2008); на Российских научно-практ. конференциях ПГФА (Пермь, 2007, 2008 гг).
Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 13 научных работ: 1 статья в журнале, рекомендуемом ВАК, 9 статей в сборниках, 3 тезиса докладов на конференциях различного уровня. Получено два положительных решения о выдаче патентов РФ на изобретения.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 159 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырёх глав, выводов, списка литературы, включающего 127 наименований работ отечественных и зарубежных авторов и приложения. Работа содержит 45 таблиц и 2 рисунка.
Амиды цинхониновых кислот
Незамещенные амиды цинхониновой кислоты образуются в реакции изатинов с избыточным количеством иминоэфира. Для успешного протекания реакции необходимо отсутствие заместителей в положении 4 изатина R]=H [15]. CONH2 N OR4 R FT / О NH II А + Me-C-OR О ґ\ Н R = H R2 = H, CI, Br, Me; R3 = H, CI, Br; R4 = CH3, C2H5 Незамещенные амиды образуются в результате реакции изатина с кетонами. Например, при синтезе антибактериального препарата декамина, взаимодействие изатина с ацетоном и аммиаком при 63 С в течение 3 часов ведёт к образованию амида 2-метилхинолин-4-карбоновой кислоты [13]. о x н -Л О о + Н3С—С—СН3, NH3 CONH2 В аналогичных условиях из изатина и метилэтилкетона при нагревании исходных реагентов с выходом 62 % получен амид 2,3-диметилхинолин-4-карбоновой кислоты [16]. О Н ї О Ч -СН3СОС2Н5 CONH2 СН3 Замещенные амиды цинхониновых кислот являются потенциально биологически активными соединениями, обладают разнообразной биологической активностью, поэтому методы их синтеза имеют важное практическое значение.
В результате реакции хлорангидрида 2-хлорцинхониновой кислоты с аммиаком или первичными аминами образуются амиды 2-хлорцинхониновой кислоты: R = Н, метил, этил, бутил [17]. Этот метод был использован для синтеза разнообразных алкил-, ариламидов 2-хлорцинхониновой кислоты. Реакция протекает в присутствии триэтиламина в бензоле. Хлорангидрид 2-хлорцинхониновой кислоты был получен при непродолжительном нагревании данной кислоты с тионилхлоридом [18-20]. COCI CONHR + H2NR R = Н, метил, этил, бутил, фенил, замещ. фенил, гетерил 1.3. Кислоты и амиды 2-замещенных цинхониновых кислот Кислоты и амиды 2-замещенных цинхониновых кислот обладают разнообразной биологической активностью и в литературе достаточно много данных о методах их синтеза.
Наличие реакционноспособной метильной группы в а-положении хи-нолинового кольца используется для получения различных производных. Так, реакцией 2-метилцинхониновой кислоты с ароматическими альдегидами в присутствии уксусного ангидрида при их нагревании в течение 30 минут были получены арилиденовые производные цинхониновой кислоты [21]. СООН СООН N ЧСН=СН-Аг + АгСНО, (СН3СО)20 N NCH3 Аг = С6Н5, С6Н4Вг-4, СбН4С1-4, C6H4N02-4, C6H4N(CH3)2 и др. При нагревании смеси амида 1-(5-диэтиламинопентил-2)-2-метилцин-хониновой кислоты, 5-нитрофурфурола и уксусного ангидрида был получен М-(5-диэтиламинопентил-2)-2- [2] -(51 -нитрофурил-2 )-винил]-4-хино-линкарбоксамид (хинифурил) [22, 23]. CONH-CH-(CH2)3N(C2H5)2 О. + (СН3СО) Н CONH-CH-(CH2)3N(C2H5)2 сн3 СгЧюг N ХСН=СН 15 В ранее проведенных на кафедре биологической химии ПГФА исследованиях было установлено, что галоген в амидах 2-хлорцинхониновой кислоты обладает высокой подвижностью и при нагревании легко вступает в реакцию с нуклеофильными реагентами. Так, для получения 2-арил-аминоцинхониновых кислот была использована реакция 2-хлорцинхониновой кислоты с различными ариламинами в среде ДМФА при нагревании исходных реагентов в течение 4 часов [24].
Авторами в работах [41, 42, 43] последовательно были получены этиловые эфиры 2,6-замещенных цинхониновых кислот, далее их гидразиды, которые были использованы в реакциях с кетонами. На всех этапах образование целевых продуктов реакций протекает с хорошими выходами. R = фенил-, 2-фурил-, 2-тиенил-, 3-нитрофенил-, 4-нитрофенил-, 2-(5-нитрофурил)-, 2-(5-нитротиенил) Реакцией гидразидов 2-ариламиноцинхониновых кислот с пировино-градной кислотой (ПВК) были получены соответствующие 3-(1-карбокси-этилиден)гидразиды 2-ариламиноцинхониновых кислот [45].
Биологическая активность производных хинолин-4-карбоновых кислот
Фенилцинхониновая кислота (цинхофен) длительное время использовалась в медицинской практике. Препарат уменьшает отложение кристаллов мочевой кислоты в тканях и воспалительную реакцию на них. Вследствие гепатотоксичности препарат выведен из номенклатуры лекарств (Приказ МЗ СССР № 163 от 30.12.85). СООН CONHC2H4NEt HCI КҐ "ОС4Н9 цинхофен совкаин В медицине широко использовался совкаин (гидрохлорид (3-диэтил-аминоэтиламида 2-бутоксицинхониновой кислоты), проявляющий анестезирующее действие. Однако, препарат весьма токсичен и медленно выводится из организма, поэтому он заменен другими лекарственными средствами.
Изучение биологической активности 2-замещенных цинхониновых кислот показывает, что они обладают разнообразным биологическим действием. Так, 2-арил(гетерил)хинолин-4-карбоновые кислоты [3] обладают слабой противовирусной активностью в отношении ДНК- содержащих вирусов. 2-Дифенилцинхониновые кислоты активны в качестве иммуноде-прессантов [6]. Алкиламиды (R= Н, СН3 С2Н5, С4Н9) 2-хлор- и 2-этилен-диаминопроизводных цинхониновых кислот проявляют слабую антигис-таминную активность [17]. Противорвотная активность обнаружена среди амидов хинолинкарбоновых кислот [58-60], а гербицидная активность у производных 2-оксохинолина [61-63]. Гидрохлориды алкиламидов хинолин-4-карбоновой кислоты обладают антибластической активностью. Например, противоопухолевая активность выявлена среди амидов 2-(5-нитрофурилвинил)- и 2-(5-нитрофурилбу-тадиенил)цинхониновой кислоты [50, 64].
Гидразиды и гидразоны 2-окси-, 2-хлор-, 2-метил-, 2-фенилцинхони-новой кислот являются ингибиторами МАО [41]. Гидразиды и сульфанил-гидразиды цинхониновой и 1,2,3,4-тетрагидрохинолинкарбоновых кислот являются ингибиторами аминооксидазы сыворотки крови [47]. Для выявления противотуберкулезной активности были получены гидразиды и гидразоны 2-галоген-, 2-алкилцинхониновых кислот [42, 65]. Противовирусной активностью обладают гидразиды 4-хинолинкарбоновых кислот, которые способны подавлять репродукцию вируса ECHO 6 в культуре клеток [44].
Противовоспалительной активностью (ПВА) обладают некоторые производные хинолина, например, хинин, хлорахин [66], 8-оксихинолин [67] и др. Противовоспалительная и анальгетическая активности обнаружены у производных 2-фенилцинхониновых кислот [68, 69]. Ариловые эфиры 2-хлорцинхониновой кислоты обладают противовоспалительной активностью и в дозе 50 мг/кг при внутрибрюшинном введении через 3 и 5 часов снижают воспаление, вызванное каррагенином, на 27-34 %. [14].
В целом ряде работ авторами изучено влияние на противовоспалительную и анальгетическую активность наличия функциональных групп в амидной части молекулы и у Сг хинолинового цикла в структуре производных цинхониновой кислоты. Так, 2-ариламиноцинхониновые кислоты показали слабую противовоспалительную активностью в дозах 50 и 100 мг/кг, снижая каррагениновый отек на 35-57%, и наиболее активной оказалась 2-(2,4-диметиланилино)цинхониновая кислота [24]. Замещенные амиды 2-хлор- и 2-анилиноцинхониновых кислот оказывают слабую противовоспалительную активность, сравнимую с таковой амидопирина [26]. Алкил-, ариламиды 2-хлорцинхониновой кислоты в дозе 50 мг/кг оказывают противовоспалительное действие и вызывают торможение развития каррагенинового отека при в/б введении через 3 часа на 46,2-48,8 и - 5 часов на 24,5-54,3 % [20, 28]. Наиболее активным среди амидов является изопропиламид 2-хлорцинхониновой кислоты [28].
Противовоспалительной активностью обладают амиды и ариловые эфиры 2-оксоцинхониновой кислоты [14, 32], но амиды 2-тиоцинхонино-вой кислоты проявляют слабую противовоспалительную активность [32]. Замещенные амиды 2-ариламиноцинхониновых кислот [24, 26] оказывают противовоспалительное действие в дозах 25 мг/кг при в/б введении и снижают воспаление через 3 часа на 40-66 %, а амиды 2-арилоксицин-хониновой кислоты в этой же дозе на 42-50 % [25].
Выраженную ПВА проявляют амиды 2-метокси и 2-этоксицинхони-новой кислоты [25] в дозах 25 и 50 мг/кг, но являются более токсичными в сравнении с амидами 2-ариламино- и 2-арилоксицинхониновых кислот.
Амиды 2-гидразиноцинхониновой кислоты оказывают слабое противовоспалительное действие и при в/б введении в дозе 50 мг/кг снижают воспаление на 24-34 % [30, 51]. Производные (4-карбамоилхинолил-2)-циануксусной кислоты в той же дозе снижают воспаление на 40-50 % через 3 и 5 часов при внутрибрюшинном введении [37].
Гидразиды и Р-(1-карбоксиэтилиден)гидразиды 2-ариламиноцинхониновых кислот проявляют противовоспалительное действие [45]. [З-Ароил-пирувоилгидразиды 2-метил-, 2-фенилцинхониновых кислот также имеют противовоспалительный эффект [44]. Слабое антиэкссудативное действие наблюдается в амидах 2-гидразиноцинхониновой кислоты в дозе 50 мг/кг при в/б введении [46].
Замещенные амиды 2-хлор-, 2-ариламино-5,6-три(тетра)метиленизони-котиновых кислот и изопропиламиды 2-ариламино-5,6,7,8-тетраметилен-хинолин-4-карбоновых кислот противовоспалительным действием не обладают или проявляют слабую активность [48, 49]. Амиды 2-хлор-5,6-тетраметиленпиридин-4-карбоновой кислоты обладают слабой противовоспалительной активностью [50]. Таким образом, по силе противовоспалительного действия можно распределить соединения в рядах в следующем порядке: амиды 2-хлорцинхониновой кислоты амиды 2-ариламино-, 2-арилокси-, 2-алкоксицинхониновых кислот 2-ариламиноцинхониновые кислоты амиды 2-гидразиноцинхониновых кислот.
Анальгетнчсская активность (АА) была выявлена среди соединений, показавших противовоспалительную активность. Так, анальгетическая активность обнаружена в рядах амидов и ариловых эфиров 2-хлорцинхониновой кислоты [14]. Амиды, ар иловые эфиры 1,2-дигидро-2-оксоцин-хониновой кислоты [14, 32] и производные (4-карбамоилхинолил-2)циан-уксусной кислот [37] показали не только противовоспалительную, но и анальгетическую активность. Наиболее активными являются замещенные амиды 2-хлор- и 1,2-дигидро-2-оксоцинхониновых кислот.
Противомнкробная активность (ПМА). В 1980 году был синтезирован амид цинхониновой кислоты, который в качестве антимикробного препарата нитрофуранового ряда под названием хинифурил был предложен для медицинского применения в виде 0,5 % мази [22, 23].
Некоторые производные хинолина являются основой лекарственных препаратов. Так, 4-амино-2-метилхинолин входит в состав деквалиния хлорида (декамина), который обладает антибактериальной и фунгицидной активностью и применяется в медицинской практике [23, 70]. 5-Этил-5,8-дигидро-8-оксо-1,3-диоксоло[4,5 ]хинолин-7-карбоновая (оксолиновая) кислота применяется в медицине как антибактериальный препарат [23, 70].
Изопропиламиды 2-алкоксицинхониновых кислот
Ранее синтезированные изопропиламиды 2-метокси- и 2-этоксицин-хониновой кислоты при биологических испытания в дозе 25 мг/кг показали хорошую противовоспалительную и анальгетическую активность, но обладали значительной токсичностью [25]. В структуре совкаина, ранее применявшегося в медицине, у Сг атома хинолинового цикла присутствует
Алкоголят-анионы довольно часто используются в органической химии как нуклеофильные реагенты в реакциях замещения хлора. Значения рКа метилат- и этилатанионов соответственно составляют 16,0 и 18,0 [76].
В развитие предыдущих исследований и с целью поиска новых биологически активных веществ нами осуществлена реакция амидов 2-хлорцинхониновой кислоты с различными по химической природе алкоголятами натрия в соответствующем спирте [78].
В ходе опытов установлено, что целевые продукты Vla-e образуются с выходом 75-90 % при нагревании амидов 2-хлорцинхониновой кислоты с алкоголятом натрия в соответствующем спирте при температуре 100 С в течение 4 часов. Изопропиламиды 2-алкоксицинхониновых кислот - это белые кристаллические вещества, нерастворимые в воде и растворимые при комнатной температуре в большинстве органических растворителей и представлены в таблице 9. В ИК-спектрах (табл. 9) соединений Vla-e наблюдаются характерная полоса колебаний карбонильной группы при 1644-1640, NH-амид при 3304-3256 см 1. В ЯМР Н-спектрах соединений Vla-e наблюдаются характерные сигналы протонов 5, м.д.: дублет двух метальных групп при 1,17-1,18 и мультиплет -СН группы изопропильного остатка при 4,10; дублет NH-амидной группы в области 8,47-8,49; группа линий гетероциклических протонов в области 6,82-7,94 (табл. 10).
В ранее проведенных исследованиях [24, 32] было установлено, что при нагревании замещенных амидов 2-хлорцинхониновой кислоты с ацетатом натрия в среде концентрированной уксусной кислоты происходит отщепление хлора и образуются амиды 1,2-дигидро-2-оксоцинхониновой кислоты. Было высказано предположение, что реакция замещения галогена протекает при участии сильного нуклеофила - ацетат-аниона (рКа = 5,0) [76] и катализируется уксусной кислотой за счет её взаимодействия с азотом хинолинового цикла. При этом образуется, 2-ацетоксипроизводное, которое является неустойчивым и распадается с образованием амидов 2-оксоцинхониновой кислоты.
При нагревании изопропиламидов 2-алкоксицинхониновой кислоты (соед. У1а,в,д) с 10 % хлороводородной кислотой в течение 3 часов осуществлен их кислотный гидролиз (схема 2). Во всех опытах был выделен изо-пропиламид 1,2-дигидро-2-оксоцинхониновой кислоты, который был ранее получен в вышеуказанных условиях [32].
Реакция образования 2-оксопроизводных имеет не только теоретическое, но и практическое значение в плане поиска новых биологически активных веществ. Амиды 2-алкоксицинхониновых кислот представляют интерес для биологических испытаний в плане изучения влияния наличия в их структуре алкоксигрупп на противовоспалительную и анальгетическую активность.
В медицинской практике в качестве нестероидных противовоспалительных средств (НПВП) используются лекарственные препараты, содержащие в своей структуре функциональные группы: - S02-N(CH3) - пирок-сикам, мелоксикам, лорноксикам, -NH-SO2-CH3 - нимесулид, -SO2NH2 -целекоксиб [23, 70].
Известно, что некоторые сульфаниламидные препараты: сульфадимезин, сульфадиметоксин, сульфален обладают противовоспалительной активностью в дозе 100 мг/кг и снижают агаровое воспаление на 36,6-49,5 % [79]. В то лее время, изопропиламид 2-хлорцинхониновой кислоты [28] обладает противовоспалительной и анальгетической активностью. Поэтому представляло интерес осуществить целенаправленный синтез целевых продуктов, содержащих эти фармакофорные фрагменты.
Из данных литературы известно, что для аминогруппы сульфадиметок-сина рКа = 1,80 [80], таким образом, данное соединение и другие сульфаниламиды могут выступать как нуклеофилы в реакциях замещения хлора.
С целью поиска биологически активных соединений в ряду производных цинхониновой кислоты нами осуществлен синтез амидов 2-замещенных цинхониновых кислот, содержащих у С2 атома гетероцикла сульфами-ланилинофармакофорные фрагменты. В опытах было установлено, что при нагревании изопропиламида 2-хлорцинхониновой кислоты с сульфаниламидом (стрептоцидом), сульфакарбамидом (уросульфаном), сульфатиазо-лом (норсульфазолом), сульфаметоксазолом, сульфаэтидолом (этазолом), сульфадимезином (сульфадимедином) в течение 6 часов в ДМФА образуются изопропиламиды 2-(4-сульфамиланилино)цинхониновых кислот (соединения VIIa-e) [81, 82].
Противовоспалительная активность
Изопропиламидов 2-сульфамиланилиноцинхониновых кислот (соед. VIIa-е) изучена на белых крысах обоего пола массой 180-220 г на каррагениновой модели воспаления, создаваемой субплантарным введением в заднюю лапу крыс 0,1 мл 1 % водного раствора каррагенина [111]. Предварительно измеряли исходный объем (мл) задней лапы опытных и контрольных крыс с помощью он-кометра. Полученные результаты сравнивали с литературными данными по ПВА препарата-эталона диклофенака натрия [25]. Исследуемые вещества вводили внутрибрюшинно в виде водной смеси с твином-80 из расчета 1 мл на 100 г веса животного за один час до моделирования воспаления. Прирост объёма воспалённой стопы оценивали онкометрически через 3, 5 часов после введения флогогенного агента и вычисляли процент торможения отёка к контролю. Проведено 5-6 опытов. Результаты обработаны статистически с использованием критерия Стьюдента [112].
Анализ результатов биологических испытаний изопропиламидов 2-сульфамиланилиноцинхониновых кислот (соед. VIIa-е) показал, что активными являются соединения VIIr,e. Соединение Vllr в дозе 50 мг/кг обладает противовоспалительной активностью при внутрибрюшинном введении и вызывают торможение каррагенинового отека через 3 часа на 31,8 и 5 часов на 44,0 % (табл. 38). Из данных приведенных в таблице видно, что наиболее активным в дозе 25 мг/кг является изопропиламид 2-[4-(4,6-диметил-2-пиримидилсульфамил)анилино]цинхониновой кислоты (Vile), поэтому это соединение было подвергнуто более углубленным исследованиям.
Анальгетнческая активность (АА) изопропиламида 2-[4-(4,6-диметил-2-пиримидилсульфамил)анилино]цинхониновой кислоты (соед. Vile), изучена на модели «уксусных корчей» на беспородных белых мышах-самцах массой 22-24 г. [113]. Мышам внутрибрюшинно вводили 0,75% водный раствор уксусной кислоты из расчета 0,25 мг на 10 г массы животного и подсчитывали количество корчей в течение 10 минут. Исследуемое вещество вводили перорально через желудочный зонд в виде водной суспензии с твином-80 в дозе 50 мг/кг за 1 час до введения уксусной кислоты. Результаты оценивали по способности соединений тормозить количество корчей по сравнению с контрольными животными, получавшими растворитель. В группе было по 5 мышей. Данные опытов обрабатывали статистически с вычислением критерия достоверности. Полученные результаты сравнивали с литературными данными анальгетической активности для диклофенака натрия [25].
Апробируемое соединение изопропиламид 2-[4-(4,6-диметил-2-пири-мидилсульфамил)анилино]цинхониновой кислоты (соед. Vile) в дозе 25 мг/кг вызывало защиту мышей от «уксусных корчей» на 50,2 % (при -р 0,01).
Анальгетическая активность 14 синтезированных соединений исследована методом «горячей пластинки» на беспородных белых мышах-самцах массой 22-22 г. [114]. Соединения вводили мышам перорально в дозе 50 мг/кг, а препарат сравнения метамизол натрия (анальгин) - в дозе 93 мг/кг, соответствующей ED5o по тесту «горячей пластинки» [115]. Определяли латентный период наступления оборонительного рефлекса - облизывания задней лапы при помещении животных на металлическую пластинку, нагретую до 55 С. Результаты оценивали по сравнению с контрольными животными, получавшими растворитель. В каждой группе было по 6 мышей. Данные опытов обрабатывали статистически с вычислением критерия достоверности. Результаты исследований даны в таблице 39.
В результате опытов выявлено, что из 14 апробированных соединений, относящихся к разным рядам, анальгетической активностью сравнимой с активностью метамизола натрия (анальгина) обладают б соединений: 1к, 1X6, Хе, XVIIIa, ХІХа, ХХв. По результатам испытаний затруднительно выявить закономерность проявления АА в зависимости от структуры апробированных соединений.
При подведении итогов биологических испытаний на ПВА и АА можно выделить изопропиламид 2-[4-(4,б-диметил-2-пиримидилсульфамил)ани-лино]цинхониновой кислоты (соед. Vile), данные по активности и токсичности которого приведены в сводной таблице 40. Соединение Vile при внутрибрюшинном введении обладает противовоспалительным действием в дозах 25, 20, 15, 10 мг/кг (таблица 40), которое проявляется торможением каррагенинового воспаления во все сроки наблюдения. Апробированное соединение Vile при в/б введении в дозе 10 мг/кг проявляет противовоспалительное действие и снижает отёк, вызванный каррагенином через 3 часа на 56,5 и 5 часов - 49,5 %. Диклофенак натрия в этой же дозе оказывает аналогичное действие и снижает воспаление через 3 часа на 55,4 и 5 часов - 52,2 %. [25].
