Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 9
1.1. Современные седативные средства 9
1.2. Седативные средства растительного происхождения 12
1.3. Выбор оптимальной композиции лекарственных растений 15
1.4. Принципы разработки, технология получения и методы стандартизации настоек
1.4.1. Технология получения настоек 20
1.4.2. Методы стандартизации настоек 26
1.5. Характеристика лекарственного растительного сырья, входящего в композицию лекарственных растений 31
1.5.1. Пустырник пятилопастный (Leonurus quinquelo batus Gilib.) 31
1.5.2. Мята перечная (Mentha х piperita L.) 32
1.5.3. Ромашка аптечная (Matricaria recutita L.) 34
1.5.4. Валериана лекарственная (Valeriana officinalis L.) 36
1.5.5. Шлемник байкальский (Scutellaria baicalensis Georgi) 37
Выводы к главе 1 40
Экспериментальная часть 41
Пояснение к эксперименту 41
ГЛАВА 2. Разработка способа получения биологически активной добавки к пище в форме фиточая
2.1. Выбор оптимального соотношения ингредиентов растительной композиции 46
2.2. Товароведческий анализ лекарственного растительного сырья 47
2.3. Изложение технологического процесса получения средства в форме фиточая 53
Выводы к главе 2 56
Глава 3. Стандартизация фиточая «седафит» 57
3.1. Исследование качественного состава фиточая 57
3.1.1. Общие качественные реакции 57
3.1.2. Хроматографическое изучение фиточая 58
3.2. Количественное определение основных биологически активных веществ в фиточае 64
3.2.1. Количественное определение суммарного содержания иридоидов в фиточае 64
3.2.1.1. Методика количественного определения суммарного содержания иридоидов в фиточае 67
3.2.2. Разработка методики количественного определения суммарного содержания флавоноидов в фито- 69 чае
3.2.3. Определение содержания других биологически активных веществ в фиточае 77
3.3. Показатели качества фиточая «Седафит» 78
Выводы к главе 3 82
Глава 4. Разработка способа получения настойки «седафит» 83
4.1. Подбор оптимальных условий экстракции биологически активных веществ из исходной растительной композиции Стр
4.2. Разработка технологической схемы получения седа тивного средства растительного происхождения 88
Выводы к главе 4 92
ГЛАВА 5. Стандартизация настойки «седафит» 93
5.1. Фитохимическое изучение настойки «Седафит» 93
5.1.1. Общие качественные реакции 93
5.1.2. Хроматографическое изучение настойки 94
5.1.3. Изучение флавоноидов в настойке методом ВЭЖХ 97
5.1.4. Изучение состава летучих компонентов настойки «Седафит» методом хромато-масс-спектрометрии 99
5.2. Изучение количественного содержания основных групп биологически активных веществ в настойке «Седафит» 103
5.2.1. Количественное определение суммарного содержания флавоноидов в пересчете на лютеолин в на стойке «Седафит» 104
5.2.2. Определение суммарного содержания иридоидов в настойке «Седафит» 108
5.2.3. Определение содержания других биологически ак тивных веществ в настойке «Седафит» 111
5.3. Показатели качества настойки «Седафит» 112
5.4. Установление срока годности настойки 114
Выводы к главе 5 117
Общие выводы 118
Список использованной литературы
- Выбор оптимальной композиции лекарственных растений
- Изложение технологического процесса получения средства в форме фиточая
- Количественное определение основных биологически активных веществ в фиточае
- Разработка технологической схемы получения седа тивного средства растительного происхождения
Введение к работе
Актуальность темы. Среди различных расстройств организма неврозы по своей распространенности занимают одно из ведущих мест. Показатели заболеваемости неврозами имеют отчетливую тенденцию к увеличению во многих, особенно развитых странах, и являются одной из причин нетрудоспособности населения. По данным ВОЗ, заболеваемость неврозами в мире за последние 65 лет возросла более, чем в 20 раз, и составляет около 40%. Неврозы относят к так называемым «болезням цивилизации» и их рост связывают с воздействием на организм неблагоприятных социально-бытовых факторов, уменьшением доли физического труда в жизни современного человека, информационными перегрузками и психотравмирующими ситуациями (Вейн, 2000; Литвицкий, 2002; Снедков, 2003).
Несмотря на наличие относительно широкого перечня средств профилактики и терапии нервных расстройств, сохраняется актуальность разработки и внедрения новых, более эффективных и безопасных средств. В этом отношении особого внимания заслуживают лекарственные средства и биологически активные добавки к пище (БАД) растительного происхождения, как средства более близкие организму человека, чем синтетические, легко включающиеся в обменные процессы, практически не вызывающие побочных эффектов и зачастую снижающие отрицательные последствия, возникающие в результате применения синтетических лекарственных средств. Необходим^ также подчеркнуть, что средства растительного происхождения, по сравнению с синтетическими, имеют более низкую стоимость, что приводит к удешевлению и доступности проводимого с их применением лечения (Современная..., 1988; Виноградова, 1998; Вайс, 2004).
В связи с вышеизложенным, исследования по созданию комплексных профилактических средств и БАД из растительного сырья, обладающих мягким седативным действием, доступных широким слоям населения, эффективных и безопасных при их длительном применении, являются актуальной задачей фармацевтической науки и клинической медицины.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является разработка оптимальной композиции, способов получения и стандартизация седативных средств растительного происхождения в форме фиточая и настойки.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить сле
дующие задачи: ——.
fWC. НАЦИОНАЛЬНАЯ 1
СПетчЛгргЛ^ I
-разработать оптимальный состав растительной композиции, являющейся основой для получения седативных средств;
-разработать способы получения седативных средств в форме фиточая и настойки;
-изучить химический состав полученных седативных средств;
-разработать методики количественного определения действующих веществ и показатели качества полученных седативных средств;
-разработать нормативную документацию на БАД - фиточай (технические условия, технологическую инструкцию и рецептуру) и настойку (ФСП, лабораторный регламент) для их внедрения.
Научная новизна работы. Разработана и предложена оригинальная композиция из пяти видов лекарственных растений, являющаяся основой для получения седативных средств, с учетом данных о применении препаратов лекарственных растений для лечения и профилактики неврозов и неврозоподобных состояний в традиционной и научной медицине, принципов составления многокомпонентных препаратов, сырьевых ресурсов и результатов фармакологического скрининга.
Разработаны способы получения фиточая и настойки.
С использованием современных методов анализа установлено наличие в фиточае и настойке «Седафит» флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, иридоидов, сесквитерпеноидов, сложных эфиров, сапонинов, кума-ринов, алкалоидов, дубильных веществ.
Разработаны методики количественного определения суммарного содержания иридоидов в пересчете на гарпагида ацетат, флавоноидов в пересчете на лютеолин и предложены показатели качества для стандартизации седативных средств.
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработана следующая нормативная документация: технические условия (ТУ 9373-037-03533369-05), технологическая инструкция (ТИ) и рецептура на биологически активную добавку (БАД) к пище-фиточай; проект Фармакопейной статьи предприятия, лабораторный регламент на лекарственное средство настойка «Седафит» (утверждены на заседании Ученого совета ИОЭБ СО РАН, протокол №10 от 26.05.2005).
Биологически активная добавка к пище - фиточай - внедрена в производство в ГУЗ «Центр восточной медицины» Министерства здравоохранения Республики Бурятия (акт внедрения от 04.05.2005).
Получено положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке № 2004134094/15(037084) от 22.11.2004: Седативное средство растительного происхождения.
Фармакологическое изучение фиточая и настойки «Седафит», проведенное в лаборатории экспериментальной фармакологии Института
общей и экспериментальной биологии СО РАН, показало, что данные средства не токсичны и обладают седативным, спазмолитическим, аналь-гезирующим и противовоспалительным действием.
Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:
научно-практической конференции, посвященной 70-летию службы контроля качества лекарственных средств в Бурятии (Улан-Удэ,2003);
научной конференции преподавателей, научных работников и аспирантов, посвященной 80-летию образования Республики Бурятия (ВСГТУ, Улан-Удэ, 2003);
научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине» (Улан-Удэ, 2003);
научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2004).
Основное содержание диссертации опубликовано в 10 научных работах; в ТУ и ТИ на производство биологически активной добавки (БАД) к пище фиточай, проекте ФСП на настойку «Седафит».
Связь задач исследований с планом НИР. Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Отдела биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН по программам: «Регуляция свободнорадикальных процессов при повреждении органов пищеварения с использованием биологически активных веществ из арсенала традиционной медицины»; «Лекарственные растения Сибири и Дальнего Востока», являющейся разделом (6.3) Государственной программы «Сибирь» на период 1986-2005 гг. и тематикой проблемной комиссии по фармации №36.08 РАМН; «Создание информационного банка данных по тибетской медицине и разработка новых лекарственных препаратов» (№ гос. регистрации 01.9.40003183).
Основные положения, выносимые на защиту:
результаты теоретического и экспериментального обоснования состава растительной композиции, рекомендуемой в качестве основы для создания седативных средств;
результаты исследований по установлению показателей подлинности, качественного и количественного определения биологически активных веществ в фиточае и настойке;
способы получения фиточая и настойки;
методы стандартизации полученных средств.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа выполнена на 147 страницах машинописного текста: состоит из введения, обзора литературы (глава 1), экспериментальной части (4 глав); 38 таблиц и
13 рисунков, общих выводов, списка литературы (включено 264 источника, из которых 37 - на иностранных языках) и приложений.
Выбор оптимальной композиции лекарственных растений
Наиболее распространенная в настоящее время технологическая схема получения настоек включает в себя следующие основные стадии: - подготовка лекарственного растительного сырья и экстрагента; - экстракция исходного сырья; - отделение извлечения от шрота; - очистка полученного извлечения. Экстракция лекарственного растительного сырья занимает ведущее место в технологической цепи производства настоек. Экстрагирование растительного материала имеет ряд особенностей, связанных с его клеточной структурой и физико-механическими свойствами. За счет смачивания и капиллярных сил экстрагент через микропоры проникает в растительные ткани, вытесняет воздух и заполняет клеточные пространства. При этом происходит набухание растительного материала, протекает десорбция и растворение различных веществ, массоперенос растворенных веществ из клеток [161, 194].
Процессы экстрагирования изучены достаточно хорошо рядом исследователей [5, 80, 154, 171, 172]. Выявлены основные факторы, влияющие на процесс экстракции растительного сырья: 1) градиент концентраций БАВ; 2) степень измельчения растительного материала; 3) температура экстракции; 4) продолжительность экстракции; 5) анатомическое (гистологическое) строение растительного материала; 6) природа экстрагента; 7) гидродинамика слоя растительного материала.
Градиент концентраций веществ в сырье и экстрагенте является основной силой диффузионного процесса. Процесс идет до установления динамического равновесия в системе твердое тело-жидкость. Поэтому в процессе экстракции необходимо поддерживать максимальный перепад концентраций. Практически это достигается путем перемешивания [80], циркуляции экстрагента или замены извлечения чистым экстрагентом, что может осуществляться периодически [3].
Степень измельчения растительного материала. Измельчение растительного сырья способствует повышению скорости экстрагирования биологически активных веществ вследствие увеличения удельной поверхности твердой фазы и уменьшения поверхности диффузионного сопротивления частиц сырья; кроме того, разрушение клеток растительного материала обеспечивает дополнительное повышение скорости экстрагирования за счет механизма вымывания. При использовании слишком измельченного сырья, вследствие сильного набухания резко возрастает гидравлическое сопротив 22 ление и процесс экстрагирования затрудняется. Кроме того, извлечения загрязняются высокомолекулярными соединениями - полисахаридами, белками и др., которые вымываются из разрушенных клеток [171]. С другой стороны, экстрагировать сырье с очень крупными частицами нецелесообразно, т.к. процесс экстракции действующих веществ становится продолжительным, что может привести к извлечению большого количества сопутствующих веществ и, кроме того, возможна адсорбция ценных биологических веществ шротом. Поэтому экстракцию лекарственного сырья необходимо проводить после предварительного изучения влияния степени измельчения материала на скорость экстракции [ПО, 125, 138, 194]. В зависимости от вида сырья, растительный материал рекомендуют измельчать до следующих размеров: - траву, листья, цветки до частиц размером 3-5 мм; - стебли, корни и кору до частиц размером 1-3 мм; - плоды и семена до крупности частиц 0,3-0,5 мм.
Важным фактором, влияющим на процесс экстрагирования, является температура экстрагента так как под влиянием температуры усиливается процесс диффузии и диализа, материал быстрее набухает. Но повышение температуры не всегда целесообразно, так как под действием температуры могут разрушаться термолабильные вещества (гликозиды, алкалоиды), некоторые вещества при повышенной температуре хуже растворяются, эфирные масла и другие летучие компоненты улетучиваются, в извлечение переходит больше балластных веществ (например, крахмал, пектин, инулин), вследствие чего извлечение мутнеет. Поэтому температурный режим подбирают в зависимости от характера растительного сырья и действующих веществ.
Продолжительность экстракции. Во время экстракции в вытяжку переходят не только биологически активные вещества, но и балластные. Поэтому о конце процесса извлечения необходимо судить не по сумме экстрактивных веществ, а по количеству действующих веществ. Как правило, действующие вещества обычно диффундируют быстрее, чем высокомолекулярные вещества, поскольку они обладают меньшей молекулярной массой. При длительной экстракции ухудшается качественный состав вытяжки за счет большего содержания балластных веществ. Необходимо стремиться к тому, чтобы полнота извлечения наступила в кратчайшее время, в максимальной степени использовать все прочие факторы, ведущие к интенсификации процесса экстракции. Ускорение процесса экстракции целесообразно и с экономической точки зрения.
Основные требования к эктрагенту: избирательность, смачивающая способность, химическая и фармакологическая индифферентность, доступность и дешевизна. Наиболее широко используемыми экстрагентами являются спирто-водные смеси различной концентрации [5, 123, 154]. Преимущества данных экстрагентов заключаются в том, что в них хорошо растворимы многие группы БЛВ; этанол обладает бактерицидными свойствами; в нем почти отсутствуют гидролитические процессы; балластных веществ спирт извлекает тем больше, чем ниже его концентрация. Недостатками спирта являются его огне- и взрывоопасность и фармакологическая неиндифферентность.
Гидродинамика слоя растительного материала. На эффективность диффузионного процесса значительное влияние оказывает удельная загрузка экстрактора (загрузочная плотность материала) [4], пористость (порозность) слоя растительного сырья, общая высота слоя, скорость подачи экстрагента и равномерность его движения по сечению аппарата [134, 157, 160].
С целью выбора емкости оборудования, подбора загрузочных средств, расчета количества экстрагента и проведения оптимизации процесса экстрагирования необходимо предварительно изучить технологические свойства используемого измельченного растительного сырья. К технологическим свойствам подготовленного для экстракции измельченного растительного сырья относят: насыпную плотность (насыпную массу), фракционный состав растительной массы (средний диаметр частиц), сыпучесть массы, пористость слоя, коэффициент поглощения сырьем экстрагента, коэффициент образования внутреннего сока.
Изложение технологического процесса получения средства в форме фиточая
На основании данных литературы о применении препаратов лекарственных растений для профилактики и лечения неврозов и неврозоподобных состояний в научной и народной медицине, а также сформулированных нами принципов (Глава 1) были выбраны следующие ингредиенты исходной растительной композиции: трава пустырника пятилопастного, листья мяты перечной, цветки ромашки аптечной, корневища с корнями валерианы лекарственной, корни шлемника байкальского.
Выбор оптимального соотношения ингредиентов, входящих в состав исходной растительной композиции, был осуществлен на основе данных фармакологического исследования седативной активности 4-х вариантов исходной растительной композиции (таблица 2.1.1), проведенного в лаборатории экспериментальной фармакологии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН.
Товароведческий анализ лекарственного растительного сырья Лекарственное растительное сырье, входящее в состав исследуемой композиции, было подвергнуто товароведческому анализу в соответствии с существующей нормативной документацией (НД).
Отбор проб для анализа проводили согласно требованиям статьи «Правила приемки лекарственного сырья и методы отбора проб для анализа» (ГФ XI, вып.1). Количественное определение эфирного масла в листьях мяты перечной и цветках ромашки аптечной проводили с использованием метода № 1 и №2 по ГФ XI. Для определения содержания валепотриатов, сложных эфиров использовали методику количественного определения в корневищах с корнями валерианы, приведенную в «Изменениях и дополнениях №5» к ГФ XI изд., вып.2, ст. 77. Для количественного определения содержания иридои-дов в траве пустырника был использован метод, изложенный в «Изменениях и дополнениях №5» к ГФ XI изд., вып.2, ст. 54. Результаты товароведческого анализа представлены в таблицах 2.2.1.-2.2.5.
Внеш ний вид Содержание эфирного масла, не менее 1% Влаж ность,неболее14% Золы общейне более 14% Золы,не раств. в 10% р-ре HCL, не более 6% По-чер-нев-ших листьев, не более 5% Стеб лей, не более 10% Частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, не более 8% Орган. примеси, не более 3% Минер. примеси, не более1%
Внешний вид Содержание эфирного масла, не менее 0,3% Влаж ность,неболее14% Золы общейне более 12% Золы,не раств. в 10% р-ре HCL, не более 4% Листьев, стеблей, корзинок с остатками цветоносов длиннее 3 см, не более 9% Корзинокпочерневших и побуревших, не более 5%
Внешний вид Экстр.вещ-визвлекаемых 70%спиртом,не менее 25% Суммарное содержание вале-потриа-тов в пересчете навал-трат, не менее 1,4% Сложных эфиров в пересчете на этиловый эфир ва-лерено-вой кислоты, не менее 2% Влажность, не более 15% Золы общей, не более 14% Золы,не раств. в10% р-реHCL,не более 10% Других частейвалерианы,не более 5% Орган.примеси, не более 2% Минер.примеси, не более 3%
Измельчение сырья, входящего в состав фиточая, проводят, согласно требованиям ГФ X изд., ст. 349. Траву пустырника, листья мяты и цветки ромашки измельчают до размера частиц 5 мм, корневища с корнями валерианы и корни шлемника до размера частиц 3 мм. После измельчения и просеивания, взвешивают на весах: траву пустырника в количестве 3 кг, листья мяты -2,5 кг, цветки ромашки -2,5 кг, корневища с корнями валерианы - 1 кг, корни шлемника -1 кг, из расчета на 10 кг чая. Потери сырья при измельчении и просеивании 2,8 %.
Получение готового продукта Измельченное и просеянное лекарственное растительное сырье перемешивают до получения однородного продукта. УМО.1. Фасовка и упаковка фиточая СЫРЬЕ Измельчение и просеивание растительного сырья Потери ТП.2. Получение готового продукта УМО.1. Фасовка и упаковка чая Потери На склад
Технологическая схема производства фиточая Фасовку готового продукта производят в полиэтиленовые пакеты по 21 г из пищевого полиэтилена, с последующей упаковкой их в картонную коробку из картона коробочного для пищевых продуктов. В каждую упаковочную единицу с фиточаем вкладывают инструкцию по применению либо инструкция по применению наносится непосредственно на упаковку.
Готовый продукт представляет собой смесь неоднородных частиц измельченного растительного сырья, включающая следующие компоненты: кусочки серовато-зеленых стеблей, от светло-зеленых до темно-зеленых листьев, кусочки белых язычковых, желтых трубчатых цветков, желтовато-зеленой обвертки, а также кусочки корней и корневищ различной формы от светло-коричневого до темно-коричневого и желто-коричневого цвета. Вкус водного извлечения горьковатый. Запах сильный, ароматный.
Количественное определение основных биологически активных веществ в фиточае
Около 5,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в кругло-донную колбу вместимостью 200 мл, прибавляют 40 мл 40% спирта этилового и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 45 мин при температуре 60С. Извлечение после охлаждения фильтруют через ватный тампон в мерную колбу вместимостью 50 мл. Экстракцию повторяют с 20 мл 40% спирта этилового при нагревании на водяной бане в течение 15 мин, затем охлаждают, фильтруют в ту же мерную колбу и доводят объем раствора 40% спиртом этиловым до метки. 10 мл полученного раствора концентрируют до 5 мл и разбавляют водой очищенной до 10 мл, пропускают через колонку с алюминия окисью. Затем колонку промывают 6 мл воды очищенной. Полученный водный элюат концентрируют в вакууме при температуре не выше 40С до первоначального объема 10 мл.
5 мл элюата переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл. Прибавляют 5 мл щелочного раствора гидроксиламина, выдерживают 5 мин, а затем прибавляют 10 мл 1 М раствора кислоты хлористоводородной, доводят объем раствора 1% раствором хлорида окисного железа в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают.
Оптическую плотность раствора определяют на спектрофотометре при длине волны 512 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют следующую смесь: 5 мл воды очищенной помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 5 мл щелочного раствора гидроксиламина, затем 10 мл 1 М раствора кислоты хлористоводородной, до 68 водят объем раствора 1 % раствором хлорида окисного железа в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают. Суммарное содержание иридоидов в фиточае в пересчете на гарпагида ацетат и абсолютно сухое сырье в % (X) рассчитывают по формуле: D-100-50-25 56-5-m-(\00-W) где D — оптическая плотность анализируемого раствора; 56 - удельный показатель поглощения стандартного образца гарпагида ацетата (ТУ 3072-90); m - навеска сырья в граммах; W -влажность сырья в процентах.
Примечание. Приготовление колонки: 3 г алюминия окиси для хроматографии II степени активности (ТУ 6-09-3916-75), переносят в стеклянную колонку диаметром 1 см, высотой 25 см, в нижнюю часть которой помещают ватный тампон, предварительно смоченный водой. Колонку заполняют при открытом кране.
Исходя из полученных данных, суммарное содержание иридоидов в пересчете на гарпагида ацетат в фиточае должно быть не менее 0,1 %.
В связи с тем, что флавоноиды являются одной из доминирующих групп биологически активных веществ в 4 из 5 видов лекарственного сырья, входящего, в состав фиточая, во многом обусловливая суммарный седатив-ный эффект, необходимо провести стандартизацию по количественному содержанию суммы флавоноидов [234, 246].
Разработка методики количественного определения флавоноидов осуществлялась с применением дифференциальной спектрофотометрии. Метод базируется на реакции комплексообразования флавоноидов с алюминия хлоридом. Происходящий при этом батохромный сдвиг первой полосы погло 70 щения флавоноидов с 330-350 нм до 390-415 нм позволяет применить в качестве контрольного испытуемый раствор без реактива и тем самым исключить влияние сопутствующих окрашенных веществ [22]. В качестве стандартного образца выбран лютеолин, максимум дифференциального спектра которого (400±2 нм) совпадает с максимумом дифференциального спектра извлечения из фиточая (400±3 нм) (рис 3.2.2.1).
Спектры поглощения извлечения из фиточая «Седафит» и ГСО лютеолина 1 -дифференциальный спектр извлечения (1:625, 70% спирт этило вый); 2 - дифференциальный спектр ГСО лютеолина (с 0.00001 мг/мл, 70% спирт этиловый). При определении оптимального времени комплексообразования суммы флавоноидов фиточая с алюминия хлоридом установлено, что измерение оптической плотности необходимо проводить через 40 мин после добавления алюминия хлорида к извлечению (таблица 3.2.2.1).
Для определения оптимальных условий экстракции флавоноидов извлечение готовили изложенным ниже способом, варьируя исследуемый параметр экстракции.
В колбы помещали по 1,0 г (точная навеска) фиточая, измельченного до размера частиц 1 мм, добавляли 100 мл экстрагента и выдерживали на кипящей водяной бане при периодическом перемешивании в течение определенного временного интервала.
Результаты опытов с использованием различных экстрагентов приведены в таблице 3.2.2.2. Все значения получены из 3 параллельных определений. Оптимальным экстрагентом является 70% спирт этиловый.
Существенное влияние на скорость процесса экстракции оказывает температурный режим экстрагирования [154]. В этой связи изучено влияние температуры на выход суммы флавоноидов при соотношении сы-рье:экстрагент - 1:50, экстрагент - 70% спирт этиловый. Результаты представлены в таблице 3.2.2.3. Как следует из данных таблицы 3.2.2.3, при однократном заливе сырья максимальный выход флавоноидов достигается при температуре 90С.
Разработка технологической схемы получения седа тивного средства растительного происхождения
Необходимость количественного определения суммарного содержания иридоидов в настойке обусловлена наличием седативного эффекта у данных соединений. В основу методики количественного определения суммарного содержания иридоидов положен хроматоспектрофотометрический метод с использованием удельного показателя поглощения гарпагида ацетата по ФС 42-2278-98. Очистку от сопутствующих веществ осуществляли методом колоночной хроматографии с применением сорбента алюминия окиси. Экспериментальным путем подтверждено используемое в фармакопейной методике количество сорбента - 3 г. Полноту осаждения флавоноидов на колонке контролировали с помощью качественных реакций (реакция комплексообра-зования с алюминия хлоридом). Для элюирования колонки использовали воду очищенную. Полнота элюирования иридоидов доказана методом ТСХ (таблица 5.2.2.1).
Установлено, что для полного элюирования достаточно 6 мл воды очищенной. Увеличение количества воды очищенной не отражается на выходе иридоидов, но увеличивает время проведения анализа, равно как и увеличение массы сорбента.
Методика количественного определения суммарного содержания иридоидов в настойке 10 мл настойки концентрируют до 5 мл, прибавляют 5 мл воды очищенной и пропускают через колонку с алюминия окисью. Затем промывают колонку б мл воды очищенной до отрицательной реакции элюата на иридои-ды. Полученный элюат концентрируют в вакууме при температуре не выше 40С до объема 10 мл. 5 мл элюата переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл. К 5 мл элюата прибавляют 5 мл щелочного раствора гидроксиламина, выдерживают 5 минут, прибавляют 10 мл 1 М раствора кислоты хлористоводородной, доводят объем раствора 1 % раствором железа окисного хлорида в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают. Измеряют оптическую плотность с помощью спектрофотометра при длине волны 512 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют следующую смесь: 5 мл воды очищенной помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 5 мл щелочного раствора гидроксиламина, затем 10 мл 1 М раствора кислоты хлористоводородной, доводят объем раствора 1% раствором железа окисного хлорида в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают.
Суммарное содержание иридоидов в настойке в пересчете на гарпагида ацетат в процентах (X) вычисляют по формуле: где D - оптическая плотность испытуемого раствора, 56-удельный показатель поглощения стандартного образца гарпагида ацетата (ТУ 3072-90).
Примечание. Приготовление колонки: 3 г алюминия окиси для хроматографии II степени активности (ТУ 6-09-3916-75), переносят в стеклянную колонку диаметром 1 см, высотой 25 см, в нижнюю часть которой помещают ватный тампон, предварительно смоченный водой. Колонку заполняют при открытом кране.
Метрологические характеристики предложенной методики количественного определения суммарного содержания иридоидов настойки «Седафит» представлены в таблице 5.2.2.2.
Метрологические характеристики методики количественного определения суммарного содержания иридоидов в настойке «Седафит» в пересчете на
Относительная ошибка единичного определения разработанной методики при доверительной вероятности 95% не превышает 5%.
Результаты количественного определения суммарного содержания иридоидов в пересчете на гарпагида ацетат в 5 сериях настойки «Седафит» представлены в таблице 5.2.2.3.
Одними из веществ, определяющих седативный эффект, являются сложные эфиры, которые переходят в настойку в основном из корневищ с корнями валерианы. Данные о количественном содержании сложных эфиров в пересчете на этиловый эфир кислоты валереновой в 5 сериях настойки, определяемых по ФС 42-3865-99, представлены в таблице 5.2.3.1.
Для количественного определения дубильных веществ в настойке был использован трилонометрический метод, основанный на осаждении дубильных веществ аммиачным раствором окиси цинка, выделении осадка центрифугированием, промывании его, разрушении комплекса цинк-дубильные вещества кислотой уксусной при титровании ионов цинка раствором трилона Б в присутствии индикатора ксиленолового оранжевого [212]. Результаты определения содержания дубильных веществ в пересчете на таннин в 5 сериях настойки представлены в таблице 5.2.3.1.
Органические кислоты обладают антиоксидантным, антигипоксиче-ским, антистрессорным, антигепатоксическим, спазмолитическим, транквилизирующим, противовоспалительным, желчегонным действием [25, 26]. Количественное определение органических кислот проводили по методу, предложенному по ГФ XI. Данные (по 5 сериям) представлены в таблице 5.2.3.1.
Для характеристики полученной настойки «Седафит» обязательными являются следующие показатели качества, согласно ОСТ 91500.05.001-00: подлинность, содержание сухого остатка, тяжелых металлов, содержание спирта или плотность, содержание действующих веществ - флавоноидов в пересчете на лютеолин, иридоидов в пересчете на гарпагида ацетат. Показатели качества регламентируются проектом ФСП. Разработка показателей качества проводилась на 5 сериях настойки «Седафит», полученной в лабораторных условиях. 1. Описание. Прозрачная жидкость зеленовато-коричневого цвета, горьковатого вкуса с характерным ароматным запахом. 2. В качестве критериев подлинности настойки «Седафит» предложены: 1) реакция комплексообразования с алюминия хлоридом (флавоноиды); 2) тонкослойная хроматография (5.1.2) (иридоиды); 3) экстремальные точки прямого спектра поглощения настойки (максимумы поглощения при 208±2 нм, 284+3 нм, 326 ±3 нм) (рис. 5.3.1). 3. Сухой остаток. Содержание сухого остатка не менее 1,50 % (ГФ XI, вып.2, с. 148). 4. Тяжелые металлы. Содержание тяжелых металлов не должно превышать 0,001% (ГФ XI, вып. 1, с. 165). 5. Спирт. Не менее 65% (ГФ XI, вып.1, с.26). 6. Суммарное содержание флавоноидов в настойке «Седафит» должно быть не менее 0,05%о. Суммарное содержание иридоидов в настойке «Седафит» должно быть не менее 0,02%. Микробиологическая чистота соответствует требованиям ГФ XI издания, вып.2 и Изм. к ГФ XI изд. «Методы микробиологического контроля лекарственных средств» от 23.12. 95 г. Категория Зд.
