Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Изониазид и этамбутола гидрохлорид: свойства, токсичность, методы анализа. Взаимодействие лекарственных веществ с высокомолекулярными соединениями (обзор литературы) 10
1.1 Общая характеристика изониазида и этамбутола гидрохлорида как противотуберкулезных препаратов 10
1.2 Методы анализа изониазида и этамбутола гидрохлорида 15
1.2.1 Химические методы анализа изониазида и этамбутола гидрохлорида 15
1.2.2 Физико-химические методы анализа изониазида и этамбутола гидрохлорида 18
1.2.3 Методы определения изониазида и этамбутола гидрохлорида в биологических жидкостях 22
1.3 Взаимодействие лекарственных веществ с высокомолекулярными соединениями 25
Выводы по главе 1 28
Экспериментальная часть
Объекты и методы исследования 30
Глава 2 Изучение взаимного влияния высокомолекулярных соединений и лекарственных веществ в растворе и в твердом состоянии. Разработка технологии гранул 32
2.1 Изучение взаимного влияния высокомолекулярных соединений и лекарственных веществ (изониазид и этамбутола гидрохлорид) в твердом состоянии 32
2.2 Изучение взаимного влияния высокомолекулярных соединений и лекарственных веществ (изониазид и этамбутола гидрохлорид) в растворе 42
2.3 Разработка технологии гранул 46
2.3.1 Определение технологических параметров гранул 49
Выводы по главе 2 51
Глава 3 Выбор методов количественного анализа изониазида и этамбутола гидрохлорида при совместном присутствии 53
3.1 Выбор методов для количественного определения изониазида в гранулах 53
3.2 Выбор методов для количественного определения этамбутола гидрохлорида в гранулах 64
3.2.1 Разработка методики определения этамбутола гидрохлорида методом экстракционной фотометрии 69
Выводы по главе 3 77
Глава 4 Использование хроматографии для определения изониазида, этамбутола гидрохлорида и продуктов деструкции при их совместном присутствии в гранулах 78
4.1 Использование метода хроматографии в тонком слое сорбента для обнаружения изониазида, этамбутола гидрохлорида и продуктов их деструкции 78
4.1.1 Выбор оптимальной системы растворителей 78
4.1.2 Выбор оптимального проявителя и установление пределов обнаружения 83
4.1.3 Разработка методик хроматографического анализа и контроля доброкачественности гранул изониазида с этамбутола гидрохлоридом 84
4.2 Изучение стабильности и стандартизация гранул изониазида этамбутола гидрохлоридом 87
4.2.1 Изучение стабильности и установление сроков годности гранул изониазида с этамбутола гидрохлоридом 87
4.2.2 Определение сроков годности гранул изониазида с этамбутола гидрохлоридом 91
4.3 Разработка норм качества на гранулы изониазида с этамбутола гидрохлоридом 93
Выводы по главе 4 100
Глава 5 Изучение биологической активности гранул, содержащих изониазид и этамбутола гидрохлорид 101
5.1 Изучение туберкулостатической активности в опытах in vitro 101
5.2 Определение острой токсичности гранул изониазида и этамбутола гидрохлорида 103
5.3 Изучение хронической токсичности гранул изониазида и этамбутола гидрохлорида 105
5.4. Изучение фармакокинетики гранул изониазида и этамбутола гидрохлорида 108
Выводы по главе 5 116
Общие выводы 117
Список литературы
- Химические методы анализа изониазида и этамбутола гидрохлорида
- Изучение взаимного влияния высокомолекулярных соединений и лекарственных веществ (изониазид и этамбутола гидрохлорид) в растворе
- Выбор методов для количественного определения этамбутола гидрохлорида в гранулах
- Разработка методик хроматографического анализа и контроля доброкачественности гранул изониазида с этамбутола гидрохлоридом
Введение к работе
Актуальность темы. Согласно рекомендациям Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) для лечения полирезистентных форм туберкулеза применяются комбинированные лекарственные препараты, содержащие два и более лекарственных веществ. За рубежом выпускаются многокомпонентные лекарственные препараты в таблетках, в состав которых входит гидразид изоникотиновой кислоты (изониазид) и другие туберкулостатические лекарственные вещества. Отечественные фтизиатры применяют только зарубежные дорогостоящие лекарственные средства, что снижает их доступность для больных. В схемы профилактики и лечения туберкулеза, наряду с изониазидом включают этамбутола гидрохлорид. Это сочетание позволяет замедлить развитие устойчивых микобактерий туберкулеза. Длительное и многократное применение некомбинированных лекарственных препаратов неудобно для больного, поэтому актуальной оказывается разработка отечественного лекарственного препарата с противотуберкулезной активностью, содержащего изониазид в сочетании с этамбутола гидрохлоридом.
Цель и задачи исследования
Целью настоящего исследования явилось обоснование состава и стандартизация комбинированного лекарственного препарата, включающего два лекарственных вещества, обладающих туберкулостатической активностью, с различными механизмами действия.
Для реализации постановленной цели необходимо было решить следующие задачи:
- изучить возможность использования химических и физико-химических
методов анализа для идентификации изониазида и этамбутола гидрохлорида при
совместном присутствии;
- исследовать возможность использования хроматографических,
' оптических и химических методов для количественного определения изониазида
в присутствии этамбутола гидрохлорида;' ' :
проведенных исследований обоснован выбор системы растворителей, позволяющий разделить как ингредиенты лекарственного препарата, так и возможные продукты деструкции.
Изучение скорости деструкции изониазида и этамбутола гидрохлорида показало, что этамбутола гидрохлорид подвергается деструкции раньше, чем изониазид. В связи с этим, изучение сроков годности предлагаемого лекарственного препарата проведено по продуктам деструкции этамбутола гидрохлорида. Кроме того, установлены константы скорости разложения этамбутола гидрохлорида при температуре 40 и 60С в субстанциях и предлагаемых гранулах. Установлено, что на стабильность этамбутола гидрохлорида в предлагаемом лекарственном препарате оказывают влияние изониазид и вспомогательные вещества.
Выбраны оптимальные условия и разработана методика определения этамбутола гидрохлорида в биологических жидкостях. На основании изучения фармакокинетических параметров изониазида и этамбутола гидрохлорида в гранулах в сравнении с таблетками изониазида и этамбутола гидрохлорида, показано, что предлагаемые гранулы значительно увеличивают время нахождения лекарственных веществ в системном кровотоке.
Практическая значимость результатов исследования
В результате исследования разработаны и валидированы методики идентификации, определения посторонних примесей и количественного определения изониазида и этамбутола гидрохлорида физико-химическими методами. Методики характеризуются простотой выполнения, высокой чувствительностью и позволяют достоверно оценивать качество изониазида и этамбутола гидрохлорида'при совместном присутствии.
Разработаны состав, технология и нормы качества гранул изониазида с этамбутола гидрохлоридом. Результаты экспериментальных исследований использованы в подготовке нормативной документации на данный лекарственный препарат.
Установлено снижение токсичности и пролонгирование действия гранул за счет введения этамбутола гидрохлорида и пектина.
проведенных исследований обоснован выбор системы растворителей, позволяющий разделить как ингредиенты лекарственного препарата, так и возможные продукты деструкции.
Изучение скорости деструкции изониазида и этамбутола гидрохлорида показало, что этамбутола гидрохлорид подвергается деструкции раньше, чем изониазид. В связи с этим, изучение сроков годности предлагаемого лекарственного препарата проведено по продуктам деструкции этамбутола гидрохлорида. Кроме того, установлены константы скорости разложения этамбутола гидрохлорида при температуре 40 и 60С в субстанциях и предлагаемых гранулах. Установлено, что на стабильность этамбутола гидрохлорида в предлагаемом лекарственном препарате оказывают влияние изониазид и вспомогательные вещества.
Выбраны оптимальные условия и разработана методика определения этамбутола гидрохлорида в биологических жидкостях. На основании изучения фармакокинетических параметров изониазида и этамбутола гидрохлорида в гранулах в сравнении с таблетками изониазида и этамбутола гидрохлорида, показано, что предлагаемые гранулы значительно увеличивают время нахождения лекарственных веществ в системном кровотоке.
Практическая значимость результатов исследования
В результате исследования разработаны и валидированы методики идентификации, определения посторонних примесей и количественного определения изониазида и этамбутола гидрохлорида физико-химическими методами. Методики характеризуются простотой выполнения, высокой чувствительностью и позволяют достоверно оценивать качество изониазида и этамбутола гидрохлорида'при совместном присутствии.
Разработаны состав, технология и нормы качества гранул изониазида с этамбутола гидрохлоридом. Результаты экспериментальных исследований использованы в подготовке нормативной документации на данный лекарственный препарат.
Установлено снижение токсичности и пролонгирование действия гранул за счет введения этамбутола гидрохлорида и пектина.
Внедрение результатов исследования в практику
По результатам исследований разработаны проект фармакопейной статьи предприятия и пояснительная записка на «Изониазид с этамбутола гидрохлоридом, гранулы», получены акты апробации от ОАО «Тюменский химфармзавод» и ЗАО «Макиз-Фарма».
Положения, выносимые на защиту
Результаты изучения взаимного влияния высокомолекулярных соединений и лекарственных веществ (изониазид и этамбутола гидрохлорид) в растворе и в твердом состоянии. Итоги исследований по обоснованию состава гранул.
Выбор методов количественного анализа изониазида и этамбутола гидрохлорида и результаты их применения при совместном присутствии.
Результаты использования тонкослойной хроматографии для определения изониазида, этамбутола гидрохлорида и продуктов деструкции при совместном присутствии.
Результаты доклинических исследований гранул, содержащих изониазид и этамбутола гидрохлорид.
Апробация и публикация результатов исследования
Основные положения диссертационной работы доложены на региональных научных конференциях (г. Пятигорск, 2006 и 2007 гг.). По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук
Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорская государственная фармацевтическая академия (номер государственной регистрации 01.2.00101060)
Объем и структура диссертации
Работа изложена на 142 страницах машинописного текста, содержит 45 таблиц, 17 рисунков, состоит из "Введения", "Обзора литературы", 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 136 источников, в том числе 40 иностранных, и приложения.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Химические методы анализа изониазида и этамбутола гидрохлорида
Изониазид является производным изоникотиновой кислоты и за счет наличия гидразидной группы образует нерастворимые соединения с солями тяжелых металлов. Препарат проявляет восстановительные свойства, присущие гидразидам [19, 23, 24, 72].
Идентификация изониазида. ГФ X рекомендует общую реакцию подлинности на производные пиридина с 2,4-динитрохлорбензолом. Как соединение, содержащее третичную аминогруппу, изониазид образует окрашенные осадки с раствором фосфорномолибденовой кислоты и некоторыми другими осадительными (общеалкалоидными) реактивами.
Для испытания подлинности изониазида используют его восстановительные свойства, обусловленные наличием остатка гидразина в молекуле препарата. При взаимодействии изониазида с аммиачным раствором нитрата серебра выделяется желтый осадок, а при нагревании на стенках сосуда осаждается серебро, т.е. происходит реакция «серебряного зеркала» [26, 27].
Идентифицировать препарат можно также по характерной цветной реакции с раствором сульфата меди (II). Вначале образуется медная соль изониазида голубого цвета, а затем происходит гидролиз и окисление гидразида солью меди (II), что сопровождается изменением окраски раствора от голубой до изумрудно-зеленой и грязно-желтой [26].
Изониазид дает цветную реакцию со щелочным раствором нитропруссида натрия. Появляется оранжевое окрашивание, которое после добавления кислоты хлористоводородной переходит в вишневое.
При щелочном гидролизе изониазида образуется гидразин, который обнаруживают цветной реакцией с п-диметиламинобензальдегидом в кислой среде. Возникает желто-оранжевая окраска, обусловленная конденсацией альдегида и гидразина с образованием хиноидного катиона [6].
Для количественного определения изониазида разработан и описан ряд методов, большинство из которых, основаны на окислении изониазида. Окислительно-восстановительные методы характеризуются трудоемкостью в исполнении.
В качестве окислителей используют гексацианоферрат калия (III) [16, 17, 120], N-бромсукцинимид [105], сульфат талия (III) [133], перманганат калия [54]. ГФ X издания предлагает для анализа изониазида йодометрический метод.
Различные варианты йодометрического определения изониазида разработаны такими авторами как: М.Т. Цупиков, D. Amin., К. Verma Krishna. [90, 99, 132]. Известно йодометрическое определение с использованием винилсерной кислоты 31, [92].
По международной Фармакопее изониазид определяют броматометрическим методом, индикатор метиловый красный в спирте этиловом [26]. Метод характеризуется высокой точностью определения изониазида.
Предложены оксидиметрические методы определения изониазида, основанные на действии раствора калия бихромата, избыток которого титруют раствором соли Мора, а также на действии хлорамина Т и йодометрическом титровании избытка окислителя. В качестве титранта для оксидиметрического определения изониазида использовали растворы производных кобальта и другие окислители [71].
Известен комплексонометрический метод определения изониазида с помощью йодвисмутата калия в присутствии натриевой соли п-аминосалициловой кислоты [131]. По ФС № 42-2081-89 определяют изониазид, используя основные свойства пиридинового цикла, методом нейтрализации в неводной среде.
В. И Опря и В.В. Ремиш описали титриметрическую методику для определения изониазида с использованием в качестве индикатора 3,3-диметоксидихиноэтана в присутствии оксида молибдена [58].
Известен метод количественного определения изониазида, в основе которого лежит осаждение препарата избытком нитрата серебра и дальнейшего титрования раствором аммония роданида [59].
В изучаемой литературе по определению изониазида химическими методами нами не найдены методики определения его при совместном присутствии с этамбутола гидрохлоридом.
Этамбутола гидрохлорид является производным аминоспирта 2-аминобутанола, содержащим связанную хлористоводородную кислоту.
Подлинность этамбутола гидрохлорида устанавливают химическим методом с помощью цветной реакции с раствором сульфата меди (II) [95].
Для количественного определения, этамбутола гидрохлорида предложен метод йодометрии, основанный на окислении этамбутола бромпроизводными до альдегидов. А также метод неводного титрования в среде протогенного растворителя [87, 95].
Изучение взаимного влияния высокомолекулярных соединений и лекарственных веществ (изониазид и этамбутола гидрохлорид) в растворе
Изучение взаимного влияния высокомолекулярных соединений и лекарственных веществ (изониазид и этамбутола гидрохлорид) в растворе проводили методом вискозиметрии. По литературным данным известно [21, 36, 78], что лекарственные и вспомогательные вещества могут оказывать взаимное влияние, приводящее к изменению своих биофармацевтических свойств. В работах Гаврилина М.В., Чан Ван Зиеп [14, 28] показано влияние лекарственных веществ на вязкость растворов полимеров. Методом вискозиметрии доказано, что при взаимодействии лекарственных веществ с ВМС значительно снижается вязкость растворов, что может быть следствием компактизации макромолекул. Вспомогательные вещества используются в широком диапазоне концентраций, поэтому для изучения взаимного влияния готовили растворы высокомолекулярных соединений в концентрациях - от 0,02 до 2 г/л.
Растворы высокомолекулярных соединений с концентрацией 0,02, 0,04, 0,1, 0,2, 0,4, 1,0 и 2,0 г/л готовили следующим образом: в химический стакан, вместимостью 100 мл помещали 0,1, 0,2, 0,5, 1,0, 2,0 и 5,0 г, соответственно, 1% раствора полимера. Объем раствора доводили до 50 мл водой. Методика исследования взаимного влияния:
К 50 мл раствора полимера соответствующей концентрации прибавляли по 10 мг этамбутола гидрохлорида или изониазида и встряхивали в течение 1 ч, затем растворы оставляли на сутки и вновь встряхивали 1 ч и определяли вязкость. Время истечения испытуемых растворов определяли с помощью капиллярного вискозиметра Оствальда по ГОСТу 10028-81. Измерения времени проводили 7 раз. При этом разность между наибольшим и наименьшим временем истечения жидкости между отметками не превышала ±0,3% среднего его значения. Параллельно в таких же условиях проводили исследование растворов высокомолекулярные соединения без добавления лекарственного вещества. Относительную (тотн) и удельную вязкость (туд) рассчитывали по общепринятым формулам [19].
В эксперименте установлено, что относительная вязкость растворов высокомолекулярные соединения не во всех случаях увеличивается пропорционально росту их концентрации в растворе. Для БЦД увеличение вязкости не наблюдается (1,001 - 1,002) и ПВП (1,00 - 1,03). До 10 % рост составил для крахмала от 1,00 до 1,06 и КПН - 1,00 - 1,07. Более 10% для растворов: ПВС 1,00 -1,16, NaKMU, - 1,00 - 1,46, пектина - 1,00 - 1,77, МЦ - 1,03 - 1,82.
Для объективной оценки степени взаимного влияния «лекарственные вещества - высокомолекулярные соединения» нами были рассчитаны величины разности относительной вязкости (Ац) растворов высокомолекулярные соединения с лекарственными веществами (ri) и растворов высокомолекулярные соединения без лекарственных веществ (п2) по формуле:
Для объективной оценки степени влияния лекарственных веществ на изменения вязкости растворов высокомолекулярных соединений рассчитали величину х, показывающую кратность увеличения или уменьшения вязкости растворов высокомолекулярных соединений в присутствии изониазида и этамбутола гидрохлорида. Расчет проводили по формуле: А 7Ь А г] Х = - (7) где Аті - величина разности относительной вязкости изучаемых растворов высокомолекулярных соединений в присутствии лекарственных веществ и без них, концентрация которых равна 0,02 и 0,2 г/л; Ат2 - величина разности относительной вязкости изучаемых растворов высокомолекулярных соединений в присутствии лекарственных веществ и без них, концентрация которых равна 0,2 и 2,0 г/л.
Установлено, что наибольшее изменение вязкости растворов высокомолекулярных соединений в присутствии лекарственных веществ наблюдается для растворов, в которых высокомолекулярные соединения находится в пределах концентраций 0,02 - 0,2 г/л. Так, присутствие изониазида увеличивает Дт растворов БЦД, пектина, МЦ, ЫаКМЦ, КПН в 2,4; 3,0; 11,9; 44,0; 95,2 раза соответственно; а в концентрации растворов высокомолекулярные соединения более 0,2 г/л в случае с БЦД и крахмалом наблюдается резкое увеличение Ал в 3,2;] 8,9 раза соответственно. Этамбутола гидрохлорид, представляющий собой вторичный алифатический аминоспирт, влияет на вязкость растворов высокомолекулярные соединения иначе. Хотя аналогично изониазиду при малых концентрациях высокомолекулярных соединений наблюдается увеличение Дп соответственно в 51,6; 311,0; 376,1 раз в растворах МЦ; ПВС; БЦД, а при концентрации полимера более 0,2 г/л в случае с растворами NaKMU,, МЦ, БЦД, пектина значение Ап возрастает соответственно в 1,3; 1,5; 2,0; 205,2 раза. Исключением из общей зависимости является изониазид в растворах МЦ в концентрации 0,2 - 2,0 г/л, который уменьшает An в 3,14 раза. Только в растворах ПВП присутствие изониазида и этамбутола гидрохлорида влияет незначительно на вязкость полимера.
Выбор методов для количественного определения этамбутола гидрохлорида в гранулах
Около 0,45 г МС гранул (точная масса) помешают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 20-40 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной и перемешивают до полного растворения, после доводят до метки ОД М раствором кислоты хлористоводородной. 1 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят до метки ОД М раствором кислоты хлористоводородной и тщательно перемешивают. Оптическую плотность полученного раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 266 нм, относительно растворителя. Параллельно в тех же условиях измеряют оптическую плотность раствора СО изониазида. Содержание (X) изониазида в граммах в одном пакете гранул рассчитывают по формуле (8): Р - масса гранул в 1 пакете, в граммах Приготовление раствора СО изониазида. Около 0,15 г (точная масса) изониазида (ФС 42-11319-00) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 20 мл ОДМ раствор кислоты хлористоводородной, объем раствора доводят до метки тем же растворителем и перемешивают. Раствор устойчив в течение 3 часов. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора до метки ОДМ раствор кислоты хлористоводородной, перемешивают. Применяют свежеприготовленный раствор.
Сравнительная оценка методов количественного определения изониазида На этапе подготовки нормативных документов на новые лекарственные средства и при пересмотре их в дальнейшем необходимо провести валидационную оценку методик, предлагаемых в данных нормативных документах для качественного и количественного анализа, с целью определения обоснованности выбора этих методик. Валидационную оценку методик проводили в соответствии с проектом ОФС «Валидация фармакопейных методов» по таким характеристикам как специфичность, линейность, правильность (точность), воспроизводимость и др.
Как характеристику, оценивающую способность достоверно определять лекарственное вещество в присутствии вспомогательных веществ - определяли специфичность. Специфичность определяется при валидации методов идентификации лекарственных веществ, определения примесей, установления количественного содержания вещества, как в образце, так и в лекарственной форме. Для определения специфичности методик качественного и количественного анализа изониазида в предлагаемых гранулах использовали гранулы аналогичного состава, но не содержащие изониазид. В ходе эксперимента было доказано что, извлечения из гранул-плацебо приготовленных как описано в методиках качественного и количественного анализа в области спектра от 220 до 350 нм поглощения не имеют, либо имеют оптическую плотность в пределах ошибки прибора.
Линейная зависимость устанавливается на основании результатов испытаний, которые пропорциональны концентрации анализируемого вещества в образце в пределах аналитической методики. Для подтверждения линейности необходимо определить следующие параметры: коэффициент регрессии, угол наклона линии регрессии и др., для этого строили градуировочный график изониазида в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты.
По полученным данным строили градуировочный график (рисунок 6) и рассчитывали статистические характеристики, г - коэффициент корреляции или линейной регрессии, по которому в первом приближении можно судить о жесткости линейной зависимости. Чем ближе этот коэффициент к единице, тем менее случайна линейная зависимость. В аналитической химии в большинстве случаев используют линейные зависимости с коэффициентом корреляции г 0,98
В дальнейшем с использованием метода наименьших квадратов, рассчитывали свободный член линейной зависимости (а), угловой коэффициент линейной зависимости (b) и другие метрологические характеристики. Данные, полученные при расчетах, представлены в таблице 13.
Полученные значения позволяют утверждать, что данная зависимость вида у=Ьх+а имеет линейный характер, что позволяет использовать её для расчетов при количественном определении изониазида спектрофотометрическим методом. Правильность (точность) аналитического метода характеризует близость результатов испытаний, полученных данным методом, к истинному значению.
При количественном определении лекарственного вещества этот параметр может быть установлен путем применения аналитического метода к анализируемому объекту с использованием стандарта известной степени чистоты, или путем сравнения результатов, полученных предлагаемой методикой, и независимой методикой, точность которой известна. В случае количественного определения вещества в лекарственной форме правильность устанавливается по результатам ее применения к анализу МС, включающей все компоненты лекарственной формы.
Для определения правильности сравнивали методики спектрофотометрического определения и броматометрического титрования (таблица 14) Таблица 14 - Сравнительная оценка методов количественного определения изониазида Критерии Результаты спектрофотометрия броматометрия специфичность методика специфична методика специфична линейность 0,0135-0,0165 мг/мл 0,06-0,08 г/в пробе чувствительность 0,01мг/мл 0,0034 г/в пробе прецизиозность S=0,0030; є=±2,09% S=0,0021; є=±1,44% F(P,fl ,і2)табл.Р95%=10,97; Рвыч. 1,99 точность 1,выч.1,67;5=±0,37% г,выч.1,64;5=±0,34% t(P, г)таб.Р 95%=2,57
По полученным данным количественного содержания изониазида рассчитывали статистические показатели, такие как дисперсия, стандартное отклонение, доверительный интервал, относительную ошибку, критерий Стыодента и др.
Из приведенных значений таблицы 14 можно сделать вывод, что спектрофотометрическая методика является правильной точной и не уступает по этому показателю броматометрической методике, следовательно, ее можно использовать для количественного определения изониазида. Данные методики не отягощены систематической ошибкой, т.к. реализуется неравенство / t(P, f)
По приведенным в таблице 14 данным можно оценить такой показатель как воспроизводимость методики, который характеризует степень совпадения результатов индивидуальных испытаний при многократном ее использовании. При сравнении воспроизводимости двух методов необходимо рассчитывать критерий Фишера, который является отношением дисперсий первого (S ]) и второго (S2 ) методов при (S2! $?!), в данном случае реализуется неравенство F F(Р, fij" , что не позволяет сделать вывод о более высокой воспроизводимости того или иного метода ввиду недостаточного объема информации.
Разработка методик хроматографического анализа и контроля доброкачественности гранул изониазида с этамбутола гидрохлоридом
Полученные данные позволили предложить данную методику для определения посторонних примесей. Методики хроматографического анализа доброкачественности препаратов изониазида с этамбутола гидрохлоридом 1,5 г гранул встряхивают с 10 мл спирта 95% в течение 15 минут. 20 мкл (1000 мкг изониазида и 1000 мкг этамбутола гидрохлорида) надосадочной жидкости наносят на хроматографическую пластинку «Сорбфил» (ТУ 26-11-17-89) в виде полосы длиной 2 см. Рядом для проверки пригодности хроматографической системы в одну точку наносят 10 мкл раствора СО изониазида (10 мкг) и 10 мкл раствора СО этамбутола гидрохлорида (10 мкг). Пластинку высушивают на воздухе, помещают в камеру с системой растворителей: кислота уксусная ледяная - ацетон - спирт этиловый 95% - бензол - вода в соотношении (5:5:20:70:2) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт подвижной фазы дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе при комнатной температуре в течение 20 минут и просматривают в УФ свете при длине волны 254 нм, опрыскивают 0,2% раствором нингидрина в спирте этиловом 95% и нагревают в течение 5 минут при температуре от 100 до 105С. После проявления на хроматограмме должно наблюдаться не более двух пятен, находящихся на одном уровне с пятнами СО изониазида (Rf 0,45-0,55) и этамбутола гидрохлорида (Rf 0,20-0,30). Любое постороннее пятно не дошкно превышать по интенсивности СО этамбутола гидрохлорида (не более 1 % в препарате). Количество посторонних пятен - не более двух. На линии старта допускается пятно от нанесения пробы препарата.
Проверка пригодности хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия: на хроматограмме из общей точки нанесения СО изониазида (в 10 мкл раствора СО изониазида 10 мкг), СО этамбутола гидрохлорида (в 10 мкл раствора СО этамбутола гидрохлорида 10 мкг) четко видны 2 пятна. Rf изониазида должен быть от 0,45 до 0,55. Rf этамбутола гидрохлорида должен быть от 0,20 до 0,30
Таким образом, нами разработана методика хроматографического разделения изониазида, этамбутола гидрохлорида и продуктов деструкции в тонком слое сорбента, позволяющая в дальнейшем контролировать стабильность изониазида и этамбутола гидрохлорида в гранулах, кроме того, предложенную методику использовали и для подтверждения подлинности анализируемых веществ.
Стабильность является важным показателем качества лекарственных препаратов, поскольку обеспечивает сохранение их терапевтических или профилактических свойств в большинстве случаев в течение нескольких лет в процессе реализации и хранения. Проблема стабильности лекарственных средств и принципы установления сроков их годности возрастает по мере развития фармацевтического производства.
Целью наших исследований было изучение процессов деструкции изониазида в присутствии этамбутола гидрохлорида в предлагаемом лекарственном препарате -гранулах, а также установление сроков годности.
Разработанная методика была применена для контроля стабильности гранул в эксперименте определения сроков годности методом «ускоренного старения» и в естественных условиях. Так как первоначально в гранулах происходит деструкция этамбутола гидрохлорида, то посчитали возможным изучать кинетику разложения [57] только этамбутола гидрохлорида и влияние изониазида на процессы деструкции этамбутола. Для изучения кинетики разложения образцы препаратов были герметично упакованы в стеклянные флаконы и помещены в термостаты. Исследования проводили в изотермических условиях при температурах 40 и 60С. В качестве опытных образцов использовали 3 серии гранул, субстанцию этамбутола гидрохлорида. Контроль количественного содержания этамбутола гидрохлорида методом экстракционной фотометрии (гл. 3.2) представлен в таблицах 27,28.
