Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы. Современные тенденции в разработке и исследовании лечебно-профилактических лекарственных сборов 8
1.1. Роль витаминов в лечении и профилактике заболеваний 8
1.2. Состояние и тенденции рынка витаминных препаратов 13
1.3. Характеристика сборов с поливитаминной активностью, их стандартизация 16
Глава 2. Обоснование работы. Объекты и методы исследования 30
2.1. Обоснование программы исследования 30
2.2. Характеристика объектов исследования 38
2.3. Методы исследования 42
Глава 3. Разработка состава, фармакогностическое изучение и стандартизация сбора витаминного 46
3.1. Обоснование и разработка состава сбора витаминного 46
3.1.1. Фармакологическое изучение сбора витаминного 49
3.2. Определение числовых показателей сбора витаминного 51
3.2.1. Изучение органолептических показателей сбора 51
3.2.2. Определение числовых показателей сбора 52
3.3. Определение микроскопических характеристик отдельных компонентов сбора 54
3.3.1. Плоды шиповника 54
3.3.2. Плоды рябины 56
3.3.3. Плоды облепихи 58
3.3.4. Листья крапивы 59
3.3.5. Трава мелиссы лекарственной 62
3.4. Исследования по идентификации основных биологически активных веществ (БАВ) сбора витаминного 65
3.4.1. Качественные реакции
3.4.2. Идентификация БАВ сбора витаминного методом УФ-спектрофотометрии 67
3.4.3. Идентификация БАВ сбора витаминного методом ТСХ 73
3.4.4. Идентификация БАВ в сборе витаминном методом ВЭЖХ 86
3.4.5. Количественное определение основных БАВ в сборе 92
3.5. Разработка методик количественного определения основных 107
групп действующих веществ в сборе витаминном
3.5.1. Количественное определение суммы флавоноидов 107
3.5.2. Количественное определение суммы полисахаридов 113
Выводы к главе 3 117
Глава 4. Разработка и стандартизация экстракта сухого на основе сбора витаминного 119
4.1. Разработка способа получения экстракта сухого 119
4.1.1. Выбор экстрагента 119
4.1.2. Изучение влияния измельченности и технологического режима на качество спирто-водных извлечений 120
4.1.3. Описание технологической схемы производства экстракта сухого.. 124
4.1.4. Технологические характеристики экстракта сухого 127
4.2. Исследования по идентификации основных БАВ экстракта сухого... 128
4.2.1. Качественные реакции 128
4.2.2. Идентификация БАВ экстракта сухого методом ТСХ
4.3. Идентификация БАБ методом ВЭЖХ 136
4.4. Количественное определение основных БАВ в экстракте сухом 141
4.5. Разработка методик количественного определения основных групп действующих веществ в экстракте сухом
4.5.1. Количественное определение суммы флавоноидов 154
4.5.2. Количественное определение суммы полисахаридов 157
Выводы к главе 4 ,,.,
Общие выводы 163
Литература
- Состояние и тенденции рынка витаминных препаратов
- Характеристика объектов исследования
- Определение микроскопических характеристик отдельных компонентов сбора
- Изучение влияния измельченности и технологического режима на качество спирто-водных извлечений
Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время у большинства населения России отмечается поливитаминная и минеральная недостаточность. Даже при тщательно сбалансированном питании дефицит большинства витаминов в рационе может достигать 30 %. Периодические стрессы, неблагоприятная экологическая обстановка, неправильное питание – эти и другие факторы способствуют снижению защитных сил организма и повышению заболеваемости населения.
По данным многих ученых, для решения проблемы гиповитаминозов, пониженного иммунитета целесообразным является применение сборов лекарственных растений, обеспечивающих комплексное воздействие за счет сочетания действий различных компонентов. Низкая токсичность извлечений из лекарственных растений позволяет назначать их длительными курсами (месяцы). Для растений характерно разнообразие химического состава, позволяющее мягко и безопасно воздействовать одновременно на многие системы организма, вовлеченные в патологический процесс. Одним из явных преимуществ фитотерапии является доступность и относительная дешевизна лекарственных растений (Зеликсон Ю.И., Кондратьева Т.С., 1999; Громовик Б.П., 2000; Адекенов С.М., 2004). Кроме того, весьма перспективным направлением является разработка на основе сборов - экстрактов сухих, более рациональной формы, обеспечивающей высокий выход биологически активных веществ (БАВ), сохраняющей все заданные свойства сбора.
Анализ данных литературы свидетельствует о том, что в России проводятся исследования по созданию новых лечебных и профилактических средств в форме сборов, в том числе адаптогенной и иммуностимулирующей направленностью действия, но внедрение поливитаминных сборов осуществляется крайне редко (Коровина Н.А. и др., 2000; Студенкин В.М., 2002; Паутова Е., 2008; Уварова Ю., 2011).
Учитывая большой интерес населения к витаминным препаратам растительного происхождения, актуальна необходимость и целесообразность выполнения настоящего исследования.
Цель и задачи исследований
Целью диссертационной работы является разработка и стандартизация многокомпонентного сбора, обладающего витаминным, общеукрепляющим и иммуностимулирующим действием, и получение на его основе экстракта сухого.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:
обосновать разработку рациональной композиции сбора витаминного (качественный состав и количественное соотношение компонентов);
провести фармакогностическое изучение исходной растительной композиции;
разработать условия получения экстракта сухого на основе сбора витаминного, провести его химическое изучение;
разработать и предложить показатели качественной и количественной стандартизации сбора витаминного и экстракта сухого на его основе;
представить проекты нормативной документации на сбор витаминный и экстракт сухой на его основе.
Научная новизна
Предложена концепция создания многокомпонентного сбора витаминного, включающая принципы и структурную модель разработки нового продукта с позиций системного подхода, обладающего витаминным, общеукрепляющим и иммуностимулирующим действием.
Установлены товароведческие показатели, диагностически значимые признаки входящих растительных компонентов методом микроскопии, определен качественный состав и количественное содержание биологически активных веществ: витаминов, органических и аминокислот, флавоноидов; разработаны методики количественного определения по сумме флавоноидов в пересчете на РСО лютеолина и полисахаридов в пересчете на РСО глюкозы.
Предложена рациональная лекарственная форма – экстракт сухой, установлены показатели его качества, установлено качественное и количественное содержание биологически активных веществ, подтверждающие рациональность технологического процесса; установлены условия хранения и сроки годности.
Разработаны проекты нормативной документации на биологически активную добавку (БАД) к пище «Арура Тан №11» и проект Фармакопейной статьи предприятия (ФСП) на экстракт сухой на основе данного сбора.
Практическая значимость работы
По результатам исследований разработаны и внедрены:
- Биологически активная добавка к пище «Арура Тан № 11» (Регистрационное удостоверение № RU.77.99.11.003.Е.004276.05.13 от 28.05.2013, ТУ 9370-011-03533369-11, ТИ, Рецептура);
- проект ФСП на экстракт сухой на основе сбора витаминного;
- методики контроля качества, технологическая схема получения БАД к пище «Арура-Тан № 11»; которые апробированы на ООО «Малое инновационное предприятие АРУРА» (акт о внедрении от 25.02.2013);
Полученные результаты используются в учебном процессе кафедры фармации ФГБОУ ДПО ИПК ФМБА России (акт внедрения от 22.05.13), кафедры фармацевтической технологии с курсом биотехнологии ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России (акт внедрения от 25.04.13), кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России (акт внедрения от 24.04.13).
Работа выполнена в рамках комплексной темы ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований» (рег. № 01.2.006 06 352)
Апробация работы
Основные результаты исследований докладывались и обсуждались на:
- XXII Московской международной гомеопатической конференции (Москва, 2012);
- II Международном конгрессе "Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации" (Москва, 2012);
- Первой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых: «Проблемы разработки новых лекарственных средств» (Москва, 2013);
- Международной заочной научно-практической конференции: «Актуальные направления научных исследований ХХI века: теория и практика» (Воронеж, 2013).
Публикации
Основное содержание работы отражено в 11 научных работах из них 7 – в изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 168 страницах основного текста, состоит из введения, четырех глав теоретических и экспериментальных исследований, выводов и списка используемой литературы, включающего 166 источников, из которых 42 – на иностранных языках, и содержит 10 приложений. Работа иллюстрирована 60 рисунками и представлена 76 таблицами.
Состояние и тенденции рынка витаминных препаратов
Фармако-эпидемиологические исследования, проведенные в последние годы, свидетельствуют о том, что как в нашей стране, так и за рубежом наблюдается устойчивый рост интереса населения к использованию препаратов природного происхождения для лечения и профилактики многих заболеваний. Данная тенденция проявляется и в количестве ежегодно регистрируемых препаратов из лекарственного растительного сырья, и в количестве видов лекарственных растений, разрешаемых к медицинскому применению. В настоящее время отечественную номенклатуру составляют 309 видов лекарственного растительного сырья, заготовляемого от 351 вида растений. За последние 20 лет общее количество официнальных видов лекарственного растительного сырья в России выросло практически втрое, что свидетельствует о положительных изменениях на отечественном рынке лекарственных растительных препаратов и перспективности дальнейшего развития исследований в этой области [88].
Состояние и динамика развития рынка лекарственных средств растительного происхождения детально проанализированы в работе Афанасьевой Т.Г., Нетцевой Т.Н. [9]. Авторы, исходя из данных о государственной регистрации препаратов растительного происхождения, констатировали наличие положительной динамики в развитии этого сегмента лекарственного рынка. Установлено, что к началу 2009 г. общий ассортимент рынка лекарственных средств растительного происхождения насчитывал 316 торговых наименований отечественных препаратов и 96 торговых наименований препаратов зарубежного производства. Монопрепараты на основе индивидуальных веществ растительного происхождения составили 84,4 %, а комплексные - 15,6 %. Систематизация ассортимента по фармакотерапевтическим группам показала, что наибольшее количество препаратов растительного происхождения относилось к отхаркивающим (24), седативным (129), желчегонным (82), слабительным (122), спазмолитическим (118) средствам.
Доля рынка лекарственных фитосборов в общем объеме фармацевтического рынка России составляет более 1,5 % (в европейских странах аналогичная продукция занимает около 10 % от общего объема лекарственного рынка). В России изготовлением сборов занимается 345 производителей, среди которых есть федеральные государственные унитарные предприятия (25,5 %), акционерные общества различного типа (42,6 %), частные предприятия (24,6 %), прочие (7,3 %). По объему продаж и широте ассортимента лидером является компания ОАО «Красногорсклексредства» (более 30 %). Этот завод имеет лицензии на производство 162 наименований лекарственных средств, основную часть продукции составляют сложные многокомпонентные сборы, в ассортимент включены также травы, чайные напитки, настойки и экстракты [37].
Специалистами из Рязанского государственного медицинского университета установлено, что на территории Рязанской области основными потребителями лекарственного растительного сырья и готовых препаратов на его основе являются женщины - пенсионного возраста (50 %) и молодые матери (45 %). По уровню фактического покупательского спроса ассортимент подразделен на 3 группы - высокий, средний, низкий. Установлено, что препараты из растений, содержащих витамины, присутствовали во всех трех группах: облепиховое масло, плоды шиповника, Персен (содержит мелиссу) - в группе с высоким спросом; крапива - в группе со средним спросом; мелисса, сбор витаминный - в ассортиментной группе с низким спросом. Исследователями отмечен также рост покупательского спроса на БАД из лекарственного растительного сырья [123].
По данным Попова И.В. [88], на территории региона Кавказских минеральных вод доля сборов в объеме аптечных продаж невелика, но имеет тенденцию к росту, особенно для сборов, применяемых в лечении и профилактике заболеваний пищеварительной системы, и сборов седативного действия. Автором констатирован высокий коммерческий потенциал сборов желчегонных, гепатопротекторных и диуретических, а также БАД на основе лекарственных растений.
Изучив тенденции современного фармацевтического рынка в России, эксперты выделяют следующие основные причины повышения потребительского спроса на лекарственные растительные средства: - относительная безопасность действия (химическая природа лекарственных растений позволяет препаратам на их основе легко включаться в биохимические процессы человека); - незначительное количество побочных эффектов; - возможность рационального сочетания лекарственных растений между собой и с синтетическими средствами; - ценовая доступность. На мировом уровне крупнейшие рынки лекарственных средств и БАД растительного происхождения представлены Германий, Китаем, Японией, США, Францией, Италией, Великобританией и Испанией. По оценкам аналитической компании IMS, в 1994 г. объем мировых продаж фитопрепаратов составил 12,4 млрд. дол. США, в том числе 6,5 млрд. дол. 15 продажи в странах Европы. Среднедушевое потребление средств растительного происхождения варьировалось от 4 дол. США в Бельгии до 28 дол. во Франции и 37 дол. в Германии [52]. В 2010 г. европейский рынок растительных препаратов составил уже 7,1 млрд. дол. США; доля этого рынка объемом 31 % приходится на Германию, 22 % - Францию, 17 % -Италию, 8 % - Великобританию [139].
Таким образом, витаминосодержащие препараты, в том числе растительного происхождения, можно отнести к группе постоянно востребованных препаратов; спрос на них характеризуется тенденцией к росту в разных регионах и странах мира, включая Россию.
Характеристика объектов исследования
БАВ обладают противовоспалительным, кровоостанавливающим, капилляроукрепляющим, витаминным, потогонным действием, понижают давление и повышают свертываемость крови. Пектины плодов рябины, обладая адсорбирующими свойствами, способствуют связыванию и выведению различных токсинов [105]. Плоды облепихи содержат широкий спектр витаминов: А, В, С, Е, Р, группы В, а также других БАВ, благодаря которым препараты плодов облепихи оказывают общеукрепляющее, антиоксидантное, противовоспалительное, антибактериальное действие, а также стимулируют регенерацию поврежденных тканей [90, 105]. В целом плоды облепихи содержат каротиноиды до 10,9 мг% (а-, /?- и у-каротины, ликопин, полицисликопин, зеаксантин, фитофлюин), аскорбиновую кислоту (до 270 мг%), витамины Вь В2, В12, Е, К\ (филлохинон), жирные масла (до 13,7 %), полисахариды (сахара и пектиновые вещества), органические кислоты, аминокислоты, флавоноиды, дубильные вещества, фенолкарбоновые кислоты, жирные масла, стерины, холин, бетаины [126].
Плоды облепихи также препятствуют развитию атеросклеротического процесса, при этом постепенно понижается содержание общего холестерина, бета-липопротеидов и общих липидов в сыворотке крови [105].
Сбор, как объект исследования готовили в соответствии с требованиями статьи «Сборы», ГФ XI, вып. 1, с. 266 [22]. При приготовлении модельных образцов сборов использовали сырье, заготовленное или закупленное в 2010-2011 гг. Сырье было подвергнуто анализу на соответствие требованиям нормативной документации в соответствии со статьями ГФ XI для отдельных видов сырья. Все сырье соответствовало требованиям НД и прошло радиационный контроль.
При разработке и оформлении проекта ФС на сбор руководствовались ОСТ 42-506-96 «Порядок разработки, согласования и утверждения нормативно-технической документации на лекарственные средства и лекарственное сырье». Количественное соотношение растительных компонентов сбора представлено в табл. 2.2.4.
В состав сырья исследуемого растительного сбора входят различные группы БАВ, в том числе фенольные соединения, флавоноиды, каротиноиды, органические кислоты, сахара, микроэлементы и другие, которые обеспечивают витаминное, иммуностимулирующее и общеукрепляющее действие сбора. Разнообразием химического состава растений, используемых для получения сбора, обусловлена необходимость применения различных методов исследования. В работе были использованы современные физико-химические методы исследования.
Измельчение сухого сырья с содержанием влаги от 9,06 до 12,00% проводили согласно ГФ XI изд., вып.1 [22]. Отбор средней и аналитических проб проводили согласно ГФ XI изд., вып.1, с.267 [22]: - пробы для определения подлинности, измельченности и содержания примесей- 100 г; - для определения влажности - 10 г; - для определения действующих веществ и золы - 40 г. Изучение внешних признаков растительных смесей проводили в соответствии с требованиями ГФ XI изд., вып.1, с. 266-267. Микроскопические исследования сборов проводили по методике ГФ XI изд., вып. 1., с. 277 [22].
Сгущение полученных извлечений на стадии экспериментальных исследований проводили на вакуум-выпарном ротационном испарителе марки ИРМ-1. Исследование качественного состава изучаемых объектов проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ); использовали пластины «KIESELGEL» 60 F254 размером 20x20 см; «Силуфол УФ-360» размером 15x15 см; «Сорбфил» УФ-254 размером 15x15 см и следующие системы растворителей: этилацетат : метилэтилкетон : муравьиная кислота : уксусная кислота : вода (50:30:7:3:10); 1. уксусная кислота : ацетон : метанол : бензол (5:5:20:70); 2. этилацетат : метилэтилкетон : муравьиная кислота : вода (50:30:10:10); 3. бензол : этанол 95% (80:20); 4. пиридин : этилацетат : вода (20:60:40); 5. гексан : диэтиловый эфир (1:1); 6. н-бутанол : ледяная уксусная кислота : вода (40:40:10). Хроматографирование выполняли в соответствующей системе растворителей при температуре 19-23 С в герметически закрытых стеклянных камерах. Нанесение исследуемых растворов на хроматографические пластины осуществляли при помощи микрошприцев. Обнаружение пятен у-пироновых веществ производили после высушивания хроматограмм и просмотра в фильтрованном УФ-свете (фильтр Хтах = 254 нм) до и после обработки 5% раствором фосфорномолибденовой кислоты в абсолютном спирте. Флавоноиды дают желтое и синее окрашивание соответственно (до обработки - коричневое). Фенолкарбоновые кислоты обнаруживаются по их собственной флуоресценции голубого или фиолетового цвета. Соотношение растворителей учитывали в объемнъж частях. Все величины Rf обнаруженных соединений являются средними из пяти измерений. Растворители для хроматографии и реактивы для получения производных использовали марки ХЧ или ЧДА. Электронные спектры соединений в УФ- и видимой областях записывали на приборе Gelios (США) в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. Для регистрации УФ-спектров исследуемых веществ готовили 0,05-10% растворы в абсолютном метаноле и абсолютном спирте, а также в 70% спирте.
При разработке методик качественного и количественного определения БАВ были использованы следующие хроматографически чистые вещества и стандарты: арбутин - Fluka, кат. №10960, СО ВИЛАР (ТУ 9363-133-048668-44-01); - галловая кислота - Fluka, кат. №48630; - кофейная кислота - Sigma, кат. № 0625; - хлорогеновая кислота - Sigma, кат. №3378; - феруловая кислота СО - ТУ 9369-143-0486244-01; - апигенин - Fluka, кат. №10748; - гесперидин- Sigma, кат. № 04125, ВИЛАР ТУ 9369-148-04868244-02; - лютеолин ГСО - ФС 42-3130-95; - лютеолин-7-гликозид ГСО - ФС 42-3130-95; - кверцетин ГСО - ФС 42-290-79, ВИЛАР ТУ 9369-128-04868244-03; - рутин ГСО - ФС 42 -2508-87, ВИЛАР ТУ 9369-141 -048668244-02; - гиперозид ГСО - ФС 42-0106-03, ТУ разработаные в ВИЛАР; - кемпферол - Fluka, кат. №60010; - р-каротин - ФС 42-3867-99; - зеаксантин - Merck, кат. №10248. Анализ сбора витаминного методом ВЭЖХ проводили на приборе фирмы «GILSTON», Франция, модель 305; инжектор ручной модель RHEODYNE 7125 USA с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы «Мультихром» для Windows. В работе применялся обращенно-фазовый вариант метода, в качестве неподвижной фазы использовали металлические колонки Кромасил С18, размер частиц 5 микрон ALTECH ОА-1000 Organic Acids, размером 6,5x300 мм. В качестве подвижной фазы использовали:
Определение микроскопических характеристик отдельных компонентов сбора
В результате исследований сбора витаминного на наличие каротиноидов в гексановом экстракте обнаружены: (3-каротин, ликопин, зеаксантин, виолаксвантин. Идентификация каротиноидов в спиртовом извлечении С целью идентификации каротиноидов получали извлечение 95 % спиртом этиловым. Для этого: Около 2,0 г сбора измельчённого до размера частиц, проходящих сквозь сито диаметром 1 мм, помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 25 мл спирта этилового 95 % и нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 10 минут, затем охлаждали до комнатной температуры, осторожно декантировали спиртовое извлечение (исследуемый раствор). В качестве неподвижной фазы использовали хроматографические пластины Sorbfil, предварительно активированные в сушильном шкафу при температуре 100 С в течение часа. В качестве подвижной фазы использовали смесь растворителей бензол : этанол 95 % в соотношении 80:20. В качестве растворов сравнения использовали 0,01% растворы лютеина и (З-каротина в 95 % спирте этиловом. По 20 мкл исследуемого раствора и растворов сравнения наносили на линию старта хроматографической пластины и хроматографировали восходящим способом.
Хроматограмму высушивали при комнатной температуре в вытяжном шкафу до полного улетучивания растворителей, опрыскивали 1 % раствором фосфорномолибденовой кислоты в 95 % этаноле и нагревали в сушильном шкафу при температуре 80 С в течение 5 минут, зона, окрашенная в синий цвет с Rf 0,53, соответствует (3-каротину (рис. 3.4.3.34). 1 2
Схема тонкослойной хроматографии каротиноидов 95 % этилового извлечения сбора витаминного в системе бензол : этанол 95 % (80:20) Условные обозначения: 1 - извлечение сбора витаминного, 2 - раствор (3 - каротина Идентификация флаеоноидов Исследование флавоноидов, входящих в состав компонентов сбора, проводилось с применением в качестве неподвижной фазы хроматографических пластин «KIESELGEL 60 F254» размером 20x20 см, в качестве подвижной фазы использована смесь растворителей этилацетат : метилэтилкетон : муравьиная кислота: вода в соотношении 50:30:10:10.
Хроматограмму высушивали при комнатной температуре в вытяжном шкафу до полного улетучивания растворителей, опрыскивали 1 % раствором фосфорномолибденовой кислоты в 95 % этаноле и нагревали в сушильном шкафу при температуре 80 С в течение 5 минут, зона, окрашенная в синий цвет с Rf 0,53, соответствует Р-каротину.
На хроматограмме в исследуемом растворе после проявления 5 % раствором алюминия хлорида в 95 % этаноле обнаружено 9 зон, окрашенных в желто-коричневые цвета: Rf 0,45 (рутин); Rf 0,68 (гиперозид); Rf 0,74 (лютеолин-7-гликозид; Rf 0,82 (лютеолин); Rf 0,87 (кверцетин) (рис. 3.4.3.35). Рис. 3.4.3.35. Схема тонкослойной хроматографии флаваноидов 70 % этилового извлечения сбора витаминного в системе этилацетат : метилэтилкетон : муравьиная кислота : вода (50:30:10:10) Условные обозначения: 1 - извлечение сбора витаминного, 2 - раствор рутина, 3 - раствор лютеолина, 4 - раствор кверцетина
Проведенные исследования спирто-водного извлечения из сбора витаминного методом ТСХ показали, что состав исследуемого образца характеризуется наличием флавоноидных веществ, идентичных рутину, гиперозиду, лютеолин-7-гликозиду, лютеолину, кверцетину.
Идентификация БАВ, входящих растений в состав сбора методом ТСХ В качестве исследуемого раствора использовали водно-спиртовую вытяжку из сбора, полученную экстракцией спиртом метиловым. Для этого: 10,0 г исследуемого сбора, измельчённого до размера частиц, проходящих сквозь сито диаметром 1 мм, помещали в колбу объёмом 100 мл, прибавляли по 40 мл спирта метилового, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа с момента закипания смеси в колбе. После охлаждения смесь фильтровали в мерную колбу вместимостью 100 мл через бумажный фильтр, и объём доводили растворителем до метки. 10 мл извлечения упаривали на водяной бане и остаток растворяли в 2 мл метанола.
Исследование проводилось с применением в качестве неподвижной фазы хроматографических пластин «KIESELGEL 60 F254» размером 20x20 см, в качестве подвижной фазы - смеси растворителей уксусная кислота : ацетон : метанол : бензол в соотношении 5:5:20:70. В качестве растворов сравнения использовали водно-спиртовые извлечения из растительных компонентов сбора: мелиссы, крапивы, шиповника, облепихи, рябины, которые готовили аналогично исследуемому раствору. На линию старта хроматографической пластины наносили по 20 мкл исследуемого раствора и по 20 мкл растворов сравнения и высушивали на воздухе до полного улетучивания растворителей. Пластины с нанесенными пробами помещали в камеру для хроматографирования и хроматографировали восходящим способом. На хроматограмме в исследуемом растворе после проявления 5 % раствором фосфорномолибденовой кислоты в 95 % этаноле обнаружено 5 зон, окрашенных в синий цвет: Rf 0,25; 0,38; 0,57; 0,69; 0,82. (табл. 3.4.3.13).
Изучение влияния измельченности и технологического режима на качество спирто-водных извлечений
В случае использования сетки с диаметром отверстий менее 5 мм, получают сырье мелкого помола, что затрудняет сдавливание экстрактов и приводит к большому загрязнению водных извлечений балластными веществами.
В сборник с помощью цилиндра отмеряют 1,315 л спирта этилового 95% и 1,260 л воды очищенной, перемешивают и отбирают пробу полученного водного спирта для определения его крепости на анализ. Получают 2,5 л спирта этилового 50 % (плотность 0,9362 г/см ).
Для приготовления спирта этилового 50 % используют также отгон спирта, поступающий со стадии и отгон спирта из шрота.
5 кг измельченного сырья сбора загружают в круглодонную колбу, заливают 4,0 л экстрагента. Экстракцию проводят в колбонагревателе с терморегулятором при постоянном перемешивании и поддерживании исходной температуры в интервале 55-65 С в течение 2,0 часов. После этого извлечение фильтруют в сборник, а сырье еще дважды экстрагируют аналогичным способом. Объем экстрагента в каждой последующей экстракции соответствует объему, полученному на предыдущей экстракции (2,056 л). Шрот помещают в шротосборник и отправляют в отвал. Третий экстракт используют для экстракции новой порции сырья следующей загрузки.
Фильтрование проводят под вакуумом через слой ваты гигроскопической, находящийся между двумя листами бумаги фильтровальной, помещенной на перфорированную пластинку воронки Бюхнера в сборник. Получают 4,112 л объединенного экстракта.
Объединенный экстракт порциями переносят в круглодонную колбу, которую соединяют с роторным испарителем. Упаривание ведут при температуре реакционной массы (60±5) С и давлении 0,09 МПа (0,9 кгс/см ) приблизительно до 1/16 первоначального объема. Для снижения вспенивания после удаления спирта добавляют 200 мл бутанола в конце упаривания.
В результате упаривания получают водный кубовой остаток (0,3 л) и отгон спирта этилового 52 % в количестве 3,64 л, который вновь используют для приготовления экстрагента - 50 % спирта. Водный кубовой остаток, содержащий действующие вещества, сливают в делительную воронку.
Очищенный экстракт сушат в вакуумном сушильном шкафу при температуре 60±5 С и остаточном давлении 0,1 кгс/см2. Удаление влаги происходит с помощью вакуума при нагревании водного экстракта в мягких условиях. Получают сухой твердый остаток в количестве 0,12 кг, который передают на ТП 6.6.
Полученный твердый остаток высушенного экстракта измельчают при помощи ступки и пестика и просеивают через капроновое сито. Получают готовый продукт - сбора витаминного экстракт сухой в количестве 0,116 кг. Выход на стадии 90,44 %. Выход от начала процесса 86,98 %.
Полученный готовый продукт - сухой экстракт сбора витаминного после анализа на соответствие ТУ 9377-075-04868244-2008 расфасовывают по 100 г в банки оранжевого стекла типа БВ-1000-63-ОС-1 или БВ-2000-90-ОС-1 по ОСТ 64-2-71-80 с навинчиваемыми пластмассовыми крышками типа 1.1-90, снабженными прокладками из картона с двусторонним полиэтиленовым покрытием. Крышку сверху обтягивают пергаментом, обвязывают нитками хлопчатобумажными швейными, концы которых подводят под этикетку и заливают парафином. Банки обертывают бумагой. На банку и бумагу наклеивают этикетку из бумаги этикеточной или писчей. Каждую банку помещают в пачку из картона марки АК или типа хром-эрзац.
Определение внешнего вида экстракта сухого проводилось органолептически. На образцах пяти серий установлено, что сухой экстракт сбора витаминного представляет собой аморфный порошок от светло-коричневого до коричневого цвета со специфическим запахом. Гигроскопичен. Насыпная масса экстракта сбора при свободном падении -0,48 г/см3, при уплотнении - 0,76 г/см3. Сыпучесть - 1,90 г/сек, угол естественного откоса 35-37 . Потеря в массе при высушивании при 100-105 С до постоянной массы установлена. Таким образом, в результате исследований определены оптимальные условия экстракции сырья и разработана технологическая схема производства экстракта сухого сбора витаминного, результаты испытаний представлены в таблице 4.1.4.51.
Исследования по идентификации основных БАВ экстракта сухого 4.2.1. Качественные реакции Для подтверждения основных групп биологически активных веществ экстракта были проведены следующие качественные реакции: - к 2 мл водного раствора (1:10) прибавляют несколько капель раствора железоаммониевых квасцов, наблюдается черно-зеленое окрашивание (дубильные вещества); - к 5 мл водного раствора прибавляют 1 мл 95 % спирта, 0.1 г порошка магния и 1 мл концентрированной хлористоводородной кислоты; постепенно появляется красное окрашивание (флавоноиды); - к 3 мл раствора прибавляют 2 мл реактива Феллинга и нагревают до кипения. Выпадает кирпично-красный осадок (сахара). - к 10 мл раствора прибавляют 30 мл 95 % спирта и перемешивают; появляются хлопьевидные сгустки, выпадающие в осадок при стоянии (полисахариды).
