Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Современные принципы фитокоррекции средства Ми, обладающими адаптогенной активностью . 4
1.1. Адаптогены растительного происхождения и некоторые аспекты их применения 7
1.2. Биологически активные вещества некоторых адаптогенов
Растительного происхождения и их вклад в адаптогенный эффект ...14
1.3. Препараты некоторых адаптогенов в государственном реестре Российской федерации и их стандартизация 22
Выводы к главе 1 25
Часть II. Экспериментальная часть 25
Глава 1. Материалы и методы исследования 26
Глава 2. Разработка и стандартизация растительного средства адаптогенного действия чая байкальский № 9...31
2.1. Выбор оптимальной композиции из лекарственного растительного сырья 31
2.2. Установление анатомо-дилгностических признаков чая методом микроскопии 37
2.3. Разработка технологической схемы получения 43
2.4. Товароведческий анализ чая байкальского № 9 43
2.5.Фитохимическое изучение чая байкальский № 9 46
2.5.1. Идентификация основных групп биологически активных веществ 46
2.5.1.1. Краткие сведения по химическому составу индивидулъных компонентов.. 46 2.5.1.2.идентификация основных групп бав с помощью качественных реакций 48 2.5.1.3.идентификация основных групп бав методом уф-спектрофотометргш. 50
2.5.1.4. Идентификация основных групп бав методом тсх. 56
2.5.1.5. Гжх эфирного масла '. 62
2.5.1.6. Высокоэффективная жидкостная хроматография 64
2.5.2. Разработка методик количественного определения основных групп действующих веществ в чае байкальском № 9 74
2.5.2.1. Определение суммы флавоноидов 74
2.5.2.2.Определение содержания глгщирризиновой кислоты 80
2.5.2.3. Определение суммы элеутерозидов, в пересчёте на сирингин 82
2.5.2.4. Определение содержания розавина 84
2.5.2.5. Определение эфирного масла 86
2.5.2.б.Определение суммы органических кислот 86
2.5.2.7.Определение дубильных веществ в чае 87
2.5.2.8. Определение содержания полисахаридов 88
Выводы к главе 2 ...92
Глава 3. Разработка способа получения сухого экстракта93
3.1. Определение коэффициента водопоглощения чая байкальский № 9 94
3.2. Изучение качественного состава настоя чая байкальский № 9 95
3.3. Изучение показателей качества водных извлечений 95
3.3.1. Определение сухого остатка 96
3.3.2. Определение содержания флаеоноидов в водном настое 96
3.3.3. Определение содержания глицирризиновой кислоты 97
3.3.4. Определение содержания органических кислот 97
3.3.5. Определение содержания полисахаридов 98
3.3.6. Изучение влияния измельченности и технологического режима на качество водных извлечений 99
3.4. Разработка способа получения адаптогенного средства - сухого экстракта 101
3.4.1. Подбор оптимальных условий экстракции биологически активных веществ 101
3.4.2. Методика получения сухого экстракта 101
3.4.3. Изложение технологического процесса получения сухого экстракта из чая байкальский № 9. 104
3.4.4. Технологические характеристики сухого экстракта 107
Выводы к главе 3 107
Глава 4. Стандартизация сухого экстракта чая Байкальский № 9 108
4.1. Определение показателей качества сухого экстракта 108
4.2. Идентификация основных групп бав с помощью качественных реакций. 109
4.3. Идентификация основных групп бав методом уф^ектрофотометрии...п0
4.4. Идентификация основных групп бав методом тсх по
4.5. Идентификация основных групп бав методом вэжх по
4.6. Разработка методик количественного определения основных групп бав в экстракте чая байкальский №9 111
4.6.1. Определение суммы флаеоноидов 111
4.6.2. Определение содержания глицирризиновой кислоты 112
4.6.3. Определение содержания суммы элеутерозидов, в пересчёте на
Сирингин-стандарт 113
4.6.4.определение содержания розавина 114
4.6.5.определение суммы органических кислот 116
4.6.6. Определение дубильных веществ в экстракте 116
4.6.7.определение содержания полисахаридов 117
Выводы к главе 4 118
глава 5. разработка показателей качества для бад <«ай байкальский №9» и экстракта сухого 119
5.1. Разработка показателей качества бад «чай байкальский № 9» 119
5.2. Разработка показателей качества сухого экстракта чая байкальский №9 126
Выводы к главе 5 141
Общие выводы 142
Список литературы 144
Приложения 163
3.3.2. Определение содержания флавоноидов в водном настое 96
3.3.3. Определение содержания глицирризиновой кислоты 97
3.3.4. Определение содержания органических кислот 97
3.3.5. Определение содержания полисахаридов 98
3.3.6. Изучение влияния измельченности и технологического режима на качество Водных извлечений 99
3.4. Разработка способа получения адаптогенного средства - сухого Экстракта. .101
3.4.1. Подбор оптіаіальньїх условий экстракции биологически активных веществ 101
3.4.2. Методика получения сухого экстракта 101
3.4.3. Излооїсение технологического процесса получения сухого экстракта из чая байкальский № 9. 104
3.4.4. Технологические характеристики сухого экстракта 107
Выводы к главе 3 107
Глава 4. Стандартизация сухого экстракта чая Байкальский № 9 108
4.1. Определение показателей качества сухого экстракта 108
4.2. Идентификация основных групп бав с помощью качественнькреащий. 109
4.3. Идентификация основных групп бав методом уф<ітектрофотометрии...1ш
4.4. Идентификация основных групп бав методом тсх но
4.5. Идентификация основных групп бав методом вэжх но
4.6. Разработка методик количественного определения основных групп бав в экстракте чая байкальский № 9
4.6.1 .определение суммы флавоноидов 111
4.6.2.Определение содержания глицирризиновой кислоты 112'
4.6.3. Определение содержания суммы элеутерозидов, в пересчёте на-сирингин-стандарт .'...:... 113''
4.6.4.Определение содержания розавина 114
4.6.5. Определение суммы органических кислот 116
4.6.6.Определение дубильных веіцеств в экстракте 116
4.6.7.Определение содержания полисахаридов. 117
Выводы К ГЛАВЕ 4. 118
ГЛАВА 5. Разработка показателей качества для бад «чай Байкальский №9» и экстракта сухого 119
5.1. Разработка показателей качества бад «чай байкальский № 9» 119
5.2. Разработка показателей качества сухого экстракта чая Байкальский № 9. 126
Выводы к главе 5 141
Общие выводы 142
Список литературы
- Препараты некоторых адаптогенов в государственном реестре Российской федерации и их стандартизация
- Товароведческий анализ чая байкальского № 9
- Изучение качественного состава настоя чая байкальский
- Разработка методик количественного определения основных групп бав в экстракте чая байкальский №9
Введение к работе
Актуальность темы. Результаты эпидемиологических наблюдений и статистических исследований, последних двух-трех десятилетий свидетельствуют о значительном увеличении сердечно - сосудистых, желудочно-кишечных, эндокринных, онкологических заболеваний, обусловленных снижением адаптационных возможностей организма. В этих условиях важное место приобретают профилактические мероприятия, направленные на повышение адаптационных возможностей организма для сохранения и укрепления здоровья населения. Одним из способов решения этой задачи является применение биологически активных добавок (БАД) к пище в виде сборов лекарственных растений обладающих адаптогенной активностью. Они будут повышать эффективность первичной и вторичной профилактики, а также могут применяться в комплексном лечении многих хронических форм заболе-*' ваний.
Многокомпонентные лекарственные средства на основе растений и БАД к пище могут оказывать влияние на организм человека как корригирующая система, благодаря наличию комплекса природных веществ. Не-., смотря на их высокую эффективность, в настоящее время применяется до-' вольно ограниченный набор лекарственных средств растительного происхождения, который не удовлетворяет возросшие потребности населения. В связи с этим, является актуальной разработка БАД к пище на основе растительной композиции, улучшающих функции обмена веществ и повышающие адаптационные способности организма.
Наиболее распространенной формой их применения являются сборы -чаи из лекарственных растений. В последние годы, весьма перспективным являются перевод в суммарные сухие экстракты, преимуществом которых является стойкость при хранении, удобство применения, а также решение вопросов стандартизации. Таким образом, весьма актуальным являются иссле-
дования по разработке БАД к пище, улучшающих функции обмена веществ и повышающие адаптивные возможности организма.
Цель и задачи исследованияю. Целью настоящих исследований является разработка и стандартизация биологически активной добавки к пище чая «Байкальский № 9» и экстракта сухого, рекомендуемого как адаптогенное средство.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основные задачи:
обосновать и разработать рациональный состав многокомпонентной растительной композиции;
провести фармакогностическое изучение растительной композиции;
разработать способ получения биологически активной добавки к пище чая «Байкальский №9» и экстракта сухого;
- определить качественное и количественное содержание основных
биологически активных веществ в чае и экстракте сухом
исследовать влияние основных факторов, влияющих на процессы экстракции БАВ из растительной композиции;
разработать нормативные документы: Технические условия (ТУ), Тех-"". нологическую инструкцию (ТИ), Рецептуру на биологически активную добавку к пище чай «Байкальский № 9».
Научная новизна работы. Разработан и обоснован состав и соотношение компонентов исходной растительной композиции.
Установлены критерии подлинности чая «Байкальский № 9», числовые показатели, внесенные в нормативные документы. С учетом вклада каждого компонента в растительной композиции разработаны методы качественного и количественного анализа, подтверждающие наличие групп веществ характерных для данного вида сырья.
Определены условия для оптимальной экстракции биологически активных веществ (БАБ) из растительной композиции: тип экстрагента, темпе-
ратурныи режим, соотношение сырья и экстрагента, степень измельчения, гидродинамические условия. Рациональность технологии получения сухого экстракта подтверждена количественной оценкой БАВ в растительной композиции и экстракте сухом.
Разработаны методики качественного и количественного анализа основных БАВ в чае «Байкальский № 9» и экстракте сухом по сумме флавоноидов в пересчете на рутин-стандарт.
Практическая значимость работы. По результатам исследований разработаны и внедрены:
Биологически активная добавка к пище чай «Байкальский № 9» Р.77.99.02.937.Б.000125.08.03.
Справка об апробации и внедрении БАД к пище в ГУЗ МЗ РБ «Центр Восточной медицины», г. Улан-Удэ.
Методика количественного определения чая «Байкальский № 9» по сумме флавоноидов в пересчете на рутин-стандарт (апробирована на кафедре ; фармакогнозии ГОУ ВПО КГМУ Росздрава).
Методика качественного определения сирингина в сухом экстракте (апробирована в ОАО «Красногорсклексредство»).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных ра
бот, из них 3 статьи в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК. :>
Основные положения, выносимые на защиту:
результаты по разработке, обоснованию рационального состава и соотношения входящих компонентов растительной смеси;
результаты фармакогностических исследований по установлению критериев подлинности и содержания биологически активных веществ в растительной композиции;
результаты по разработке и обоснованию технологии получения сухого экстракта;
результаты исследований по стандартизации чая и экстракта сухого по основным группам действующих веществ.
Препараты некоторых адаптогенов в государственном реестре Российской федерации и их стандартизация
Черники побеги содержат: -плоды: дубильные вещества (до 12%), кате-хины (галлокатехин, эпикатехин, эпигаллокатехин, эпигаллокатехингаллат), гликозид миртиллин, неомиртиллин, галактозид дельфинидин, антоцианы; органические кислоты: лимонную, яблочную, янтарную, хинную, молочную и щавелевую кислоты (до 7%), витамин С до 250 мг%, каротин до 1,6 мг%, сахара до 30%, пектиновые вещества 0,6%, соли марганца, железа и др.; - листья: до 2% неомиртиллина, миртиллина; тритерпеноиды: 0-амирин, олеаноловая и урсоловая кислоты; фенолокислоты: кофейная, хлорогеновая, хинная; фенолы и их производные: гидрохинон, до 1% арбутина; флавоноиды: кемпферол, авикулярин, астрагалин, гиперин, кверцетрин, изо-кверцетрин, рутин, дубильные вещества (до 20%), катехины, органические кислоты [93].
Фенольные комплексы способны оказывать преимущественное влияние на базовые реакции в виде ингибирования свободно-радикального окисления липидов, стабилизации биомембран, активации ферментов углеводно го и липидного обмена [6, 13, 17, 18, 44, 45, 75]. В результате возникающих под влиянием фенольных комплексов метаболических превращений происходит уменьшение интенсивности свободно-радикального окисления липи-дов в биомембранах, блокируется воспалительная реакция, снижается степень повреждения тканей, активируются восстановительные процессы и защитно-компенсаторные механизмы организма, приводящие к процессам адаптационной перестройки в деятельности различных органов и систем [75, 82,86,92,98, 121,127,133, 139, 148,149,161,162, 165, 173,175, 197].
Наибольший интерес и практическую ценность из числа реакций, в которых участвуют фенольные соединения, представляют реакции окисления, обусловливающие антиоксидантные свойства фенолов [16, 19, 31, 54, ПО, 138, 145, 194]. О взаимосвязи адаптогенного и антиокислительного действия указывалось во многих работах [9, 35, 44, 70, 92].
Введение в организм фенольных антиоксидантов - АО (флавоноидов, каротинов, токоферолов, катехинов и др.) нормализует уровень антиоксидантов, тормозит свободно-радикальные реакции [137, 138, 145, 155]. Главным -действующим началом, обеспечивающим фенольным АО способность тор- мозить радикальные процессы окисления, является гидроксильная группа, присоединенная к ароматическому ядру [156].
В ряду фенольных соединений, участвующих в базисных реакциях организма заметное место занимают флавоноиды, которым присуще большое разнообразие биологических свойств. Флавоноиды - растительные вещества, не образуются в живом организме, а, поступая через пищу и лекарства в организм, участвуют в обменных превращениях, реакциях метаболизма [190, 194].
Биологическую роль флавоноидов в клетке связывают с их способностью: во-первых, образовывать прочные хелатные комплексы с различными ионами металлов, во-вторых, взаимодействовать со свободными радикалами; в-третьих, участвовать в транспорте электронов; в-четвертых, связываться с различными ферментами, изменяя их активность [3, 5, 16, 18, 195].
В большинстве препаратов адаптогенный эффект обусловлен действием всего комплекса полифенолов: мономеров и полимеров [44, 45]. Исследования последних лет показали наличие общего молекулярно-биологического механизма действия фенольных комплексов [44].
Таким образом, анализ данных литературы о растительных адаптоген-ных средствах позволяет сделать следующие выводы. В механизме действия большинства фитоадаптогенов принимают участие различные группы биологически активных веществ: панаксозиды в препаратах женьшеня [39, 59, 131, 150], элеутерозиды и полисахариды - элеутерококка [38, 59, 64, 132]; сапонины, полисахариды, флавоноиды в солодке [25, 170, 171, 172, 183].
В то же время установлено, что адаптогенную и иммуностимулирующую активность большинства фитоадаптогенов обусловливают фенольные. соединения: флавоноиды, фенолкарбоновые и оксикоричные кислоты, кума-рины, дубильные вещества, эфирные масла, где основную роль играют поли-1 фенольные комплексы (мономеры и полимеры) [5, 7, 9, 16, 19, 25, 31, 37, 46]. Под влиянием фенольных комплексов происходит ингибиция перекисного окисления липидов, стабилизация биологических мембран, активация ферментов углеводного и липидного обмена [7, 9, 16, 19, 25, 31, 37], в результате чего снижается степень повреждения тканей, активируются восстановительные процессы и защитно-компенсаторные механизмы организма, приводящие к процессам адаптационной перестройки в деятельности различных органов и систем [44, 45].
Таким образом, создание поликомпонентных композиций [83, 95, 97, 104], содержащих полифенольные комплексы и разработка лекарственных средств, обладающих широким спектром адаптогенного действия, являются в настоящее время одной из актуальных проблем.
Товароведческий анализ чая байкальского № 9
В связи с тем, что в состав чая входит сырьё, имеющее достаточную сырьевую базу, нами проведен товароведческий анализ нескольких серий растительной композиции. Сырьё оценивали по следующим показателям: внешние признаки, зола общая, зола, нерастворимая в 10% хлористоводородной кислоте, влага, примеси: побуревшие, почерневшие части растений, органические, минеральные, измельчённость, радионуклиды. Результаты анализа приведены в таблицах 2.4.5., 2.4.6.
Испытание проводились на 5 образцах чая. Методы испытаний, по выше приведенным показателям, изложены в соответствующих статьях ГФ XI изд. вып.1. Испытание радиоактивности проводилось с помощью гамма-бета-спектрофотометричекого комплекса «Прогресс-БГ» по 2-м радионуклидам: цезию 137, стронцию 90 (ОФС 42-0011-03). Стронций 90 определяли в навеске лекарственного растительного сырья по бета-измерению. Цезий 137 определяли по гамма-измерению в зольном остатке лекарственного растительного сырья.
Согласно проведенным испытаниям нами установлены следующие показатели для чая Байкальского № 9: смесь неоднородных частиц растительного сырья серовато-зеленого цвета со светло-желтыми, серовато-коричневыми, кремовыми, желтовато-серыми, оранжево-красными, коричневато-красными и белыми вкраплениями, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 5 мм;
при просмотре сбора под лупой (10х) или стереомикроскопом видны: - голые, слегка блестящие, светло-зеленые, зеленые или коричнево зеленые кусочки листьев с перистым жилкованием и остро-ребристые, зеле- : ные или коричневато-зеленые кусочки стеблей (черники побеги); -кусочки деревянистых корней и корневищ с занозистыми или гладкими краями, серовато-коричневые, желтовато-серые, светло-желтые или кремовые (элеутерококка корневища и корни); - светло-желтые кусочки корней волокнистой структуры, иногда с остатками серовато-коричневой продольно-морщинистой пробки (корни солодки). - серовато-коричневые, коричневые, светло-желтые обрывки пробки, розовато-коричневые, светло-коричневые кусочки основной ткани корневища и проводящих пучков (родиола розовая, корневища и корни). - кусочки неясно четырехгранных тонких, слегка опушенных или голых стеблей красновато-бурого цвета; слабоопушенных листьев с многочис ленными буроватыми точками (железками), на кусочках листьев у основания иногда заметны редкие щетинистые волоски; мелкие одиночные цветки или их части, кусочки сине-фиолетового венчика и двугубой опушенной чашечки буровато-красного цвета (трава чабреца); цвет чая: частицы зеленого, желтовато-зеленого, желтовато-белого, бурого, розовато-коричневого, синевато-фиолетового цвета; аромат чая своеобразный; вкус водного извлечения своеобразный со сладким привкусом; содержание общей золы, не более 10 %; золы нерастворимой в 10% хлористоводородной кислоте, не более 4 %; массовая доля влаги, не более 14%; степень измельчения: частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм, не более 5 %, части, проходящей сквозь сито с диаметром -отверстий 0,18 мм не более 10 %. органической примеси, не более 3 %; минеральной примеси не более 2 %; массовая доля металломагнитной примеси не более 0,0005 %; зараженность амбарными вредителями; плесень, затхлость, посторонние запахи и привкусы не допускаются; содержание радионуклидов регламентируется СанПиН 2.3.2.560-96.
Изучение качественного состава настоя чая байкальский
В связи с тем, что настои являются наиболее распространенной лекарственной формой в России [1, 2], они имеют ряд недостатков, а именно: их нестабильность при хранении, зависимость качества получаемых настоев от формы обработки сырья и способов получения водных извлечений [3,4,5,6].
Учитывая тот факт, что наиболее перспективным направлением в области создания фитопрепаратов является производство сухих экстрактов, используемых в виде растворимых чаев, или служащих субстанцией для получения различных лекарственных форм, содержащих стандартизированный набор БАВ в их естественной, природной композиции, целью продолжения нашего исследования стала также разработка и стандартизация адаптогенно-го средства растительного происхождения, представляющего собой сухой экстракт.
Сухой экстракт, легко растворимый в воде, является наиболее пер- ч спективной лекарственной формой многокомпонентного растительного сбора. Он представляет собой сумму БАВ в концентрированном виде и W. имеет все преимущества комплексных растительных лекарственных средств: взаимное усиление полезных фармакологических свойств каждого входящего компонента, соответствие свойств поливалентности патогенеза заболевания, взаимодействия в целом на организм как корригирующей системы [7,8,9].
Нами было проведено изучение перехода некоторых групп БАВ из нативного чая в получаемые из него водные извлечения, которые получали: по фармакопейной методике изготовления настоев — метод 1 (соотношение сырья и экстрагента (1:10), 15 минут - настаивание на водяной бане, 45 минут - охлаждение при комнатной температуре); по существующей инструкции к способу применения чая Байкальский № 9 — метод 2 (1/2 чайной ложки заливают 1/2 стакана (100 мл) кипятка, выдерживают на водяной бане в течение 15 минут; настаивают в течение 25-30 минут.).
Полученные водные извлечения исследовали органолептически и по физико-химическим показателям.
Извлечение, полученное по методу 2, представляет собой прозрачный раствор светло-коричневого цвета, горьковатого вкуса с рН= 6,0 со слабым ароматным запахом. Осадок при хранении в холодильнике выпадает на 4-е сутки (не обильный).
Настой, полученный по методу 1, представляет собой мутный раствор коричневого цвета, горьковатого вкуса с рН=5,7, с ароматным запахом. Осадок при хранении в холодильнике выпадает на 2-е сутки (обиль--ный, коричневого цвета).
Чай Байкальский № 9 представляет собой смесь сырья различныхч морфологических групп (трава чабреца, побеги черники, корень солодки, корень и корневище элеутерококка, корень и корневище родиолы розовой). Каждый из них обладает различной степенью водопоглощения (Кв).
В ГФ XI издания, вып.2 в статье «Настои и отвары» данный показатель определен для некоторых видов сырья, в частности, для корня солодки -1,7. Кв чая Байкальский № 9 ранее не определялся. В связи с тем, что данный параметр является важным фактором в процессе экстрагирования лекарственного сырья, значительно влияет на полноту извлечения биологически активных веществ, и обеспечивает получение номинального объема лекарственной формы, нами экспериментальным путем установлена его величина.
Для определения коэффициента водопоглощения чая (Кв) готовили водные извлечения из чая Байкальский № 9 в соотношении сырья и экст-рагента 1:10 по методике настоя ГФ XI, вып.2, стр. 147 (15 минут - нагревание на кипящей водяной бане в инфундирном аппарате, 45 минут -настаивание при комнатной температуре). Водные извлечения фильтровали через двойной слой марли. Сырье тщательно отжимали, объем полученного извлечения измеряли. Кв рассчитывали по формуле: У-Ух т где: V — первоначальный объем экстрагента, взятый для извлечения, мл; Vi — объем после экстрагирования, мл; m — масса чая, г. Таким образом Кв чая составил - 2,0±0,07 - ;
Изучение качественного состава настоя приготовленного по методу 2, проводилось параллельно аналогичным исследованиям для нативного объекта с учетом перехода действующих веществ в полярную водную фазу.
Проведенные исследования показали, что в настой из чая перешли следующие группы активных соединений: флавоноиды, органические кислоты, дубильные вещества, тритерпеновые сапонины, полисахариды.
Разработка методик количественного определения основных групп бав в экстракте чая байкальский №9
ВЭЖХ - анализ сухого экстракта доказал присутствие в нем ранее идентифицированных веществ и дополнил состав фенольных соединений за счет обнаруженных - органических кислот (щавелевая, лимонная, винная, яблочная, янтарная кислоты), Сахаров (глюкоза, фруктоза, мальтоза, сахароза, рамноза), глицирризиновой кислоты, сирингина и розавина.
Исследования проводились в условиях описанных в главе 2.4.1.6.
На основе проведенных исследований по идентификации биологически активных веществ в сухом экстракте чая «Байкальский № 9» качественными реакциями, методами спектрофотометрии, хроматографии в тонких слоях сорбента, высокоэффективной жидкостной хроматографии подтверждено на личие фенольных соединений, в том числе флавоноидов, органических кислот, Сахаров, глицирризиновой кислоты, сирингина и розавина.
Таким образом, исходя из полученных результатов, можно сделать ввод, что по качественному составу обнаружен 100 % переход активных соединений из чая в сухой экстракт, что в свою очередь подтверждает рациональность разработанной ранее технологии его получения.
Учитывая идентичность качественного состава чая и экстракта, стандартизацию и контроль на отдельных стадиях его производства проводили по методикам, разработанным для исходной растительной смеси. 4.6.1.Определение суммы флавоноидов.
При подборе оптимальных условий, выбраны следующие параметры:: навеска сухого экстракта, количество растворителя, устойчивость комплекса с хлоридом алюминия и аналитическая длина волны.
Методика. Около 1,0 г (точная навеска) сухого экстракта помещали в мерную колбу объёмом 100 мл, прибавляли 70 мл спирта этилового 70%, перемешивали до растворения и объём доводили растворителем до метки, фильтровали (испытуемый раствор). И далее поступали, как описано при определении суммы флавоноидов в Главе 2.4.2.1.
Определение суммы органических кислот проводили по методике, изложенной в ГФ XI изд. вып. 2, стр. 295 титриметрическим методом в пересчёте на яблочную кислоту.
Методика. Около 1,0 г (точная навеска) экстракта помещали в колбу вместимостью 200 мл, заливали 100 мл воды и выдерживали в течение 2-х часов на кипящей водяной бане, затем охлаждали, количественно переносили в мерную колбу вместимостью 250 мл, доводили объём извлечения водой до метки и перемешивали. К 10 мл извлечения прибавляли 200 - 300 мл свеже-прокипячённой воды, 1 мл 1% спиртового раствора фенолфталеина, 2 мл 0,1% раствора метиленового синего и титровали 0.1 М раствором натра едкого до появления в пене лилово-красной окраски. 1 мл 0.1 М раствора натра едкого соответствует 0,0067 г яблочной кислоты. Результаты определения суммы органических кислот в сборе приведены в таблице 4.6.5.55.
Определение дубильных веществ в чае проводили по методике, изложенной в ГФ XI изд. вып.1, стр. 286. Результаты проведенных испытаний приведены в таблице 4.6.6.56. Определение суммы органических кислот проводили по методике, изложенной в ГФ XI изд. вып. 2, стр. 295 титриметрическим методом в пересчёте на яблочную кислоту.
Методика. Около 1,0 г (точная навеска) экстракта помещали в колбу вместимостью 200 мл, заливали 100 мл воды и выдерживали в течение 2-х часов на кипящей водяной бане, затем охлаждали, количественно переносили в мерную колбу вместимостью 250 мл, доводили объём извлечения водой до метки и перемешивали. К 10 мл извлечения прибавляли 200-300 мл свеже-прокипячённой воды, 1 мл 1% спиртового раствора фенолфталеина, 2 мл 0,1% раствора метиленового синего и титровали 0.1 М раствором натра едкого до появления в пене лилово-красной окраски. 1 мл 0.1 М раствора натра едкого соответствует 0,0067 г яблочной кислоты. Результаты определения суммы органических кислот в сборе приведены в таблице 4.6.5.55.
Для характеристики БАД «Чай Байкальский № 9» были предложены следующие показатели качества: описание внешнего вида, органолептиче-ские показатели: цвет, аромат, вкус водного извлечения, физико-химические показатели: содержание общей золы, золы, нерастворимой в 10% хлористоводородной кислоте, массовая доля влаги, степень измельчения, отклонение от средней массы, органические примеси, минеральные примеси, массовая доля металломагнитной примеси, заражённость амбарными вредителями, плесень, затхлость, посторонние запахи и привкусы, показатели безопасности: содержание токсических элементов, содержание пестицидов, содержание радионуклидов, микробиологические показатели; показатели подлинности: микроскопия, качественные реакции на флавоноиды, сумма флавонои.-. дов, в пересчёте на рутин; упаковка, маркировка. 1. Внешний вид лекарственного растительного сырья и БАД к пище оценивают при дневном свете, либо при ярком исскуственном освещении. Их цвет интенсивность, оттенки определяют визуально. 2. Цвет, аромат определяют визуально, вкус определяют в настое, отмечая полноту, степень выраженности, наличие дополнительных оттенков аромата и привкусов. 3. Отбор и подготовка проб для определения токсических элементов по ГОСТ 26929-94. 4. Отбор и подготовка проб для определения микробиологических показателей по ГОСТ 26668-85 и по ГОСТ 26669-85. 5. Микроскопия. При микроскопическом анализе составных частей сбора, согласно общей статьи «Сборы» (ГФ XI, вып. 1, с. 267), отбирают 25-30 однородных по внешнему виду частиц и из нескольких кусочков готовят препараты в соответствии со статьей «Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья» (ГФ XI, вып. 1, с. 277).
Подлинность сырья подтверждается изучением анатомического строения компонентов сбора в соответствии с ГФ XI изд. вып.1,с. 266 . 6. Качественные реакции:
1) 0,5 г измельченного чая помещают в стакан, прибавляют 10 мл горячей воды, нагревают на кипящей водяной бане 5 минут и фильтруют. К 1 мл извлечения прибавляют несколько капель 1% раствора железа окисного хлорида, появляется зеленое окрашивание (полифенолы);
2) 0,5 г чая кипятят с 10 мл воды в течение 3 минут, после охлаждения фильтруют. К 3 мл фильтрата прибавляют 2-3 капли раствора железоаммо-ниевых квасцов, появляется черно-синее окрашивание (дубильные вещества);
3) 1,0 г чая помещают в коническую колбу, прибавляют 50 мл спирта этилового 70%, экстрагируют на водяной бане в течение 10 минут. Извлечение фильтруют в стакан. 1 мл полученного извлечения помещают в пробирку, разбавляют водой до 10 мл. Прибавляют 1 мл 5% спиртового раствора хлорида алюминия. Появляется желтое окрашивание (флавоноиды).
7. Количественное определение суммы флавоноидов. Около 2,0 г (точ ная навеска) чая «Байкальский № 9» помещают в колбу со шлифом вмести мостью 150 мл, прибавляют 100 мл 60% этанола. Колбу присоединяют к об ратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 минут, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Го рячее извлечение фильтруют через вату в мерную колбу вместимостью 100 мл. После охлаждения объем извлечения доводят 60%) этанолом до метки и перемешивают (раствор А).
