Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Производные n-ацилзамещенных антраниловых кислот: синтез, биологическая активность и количественные соотношения «структура - активность» 7
1.1. Производные антраниловой кислоты как лекарственные средства 7
1.2. Получение N-ацилзамещенных антраниловых кислот 10
1.3. Получение N-ацилантраниламидов 21
1.4. Биологическая активность производных N-ацилзамещенных антраниловых кислот 28
1.5. Количественные соотношения «структура - активность» среди производных антраниловой кислоты 45
Глава 2. Синтез N-ацил-б-галогенантраниловых кислот 49
2.1. Синтез 5-галогенантраниловых кислот 49
2.2. Получение N-ацил-б-бромантраниловых кислот 50
2.3. Синтез N-ацил-б-йодантраниловых кислот 54
Глава 3. Синтез N-ацил-б-галогенантраниламидов 63
3.1. Синтез 5-галогенантранил амидов 63
3.2. Получение №ацил-5-хлорантраниламидов 68
3.3. Синтез N-ацил-б-бромантраниламидов 71
3.4.Получение арил(бензил) амидов ^ацил-5-галогенантраниловых кислот... 78
Глава 4. Биологическая активность производных ім-ацил-5- галогенантраниловых кислот 90
4.1. Противовоспалительная активность производных М-ацил-5-галоген-антраниловых кислот 90
4.2. Исследование анальгетическои активности и острой токсичности амида М-(4-хлорбензоил)-5-бромантраниловой кислоты 103
4.3. Противомикробное действие производных М-ацил-5-галоген-антраниловых кислот 105
Глава 5. Количественные соотношения «структура противовоспалительная активность» 112
Квантово-химические расчеты и их использование в прогнозировании противовоспалительной активности 112
Выводы 122
Рекомендации 123
Библиография 124
Приложения 142
- Получение N-ацилзамещенных антраниловых кислот
- Получение N-ацил-б-бромантраниловых кислот
- Получение №ацил-5-хлорантраниламидов
- Исследование анальгетическои активности и острой токсичности амида М-(4-хлорбензоил)-5-бромантраниловой кислоты
Введение к работе
Актуальность темы. Одной из основных задач фармацевтической химии является поиск новых биологически активных соединений. Поскольку для производных антраниловой кислоты характерно наличие разнообразных биологических эффектов и, прежде всего, противовоспалительного и противомикробного, наш выбор остановился на этом классе соединений.
Установление количественной зависимости биологического действия от структуры химического соединения приобретает особую значимость на современном этапе развития фармацевтической химии, так как позволяет значительно снизить финансовые затраты на разработку новых лекарственных средств. Поэтому, установление количественных соотношений между квантово-химическими параметрами и противовоспалительной активностью ]Ч-ацил-5-галогенантраниловых кислот и их амидов подчеркивает актуальность работы.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Пермской государственной фармацевтической академии Минздрава России (номер государственной регистрации 01.9.50 007422). Тема утверждена на заседании Ученого совета Пермской государственной фармацевтической академии, протокол №5 от 25 января 2001 г.
Цель работы. Целью исследования явился синтез и поиск новых биологически активных соединений с. противовоспалительным и противомикробным эффектом среди ]Ч-ацил-5-галогенантраниловых кислот и их амидов, а также установление количественных соотношений «структура - противовоспалительная активность».
Задачи исследования. Для достижения намеченной цели необходимо было решить следующие задачи:
Получить ]Ч-ацил-5-галогенантраниловые кислоты и их амиды. Установить структуру соединений на основании спектральных данных.
Выявить возможную связь фармакологического действия со структурой синтезированных соединений на основании проведенных исследований противовоспалительной (ПВА) и противомикробной активности (ПМА).
Провести обоснованный выбор некоторых рассчитанных квантово-химических параметров для получения уравнений регрессии.
Рассчитать регрессионные уравнения, количественно описывающие зависимость противовоспалительного эффекта от выбранных предикторов и позволяющие прогнозировать противовоспалительное действие гипотетической молекулы.
Научная новизна исследования. 1. Синтезировано 71 соединение, из которых 54 новых неописанных в литературе N-ацил-5-галогенантраниловых кислот и их амидов. Структура полученных веществ установлена на основании спектральных данных.
Определены некоторые качественные характеристики зависимости противомикробного и противовоспалительного эффекта от структуры соединений.
Предложена гипотеза о роли атомных зарядов ключевых фрагментов молекул во взаимодействии с ответственными за противовоспалительный эффект структурами, что обусловило выбор квантово-химических параметров.
Установлены количественные соотношения между противовоспалительным эффектом и выбранными дескрипторами.
Практическая значимость работы. Синтезировано 71 соединение, в том числе 54 веществ ряда ]Ч-ацил-5-галогенантраниловых кислот и их амидов, неописанных ранее в литературе. Проведен скрининг противовоспалительной и антимикробной активности среди полученных (Ыгф&ЙЛШйУ/Ь^ЬиЛЯтезирОВанныс
БИБЛИОТЕКА I СПетербгрг л/ J 0 XXf-jirUi \
соединения проявили противовоспалительное и противомикробное действия,
превышающие эффекты применяемых в медицине препаратов. Для доклинических
испытаний в качестве потенциальных противовоспалительных средств предлагаются
амид ]Ч-(4-хлорбензоил)-5-бромантраниловой кислоты и фениламид ]Ч-хлорацетил-5-
бромантраниловой кислоты, а ]Ч-(2-метоксибензоил)-5-бромантраниловая кислота -
как соединение, обладающее выраженным антибактериальным и
противовоспалительным действием.
Определена количественная связь между противовоспалительной активностью синтезированных соединений и такими квантово-химическими параметрами как заряд на атоме кислорода карбонильной группы и атоме азота антраноильного фрагмента. Результаты работы могут быть использованы в дальнейшем целенаправленном синтезе и поиске новых биологически активных соединений.
Апробация работы. Основные фрагменты работы докладывались и обсуждались на конференциях и конгрессах различного уровня: научно-практических конференциях Пермской государственной фармацевтической академии 2001-2003 гг.; областной научной конференции «Молодежная наука Прикамья - 2002»; IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002), на котором в рамках конкурса научных работ молодых ученых по специальности «Провизор» получен диплом за второе место; III Международной научно-практической конференции молодых ученых "Санкт-Петербургский научный форум -2003" - диплом за второе место.
Публикации. Материалы диссертации отражены в 3 статьях и 12 тезисах. По результатам работы подана заявка на патент (№2003114552 от 15.05.2003).
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, четырех, глав, посвященных описанию результатов собственных исследований: синтезу, установлению структуры соединений, изучению фармакологической активности полученных веществ, и расчету уравнений регрессии, связующих противовоспалительную активность и квантово-химические параметры исследуемых молекул, выводов, рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 22 схемами, 23 таблицами, 3 рисунками и 7 регрессионными уравнениями. Список литературы включает 194 работы отечественных и зарубежных авторов.
Получение N-ацилзамещенных антраниловых кислот
Доступность и многообразие фармакологического действия производных антраниловой кислоты привлекает внимание исследователей к этому классу соединений. Единственная обзорная работа [2], посвященная синтезу, свойствам и химическим превращениям антраниловой кислоты и ее ацильных производных, является депонированной в Украинском НИИНТИ, а потому малодоступной. Учитывая также тот факт, что с момента ее появления прошло более 10 лет, эта проблема нуждается в новом рассмотрении с учетом современных данных. Предложенный обзор является попыткой заполнить имеющийся пробел.
Антраниловая кислота и ее N-ацилпроизводные широко распространены в природе. Так, эфиры антраниловой кислоты входят в состав некоторых эфирных масел ряда цветов (иланг-иланг, жасмин, бергамот) и цитрусовых [84]. Кроме того, метиловые эфиры антраниловой кислоты присутствуют в вине, малине, чае, какао [123].
В основе самого распространенного синтетического способа получения N-ацилантраниловых кислот лежит реакция N-ацилирования антраниловой кислоты. В качестве ацилирующих агентов применяются сами кислоты, их хлорангидриды, ангидриды, а в ряде случаев эфиры. Наиболее часто для ацилирования антраниловых кислот используются хлорангидриды, что связано с их высокой ацилирующей способностью. Для нейтрализации и удаления образующегося хлороводорода наиболее часто используют органические основания, реакцию проводят в неполярных растворителях (дихлорметан, диоксан, бензол и др.).
Реакцией замещенных антраниловых кислот с хлорангидридами карбоновых кислот в дихлорметане в присутствии триэтиламина синтезированы N-ацилантраниловые кислоты, их эфиры и амиды (1.2д) [133].
Диметоксициннамоил)антраниловую кислоту (1.2к) получали ацилированием хлорангидридом 3,4-диметоксициннамовой кислоты при использовании реагента Вилсмейера (і) [145]. Способ получения (іі) заключается в конденсации N-малонилантраниловой кислоты с вератровым альдегидом при нагревании, с последующим добавлением воды, гидроксида натрия, пиперидина [157]. В методе (iii) предлагается взаимодействие замещенных бензоксазинонов с солями 3,4-диметоксициннамовой кислоты [28; 166].
В патенте [158] описан синтез структурно схожих N-(3,4,5-триметоксициннамоил)антраниловых кислот (1.2л), в антраноильный фрагмент которых, кроме прочих заместителей входят атомы галогенов.
В патенте [173], посвященном получению N-оксалилантраниловой кислоты и ее аналогов (1.2р), описан метод ацилирования антраниловои кислоты этилоксалилхлоридом в тетрагидрофуране (ТГФ) (выход 94%), с последующим щелочным гидролизом эфирной группы в спиртоводном растворе (выход 81%).
Прибавлением к щелочному водному раствору антраниловои кислоты раствора дихлорангидрида терефталевои кислоты в органическом растворителе в присутствии оснований при температуре 0-40С в течение 2-Ю ч синтезирована N-(4-карбоксибензоил)антраниловая кислота (1.2с) (выход 30%) [24, 25].
Другими подходящими ацилирующими агентами в синтезе N-ацилпроизводных антраниловой кислоты являются циклические ангидриды дикарбоновых кислот, уступающие по ацилирующей способности хлорангидридам, но не дающие в качестве сопутствующего продукта хлороводород.
Синтезированы М-сукцинил(малеил)- антраниловые кислоты и подробно рассмотрены их одномерные и двумерные 1Н- и 13С-ЯМР спектры. Соединения получали реакцией антраниловой кислоты с янтарным или малеиновым ангидридом в безводном ТГФ при комнатной температуре с высоким выходом (94-98%) [189].
Таким образом, в синтезе N-ацилантраниловых кислот используют различные методы и реагенты. Из-за простоты проведения реакций и возможности получения данных для больших химических библиотек наиболее часто применяют реакции ацилирования антраниловых кислот в апротонных растворителях, тем не менее, известны реакции дециклизации гетероциклов с непосредственным образованием N-ацилантраниловых кислот.
Синтетические методы получения амидов N-ацилантраниловой кислоты отличаются, как по условиям реакций, так и по используемым реагентам (антраниловые кислоты, гетероциклические соединения и др.). Широко применяются реакции N-ацилирования антраниламидов различными кислотами, их хлорангидридами и ангидридами.
В еще одну группу методов получения производных N-ацилантраниловых кислот можно выделить реакции раскрытия различных гетероциклов (изатины, бензоксазиноны, в том числе изатовый ангидрид, и их производные) при взаимодействии с аминами. Так, десятикратный избыток первичного амина (циклопентиламин, циклогексиламин, циклогептиламин) с изатином (X = О) в 95% этаноле при нагревании на водяной бане в течение 30 мин ведет к выделению соответствующих антраниламидов (1.3и) [180]. Иной способ получения этих продуктов основан на взаимодействии имина (X = NR) с теми же аминами в условиях, аналогичных описанным для изатина [179].
Получение N-ацил-б-бромантраниловых кислот
Синтезированные соединения являются кристаллическими веществами белого или белого с желтоватым оттенком цвета, нерастворимыми в воде, растворимыми в органических растворителях, таких как ДМСО, ДМФА, этанол, ацетон и диоксан. Полученные продукты имеют четкую температуру плавления в интервале 194-260 С.
Общими фрагментами М-ацил-5-бромантраниловых кислот являются бензольное кольцо, карбоксильная и N-ацильная группы. В 1Н ЯМР-спектре полученных соединений протоны ароматического кольца обнаруживаются в виде группы сигналов в интервале 6,62-9,00 м.д. Сигнал протона амидной группы присутствует в слабом поле в виде синглета в области 10,15-12,27 м.д. Протоны метиленовой группы N-фенилацетил-б-бромантраниловой кислоты (2.2ж) наблюдаются в виде синглета при 3,72 м.д. У ее аналога - М-дифенилацетил-5-бромантраниловой кислоты (2.2з) протон в а-положении ацильного фрагмента экранирован в меньшей степени, что приводит к сдвигу сигнала в более слабое поле 5,12 м.д.
В ИК-спектре N-ацил-б-бромантраниловых кислот наблюдается полоса поглощения амидной группы в интервале 3248-3140 см"1 (валентные колебания N-H). Кроме колебаний NH амидной группы, в высокочастотной области обнаруживаются и валентные колебания О-Н карбоксильной группы при 3332 см"1. В низкочастотной области появляются широкие полосы поглощения деформационных колебаний СОО-Н группы в интервале 932-884см"1. Карбоксильные группы соединений (СОРЮ дают сильные полосы поглощения при 1712 и 1704 см"1. Полоса «Амид I» наблюдается в интервале 1672-1612 см"1. В области 1540-1518 см"1 проявляется полоса «Амид II». Ароматическая нитрогруппа (соединение 2.2д) дает полосы в областях 1502, 1353, 824 и 740 см"1, а в спектре производного с фураноильным остатком (2.2и) дополнительно появляются характеристические полосы фуранового цикла при 1554 и 1496 см"1, что хорошо согласуется сданными литературы [4, 29]. 2.3. СИНТЕЗ N-АЦИЛ-б-ЙОДАНТРАНИЛОВЫХ КИСЛОТ
Соединения представляют собой кристаллические вещества серого или белого со слабым фиолетовым оттенком цвета, нерастворимые в воде, растворимые в органических растворителях: этанол, ацетон, диоксан, ДМСО и ДМФА. Полученные продукты имеют четкую температуру плавления. В целом, присутствие ароматической структуры в ацильном фрагменте повышает температуру плавления.
Общими элементами структуры синтезированных соединений являются бензольное кольцо, амидная и карбоксильная группа. Ароматические протоны характеризуются группой сигналов в интервале 6,47-8,88 м.д. в 1Н ЯМР спектре. Синглеты протонов амидных групп CONH присутствуют в слабом поле в области 10,20-12,58 м.д. Сигнал протонов метиленовой группы Ы-фенилацетил-5-йодантраниловой кислоты (2.3м) наблюдается в виде синглета при 3,78 м.д., близкое значение химического сдвига характерно для его аналога (2.2ж) из ряда N-ацил-5-бромантраниловых кислот - 3,72 м.д. Однако, протон в сс-положении ацильного фрагмента ІМ-дифенилацетил-5-йодантраниловой кислоты (2.3н) экранирован в меньшей степени, что приводит к сдвигу сигнала в более слабое поле (5,32 м.д.). Если сравнить этот показатель с сигналом ІМ-дифенилацетил-5-бромантраниловой кислоты (2.2з), то можно отметить, что у бромзамещенного аналога сигнал наблюдается в более сильном поле (5,12 м.д.).
Сигналы протонов двух метиновых групп N-малеил-б-йодантраниловой кислоты (2.3а), присутствующие в 1Н ЯМР спектре в виде двух дублетов при 6,35 и 6,55 м.д., подтверждают фус-конфигурацию соединения. Это согласуется с расчетом по аддитивной схеме с учетом констант дезэкранирования заместителей в замещенных олефинах [31]. Расщепление метиновых протонов спиновой системы АВ для малеамидного фрагмента характеризуется константой спин-спинового взаимодействия JAB = 12,0 Гц, величина которой согласуется с табличными значениями для цис-олефинов [22, 32].
При сравнении химических сдвигов NH групп производных 5-бром- и 5-йодантраниловых кислот наблюдается общая закономерность сдвига сигналов в слабое поле у 1\1-ацил-5-йодантраниловых кислот в сравнении с их аналогами 5-бромантраниловой кислоты.
В ИК-спектре М-ацил-5-йодантраниловых кислот наблюдаются полосы поглощения группы NH ацильного фрагмента в интервале 3350-3070 см"1. Характеристические полосы колебаний связей СООН проявляются в области 3500-3280 см"1. Также карбоксильную группу можно идентифицировать по сильным пикам деформационных колебаний СООН в интервале 1726-1680 см"1 и широким сигналам СООН в низкочастотной области 950-890 см"1. Полосы «Амид I» наблюдаются в интервале 1690-1600 см"1, что соответствует карбонилу амидной группы. Характеристические полосы «Амид II» находятся при 1652-1515 см"1. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Спектры 1Н ЯМР синтезированных соединений записаны на спектрометре РЯ-2310 (рабочая частота 60 МГц) в ДМСО-de, внутренний стандарт - ГМДС. ИК-спектры соединений выполнены на спектрометре Specord М-80 в вазелиновом масле. Расчет химических сдвигов протонов вели по шкале а, м.д. Ход реакций и чистоту соединений контролировали методом ТСХ на пластинах Silufol UV-254 в системе ацетон - бензол, 1:6, пятна детектировали парами йода и в УФ-свете. 5-Бромантраниловая кислота (2.1а)
К раствору 19,20 г (0,14 моль) антраниловой кислоты в 200 мл ледяной уксусной кислоты по каплям и при перемешивании добавляют раствор 22,40 г (0,14 моль) брома в 50 мл ледяной уксусной кислоты. Температура реакционной смеси не должна превышать 12С. После добавления брома перемешивание продолжают в течение часа до полного обесцвечивания. Выделившийся осадок отфильтровывают, промывают 2% раствором тиосульфата натрия. Затем осадок кипятят в 1500 мл воды и фильтруют горячим. Осадок, образовавшийся после охлаждения фильтрата, отфильтровывают и высушивают.
К раствору 25,00 г (0,18 моль) антраниловой кислоты и 16,90 г гидроксида калия в 500 мл воды при перемешивании медленно добавляют раствор 46,50 г (0,18 моль) йода в 250 мл воды с 24,75 г гидроксида калия. Через 1 мин к реакционной массе приливают 100 мл ледяной уксусной кислоты, после чего полученную смесь немедленно разбавляют 500 мл воды. Перемешивание продолжается в течение часа. Затем реакционную массу оставляют на 2 часа. Избыток йода удаляют добавлением 25 мл 15% раствора сульфита натрия. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают водой, сушат и кристаллизуют из этанола.
Получение №ацил-5-хлорантраниламидов
Амиды N-ацилантраниловых кислот получают обычно реакцией N-ацилирования незамещенных амидов антраниловых кислот. Известные в литературе варианты синтеза отличаются в основном по типу используемого ацилирующего агента. Реакции проводят преимущественно в среде неполярного растворителя (дихлорметан, диоксан, бензол и др.).
Соединения представляют собой кристаллические вещества белого или белого с желтоватым оттенком цвета, нерастворимые в воде, растворимые в органических растворителях: этанол, хлороформ, ДМСО и ДМФА. Полученные продукты имеют четкую температуру плавления.
Общими фрагментами синтезированных соединений являются бензольное кольцо и амидные группы CONH2, CONH. Протоны бензольного кольца и амидной группы СОІМНг характеризуются группой сигналов в интервале 7,27-8,93 м.д. в 1Н ЯМР спектре. Синглеты протонов амидной группы CONH присутствуют в слабом поле в области 12,10-13,07 м.д. Протоны метильной группы соединения 3.2д представлены синглетом при 2,33 м.д.
В ИК-спектре (см. экспериментальную часть) соединений наблюдаются полосы поглощения вторичной и первичной амидных групп в интервале 3408-3216 см"1 (симметричные и асимметричные валентные колебания NH и ІМНг). Две полосы «Амид I» прописываются в области 1680-1672 см"1, что соответствует карбонилу первичной амидной группы и 1660-1652 см"1 - вторичной амидной группы. Полосы «Амид II», связанные с деформационными колебаниями амидных групп, расположены в интервале 1626-1600 см"1 для первичных амидов и 1530-1504 см"1 -для вторичных. Кроме валентных колебаний карбонилов амидных групп в спектре соединения 3.26 наблюдается полоса поглощения С=0 (1700 см"1) карбоксильной группы. 3.3. СИНТЕЗ М-АЦИЛ-5-БР0МАНТРАНИЛАМИД0В
При попытке получения в аналогичных условиях соединения З.Зё, где ацилирующим агентом выступал пропионовый ангидрид, целевой продукт не был выделен ввиду меньшей ацилирующей способности пропионового ангидрида. Взаимодействие амида 5-бромантраниловой кислоты с хлорангидридами кислот (схема 3.11) приводит к получению соответствующих амидов N-ацил-б-бромантраниловой кислоты (З.Зд-у).
Синтезированные соединения являются кристаллическими веществами белого или белого с желтоватым оттенком цвета, нерастворимыми в воде, растворимыми в органических растворителях, таких как ДМСО, ДМФА, этанол, ацетонитрил и диоксан. Полученные продукты имеют четкую температуру плавления.
В 1Н ЯМР-спектре амидов М-ацил-5-бромантраниловой кислоты протоны ароматического кольца и амидной группы обнаруживаются в виде группы сигналов в интервале 6,40-8,93 м.д. Сигнал протонов вторичной амидной группы присутствует в слабом поле в виде синглета в области 11,33-13,20 м.д. При сравнении характерных сигналов метиленовых групп соединений 3.3е,ж,и можно проследить влияние заместителей на химические сдвиги протонов. Так, в случае соединения З.Зе из-за электроноакцепторных свойств соседней карбонильной группы с одной стороны и атома хлора с другой, сигнал протонов метиленовои группы сдвинут в относительно слабое поле - 4,50 м.д. При увеличении длины алкильной цепочки (соединения 3.3ж,и) наблюдается ослабление совместного влияния указанных групп, что в большей степени выражено у соединения с тремя метиленовыми группами (З.Зи). Поэтому сигналы протонов метиленовых групп сдвигаются в более сильное поле 1,77-3,77 м.д. Сигнал протонов метиленовои группы амида г\І-фенилацетил-5-бромантраниловой кислоты (3.3с) наблюдается в виде синглета при 3,60 м.д. У его аналога - амида N-дифенилацетил-б-бромантраниловой кислоты (3.3т) протон в соположении ацильного фрагмента экранирован в меньшей степени, что приводит к сдвигу сигнала в более слабое поле.
В амиде N-малеил-б-бромантраниловой кислоты (3.36) сигналы протонов двух метиновых групп присутствуют в спектре в виде двух дублетов при 6,17 и 6,50 м.д., что подтверждает цис-конфигурацию соединения. Это согласуется с расчетом по аддитивной схеме с учетом констант дезэкранирования заместителей в замещенных олефинах [31]. Расщепление метиновых протонов спиновой системы АВ для малеамидного фрагмента характеризуется константой спин-спинового взаимодействия JAB = 12,0 Гц, величина которой согласуется с табличными значениями для цис-олефинов [22].
Протоны карбоксильной группы производных дикарбоновых кислот (З.За-г) наблюдаются в виде уширенного сигнала в области 12,07-13,10 м.д. В ИК-спектре (см. экспериментальную часть) амидов Ы-ацил-5-бромантраниловой кислоты наблюдается несколько полос поглощения амидных групп (первичной и вторичной) в интервале 3340-3180 см"1 (валентные асимметричные и симметричные колебания). Кроме колебаний NH в амидных группах, в высокочастотной области (3660 и 3610 см"1) присутствуют и валентные колебания О-Н карбоксильной группы (амиды З.Зв.г, соответственно). В низкочастотной области появляются широкие полосы поглощения деформационных колебаний О-Н групп (908 и 900 см"1). В карбоксильных группах тех же соединений СООН дают сильные полосы поглощения при 1710 и 1688 см"1, соответственно. Полосы «Амид I» наблюдаются в интервале 1680-1650 см-1. В области 1620-1505 см"1 проявляются полосы «Амид II». Ароматическая нитрогруппа (соединение З.Зн) дает полосы в областях 1540 (в виде плеча), 1349 и 820 см"1, а в спектре производного с фурановым кольцом (амид З.Зу) дополнительно появляются характеристические полосы при 1560 и 1500 см"1, что хорошо согласуется с табличными данными [4, 29].
Общими фрагментами ІМ-ацил-5-хлорантраниламидов являются бензольное кольцо и амидные группы, образованные аминогруппой (амиды N1) и карбоксильной группой (амиды N2) антраниловой кислоты. В 1Н ЯМР-спектрах N-ацил-б-галогенантраниламидов (3.4а-д) протоны бензольного кольца иногда проявляются совместно с протонами амидной группы CON2H (соединения 3.4а,г) в виде группы сигналов в интервале 6,64-8,92 м.д. Протоны метильных групп соединений 3.4а-в представлены синглетами в интервале 2,05-2,45 м.д. В области 4,50-4,62 м.д. наблюдаются дублеты протонов метиленовых групп бензиламидного фрагмента соединений 3.4в-д.
Исследование анальгетическои активности и острой токсичности амида М-(4-хлорбензоил)-5-бромантраниловой кислоты
С одним из наиболее активных противовоспалительных агентов, амидом N-(4-хлорбензоил)-5-бромантраниловой кислоты (З.Зп), проведены углубленные биологические исследования. Установлена его острая токсичность и изучен анальгетический эффект. Острую токсичность определяли на нелинейных белых крысах массой 180-260 г при внутрибрюшинном введении. Соединение З.Зп и препарат сравнения (диклофенак) вводили внутрибрюшинно в виде водного раствора в возрастающих дозах. Результаты обрабатывали по Прозоровскому с вычислением средней смертельной дозы (ЛДбо) при р = 0,05 [56].
Анальгетическое действие изучали на модели уксусных корчей на белых нелинейных крысах массой 180-240 г. Амид З.Зп и препарат сравнения (диклофенак) инъецировали внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг за 1 ч до введения 0,75% водного раствора уксусной кислоты. Раствор уксусной кислоты вводился внутрибрюшинно из расчета 1 мл на 100 г массы тела животного [59]. Во всех сериях эксперимента использовали по 6 животных. Результаты обрабатывали статистически, используя коэффициент Стьюдента[61)]. Как видно из таблицы 4.2.1, противовоспалительная активность амида N-(4-хлорбензоил)-5-бромантраниловой кислоты практически равна эффекту диклофенака и проявляет сравнимое с активностью эталонного препарата анальгетическое действие. Следует отметить, что соединение З.Зп более чем в 2,2 раза менее токсично по сравнению с диклофенаком. Условная широта фармакологического действия (УШФД) амида М-(4-хлорбензоил)-5-бромантраниловой кислоты по противовоспалительному эффекту превышает таковую для диклофенака, а по УШФД относительно анальгезии вещество З.Зп более чем в 2 раза превосходит препарат сравнения.
Таким образом, амид ІМ-(4-хлорбензоил)-5-бромантраниловой кислоты (З.Зп) проявляет высокую противовоспалительную, аналыетическую активность и в 2,5 раза менее токсичен, чем диклофенак по ЛД5о. Сочетание этих свойств у соединения З.Зп при низкой токсичности указывает на его высокую перспективность. С другим соединением (3.4ё), проявившим наибольшую противовоспалительную активность, в настоящий момент также проводятся углубленные исследования. Среди синтезированных производных ІМ-ацил-5-галогенантраниловой кислоты 46 соединений были подвергнуты испытаниям на антимикробное действие.
Определение бактериостатической активности проводили методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде [59]. Для всех исследуемых соединений были определены МПК в отношении фармакопейных штаммов: Staphylococcus aureus АТСС 6538-Р, Escherichia coli АТСС 25922. Посевы производили в мясопептонный бульон (рН 7,0) с различной концентрацией испытуемых соединений. Культуры выращивали в пробирках на скошенной агаризированной среде (мясопептонный агар). Для определения противомикробной активности использовалась 18-20 часовая культура. Для приготовления рабочей взвеси микробов производили смыв выросшей культуры изотоническим раствором хлорида натрия и устанавливали плотность микробной взвеси по стандарту мутности 5 единиц. Далее из полученной микробной взвеси (500 000 000 микробных тел на 1 мл) готовили рабочий раствор бактерий с концентрацией 5 000 000 микробных тел на 1 мл. Данную взвесь микробов вносили в количестве 0,1 мл в пробирки с серийными разведениями изучаемого препарата. Таким образом, микробная нагрузка при определении противомикробного действия составила 250 000 микробных тел на 1 мл. Изучаемое соединение в количестве 50 мг растворяли в 5 мл ДМФА; 1 мл полученного разведения 1:100 соединяли с 4 мл мясопептонного бульона (1:500). Далее готовили ряд серийных разведений соединения с двукратно уменьшающейся концентрацией.
Через 18-20 ч выдержки контрольных и опытных пробирок в термостате при температуре 37С фиксировали результат. МПК определяли по отсутствию признаков роста микробов на питательной среде: последняя пробирка с задержкой роста (прозрачный бульон) соответствует МПК соединения в отношении данного штамма. Бактериостатический эффект исследуемых соединений сравнивали с действием диоксидина [42]. Результаты изучения противомикробной активности соединений представлены в таблицах 4.3.1-4.3.4.
