Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Характеристика семейства паслёновые (Solanaceae) 12
1.2. Характеристика рода Capsicum 12
1.2.1. Происхождение рода Capsicum 12
1.2.2. Современная классификация рода и видов перца 13
1.2.3. Вид Capsicum annuum L. (перец однолетний) 14
1.3. Районы культивирования перца однолетнего и особенности климатических и агротехнических условий выращивания перца однолетнего 17
1.4. Сроки заготовки перца однолетнего 18
1.5. Основные требования производства к плодам перца 18
1.6. Химический состав плодов перца однолетнего 20
1.6.1. Полициклические спирты семян растений семейства пасленовых 22
1.7. Современное состояние фитохимии липидов 37
1.8. Локализация запасных липидов в растительной клетке 41
1.9. Выделение липидного комплекса из семян масличных культур.43
1.9.1. Извлечение масла методом экстракции органическими растворителями 44
1.9.1.1. Циркуляционное экстрагирование 47
1.9.2. Извлечение масла методом механического отжима 49
1.10. Перспективы использования масличных растений 50
1.11. Фармакологическое применение растительных масел 50
1.12. Использование перца однолетнего в пищевых и фармацевтических целях 54
Глава 2. Объектыиметоды иследования
2.1. Объекты исследования 58
2.2. Методы, применяемые для разработки характеристик подлинности и показателей качества плодов перца однолетнего 60
2.3. Методы получения липидного комплекса 65
2.4. Методы, применяемые для стандартизации липидного комплекса плодов перца однолетнего 65
2.4.1. Определение физико-химических показателей 65
2.4.2. Определение жирно-кислотного состава 67
2.4.2.1. Выделение свободных и связанных кислот и их идентификация 67
2.4.3. Выделение и идентификация неомыляемого остатка 71
2.4.4. Определение количественного содержания фосфолипидов 72
2.4.5. Определение количественного содержания каротиноидов 73
2.4.6. Определение количественного содержания токоферолов 74
2.4.6.1. Количественное определение токоферолов методом
спектрофотометрии 74
2.4.6.2. Количественное определение токоферолов методом ВЭЖХ 75
Глава 3. Изучение показа телейка чества плодов и семян перца однолетнего
3.1. Морфолого-анатомическая характеристика плодов и семян перца однолетнего 76
3.1.1. Внешние признаки 76
3.1.2. Микроскопическое изучение и разработка диагностических признаков плодов и семян перца однолетнего 74
3.2. Реакция на алкалоиды 85
3.3. Разработка показателей качества плодов перца однолетнего 86
3.3.1. Определение влажности 86
3.3.2. Определение содержания золы общей 88
3.3.3. Определение содержание золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте 89
3.3.4. Изучение термических характеристик методом дериватографии 89
3.4. Определение содержания липидного комплекса в плодах перца
однолетнего 93
Глава 4. Физико-химическое изучение и разработка показателей качества липидного комплекса плодов и семян перца однолетнего
4.1. Исследование липидного комплекса плодов перца однолетнего 97
4.1.1. Определение физико-химических показателей и разработка характеристик подлинности анализируемого липидного комплекса 97
4.1.1.1. Описание 98
4.1.1.2. Растворимость 98
4.1.1.3. Испытание на присутствие парафина, воска, смоляных масел, перекисей, альдегидов и мыла 98
4.1.1.4. Определение числовых показателей 99
4.1.1.5. Определение минерального состава 104
4.1.2. Изучение качественного и количественного состава липидного комплекса 104
4.1.3. Определение жирно-кислотного состава липидного комплекса 107
4.1.3.1. Изучение динамики изменения жирно-кислотного состава липидного комплекса в процессе хранения 111
4.1.4. Изучение неомыляемой фракции анализируемого липидного комплекса 112
4.1.5. Спектрофотометрическое определение содержания каротиноидов и токоферолов в образцах масла и верификация методики определения токоферолов методом ВЭЖХ с УФ детекцией 117
Выводы 118
Список литературы .120
- Районы культивирования перца однолетнего и особенности климатических и агротехнических условий выращивания перца однолетнего
- Методы, применяемые для разработки характеристик подлинности и показателей качества плодов перца однолетнего
- Микроскопическое изучение и разработка диагностических признаков плодов и семян перца однолетнего
- Испытание на присутствие парафина, воска, смоляных масел, перекисей, альдегидов и мыла
Введение к работе
Актуальность работы
Растительные масла — богатый источник незаменимых жирных кислот, а также витаминов, фосфолипидов и стеринов. Они способствуют регуляции обмена веществ в организме человека и обладают антиоксидантными, провитаминными, антихолестеринемическими, противовоспалительными, ранозаживляющими и другими ценными свойствами.
В фармацевтической промышленности растительные масла служат растворителями для липофильных лекарственных средств, а также экстрагентами для извлечения биологически активных веществ из растительного сырья. Некоторые из них, в силу особенностей своего химического состава, представляют собой самостоятельные терапевтические средства широкого спектра действия.
Основной источник растительных масел — масличные культуры. Но растительные масла также содержатся и в косточках плодовых деревьев, семенах винограда, арбуза, томатов, являющихся отходом пищевых производств по переработке сельскохозяйственного сырья.
Для снижения себестоимости фитопрепаратов, в последние годы все большую актуальность приобретают безотходные технологии в производстве - использование растительных отходов пищевой промышленности в качестве источника биологически активных веществ.
С этой точки зрения, отходы плодопереработки перца однолетнего (Capsicum annuum), в настоящее время подлежащие полной утилизации, являются перспективным сырьем для получения растительного масла, которое в зависимости от химического состава может представлять интерес как продукт фармацевтического, парфюмерно-косметического, пищевого или технического назначения.
Плоды и семена перца однолетнего сладких сортов изучены с химической и фармакологической точки зрения недостаточно, сведения об их качественном и количественном составе, а также о биологической активности, фрагментарны. Поэтому фитохимическая характеристика данного вида растительного сырья в сочетании с тщательным изучением фармакологических возможностей получаемого продукта, даст возможность рассматривать его в качестве перспективного источника лекарственных препаратов и позволит расширить ассортимент отечественных лекарственных средств растительного происхождения, полученных на основе липидных комплексов.
Цель работы и задачи исследования
Целью настоящей работы является фармакогностическое изучение плодов перца однолетнего и стандартизация липидного комплекса на его основе. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
- провести фармакогностический анализ сырья - плодов перца однолетнего и определить его диагностические признаки;
- определить содержание влаги, золы общей и нерастворимой в соляной кислоте, органической и минеральной примесей в сырье и на их основании нормировать числовые показатели данного сырья;
- разработать оптимальные условия выделения липидной фракции из исследуемого сырья различными методами;
- изучить химический состав масла, полученного из плодов перца однолетнего;
- определить в липидном комплексе содержание БАВ для оценки перспективности использования отходов плодопереработки перца однолетнего в качестве сырья для получения фармакологических препаратов; - на основании полученных данных обосновать необходимые показатели качества и методы стандартизации липидного комплекса плодов и семян перца однолетнего.
Научная новизна работы
Разработаны критерии стандартизации сырья на подлинность, включающие макро- и микроскопическое исследование, дериватографические характеристики.
Изучен состав образцов масла плодов и семян перца однолетнего, полученных холодным прессованием и экстракцией различными растворителями.
Проведена гравиметрическая характеристика масличности сырья при различных методах экстракции и разной степени измельчения. Полученные образцы масла охарактеризованы по требованиям фармакопейной статьи № 472 ГФ X «Масла жирные» и ГОСТов на пищевые масла. При этом получены количественные данные содержания 26 алифатических кислот, часть из которых проявляет F-витаминную активность, 10 нейтральных компонентов неомыляемого остатка, витаминов группы А и Е, а также элементов, составляющих основу минерального состава изучаемого липидного комплекса.
Выявлено существенно более высокое по сравнению с другими растительными маслами содержание стериновых и тритерпеноидных компонентов, известных своими репарационными, антиульцерогенными, антихолестеринемическими и провитаминными свойствами.
Показано, что изученное сырье перспективно для получения фармакологических препаратов.
На основании полученных данных были обоснованы показатели качества и методы стандартизации сырья плоды перца однолетнего и липидного комплекса на его основе.
Практическая значимость работы
Получено заключение о проведении апробации масла плодов перца однолетнего, как средства для лечения заболеваний слизистой оболочки полости рта и воспалительных заболеваний тканей пародонта, на базе МСЧ -4 Федерального управления медико-биологических и экстремальных проблем при МЗ РФ.
Получено положительное решение по заявке №2004122438 от 8 февраля 2005 года на патент на изобретение «Средство для лечения заболеваний слизистой оболочки полости рта и воспалительных заболеваний тканей пародонта».
На основании проведенных исследований апробированы и внедрены:
- методика хроматографического определения токоферолов в липидных комплексах (испытательная лаборатория ГУЗ «ЦС и ККЛ ДЗ г. Москвы»);
- определения показателей подлинности сырья плодов перца однолетнего в процессе контроля качества (ЗАО АПФ «Фито-Эм» г. Москва);
- результаты диссертационного исследования (лекционный курс и практические занятия со студентами 5 курса на кафедре фармацевтической и токсилогической химии РУДН по теме «Анализ лекарственных средств липидной природы»).
Высокая биологическая активность масла плодов и семян перца однолетнего в сочетании с уникальностью состава по отдельным физиологически активным компонентам дает возможность выпуска на его основе фармакологических средств, эффективных для лечения ревматических явлений и пародонтоза, а также косметических препаратов и пищевых добавок, обладающих противовоспалительным и ранозаживляющим действием.
Апробация работы
Материалы диссертации доложены на Открытом российском конкурсе на лучшую научную работу студентов 2000 года по разделу «Медицинские науки» (Москва, 2001), II Российской конференции молодых ученых России с международным участием (Москва, 2001), VIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2001), Международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (Алматы, 2003), на межкафедральной научной конференции ММА им. И.М. Сеченова, ICNPAS-2004 (Novosibirsk, 2004).
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 9 работ.
Связь задач исследования с проблемным планом научного совета по фармации и фармакологии
Диссертационная работа выполнена в рамках отраслевой научно-исследовательской программы ММА им. И.М. Сеченова «Разработка и совершенствование технологии подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием» и в соответствии с комплексной темой кафедры общей химии ММА им. И.М. Сеченова: «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификации биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические аспекты)» (номер государственной регистрации 01.200.118796).
На защиту выносятся
Результаты стандартизации плодов перца однолетнего и липидного комплекса плодов перца однолетнего, полученные при различных методах экстракции и разной степени измельчения сырья в условиях лаборатории и опытно-промышленного производства, а также данные по содержанию биологически активных соединений исследуемого объекта.
Районы культивирования перца однолетнего и особенности климатических и агротехнических условий выращивания перца однолетнего
В настоящее время перец однолетний возделывается во всех странах земного шара, где климатические условия позволяют выращивать промышленную культуру. В. Л. Газенбуш (1958) определил ориентировочно границы распространения перца - от 55 южной широты до 52 северной широты. Основные площади под сладким перцем заняты в зоне консервных заводов (Молдавия, Украина, Северный Кавказ, Нижнее Поволжье Средняя Азия, Закавказье). Первые промышленные плантации были заложены еще в XIX в. в Астрахани. По данным ФАО, производство острого (Чили) и сладкого перца в мире составило 8,8 млн. т. Культуру выращивали на площади 107 тыс. га.
Происхождение перца из стран тропического пояса обуславливает его исключительно высокую требовательность к условиям выращивания. Растения перца очень светолюбивы. При затенении наблюдается опадание бутонов, завязей, пожелтение листьев. При недостатке света растения обычно не переходят к репродуктивному периоду жизни.
Перец относится к теплолюбивым растениям. Дружное прорастание семян и появление всходов через 7-9 дней обеспечивается при температуре 25С. Днём оптимальной для растений перца является температура 20-30С, а в условиях полного затемнения или ночью, когда не происходит фотосинтез, и накопленные ранее пластические вещества расходуются на дыхание, оптимальной считается температура 15-18С. Под влиянием климатических условий родины у перца выработалась высокая требовательность к увлажнению почвы и воздуха, что объясняется относительно слабо разветвленной корневой системой и большой потребностью в воде на транспирацию и формирование урожая. Благоприятной для перца считается относительная влажность воздуха не менее 70 %.
Растения перца весьма требовательны к почве. Хорошими предшественниками перца считаются капуста, корнеплоды, тыквенные, бобовые. Перцы плохо растут и плодородят на тяжелых, глинистых, холодных почвах и на участках с сильно минерализованными почвами. Поэтому на малоплодородных почвах всегда практикуют обильное внесение органических и минеральных удобрений, содержащих фосфор, азот, калий, кальций, магний, а также микроэлементы: бор, марганец, цинк, йод, молибден. Неблагоприятна для них повышенная кислотность. Оптимальной считается реакция почвенного раствора в пределах рН 6-6,6. Перец в основном выращивают рассадным способом.
Плоды собирают как в технической, так и биологической спелости. Техническая спелость плодов наступает через 20-30 дней после цветения, когда плоды достигают оптимального размера и окраски, характерного для сорта. Через 20-30 дней после этого плоды достигают биологической спелости. Собирают плоды через каждые 5-7 дней. В зависимости от зоны выращивания проводят 6-10 сборов в технической спелости плодов, и 2-3 сбора при съёме полностью созревших плодов. При сборе плодов в биологической спелости, урожай на 20-30% ниже, чем при сборе плодов, достигших технической спелости.
Свежие плоды культурных сортов сладкого перца, выращенные в открытом грунте, заготовляемые, поставляемые и реализуемые для потребления в свежем виде и промышленной переработки, должны соответствовать техническим требованиям и нормам ГОСТ 13908-68 «Перец сладкий свежий», указанным в таблице 1.
Плоды перца в своем составе имеют воду, углеводы, органические кислоты, белковые вещества, жиры, витамины, красящие вещества, эфирные масла, специфическое вещество капсаицин.
Содержание сухих веществ в плодах перца, как свидетельствуют результаты исследований С. Т. Буткевич (1965), колеблется в пределах 6-13%. Сухие вещества в плодах перца представлены в основном углеводами: сумма Сахаров - 28-52,7% от общей суммы сухих веществ, крахмала — 1,78-9,34%, сырой клетчатки - 9,68-24%, гемицеллюлозы - 0,85-3,14%, пектиновых веществ - 6-13%. На долю азотистых веществ (главным образом белковых) приходится 11,2-35,7%. Зола от общего количества сухих веществ составляет 1,03-11,82%, из них более чем 50% приходится на соли калия. Помимо последних имеются соли натрия, кальция, магния, железа, а также соединения, содержащие фосфор, серу, кремний и другие элементы. Сахара в плодах перца состоят в основном из глюкозы и фруктозы. Плоды перца бедны содержанием жира (всего 0,09-3,9% на сухой вес), которого значительно больше (19-29%) накапливается в семенах. Титруемые кислоты составляют всего 1,77-3,90% от общего содержания сухих веществ. Плоды перца очень богаты витаминами.
В значительных количествах содержатся витамины С и Р. По их наличию перец стоит на первом месте среди всех овощных культур. По мере роста плода в нем накапливается от 10 до 482 мг на 100 г сырого веса аскорбиновой кислоты и 300-450 мг на 100 г сырого веса рутина (характерно, что чем выше степень созревания плода, тем больше в нем этих витаминов). Достаточно 20-50 грамм свежего перца, чтобы удовлетворить суточную потребность организма в витаминах С и Р. Содержание тиамина и рибофлавина в перце соответственно от 0,02-0,09 мг и 0,02-0,1 мг на 100 г сырого веса. В процессе созревания плода количество тиамина постепенно уменьшается, а рибофлавина -увеличивается.
Фолиевой кислоты накапливается 1,3-2,9 мг на 100 г сухого веса и её содержание уменьшается при созревании плодов. Количество никотиновой кислоты достигает 6-9,9 мг на 100 г сухого веса.
Красящие вещества плодов перца состоят в основном из каротиноидов. Количество каротиноидов колеблется от 0,2 до 4,8 мг на 100 г сырого веса у зеленых плодов и от 0,5 до 16,7 мг - при их созревании. Бета-каротин -наиболее активный для биологических объектов из группы каротиноидных пигментов, по литературным данным, обладает антиканцерогенной и иммуностимулирующей активностью. Помимо каротина, в плодах перца содержится (в процентах на сухой вес): капсантина 0,354, капсорубина 0,073, криптоксантина 0,016, зеаксантина 0,025. Имеются также ксантофилл, мутатохром, фолиаксантин, фолиахром, виолоксантин, аурохром, антероксантин, цис-изомерные формы ксантофилла и виолоксантина, эпоксид ксантофилла. Капсантин окрашен в 10 раз интенсивнее других каротиноидов и оставляет более 85% всех красящих веществ перца (Cholnoky et al, 1955, 1958, Y. Ittoh et al, 1993).
Капсаицины (производные ваниламид дециленовой кислоты) накапливаются в особых секреторных клетках плода, локализованных в плаценте и стенках внутренних перегородок (Сагдуллаев Т., Арипова С.Ф., 2000). В семенах и стенках околоплодника его практически нет. Общее содержание капсаицина у сладкого перца - 0,01 -0,015%.
Методы, применяемые для разработки характеристик подлинности и показателей качества плодов перца однолетнего
Определение подлинности проводили согласно указаний соответствующей статьи ГФ XI. При стандартизации плодов перца однолетнего руководствовались общими статьями ГФ XI «Плоды» и «Семена», а также учитывали требования к исходному цельному сырью государственного стандарта 13908-68 «Перец сладкий свежий» (см. табл. 1), предъявляемого к свежим плодам культурных сортов сладкого перца (Capsicum annuum). При микроскопическом исследовании и разработке диагностических признаков перца однолетнего учитывали требования, предъявляемые к технике приготовления микроскопических препаратов цельного сырья в соответствии со статьей ГФ XI «Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья». Определение влажности, содержание золы общей и золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте проводили в соответствии с методами, описанными в статьях «Определение влажности лекарственного растительного сырья» и «Определение золы» ГФ XI. Однако, "постоянство" массы при температуре, заданной ГФ XI не является гарантией того, что из образца произошло полное удаление влаги, так как в большинстве случаев температуру и время нагревания устанавливают эмпирически. При температуре, рекомендуемой ГФ XI происходит неполное удаление влаги, а достигается равновесие между водяными парами в воздухе и водой в лекарственном растительном сырье при данной температуре. Всё это указывает на некоторую условность определения влажности в лекарственном растительном сырье в изотермическом режиме.
Дериватография позволяет установить природу и сущность многих физико-химических процессов, происходящих при нагревании сырья, а также позволяет охарактеризовать свойства влаги и те изменения, которые происходят в процессе удаления влаги. В основе этого метода лежит автоматическая регистрация дериватограмм, которые представляют собой совокупность одновременно записанных простой T=f (t) и дифференциальной ДТА кривых нагревания, простой m=f (t) и дифференциальной TG кривых потери массы исследуемого образца. Температуру (Т) следует откладывать по оси ординат снизу вверх, а время - по оси абсцисс слева направо. Кривая dt/dt=f(t) представляет собой зависимость разницы температур между исследуемым образцом и эталоном от времени нагревания и называется дифференциальной кривой нагревания (ДТА). Разность температур откладывают по оси ординат снизу вверх для экзотермических реакций, а для эндотермических - сверху вниз. Простая кривая потери массы в зависимости от температуры представляет собой зависимость массы вещества от времени или температуры нагревания (охлаждения). Дифференциальную кривую потери массы исследуемого образца по температуре (ДТГ) следует откладывать по оси ординат. В том случае, когда в исследуемом образце происходят процессы, сопровождающиеся поглощением или выделением тепла, дифференциальная и простая кривая отклоняются от прямой линии. На простой кривой нагревания появляются горизонтальные участки, а на дифференциальной - резкие отклонения вверх, соответствующие экзотермическим эффектам (см. схему 2). Принцип работы дериватографа заключается в следующем.
Исследуемое вещество и эталон помещаются в тигель. В качестве эталона используют вещества, с которыми в исследуемом интервале температур не происходит процессов, сопровождающихся выделением или поглощением тепла, и наиболее часто используют свежепрокаленный оксид алюминия. Тигли устанавливаются на термопары, расположенные строго вертикально, спаи термопар контактируют с веществом и эталоном через специальные углубления в дне тигля. Термопара, держащая тигель с пробой, закреплена на одном конце весов, а на другом конце весов находится катушка. Силовое поле магнита, индуцирующее в катушке постоянный ток, подает на зажимы гальванометра световой сигнал, который фиксирует на фотобумаге дифференциальную кривую потери массы. Температурная кривая также регистрируется на фотобумаге. При этом измерение температуры вещества в процессе нагрева производится через металлические стенки тигля, которая измеряется горячим спаем термопары и равна температуре вещества изучаемого объекта. Равномерность нагревания печи осуществляется программным управлением со скоростью 0,5- 20С в минуту. Максимальная рабочая температура была установлена до 1000С, т.к. термическое разложение для большинства лекарственных веществ и лекарственного растительного сырья происходит именно в этом интервале температур. Навеска образца, необходимая для получения одной дериватограммы, составляет обычно от 0,002 до 0,2 г (в нашем случае 80 мг).
Микроскопическое изучение и разработка диагностических признаков плодов и семян перца однолетнего
Образцы ацетатов токоферолов, любезно предоставленные ОАО «Алтайвитамины», подвергали омылению в условиях, описанных выше (см. выделение неомыляемого остатка). После отгонки растворителя неомыляемые остатки, полученные омылением ацетатов токоферолов, подвергали хроматографической очистке на колонках, заполненных силикагелем (Чехия, размер зерен силикагеля 0,100-0,250 мм). Контроль чистоты образцов осуществляли при помощи ТСХ и ВЭЖХ. Согласно хроматографическим данным продукты были гомогенными. Условия хроматографического анализа токоферолов Из навески неомыляемого остатка, анализируемого на содержание токоферолов, в количестве 2-10 мг с точностью до 0,0001 г в пенициллиновом флаконе готовили раствор в элюентном растворителе (свежеперегнанный метанол) с концентрацией 3-5 мг/мл. При необходимости (при неполном растворении образца в метаноле) добавляли точный объем ацетона при помощи дозатора прибора «Милихром». Пробу в количестве 4-8 мкл после полного растворения вводили в хроматограф «Милихром» с УФ -детекцией, колонка 6,3 см х 0,2 см, заполненная сорбентом Lichrosorb RP-18, элюент - метанол.
Скорость набора пробы - 50 мкл/мин, скорость элюирования пробы - 100 мкл/мин. Элюент перед началом работы продували гелием через вентиль тонкой регулировки. В тех же условиях прописывали хроматограммы растворов чистых стандартов токоферолов, приготовленных из расчета 0,5 мг/мл. В хлороформ-метанольных экстрактах содержание токоферолов не определялось. Химический состав плодов и семян перца однолетнего сладких сортов, как показано в литературном обзоре, изучен недостаточно. Имеются лишь отрывочные данные о содержании витаминов, микроэлементов и флавоноидов в образцах отдельных сортов. В то же время тщательный анализ литературных данных по составу горьких сортов перца однолетнего дает основание предполагать наличие в плодах и семенах сладкого перца ряда биологически активных компонентов антитихолестеринемического, противосклеротического, репаративного противовоспалительного, иммуностимулирующего, антиульцерогенного, репаративного действия. Изучение химического состава дает основание для практических рекомендаций по использованию этого вида сырья для получения масла фармацевтического, пищевого и технического назначения. Практически полное отсутствие в семенах и плодах сладкого перца раздражающих и горьких алкалоидов, содержащихся в семенах и плодах перца однолетнего горьких сортов, дает возможность широко использовать масло из этого сырья для получения лекарственных средств. Эта требует стандартизации используемого сырья по морфолого-анатомическим характеристикам и физико-химическим показателям. По внешним признакам зрелые плоды соответствуют техническим требованиям и нормам ГОСТа 13908-68 «Перец сладкий свежий» (см. таб. 1). Зрелые плоды высушены в сушильной камере при температуре 60С. Плод — синкарпная ягода призмовидной формы диаметром 3-6 см, длиной до 10 см. Поверхность плода гладкая, продольно-ребристая, соответствующая числу сросшихся плодолистиков.
Плод прикреплен к чашечке своим плоским или вогнутым основанием. Вершина плода может быть острой, тупой или даже вогнутой. Внутри плода перца образуется слипшаяся полость. Цвет - зеленый, желтый, красный. Запах ароматный, вкус сладковатый. Семена перца высушены в сушильной камере при температуре 60С. Семена плоские, почковидные, с хорошо выраженным ободком по краю. Длина от 2 до 6 мм. Толщина семян составляет 0,5-1 мм. Поверхность -глянцевая или матовая, гладкая или слегка шероховатая. Цвет семян желтый или бледно-желтый. Запах отсутствует. Вкус сладковатый. С целью стандартизации плодов и семян перца однолетнего нами проведена микроскопия исследуемых частей: околоплодника и семян. Техника приготовления микроскопических препаратов околоплодника с поверхности и поперечные срезы околоплодника и кожуры семени перца однолетнего проводилась в соответствии с ГФ XI. Для приготовления препаратов околоплодника с поверхности, берут 2-3 небольших кусочка высушенного плода, кипятят в пробирке в растворе 5% едкого натра в течение 2-3 минут и тщательно промывают водой. Объект помещают на предметное стекло, препаровальными иглами отделяют ткани околоплодника и рассматривают их в растворе хлоралгидрата или глицерина. Для приготовления срезов сухие семена и плоды предварительно размягчают, поместив их на сутки во влажную камеру (влажной камерой служит эксикатор с водой, в которую добавлено несколько капель хлороформа) или водяным паром в течение 15-30 минут. Срезы объекта помещают на предметное стекло и рассматривают их в растворе хлоралгидрата или глицерина. В качестве включающей жидкости использовался раствор глицерин -вода (1:1). На поперечном срезе семени различают: спермодерму, эндосперм и зародыш. Спермодерма (семенная кожура) (1) состоит из 5-6 рядов клеток. Снаружи располагается однослойный эпидермис (2). Его клетки крупные, сильно склерифицированные, V - образные, с внутренней стороны с извилистыми, неравномерно-утолщенными, пористыми (3) боковыми стенками и бородавковидными выступами (4). Внешние стенки эпидермальных клеток покрыты толстой кутикулой (5). Под эпидермисом находится 4-5 рядов мелких, тонкостенных, сдавленных в радиальном направлении клеток паренхимы (6) и однослойная внутренняя эпидерма (7), (см. рис.1, 2).
Испытание на присутствие парафина, воска, смоляных масел, перекисей, альдегидов и мыла
Липидный комплекс перца однолетнего, полученный методом экстракции гексаном, представляет собой прозрачную маслянистую жидкость желто-бурого цвета с характерным ароматным запахом и сладковатым вкусом. Липидный комплекс перца однолетнего, полученный методом холодного прессования, представляет собой полупрозрачную густую зеленовато-бурого цвета маслянистую жидкость с характерным ароматным запахом и сладковатым вкусом. Липидные комплексы перца однолетнего нерастворимы в воде, мало растворимы в спирте, легко — в эфире, хлороформе, гексане, петролейном эфире. В соответствии с методиками на обнаружение парафина, воска, смоляных масел, перекисей, альдегидов и мыла, описанными в статье 472 «Масла жирные» ГФ X, установлено их отсутствие в липидном комплексе плодов перца однолетнего. Определение плотности Плотность большинства жиров находится в пределах 0,910 - 0,945. В соответствии с ГФ XI, определение плотности проводили с помощью пикнометра (метод 1) (см. табл. 7). В соответствии с ГФ XI, показатель преломления определяют с помощью рефрактометра (см. табл. 8). Относительным показателем преломления (п) называют отношение скорости распространения света в воздухе к скорости распространения света в испытуемом веществе. Рефрактометрия применяется для установления подлинности и чистоты вещества. Показатель преломления тем выше, чем больше содержится в жире триглециридов ненасыщенных кислот. Определение кислотного числа
В соответствии с ГФ XI кислотным числом называют количество миллиграммов едкого калия, необходимое для нейтрализации свободных кислот, содержащихся в 1 г исследуемого вещества (см. табл. 9). Прогоркание жира контролируется по величине кислотного числа. Доброкачественные жиры содержат небольшое количество свободных жирных кислот. В соответствии с ГФ XI, числом омыления называют количество миллиграммов едкого калия, необходимое для нейтрализации свободных кислот и кислот, образующихся при полном гидролизе сложных эфиров, содержащихся в 1 г исследуемого вещества (см. табл. 10). Число омыления позволяет определить состав жиров и их доброкачественность. Определение йодного числа В соответствии с ГФ X, йодным числом называют количество граммов йода, связываемое 100 г исследуемого вещества. Определение йодного числа проводилось по методу 2 соответствующей статьи ГФ X (см. табл. 11). Способом выявления высыхаемости масел служит определение йодного числа. По величине йодного числа масло перца по степени высыхаемости относится к группе полувысыхающих масел (тип линолевой кислоты), что также соответствует данным, полученным в результате хроматографического анализа. Для характеристики окислительного прогоркания липидного комплекса было проведено определение перекисного числа в соответствии с ГОСТ 26593-85, которое выражается количеством йода, пошедшего на разрушение перекисей (см. таб. 12). Метод основан на реакции взаимодействия продуктов окисления растительных масел (перекисей и гидроперекисей) с йодистым калием в растворе уксусной кислоты и хлороформа и последующем количественном определении выделившегося йода раствором тиосульфата натрия титриметрическим методом. Для этого массу пробы 2,0 г отвешивают в колбу. Добавляют 10 мл хлороформа, быстро растворяют испытуемую пробу, приливают 15 мл уксусной кислоты и 1 мл раствора йодистого калия, после чего колбу сразу же закрывают, перемешивают содержимое в течение одной минуты и оставляют на 5 минут в темном месте при температуре 15-25С.
Затем добавляют 75 мл воды, тщательно перемешивают и добавляют 5 капель раствора крахмала. Выделившийся йод титруют раствором тиосульфата натрия, используя раствор следующей концентрации в зависимости от предполагаемого значения перекисного числа. С (1/2 Na2S203) = 0,002 моль/л, если перекисное число не более 6,0 ммоль/л или С (1/2 Na2S203) = 0,01 моль/л, если перекисное число равно или более 6,0 ммоль/кг. Для каждой испытуемой пробы выполняют пять измерений. Контрольное измерение проводят параллельно с другими измерениями. Если на контрольное измерение пойдет более 0,1 мл 0,01 моль/л раствора тиосульфата натрия, то проверяют соответствие реактивов требованиям стандартов.
