Введение к работе
: г
'., ..- [Актуальность темы. Начало 80-х годов возвестило человечество о появлении нового заболевания, явившегося воистину "чумой XX века" н получившего название синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД).
В основе этого заболевания лежит поражение иммуной системы организма. Возбудителем является вирус, относящийся к семейству ретро-вирусов. Сам по себе иммунодефицит не вызывает каких-либо признаков заболевания, юс вызывают многочисленные, наслаивающиеся друг на друга патологические процессы, перед которыми организм оказывается беззащитным.
Поиск и разработка новых лекарственных препаратов для лечения этого заболевания на сегодняшний день является весьма актуальной проблемой.
Наиболее перспективными синтетическими лекарственными средствами, применяемыми для лечения СГЩЦ является производные двэоксинуклеотидов. В настоящее время З-дезокси-3-азидотимидин (азидотимидин) можно рассматривать как единственное лекарственное средство для лечения СІВД.
Рост числа заболеваний СІВД в СССР (к концу 1992 г. ожидается до 24 тыс., а к 2000 г. около 1,Ь млн.человек), а также высокая цена препарата за рубежом (стоимость годичного курса (100-200 грамм) составляет свыше 15 тыс.долларов), диктует необходимость промышленного производства аэидотимидина в нашей стране.
Синтез аэидотимидина (АЗТ) в Советском Союзе осуществлен в Институте молекулярной биологии АН СССР, совместно с Московским институтом тонкой химической технологии и НПСВитамины".
Одной из проблем, которая требовала незамедлительного решения при осуществлении промышленного выпуска нового лекарственного средства, является контроль качества готового продукта.
Известно, что качество препарата находится в прямой зависимости от уровня технологического процесса, используемых методов анализа, стандартизации основных продуктов его синтеза, а также уровня требований включенных в НТД.
Поэтому для обоснования нормативных показателей качества аэидотимидина и разработки методов контроля необходимо было провести исследование по изучению физико-химических свойств как самого АЗТ, так и веществ, представлюиих собой его возможные примеси.
_ з -
Для ранения перечисленных задач наиболее перспективным является применение комплекса физических и физико-химических методов анализа. Такой подход позволяет всесторонне, с высокой чувствительностью и надежностью исследовать физико-химические свойства вещества, определить возможные причины их изменений, и на основе полученных результатов разработать методики анализа для оценки качества препарата.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось изучение физико-химических свойств нового противовирусного лекарственного средства азидо^имидина на основе использования комплекса современных методов и обоснование параметров нормативно-технических показателей качества препарата.
Для достижения указанной цели необходимо было решение следующих основных задач исследования*.
изучить хроматографические характеристики исследуемого соединения азидотимидина и возможных примесей для разработки методик определения его чистоты и количественного содержания;
изучить спектральные характеристики в видимой УФ- и ИК-области спектра, показать возможность их использования для оценки степени идентичности и качества препарата;
исследовать возможность применения методов поляриметрии, термического анализа,рентгенографии и Я14Р при определении структурных особенностей азидотимидина;
на основании выявленных физико-химических свойств азидотимидина обосновать комплекс методов анализа и установить параметры, позволяющие всесторонне оценить качество и стандартизировать готовый продукт.
Научная новизна. Изучено влияние основных компонентов хроыатографической системы на поведение азидотимидина (АЗТ) и сопутствующих ему примесей в условиях обращенно-фазной ЮЖХ. Показано, что они являются полупродуктами, побочными продуктами синтеза и продуктами разложения препарата. Разработаны условия их хроматографичес-кого разделения.
Установлена ТСХ - селективная система для определения чистоты АЗТ - (метанол:хлороформ, 1:9).
Разработана унифицированная газохромагографическая методика, позволяющая одновременно идентифицировать и количественно оценить примеси Ь органических растворителей в лекарственном веществ АЗГ и остаточных растворителей, используемых в производстве стандартного образца препарата.
С использованиемпроизводноК УФ-спвктрофотометряи исследованы УФ-спектрЫ АЗТ и его вероятных примесей в различных растворителях (вода, метанол, раствори соляной кислоты и натрия гидроксида), в результате установлено, что рН срэды влияет на характер спектра АЗТ: в кислой среда наблюдается смещение церво! полосы поглощения в високочастотную область, а в палочной в низкочастотную область.
Методом Ж-спеггрофотокстрия исследовано строение АЗТ и выявлены наиболее характерные полосы поглощения (при 3350-3300, 3180-3120, 900-820, 1070-990, 1625-1500 и 2130-2080 см"1) для группировок, определяющих фармакологическое действие препарата.
При изучении термических характеристик АЗТ установлена возможность образования его полиморфных форм с различными текпературзгет плавления. Исследовано влияние примесей на термические эффекты препарата, показано, что с увеличением концентрации примесей наблюдается понижение температуры плавления вещества.
Для идентификации и контроля качества АЗТ разработан комплекс методов (хроматографических, спектральных и термических), позволяющий определить показатели качества АЗТ (подлинность, содержание специфических примесей, количественное содержание, а также допустимые нормы их отклонений).
Практическая значимость. На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:
методики контроля качества и стандартизация АЗТ, которые включены в проект В5С на лекарственное вещество и стандартный образец АЗТ. Проекты представлены в Фармакологический Комитет ЫЗ СССР для получения разрешения на клинические испытания препарата (Акт № 94/9Ь от 7.06.І99І г., Акт № 95/95 от 7.06.І99І г.);
методики постадийного контроля лабораторного синтеза АЗТ (Акт от 10.01.1989 г. НПО "Витамины);
методики определения органических остаточных растворителей и определения цветности АЗТ (Акт 0.6-6216-92.3 от 2.10.90 ИВХ АН СССР);
методики ТСХ и ВЭ1Х для определения специфических примесей и чистоты АЗТ (Акт от 19.03.1991 г. ЗП МБК ВКЩ АМН СССР);
методики контроля качества стандартного образца АЗТ с использованием ТСХ, ВЙІХ, и ГЖХ (Акт от 22.04.91 ИКС АН СССР).
На защиту выносятся следующие положения:
- результаты исследования хроматографического поведеїшя аэидоти-
мидина и его специфических примесей, полученные с использованием мето
дов ТСХ, ЬЫХ и. Ш; '
ь -
данные исследования спектральных характеристик азидотимидина с использованием методов ОСФИ, УФ-, ИК-спектрофотометрии, ЯМР^Н-спектро-скопии, рентгеновской дифрактоТрафии и подяриметрии;
результаты изучения термических характеристик азидотимидина, полученные методом дериватогрвфии;
методики контроля качества и стандартизации лекарственного вещества азидотимидина и его стандартного образца.
Апробация работы. Результаты исследований доложены на конференции молодчх ученых Гос.НИИЩДС 43 СССР (Москва 1988,1989, 1990 гг), на Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых в г.Куйбышеве - 1988 г., на Всесоюзной научной конференции молодых ученых г.Москва-1990 г., на научно-практической конференции в г.Владимире - 1991 г.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом основных научных исследований Гоо.НИИСКЛС МЗ СССР (номер государственной регистрации 01.6b.О 0823Ы) и соответствует тематике научного направления "Фармацевтическая химия" союзкой проблемы "Фармация, Научного Совета » 48 АМН СССР.
И у б л и к а ц и и. По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 159 страницах машинописного текста, содержит 25 таблиц и 29 рисунков.
