Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 11
1.1. Этиология и патогенез нарушений мозгового кровообращения 11
1.2. Фармакотерапия нарушений мозгового кровообращения 16
1.3. Лекарственные растения, используемые при нарушениях мозгового кровообращения 21
1.4. Перспективы использования антиоксидантов при нарушениях мозгового кровообращения 26
Заключение 30
Глава II. Материалы и методы исследования 31
2.1. Характеристика объектов исследования 31
2.2. Методы исследования 32
2.2.1. Определение подлинности сырья 32
2.2.2. Методы фитохимического анализа 33
2.2.2.1. Методы качественного анализа биологически активных соединений 33
2.2.2.2. Методы количественного анализа биологически активных соединений 34
2.2.3. Методы фармакологических исследований 40
2.2.4. Методы технологических исследований 44
Глава III. Обоснование состава сбора для профилактики и лечения нарушений мозгового кровообращения 46
3.1. Теоретическое обоснование компонентного состава сбора для профилактики и лечения нарушений мозгового кровообращения 46
3.2. Исследование антиоксидантной активности лекарственного растительного сырья и растительных композиций 50
3.3. Сырьевое обеспечение производства сбора в Башкортостане 63
Выводы по главе 66
Глава IV. Изучение химического состава и разработка методов стандартизации сбора для профилактики и лечения нарушений мозгового кровообращения 67
4.1. Изучение фенольных соединений 68
4.2. Изучение других групп биологически активных веществ 92
4.3. Стандартизация сбора при нарушении мозгового кровообращения 97
4.3.1. Характеристика подлинности сбора 9 8
4.3.2. Определение числовых показателей сбора для профилактики и лечения нарушении мозгового кровообращения 105
Выводы по главе 110
Глава V. Фармакологическое изучение сбора для профилактики и лечения нарушений мозгового кровообращения 111
5.1. Определение острой токсичности сбора 111
5.2. Определение антиагрегационной активности сбора 112
5.3. Определение антикоагулянтной активности сбора 114
5.4. Определение антигипоксических свойств сбора 115
5.5. Определение антиоксидантных свойств сбора 117
Выводы по главе 118
Глава VI. Разработка лекарственной формы на основе сбора для профилактики и лечения нарушений мозгового кровообращения 119
6.1. Получение и анализ жидких лекарственных форм 119
6.2. Определение антиоксидантной активности в жидких лекарственных формах 122
6.3. Определение биодоступности в жидких экстрактах 122
6.4. Разработка показателей подлинности и качества жидкого экстракта 124
Выводы по главе 133
Общие выводы 134
Литература 135
Приложения 152
- Фармакотерапия нарушений мозгового кровообращения
- Методы фитохимического анализа
- Исследование антиоксидантной активности лекарственного растительного сырья и растительных композиций
- Изучение других групп биологически активных веществ
Введение к работе
Современные концепции эффективной интенсивной терапии острых нарушений мозгового кровообращения рассматривают инсульт как один из самых тяжелых критических состояний. При этом у больных с церебральным инсультом любого характера могут быть выявлены клинические синдромы критических состояний, определяющие собой- тяжесть течения заболевания, его исход, степень постинсультной инвалидизации.
Медикаментозные методы терапии не всегда позволяют восстановить нарушенные неврологические функции, несмотря на большой ассортимент синтетических препаратов, действие которых направлено лишь на некоторые звенья патогенеза. Этим, в определенной степени, можно объяснить вероятность повторного нарушения мозгового кровообращения с многообразием
патогенетических расстройств. Поэтому проблема эффективности лечения нарушений мозгового кровообращения остается актуальной.
Одним из путей решения этой острой проблемы может служить применение лекарственного растительного сырья, использование которого способствует снижению дозы синтетических препаратов, значительному уменьшению осложнений и побочных эффектов. Низкая токсичность лекарственных растений позволяет назначать их длительными курсами (месяцы, годы), в простых и сложных комбинациях, для противорецидивного или реабилитационного лечения. Для растений характерно разнообразие химического состава, позволяющее мягко и безопасно воздействовать одновременно на многие системы организма, вовлеченные в патологический процесс. Одним из явных преимуществ фитотерапии является доступность и относительная дешевизна лекарственных растений.
Таким образом, создание высокоэффективных, безвредных, экономически доступных и удобных в применении лекарственных растительных средств для профилактики и комплексной терапии нарушений мозгового кровообращения является актуальным.
ЦЕЛЬЮ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ явилась разработка многокомпонентного сбора для профилактики и лечения нарушений мозгового кровообращения из лекарственного растительного сырья, разрешенного для применения в медицинской практике на территории Российской Федерации, его стандартизация и создание рациональной лекарственной формы.
Для реализации поставленной цели предстояло решить следующие задачи:
разработать, теоретически и экспериментально обосновать пропись сбора для профилактики и лечения нарушений мозгового кровообращения;
провести фармакогностическое изучение сбора с целью его стандартизации;
провести исследования фармакологической активности сбора;
разработать лекарственную форму на основе предложенной прописи и провести ее фитохимические исследования;
разработать проекты нормативной документации на предлагаемый сбор и лекарственную форму.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые разработан, теоретически и экспериментально обоснован сбор для профилактики и лечения нарушений мозгового кровообращения, содержащий 11 видов лекарственного растительного сырья, разрешенных для применения в медицинской практике на территории РФ.
С использованием современных физико-химических методов анализа изучен состав биологически активных веществ исследуемого сбора, обеспечивающих его лечебное действие, и определено количественное содержание флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, кумаринов, суммы дубильных соединений, эфирного масла, сапонинов, аскорбиновой кислоты, полисахаридов, каротиноидов и алкалоидов. Проведено хроматографическое исследование фенольных фракций сбора и предложена методика качественного анали- за для флавоноидов.
Разработана спектрофотометрическая методика количественного ана- -лиза сбора по содержанию суммы флавоноидов в пересчете на рутин.
Микроскопический метод использован не только для определения подлинности сбора, но и как один из методов стандартизации сбора и контроля качества компонентов прописи посредством количественной оценки проявления диагностически значимых признаков.
Проведены фармакологические исследования сбора. Определены антиоксидантная, антиагрегационная, антикоагулянтная, антигипоксическая активности сбора; доказана его нетоксичность.
Предложена рациональная лекарственная форма - жидкий экстракт и установлены показатели его качества, содержание биологически активных веществ, подтверждающие рациональность технологического процесса полу-
чения лекарственной формы; определены сроки годности лекарственного средства.
Разработаны проекты фармакопейных статей предприятия на сбор для профилактики и лечения нарушений мозгового кровообращения и на лекарственную форму на его основе — жидкий экстракт.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Теоретические и экспериментальные исследования показали целесообразность дальнейшего фармакологического исследования предложенного сбора в качестве средства для профилактики и лечения нарушений мозгового кровообращения.
Разработаны проекты ФСП на сбор и жидкий экстракт при нарушении мозгового кровообращения.
Подана заявка на изобретение «Сбор при нарушении мозгового кровообращения».
Результаты технологических исследований могут быть использованы при разработке нормативной и технологической документации для промышленного производства рациональной лекарственной формы - жидкого экстракта.
Предложенная оптимальная лекарственная форма позволяет решить задачу рационального использования лекарственного растительного сырья при изготовлении сбора для профилактики и лечения нарушений мозгового кровообращения в заводских условиях.
Материалы диссертации внедрены в учебный процесс на кафедре фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии Башкирского государственного медицинского университета.
Метод определения диагностически значимых признаков может быть использован для стандартизации многокомпонентных растительных композиций.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ: - результаты теоретического и экспериментального обоснования сбора для лечения и профилактики нарушений мозгового кровообращения;
результаты фармакогностического исследования сбора с целью его стандартизации;
результаты фармакологических исследований сбора по выявлению специфической активности;
результаты фотохимических, фармакологических и технологических исследований по созданию рациональной лекарственной формы - жидкого экстракта на основе предложенного сбора.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертационной работы были доложены и обсуждены на: научной конференции студентов и молодых ученых БГМУ (Уфа, 2003г.); научно-практической конференции, посвященной 25-летию фармацевтического факультета «Актуальные вопросы современной фармации и фармацевтического образования» (Уфа, 2006г.); научной конференции студентов и молодых ученых БГМУ (Уфа, 2007г.); XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007г.).
ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 11 работ, в которых отражены основные результаты исследования.
СТРУКТУРА И ОБЪЕ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа изложена на 151 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», 4 экспериментальных глав, выводов и списка литературы, 40 таблиц и 19 рисунков. Список литературы включает 165 библиографических источников, из которых 23 иностранных.
СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЙ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Башкирского государственного медицинского университета по проблеме «Фармакология и фармация». Номер госрегистрации 01200507996.
Фармакотерапия нарушений мозгового кровообращения
При ОНМК происходят сложные взаимоотношения сосудистого обеспечения и морфофункционального состояния ткани мозга, что ведет к необратимым повреждениям, мозга. Степень повреждающего действиям ишемии определяется, прежде всего, глубиной и длительностью снижения; мозгового кровотока [112]. Область мозга с наиболее выраженным снижением кровотока (менее 10-15 мл) становится необратимо поврежденной в течение 5-8 минут с момента возникновения ишемии. Однако в течение нескольких часов центральный инфаркт окружен ишемизированной живой; тканью, в которой сохранен энергетический метаболизм и имеются лишь функциональные, но не структурные изменения [145]. Наряду с реперфузионным направлением, которое позволяет исключить геморрагический компонент поражения головного мозга, оценить размеры ишемизированной области и патогенетический вариант инсульта, активно внедряется нейропротективная терапия. Она может использоваться на догоспитальном этапе при появлении первых симптомов инсульта, даже при возможном геморрагическом его характере [40 43, 150]. г
Выделяют первичную и вторичнуюнейропротекцию: Первичная?—прет-: рывает быстрые реакции глутамат-кальциевого каскада,,которые;начинаются с первых минут ишемии и продолжаются на протяжении первых 3 дней инсульта, особенно активно в первые 12 часов. Вторичная нейропротекция направлена на уменьшение степени выраженности отдельных последствий ишемии: блокаду противовоспалительных цитокининов, молекул клеточной адгезии, торможение прооксидантных ферментов, усиление трофического обеспечения, прерывание апоптоза. Вторичная нейропротекция может быть начата спустя 3-6 ч после развития инсульта и должна продолжаться не менее 7 дней [40, 42, 43, 48, 136].
Нейропротекторы, обладающие трофическими и модуляторными свойствами, а также ноотропы усиливают регенераторно-репаративные процессы, способствуя восстановлению нарушенных функций. Наиболее известными препаратами нейротропного ряда являются: церебролизин, мексидол, эмок-сипин, цитофлавин, семакс, актовегин, глиатилин [40, 42, 43, 48, 87].
Новые подходы к терапии ИИ включают применение современных методов реперфузии ткани головного мозга в первые часы заболевания путем восстановления кровотока [112]. К реперфузии относятся: антитромботиче-ская гемокоррекция, включающая медикаментозный тромболизис, нормализация гемореологических и гемостатических свойств сосудистой стенки с помощью антиагрегантов, антикоагулянтов, вазоактивных средств, ангио-протекторов и др. Для системной тромболитической терапии при ИИ в настоящее время используются следующие препараты: фибриноселективные тромболитики: рекомбинантный тканевый активатор плазминогена - алтепла-за; усовершенствованные активаторы тканевого плазминогена: тенектеплаз-ма, ретеплазма, ланотеплазма; усовершенствованные активаторы плазминогена III поколения: биосинтетические и композиции тромболитиков.
Основной целью антиагрегантной терапии является прекращение тромбообразования на стадии формирования тромбоцитарных агрегантов. Спорным остаются вопросы определения истинно лечебного, либо профилактического действияшрепаратов. Неоднозначны результаты, об эффективности их различных доз (аспирин, курантил, плавике, тиклид, пентоксифил-лин). Среди прямых антикоагулянтов наиболее известным препаратом является гепарин, который оказывает непосредственное влияние на активность циркулирующих в крови факторов свертывания и тормозит ферментативную активность тромбина. Из непрямых антикоагулянтов (непосредственно влияющих на образование факторов свертывания крови в печени путем ин-гибирования эпоксидредуктазы витамина К) используют производные инда 18 диона (фенилин) и кумарина (варфарин, синкумар, неодикумарин) [93, 121, 123]. В настоящее время существуют программы, направленные по предупреждению инсульта [121, 122]: контроль артериальной гипертонии (диуретики, Р-адреноблокаторы, антагонисты кальция, ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента (АПФ), антагонисты рецепторов ангиотензина II, а-адреноблокаторы) [88]. многофакторная профилактика ишемической болезни сердца (антикоагулянты непрямого действия: варфарин, дикумарин, фениндион); предупреждение кардиоэмболического инсульта (антиагреганты, проведение ангиохирургической операции); применение антиагрегантов (аспирин, Аспирин-Кардио, Тромбо АСС, ди-пиридамол, тиклопидин, плавике); оценка возможностей профилактической ангиохирургии; коррекция нарушений липидного обмена (статины, фибраты); заместительная гормональная терапии у женщин, находящихся в постменопаузе; профилактическое применение антиоксидантов.
Диуретики снижают периферическое сосудистое сопротивление и сосудистую реактивность. Гипотензивный эффект этих препаратов не связан напрямую с мочегонным действием. Для длительного применения в качестве монотерапии, и в комбинации с другими препаратами преимущественно используют гидрохлортиазид, индапамид, фуросемид.
Методы фитохимического анализа
Качественное обнаружение дубильных веществ проводили по известным методикам в водном (1:10) извлечении (реакция с желатином и раствором железоаммониевых квасцов) [135]. Качественные реакции на флавоноиды, общие для всех фенольных соединений и специфические, позволяющие установить тип соединений и некоторые особенности их структуры, проводили по известным методикам [14, 39, 133]. Для проведения качественных реакций из сбора готовили очищенные экстракты [49]: экстрагировали сырье в соотношении сырья и экстра-гента 1:10 96% этиловым спиртом. Спиртовое извлечение упаривали, густой остаток растворяли в горячей воде и очищали от липофильных веществ алик-вотным количеством хлороформа; танниды осаждали 5% раствором желатина, а затем экстрагировали этилацетатом. Этилацетат отгоняли под вакуумом на ротационном испарителе ИР1-М2; сухой остаток, содержащий флавоноиды, растворяли в 96% этиловом спирте и проводили качественные реакции (цианидиновая проба по Брианту, с реактивом Вильсона, с 2% спиртовым раствором алюминия хлорида, с 10% спиртовым раствором натрия гидрокси-да).
Для обнаружения кумаринов проводили лактонную пробу; использовали реакцию, основанную на образовании окрашенных растворов с диазореак-тивом, и по способности флуоресцировать в УФ-свете [39, 58, 62].
Присутствие аскорбиновой кислоты в настоях из сбора определяли хроматографическим методом, проявляя 0,04% водным раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия [135]. Исследования по качественному обнаружению сапонинов и установлению структурной группы проводили с использованием известных реакций [39, 135]. Для проведения анализа готовили водное извлечение исследуемого сбора (1:10), нагревая на водяной бане в течение 10 мин (реакция пенообразования, реакция Лафона (с раствором железа сульфата (II), реакция с 10% раствором свинца ацетата среднего).
Качественное обнаружение полисахаридов проводили по известной методике осаждением 96% этиловым спиртом в водном извлечении- анализируемого сбора (1:10) [36]. Присутствие алкалоидов определяли реакцией ван-Урка. Для проведения реакции готовили хлороформное извлечение, из которого алкалоиды извлекали 0,5 н. раствором серной кислоты [4, 29].
Количественное определение дубильных веществ осуществляли по ГФ XI оксидиметрическим методом путем титрования раствором калия перман-ганата {методике Г) [35].
Для количественного определения флавоноидов была разработана методика 2, в основе которого лежит спектрофотометрический метод с использованием комплексообразующей добавки [15, 16]. Измерения проводили с помощью прибора СФ-46. Этот метод основан на том, что флавоноиды обладают значительной интенсивностью поглощения в УФ-области спектра. В основе ее лежит дифференциальный метод, основанный на измерении оптической плотности спиртового извлечения с комплексообразующей добавкой -5% раствором алюминия хлорида. Содержание флавоноидов вычисляется в пересчете на доминирующий флавоноид.
Количественное определение фенолкарбонових кислот проводили по методике 3 из спиртового извлечения хромато-спектрофотометрическим методом в пересчете на хлорогеновую кислоту [141]. Аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. Около 2,0 г (точная навеска) сырья помещали в коническую колбу вместимостью 300 мл, прибавляли 50 мл 96% этилового спирта и нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 45 минут. После охлаждения до комнатной температуры, извлечение фильтровали через ватный тампон в мерную колбу вместимостью 100 мл, избегая попадания сырья на фильтр. Колбу промывали 10 мл этилового спирта и фильтровали в ту же мерную колбу. Экстракцию повторяли с 25 мл 96% этилового спирта в течение 15 минут. После охлаждения до комнатной-температуры сырье переносили на фильтр с ватой, промывали 10 мл этилового спирта и доводили объем раствора до метки спиртом.
На стартовую линию хроматографической бумаги наносили 0,2 мл полученного извлечения полосой 3 см отмечали границы пятна, затем хромато-графировали восходящим- способом в хлороформе. После- прохождения-фронтом растворителя 5 см, бумагу вынимали и высушивали на воздухе до удаления следов хлороформа. Отмеченный участок на стартовой линии вырезали и помещали в колбу с притертой пробкой вместимостью 25 мл, прибавляли 5 мл 96% этилового спирта и интенсивно встряхивали в течение 30 минут. Измеряли оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 327 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно 96% этилового спирта.
Исследование антиоксидантной активности лекарственного растительного сырья и растительных композиций
Головной мозг особенно чувствителен к гиперпродукции свободных радикалов. Поэтому наиболее эффективными путями коррекции тканевой гипоксии, лежащей в основе нарушений деятельности антиоксидантных ферментов, является применение лекарственных средств антиоксидантного действия.
Для выбора оптимального состава сбора нами использована методика 1 определения антиоксидантной активности, с помощью которой были проанализированы выбранные в процессе информационно-литературного поиска виды лекарственного растительного сырья и 125 различных их сочетаний (всего 143 образца) на их основе (гл. II, п. 2.2.3.4). Компоненты в композициях взяты в равных частях.
Согласно полученным результатам следует, что лекарственное растительное сырье под № 6, 10, 11, 12 и композиции № 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 40, 41, 45, 46, 56, 58, 62, 76, 99, 105, ПО, 113, 126, 135 обладают достаточно высокими результатами значений АОА (более 50%). Из них композиции № 23-29 состоят из 2 видов лекарственных растений, № 40-46 - 3 видов, 56-62 61
4 видов, 76-5 видов, 99-7 видов, 105-113 - 8 видов, 126 - 10 видов, 135 -11 видов. Композиции №23-29 (2 вида ЛРС), №40-46 (3 вида), №56-62 (4 вида), №76 (5 видов) нами в дальнейшем не рассматривались, так как не обеспечивают комплексного воздействия на все патогенетические звенья данных нарушений.
Таким образом, изученные нами индивидуальные лекарственные растения и их композиции обладают выраженным антиоксидантным действием, так как содержат природные антиоксиданты (витамины, флавоноиды, фенол-карбоновые кислоты, макро- и микроэлементы). Из результатов исследования, представленных в таблице 3.2.1, видно, что получаются неоднозначные значения АО А в многокомпонентных композициях: в некоторых случаях происходит простая арифметическая суммация эффектов(№ 90, 102, 104, 107, 111, 112, 114, 117-118, 120,122, 125, 129, 130, 132-134, 137, 141-143), в других - подавление (№ 93-97, 89, 91-98, 100, 101, 103, 106, 108, 109, 116, 119, 121, 123, 127, 128, 131, 136, 138, 139), а в третьих - потенцирование антиокси-дантной активности (№ 99, 105, ПО, 113, 115, 124, 126, 135, 140).
Наибольшей антиоксидантной активностью обладают многокомпонентные композиции №99 (АОА - 58%), №110 (АОА - 58%), №126 (АОА -70%), №135 (АОА - 77%), которые и использовались при выборе оптимального состава сбора для профилактики и лечения нарушений мозгового кровообращения.
Исходя из выше приведенных принципов, по,данным параметрам нам больше-всего-подходит композиция №135, состоящая изЛ1 видов лекарственного растительного сырья: плоды боярышника, цветки- ромашки, листья мяты перечной, трава сушеницы топяной, листья подорожника1 большого, плоды шиповника, плоды рябины, трава полыни обыкновенной, листья барвинка малого, корень солодки, трава донника лекарственного, обеспечивающая комплексное воздействие на все патогенетические звенья изучаемой патологии, так как охватывает большинство прогнозируемых фармакологических эффектов. Композиции, содержащие более 12 видов ЛРС, нами не рассматривались, так как исходя из выше проведенных исследований, в них возможны снижение фармакологического эффекта (на примере антиоксидантной активности) и возникновение фармакологической несовместимости компонентов.
В дальнейших исследованиях нами использована композиция № 135, как имеющая оптимальный состав согласно методологическим принципам составления сборов и обладающая высокой антиоксидантной активностью.
При подборе соотношения компонентов в сборе мы учитывали важность каждого из них для оказания конечного фармакологического эффекта. Поэтому дозу донника лекарственного, как классического антикоагулянта, обладающего также антиоксидантной и антигипоксической активностью взяли 2 части, а всех остальных компонентов в прописи - в равных соотношениях. Антиоксидантная активность вариантов композиции № 135(1и2 части травы донника лекарственного) оказалась в пределах среднего значения.
Описанные подходы к составлению сбора нами были подтверждены в ходе доклинических Одним из важнейших факторов внедрения в практику новых лекарственных средств является сырьевое обеспечение их промышленного производства. В состав сбора вошли преимущественно виды местной флоры: из 11 используемых растений 7 произрастают в диком виде или культивируются в республике, и лишь корень солодки, цветки ромашки, трава барвинка и листья мяты поступают к нам из других регионов России: - мята перечная - культивируется (Краснодарский край, Украина, Молдавия, Белоруссия, Воронежская область, Киргизия, Примор ский край) [71]; солодка голая - в диком виде произрастает на юге Европейской части и Западной Сибири, Кавказе, Казахстане, Средней Азии. Основные районы заготовки: Западно-Казахстанский, Нижнеамударь-инский, Чарджоуский, Южно-Казахстанский, Закавказский [71]; - ромашка аптечная - в диком виде произрастает в Европейской части во всех районах, кроме Нижне-Волжского; на Кавказе; в Западной и Восточной Сибири; в Средней Азии [5, 102]. - барвинок малый - распространен в Средней и Южной Европе и на Кавказе. Встречается в Верхне-Днепровском, Нижне-Днепровском, Прибалтийском, Закавказском флористических районах. Заросли при годные для промышленных заготовок находятся в,Молдавии, на Ук раине и т.д. [5, 103]. В республике в диком виде произрастают или культивируются следующие виды лекарственных растений, сырье которых входит в исследуемый сбор:
Шиповник коричный распространен во всех районах Башкортостана, встречается часто, образуя не густые, но пригодные для заготовок заросли в поймах рек Белой, Демы, Уршак, по опушкам лесов [102]. Сушеница топяная растет по берегам рек, озер, по обочинам сырых лесных дорог, на заболоченных участках, по сырым лугам. Иногда образует большие заросли. Много зарослей находится в Иглинском, Нуримановском, Уфимском районах [102].
Полынь обыкновенная растет в лесах, на полях, опушках, лугах, среди кустарников, в степях, по речным долинам и т.д., является сорно-рудеральным растением, распространена по всей Европейской части, на Кавказе, Западной и Восточной Сибири [102].
Подорожник большой одно из самых распространенных растений Башкортостана. Растет около дорог, на пустырях, на заливных лугах, как сорное на полях, в садах [103, 104].
Рябина обыкновенная распространена почти по всей Европе. Она занимает большую часть лесной и лесостепной зон европейской части РФ (кроме Крайнего Севера и Юго-Восточных районов). Ежегодно в больших количествах заготавливают в Республике Башкортостан, Республике Татарстан, Пермской и Свердловской областях и др..[5].
Донник лекарственный распространен гаг всей территории европейской части РФ, кроме северных и северо-восточных районов. Массовую заготовку проводят в Республике Башкортостан, Чеченской республике, Ингушской республике и т.д. [5].
Боярышник кроваво-красный в, Башкортостане распространён в основном лесостепной и степной ;зонах, главным образомв поймахрек.
Из приведенных данных следует, что все используемые для изготовления предлагаемого сбора виды, дикорастущие и культивируемые, имеют достаточную сырьевую базу, в том числе, и в Башкортостане.
Изучение других групп биологически активных веществ
Важными биологически активными веществами, входящими в состав компонентов изучаемого сбора, являются полисахариды, обусловливающие его иммуностимулирующие свойства, способствующие лучшему усвоению кальция и фосфора. Известны данные об антибактериальной, антивирусной, противолучевой и противоопухолевой активности этих соединений. Полисахариды входят в состав соединительной ткани, ферментов, гормонов, обусловливают проницаемость тканей, стимулируют жизненно важные процессы, оказывают влияние на свертываемость крови [56,76, 137].
Каротиноиды содержатся во многих растениях, входящих в изучаемый сбор: сушенице топяной - 30 мг%, шиповнике майском - до 10 мг%, рябине обыкновенной - 18-20 мг% и т.д. Обладают антисептическим, противовоспалительным, регенерирующим, ранозаживляющим, иммуномодулирующим и др. действиями [76, 80, 95]. Сапонины обладают широким спектром фармакотерапевтической активности: выраженным противосклеротическим действием, снижают артериальное давление, нормализуют учащенный ритм сердечных сокращений, увеличивают глубину дыхания, уменьшают количество холестерина в крови. Кроме того, тритерпеноиды являются предшественниками гормонов надпочечников и других физиологически активных веществ в организме. Этим объясняется гормональная активность тритерпеновых сапонинов. Известны адаптогенные, антидиабетические и стимулирующие свойства тритерпеновых сапонинов [32, 64]. Наличие сапонинов в сборе и принадлежность их к тритерпеновой природе доказали качественными реакциями (гл. II, п. 2.2.2.1) и установили среднюю сапониноностность сбора. Количественное определение сапонинов в сборе определяли гравиметрически. Результаты исследования представлены в таблице 4.2.4. Количественное определение проводили по методике 1 ГФ XI (гл. II, п. 2.2.2.2) [35]. В результате определения были обнаружены только следы эфирного масла. Вероятно, это связано с тем, что в сбор вошли только 2 растения, содержащие эфирные масла. В разработанном сборе содержатся индольные алкалоиды, которые обладают спазмолитической, коронародилатирующей, седативной, гипотензивной активностью, преимущественно действуют на сосуды мозга, улучшая кровоснабжение мозга [61, 116, 117]. Качественное обнаружение проводили известными реакциями и подтвердили наличие индольных алкалоидов в анализируемом сборе (гл. II, п. 2.2.2.1). Количественное определение алкалоидов проводили титриметриче-ским методом (гл. II, п. 2.2.2.2). Результаты исследования представлены в таблице 4.2.5. Из данных, представленных в таблице видно, что содержание суммы алкалоидов в пересчете на винкамина-гидрохлорид в сборе в среднем составило 0,039±0,001%. Для установления подлинности исследуемого сбора необходимо провести не только макро-, но и микроскопическое исследование, так как в состав сбора входит измельченное сырье.
При макро- и микроскопическом анализе сбора были обнаружены растительные элементы, отвечающие по своим диагностическим признакам видам сырья, описанным в частных статьях ГФ XI и других ГОСТов.
Исходя из данных, полученные при оценке внешнего вида образцов сбора, они могут быть охарактеризованы следующим образом: сбор представляет собой смесь неоднородных, различных по размеру и по окраске серых войлочных, зеленовато-серых, зеленых и желто-коричневых частиц с вкраплениями красноватого и бурого цвета с цельными цветками ромашки аптечной, донника лекарственного и полыни обыкновенной, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 5 мм. Запах ароматный, вкус водного извлечения сладковато-горький.
Микроскопический анализ использован не только, как качественная характеристика, но и как метод стандартизации по проявляемости диагностически значимых признаков. Поэтому с помощью методики, предложен-нойпроф. И.А. Самылиной (гл. II, п. 2.2 .2.1) исследовали проявляемость. диагностически значимых признаков каждого вида лекарственного растительного сырья в сборе.
Предварительно выделили и рассчитали диагностически значимые признаки отдельных компонентов исследуемого сбора (рисунки ДЗП компонентов сбора приведены в приложении 1 в ФСП на сбор).
ДЗП в плодах боярышника: четырех-шестиугольные клетки эпидермиса с равномерно утолщенными стенками и желто-бурым содержимым; одноклеточные одиночные волоски эпидермиса с заостренными концами, толстостенные и многочисленные волоски кольцевой оторочки плода (со вздутиями, притуплённые у верхушки и расширенные у основания, с тонкими стенками и буроватым содержимым); округлые или овальные клетки мякоти, содержащие включения оранжево-красного или буровато-желтого цвета (каро-тиноиды); мелкие друзы и призматические кристаллы оксалата кальция, в коллатеральных пучках мякоти встречаются одиночные склереиды, каменистые клетки и кристаллоносная обкладка;.
ДЗП в плодах рябины: обрывки наружного эпидермиса с окончатыми клетками, имеются многочисленные капли масла желтого цвета, обрывки тонкостенной паренхимы (клетки разнообразны по форме и величине) с многочисленными оранжево-желтыми хромопластами, встречаются каменистые клетки различные по форме и размеру по одиночке или группами, волоски, одноклеточные длинные толстостенные с внутренним содержимым.
ДЗП в плодах шиповника: обрывки наружного эпидермиса гипантия в виде светло-желтых пластов (многоугольные клетки с прямыми неодинаково утолщенными, местами четковидно-утолщенными стенками и редкими устьицами), тонкостенные паренхимные клетки мякоти с оранжево-красными глыбками каротиноидов и друзами оксалата кальция, фрагменты околоплодника орешка (группы и реже одиночные каменистые клетки с сильно утол-щеннымишористыми оболочками), крупные одиночные волоски двух типов -очень крупные прямые с толстой стенкой и узкой полостью и более мелкие, слегка извилистые с широкой полостью.
ДЗП в листьях барвинка малого: обрывки листа и эпидермиса листа1 с прямоугольными (черешок), извилистыми и сильно извилистыми стенками и четковидными утолщениями, устьичный аппарат парацитного типа, волоски одноклеточные толстостенные, остроконечные и мелкие сосочки, имеются многоклеточные железки с желто-коричневым содержимым у основания листа. ДЗП в траве сушеницы топяной: обрывки листа и эпидермиса листа (слегка извилистые и сильно извилистые клетки; крупные, овальные, погруженные устьица, окруженные 4-5 клетками эпидермиса (аномоцитного типа); простые волоски с тонкими стенками с 1-3 базальными клетками и длинной извилистой конечной клеткой и головчатые волоски, состоящие из одноклеточной ножки и многоклеточной удлиненно-овальной головки, которые располагаются в один или два ряда). Обрывки чашелистика и эпидермиса чашелистика (клетки со слабо- или сильноизвилистыми стенками, простые и головчатые волоски, аномоцитный устьичный комплекс). Обрывки лепестка (клетки с сильно- или слабоизвилистыми стенками, простые и головчатые волоски, пыльца округлая, ячеистая). Рассматриваемые обрывки листа, лепестков или чашелистиков могут иметь один признак или комбинацию признаков (устьица, волоски и т.д.).
![Разработка и стандартизация сердечно-сосудистого сбора [Электронный ресурс]](/i/i/4474/210172.png "Разработка и стандартизация сердечно-сосудистого сбора [Электронный ресурс] Марьин Андрей Александрович")
