Содержание к диссертации
Введение
Глава I Обзор литературы 10
1.1 Анальгин и методы анализа его препаратов 10
1.1.1 Структурам свойства анальгина 10
1.1.2 Методы анализа анальгина 13
1.2 Дротаверина гидрохлорид и методы анализа его препаратов 26
1.2.1 Структура и свойства дротаверина гидрохлорида 27
1.2.2 Методы анализа дротаверина гидрохлорида 28
Экспериментальная часть
Глава II Объекты исследования, используемые реактивы и приборы 39
Глава III Установление подлинности анальгина и дротаверина гидрохлорида. другие показатели качества субстанций 41
3.1 Идентификация анальгина и дротаверина гидрохлорида 41
3.1.1 Спектральные методы анализа 41
3.1.2 Качественные реакции 48
3.2 Другие показатели качества субстанции 52
3.2.1 Растворимость 52
3.2.2 «Прозрачность раствора» и «Цветность раствора» 53
3.2.3 Температура плавления дротаверина гидрохлорида 56
Глава IV Количественное определение анальгина и дротаверина гидрохлорида 57
4.1 Количественное определение анальгина в субстанциях и однокомпонентных таблетированных лекарственных формах 57
4.1.1 Титриметрические методы анализа 57
4.1.2 Спектрофотометрическое определение анальгина в однокомпонентных таблетках 68
4.1.3 Использование метода ВЭЖХ для количественного определения анальгина в таблетках 71
4.1.4 Количественное определение анальгина в комбинированном препарате «Спалгин форте» 74
4.2 Дротаверина гидрохлорид 78
4.2.1 Титриметрическое определение содержания дротаверина гидрохлорида 79
4.2.2 Спектрофотометрическое и хроматографическое определение содержания дротаверина гидрохлорида в однокомпонентных таблетках 82
4.2.3 Определение дротаверина гидрохлорида в препарате «Спалгин форте» 90
Глава V Посторонние примеси анальгина и дротаверина гидрохлорида 96
5.1 Определение посторонних примесей в субстанции и однокомпонентных таблетках анальгина 96
5.1.1 Метод ТСХ 96
5.1.2 Метод ВЭЖХ 106
5.2 Дротаверина гидрохлорид 111
5.2.1 Анализ методом ТСХ 111
5.2.2 Метод ВЭЖХ 118
5.3 Определение посторонних примесей в комбинированном препарате «Спалгин форте» 121
Глава VI Количественное определение фенпивериния бромида в комбинированных препаратах 129
Выводы 134
Список использованной литературы 135
Приложения 151
- Методы анализа анальгина
- Спектральные методы анализа
- Спектрофотометрическое и хроматографическое определение содержания дротаверина гидрохлорида в однокомпонентных таблетках
- Определение посторонних примесей в комбинированном препарате «Спалгин форте»
Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Препараты спазмолитического и анальгезирующего действия широко используются в медицинской практике. Многие из них включают в себя такие действующие вещества, как анальгин и дротаверина гидрохлорид. На территории Российской Федерации зарегистрировано порядка 300 однокомпонентных и многокомпонентных препаратов для каждого из этих лекарственных веществ (в форме таблеток, инъекционных растворов, капсул), а также субстанций.
Изучение существующей нормативной документации показало, что имеются существенные различия в методиках анализа данной группы препаратов и разночтения в нормировании некоторых показателей, а в ряде случаев с помощью заявленных методик объективно оценить качество препаратов не представляется возможным.
Таким образом, вопрос унификации методик контроля качества субстанций и однокомпонентных таблетированных лекарственных форм является важным и актуальным. Кроме того, одним из основных стимулов проведения исследований в этой области послужила подготовка к выпуску ГФ XII издания.
Отечественные производители работают над созданием новых оригинальных комбинированных препаратов, содержащих в своем составе анальгин и дротаверина гидрохлорид. Одним из таких препаратов является недавно выпущенный на отечественный рынок препарат «СПАЛГИН форте» таблетки, покрытые оболочкой; в стадии разработки находится другой подобный препарат.
Появление новых комбинированных препаратов ведет к необходимости разработки методик контроля их качества для последующего включения в соответствующие проекты ФСП.
Таким образом, систематизация уровня требований, унификация существующих и разработка новых методик анализа однокомпонентных и многокомпонентных препаратов, содержащих анальгин и дротаверина гидрохлорид, является актуальной на данный момент проблемой.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящего исследования является оптимизация условий анализа субстанций и однокомпонентных таблетированных лекарственных форм анальгина и дротаверина гидрохлорида, а также разработка методик контроля качества комбинированного препарата «СПАЛГИН форте», позволяющих объективно оценить его по предписанным показателям. По результатам проведенных исследований подготовлена соответствующая нормативная документация.
Для достижения цели поставлены следующие задачи:
- изучение данных литературы и действующей нормативной документации на препараты, содержащие анальгин и дротаверина гидрохлорид
- сравнение аналитических методик и выбор оптимальных для осуществления контроля качества препаратов по различным показателям
- разработка аналитических методик для комбинированного препарата «СПАЛГИН форте» таблетки, покрытые оболочкой
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. На основе сравнительного изучения известных методик анализа субстанций и однокомпонентных таблетированных лекарственных форм анальгина и дротаверина гидрохлорида выбраны унифицированные условия контроля их качества, уточнены нормы для ряда показателей качества;
- проведен сравнительный анализ методик количественного определения анальгина и дротаверина гидрохлорида в субстанциях и однокомпонентных таблетированных лекарственных формах с привлечением процедуры валидации;
- выделена и охарактеризована основная примесь анальгина – 4-метиламиноантипирин - с целью использования в дальнейшем в качестве метчика при анализе чистоты препаратов анальгина хроматографическими методами;
- выбраны условия идентификации анальгина и дротаверина гидрохлорида при их совместном присутствии в препарате с использованием спектров поглощения в ультрафиолетовой и видимой области, а также цветных реакций;
- выбраны условия количественного определения анальгина и дротаверина гидрохлорида в комбинированном препарате «СПАЛГИН форте»;
- выбраны условия одновременного определения примесей анальгина и дротаверина гидрохлорида методом ТСХ в препарате «СПАЛГИН форте» таблетки, покрытые оболочкой.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. На основании результатов проведенных исследований разработаны проекты фармакопейных статей на субстанции анальгина и дротаверина гидрохлорида для последующего их включения в ГФ XII издания, проекты фармакопейных статей на таблетки анальгина и дротаверина гидрохлорида. Разработана и утверждена фармакопейная статья предприятия на новый отечественный комбинированный препарат «СПАЛГИН форте» таблетки, покрытые оболочкой.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации представлены на XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (апрель 2005), на конференции ИКЛС ФГУ «НЦ ЭСМП», посвященной памяти Чичиро В.Е. (Москва, 2006 г.), на заседании Секции №2 Ученого совета ФГУ «НЦ ЭСМП» Росздравнадзора (Москва, 2008г).
ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 10 работ.
СВЯЗЬ ИССЛЕДОВАНИЙ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Института стандартизации и контроля лекарственных средств по разработке и пересмотру нормативных документов для контроля качества, стандартизации и выпуска лекарственных средств из группы органических и неорганических соединений.
НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ следующие основные положения:
1. Результаты исследований по выбору методик подтверждения подлинности анальгина и дротаверина гидрохлорида в субстанциях, однокомпонентных таблетированных препаратах, а также препаратах, содержащих оба эти вещества
2. Результаты исследований по сравнению и выбору методик количественного определения анальгина и дротаверина гидрохлорида в субстанциях, однокомпонентных таблетированных лекарственных формах, а также разработке методик определения их содержания в комбинированном препарате «СПАЛГИН форте» таблетки, покрытые оболочкой.
3. Результаты исследований по выбору условий определения посторонних примесей в субстанциях анальгина и дротаверина гидрохлорида, их однокомпонентных таблетированных лекарственных формах и разработке методики одновременного определения примесей изучаемых лекарственных веществ в комбинированном препарате «СПАЛГИН форте»
4. Результаты исследований по изучению возможности экстракционно-фотометрического определения содержания фенпивериния бромида в модельной смеси, содержащей также анальгин и дротаверина гидрохлорид, с последующей апробацией на образцах разрабатываемого препарата аналогичного состава без использования в методике ядовитого вещества (калия цианида).
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа состоит из введения, общей характеристики работы, обзора литературы, пяти глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка использованной литературы и приложений. Работа изложена на 148 страницах машинописного текста, содержит 19 рисунков и 32 таблицы. Список использованных литературных источников включает 116 наименований, из них иностранных - 77.
Методы анализа анальгина
Методы анализа анальгина определяются его физико-химическими свойствами, в основном способностью к окислению, также применяются различные спектральные и хроматографические методы.
Окислительно-восстановительные реакции, как правило, используются для подтверждения подлинности анальгина, поскольку продукты окисления имеют характерное окрашивание в растворах. Кроме того, окислительно-восстановительная реакция лежит и в основе наиболее часто используемого метода количественного определения анальгина (йодометрическое титрование) [3, 6, 31, 32].
Цветные реакции
Для подтверждения подлинности анальгина чаще всего применяются следующие реакции:
1. Реакция с раствором хлорной извести в водной среде, подкисленной кислотой серной разведенной. Наблюдается появление голубой окраски, переходящей в зеленую, затем в желтую (используется для субстанций, таблеток и инъекционных растворов анальгина, №1, 5-27, 30-35, 37, 39, 41, 43, 45, 47-50, 53 Приложения 1)
Данная реакция используется абсолютным большинством отечественных производителей однокомпонентных лекарственных препаратов анальгина и значительной частью производителей стран СНГ и Балтии.
2. Реакция с концентрированной перекисью водорода, в результате которой в растворе образуется синее окрашивание, переходящее в красное через несколько минут (используется для субстанций, однокомпонентных и комбинированных таблетированных форм, № 2-4, 40, 74 Приложения 1) Реакция менее распространена, хотя достаточно наглядна, и используется преимущественно зарубежными производителями препаратов анальгина (около 8 % изученной документации).
3. Реакция с раствором йодата калия проводится с подкисленным спиртовым раствором анальгина. В результате наблюдается розово-красное окрашивание раствора, интенсивность окраски нарастает при прибавлении дополнительных порций раствора калия йодата, образуется коричневый осадок (используется для таблеток и суппозиториев анальгина, а также комбинированных таблетированных и инъекционных форм, № 36, 44, 46, 51, 52, 54, 56, 67-68, 71-72 Приложения 1). Реакция используется в основном зарубежными производителями и является довольно распространенной (около 15% рассмотренной документации)
4. Реакции с растворами железа окисного хлорида:
а) после нагревания раствора препарата в кислой среде (запах ангидрида сернистого, затем формальдегида) к охлажденной реакционной смеси прибавляют 30% раствор железа окисного хлорида, через 2 минуты появляется темно-красное окрашивание (применяется для субстанций, комбинированных препаратов, № 1, 28, 37, 38, 59, 115 Приложения 1).
Реакция используется отечественными и зарубежными производителями приблизительно в равной степени и частота использования ее в документах -порядка 10%.
б) к водному раствору препарата прибавляют несколько капель 10% раствора железа окисного хлорида. Появляется синее окрашивание, переходящее в красное, а затем в желтое (применяется для таблетированных форм — однокомпонентных и многокомпонентных, для инъекционных препаратов; № 37, 38, 51, 63 Приложения 1). Данный вариант проведения реакции менее распространен и используется отечественными и зарубежными производителями также приблизительно в равной степени (около 5 % изученной документации).
5. Реакция с 5% раствором хлорамина: в солянокислом растворе препарата после прибавления раствора хлорамина появляется синяя окраска, переходящая в розовую, а при нагревании - в желтую (используется преимущественно для определения подлинности анальгина в многокомпонентных препаратах в форме таблеток, инъекций и суппозиториев, № 65-66, 68-70, 77 Приложения 1). Реакция применяется зарубежными производителями (порядка 10% от изученных документов).
6. Менее распространена реакция с 0,1 % раствором натрия нитрита в водных растворах анальгина, подкисленных азотной кислотой (неустойчивое голубое окрашивание) с последующим добавлением 4,25% раствора серебра нитрата. При этом вновь появившаяся голубая окраска медленно переходит в желтую, происходит выделение металлического серебра (реакция включена в основном в импортные документы на субстанции, № 2-4, 40 Приложения 1, то есть, около 5% изученных документов).
7. Также к числу редко используемых реакций можно отнести реакцию с хромотроповой кислотой: к водному раствору анальгина прибавляют равный объем разведенной хлористоводородной кислоты, подогревают -фильтровальная бумага, смоченная раствором калия йодата в растворе крахмала, окрашивается в голубой цвет. После дальнейшего нагревания пробирку снимают с огня и вносят в нее каплю кислоты хромотроповой на кончике стеклянной палочки. Наблюдается голубое с фиолетовым оттенком окрашивание (максимально через 10 минут). Образование красителя подтверждает присутствие формальдегида в смеси [31] (реакция используется преимущественно для подтверждения подлинности субстанций в зарубежных НД, № 2, 3, 40 Приложения 1)
8. Другая мало распространенная реакция - с раствором п-диметиламинобензальдегида (20%) в серной кислоте и анальгином в водном растворе. При смешивании растворов появляется интенсивное желтое окрашивание (№ 63,74 Приложения 1).
Часто проводится разложение анальгина при нагревании с кислотами, причем используется это и как самостоятельная реакция подтверждения подлинности, и как промежуточная стадия для других реакций (4а). Кроме того, имеется ряд достаточно известных реакций, не вошедших ни в один нормативный документ [22, 32, 33, 35, 47]
Например:
9. К водному раствору анальгина прибавляют растворы феррицианида калия и хлорида окисного железа, в результате чего появляется изумрудно зеленое окрашивание и постепенно выпадает осадок.
10. Реакция с 5% раствором сульфата меди с образованием зеленой окраски.
11. К раствору анальгина в концентрированной серной кислоте добавляют 1 каплю азотной кислоты. Наблюдается красно-оранжевое окрашивание.
12. Обрабатывают препарат концентрированной азотной кислотой.
а) пробирку со смесью опускают на 1 минуту в кипящую водяную баню. Наблюдается желтое окрашивание
б) после охлаждения прибавляют 10 мл воды, подщелачивают раствором гидроксида натрия и извлекают амиловым спиртом. Конечный раствор — оранжевого цвета.
13. При попадании кристаллов анальгина в 0,5% раствор ванадата аммония в концентрированной серной кислоте наблюдается бледно-зеленое окрашивание.
Спектральные методы анализа
Особенности спектров в ИК, УФ и видимой области являются важными характеристиками рассматриваемых веществ.
Инфракрасные спектры исследуемых веществ снимают, как правило, в дисках с калия бромидом (1 мг препарата в 300 мг калия бромида) в области от 4000 до 400 см"1; при этом полученные спектры анальгина и дротаверина должны иметь полное совпадение полос поглощения с полосами спектров соответствующих стандартных образцов, либо имеющихся рисунков эталонных спектров.
В методиках получения инфракрасных спектров анальгина особых разночтений в различных НД не отмечено. Для дротаверина гидрохлорида предусмотрено также получение ИК-спектров в вазелиновом масле, однако это нецелесообразно, поскольку в данном случае прослеживается зависимость получаемых спектров от природы используемого вазелинового масла, спектр которого накладывается на спектр дротаверина гидрохлорида.
Кроме того, отмечается, что ИК-спектрах разных серий субстанций возможны различия, обусловленные способностью дротаверина гидрохлорида к полиморфизму [63]. В процессе исследований предпринимались попытки устранить указанные различия с помощью высушивания образцов до постоянной массы.
Для подтверждения подлинности дротаверина гидрохлорида в лекарственных формах ИК-спектры используются крайне редко и не используются вовсе для препаратов анальгина.
Таким образом, на основании сравнительного анализа существующих методик и результатов собственных исследований для подтверждения подлинности анальгина и дротаверина гидрохлорида методом ИК-спектроскопии выбраны следующие условия:
Инфракрасные спектры препаратов снимают в дисках с калия бромидом (1 мг препарата в 300 мг калия бромида) в области от 4000 до 400 см"1 . Дротаверина гидрохлорид перед проведением анализа должен быть высушен до постоянной массы при температуре 105 С.
Ультрафиолетовые спектры применяются для подтверждения подлинности как субстанций, так и лекарственных форм анальгина и дротаверина гидрохлорида.
Ультрафиолетовый спектр поглощения анальгина (как правило, 0,002 % раствор в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной) в области от 245 до 280 нм характеризуется максимумом при длине волны 258 нм ± 2 нм, а ультрафиолетовый спектр поглощения дротаверина гидрохлорида (0,0015 % раствор в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной) в области от 210 до 440 нм характеризуется максимумами при длинах волн 241 нм ± 2 нм, 302 нм ± 2 нм и 353 нм ± 2 нм и минимумами при 223 нм + 2 нм, 262 нм ± 2 нм и 322 нм ± 2 нм.
Спектры анальгина и дротаверина гидрохлорида в ультрафиолетовой и видимой области представлены на рисунках 3.1 и 3.2.
Учитывая вышеизложенное, для подтверждения подлинности субстанций анальгина и дротаверина гидрохлорида и их однокомпонентных препаратов выбраны следующие методики.
Субстанция анальгина: в области от 245 до 280 нм спектр поглощения 0,002% раствора анальгина в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты должен иметь максимум при длине волны 258 нм±2 нм
Таблетки анальгина: Ультрафиолетовые спектры растворов препарата и рабочего стандартного образца (РСО) анальгина в ОД М растворе кислоты хлористоводородной в области от 245 до 280 нм должны иметь максимум поглощения при одной и той же длине волны.
Испытуемый раствор. Около 0,11 г (точная навеска) порошка растертых таблеток помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют при встряхивании в 30 мл ОД М раствора кислоты хлористоводородной, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. Раствор фильтруют, отбрасывая первую порцию фильтрата.
1 мл фильтрованного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают.
Раствор РСО анальгина. Около 0,1 г (точная навеска) СО анальгина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл ОД М раствора кислоты хлористоводородной, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают.
1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора ОД М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают.
Субстанция дротаверина гидрохлорида: 0,0015% раствор субстанции дротаверина гидрохлорида в ОД М растворе кислоты хлористоводородной в области от 210 до 440 нм должен иметь максимумы при длинах волн 241 нм ± 2 нм, 302 нм ± 2 нм и 353 нм ± 2 нм. Минимумы должны наблюдаться при 223 нм ± 2 нм, 262 нм ± 2 нм и 322 нм ± 2 нм .
Таблетки дротаверина гидрохлорида: Спектры поглощения растворов препарата и РСО дротаверина гидрохлорида, приготовленных для количественного определения, в области от 210 до 420 нм должны иметь максимумы и минимумы при одних и тех же длинах волн.
Испытуемый раствор: Около 0,28 г (точная навеска) порошка растертых таблеток помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл ОД М раствора кислоты хлористоводородной и нагревают на водяной бане при встряхивании в течение 20 мин. Охлаждают, доводят объем раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают. Раствор фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата.
1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают.
Раствор РСО дротаверина гидрохлорида. Около ОД 6 г (точная навеска) СО дротаверина гидрохлорида помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 20 мл ОД М раствора кислоты хлористоводородной и нагревают на водяной бане при встряхивании до растворения. Охлаждают, доводят объем раствора ОД М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают.
1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора ОД М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают.
Установлено, что использование вышеописанных методик для подтверждения подлинности исследуемых веществ в комбинированном препарате «СПАЛГИН форте», таблетки, покрытые пленочной оболочкой, не представляется возможным в связи с частичным наложением спектров поглощения указанных веществ. Спектры растворов препарата, снятые в приведенных выше условиях представлены на рисунках 3.3 и 3.4.
Спектрофотометрическое и хроматографическое определение содержания дротаверина гидрохлорида в однокомпонентных таблетках
Количественное определение дротаверина гидрохлорида в готовых формах, как показано в обзоре литературы, также не отличается большим разнообразием методик: обычно используется спектрофотометрический метод (концентрация дротаверина гидрохлорида в растворе - 0,016мг/мл, среда — 0,1 М хлористоводородная кислота, измерение оптической плотности проводится при длине волны 353 нм). Имеются отдельные примеры использования ВЭЖХ. Поэтому нами проведен сравнительный анализ этих методик с привлечением процедуры валидации. Эксперименты проводились сначала на модельных смесях, которые готовились тем же способом, который описан в других разделах данной главы. Вспомогательные вещества, входящие в состав таблеток дротаверина: лактоза, крахмал картофельный, поливинилпирролидон, кросповидон, тальк, магния стеарат. Разброс навесок - исходя из норм содержания дротаверина гидрохлорида в одной таблетке (± 10%).
Спектрофотометрический метод
Нижний уровень - 0,072 г (0,0716-0,0725 г), средний - 0,08 г (0,076-0,085 г), верхний - 0,088 г (0,0876-0,0885 г).
Метод ВЭЖХ
Нижний уровень - 0,090 г (0,086-0,095 г), средний - ОД 00 г (0,096-0,105 г), верхний - 0,11 г (0,106-0,115 г)
Методики
Спектрофотометрический метод
Испытуемый раствор
Навеску дротаверина гидрохлорида (с учетом влаги в образце и его чистоты) помещают в мерную колбу объемом 100 мл, добавляют соответствующее количество смеси вспомогательных веществ, 50 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты и нагревают при периодическом встряхивании на водяной бане в течение 20 минут. Охлаждают, доводят до метки 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты, перемешивают и фильтруют. 1 мл фильтрата разводят до 50 мл 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты
Стандартный раствор
Около 0,16г (точная навеска) стандартного образца дротаверина гидрохлорида (в пересчете на 100% вещество) помещают в мерную колбу объемом 100 мл, прибавляют 20 мл 0ДМ раствора хлористоводородной кислоты и нагревают на водяной бане до растворения. Охлаждают, доводят до метки 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты.
1 мл полученного раствора разводят 0,1М раствором хлористоводородной кислоты до 100 мл.
Измеряют оптическую плотность стандартного и испытуемого растворов при длине волны 353 нм, используя в качестве раствора сравнения 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты.
Метод ВЭЖХ
Испытуемый раствор
Навеску дротаверина гидрохлорида помещают в мерную колбу объемом 50 мл, прибавляют соответствующее количество смеси вспомогательных веществ, 30 мл подвижной фазы и встряхивают в течение 15 минут, доводят тем же растворителем до метки, перемешивают и фильтруют.
Стандартный раствор
Около 0,1 г стандартного образца дротаверина гидрохлорида помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в подвижной фазе и доводят до метки тем же растворителем.
Условия определения
Хроматографическая колонка: Kromasil С18, 250x4,6 мм, 5мкм
Подвижная фаза: спирт метиловый - ацетонитрил - ацетатный буфер (8:48:44)
Скорость потока: 1 мл/мин
Детектор: спектрофотометрический, 254 нм
Объем пробы: 10 мкл
Ацетатный буфер: 10,88 г натрия ацетата растворяют в 500 мл воды, добавляют 30 мл кислоты уксусной ледяной и перемешивают. Доводят водой до 1 л.
Результаты экспериментов и их метрологические характеристики представлены в таблицах 4.17 и 4.18.
Полученные результаты были проверены на однородность с помощью критерия Qj и установлено, что они не отягощены грубой погрешностью (значение меньше табличного).
Зависимость между навеской испытуемого образца и оптической плотностью раствора (площадью основного пика на хроматограмме) в диапазоне измерения оценивалась с помощью непарного коэффициента корреляции, который был более 0,99 (гсфм=0,999957; гВэжх==0,999988), что свидетельствует о линейном характере этой зависимости.
Уравнения зависимости между навеской дротаверина гидрохлорида и оптической плотностью раствора (площадью пика дротаверина на хроматограмме) имеют вид:
Усфм = 4,6437х-0,0031
УВэжх=106235х- 31,699
Построением линий тренда для каждой из методик установлено отсутствие в них систематических погрешностей (Рис. 4.9).
Сравнение методик
Из проведенных экспериментов можно сделать вывод, что методы спектрофотометрии и ВЭЖХ могут с равным успехом применяться для количественного определения содержания дротаверина гидрохлорида в однокомпонентных таблетках (таблица 4.19).
Следует также отметить, что не во всех предварительно изученных НД при приготовлении стандартных растворов навеска РСО берется в пересчете на 100% дротаверина гидрохлорид, какой бы метод ни использовался для проведения количественного анализа препаратов. С учетом всех вышеизложенных фактов нами предложены следующие методики количественного определения дротаверина гидрохлорида.
Спектрофотометрический метод Испытуемый раствор:
Около 0,28 г (точная навеска) порошка растертых таблеток помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной и нагревают на водяной бане при встряхивании в течение 20 мин. Охлаждают, доводят объем раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают. Раствор фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата.
1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают.
Стандартный раствор:
Около 0,16 г (в пересчете на 100% вещество, точная навеска) дротаверина гидрохлорида помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 20 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной и нагревают на водяной бане при встряхивании до растворения. Охлаждают, доводят объем раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают.
1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают.
Измеряют оптическую плотность полученного раствора в максимуме поглощения при длине волны 353 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора РСО дротаверина гидрохлорида.
В качестве раствора сравнения используют 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной.
Определение посторонних примесей в комбинированном препарате «Спалгин форте»
Нами изучена возможность одновременного определения посторонних примесей анальгина и дротаверина гидрохлорида в препарате «СПАЛГИН форте таблетки, покрытые оболочкой» методом ТСХ.
В качестве основной выбрана подвижная фаза: бензол - метанол -раствор аммиака концентрированный (20:4:0,1), которая, как показано выше, пригодна для определения содержания примесей как дротаверина гидрохлорида, так и анальгина.
В качестве растворителя использовали хлороформ (применяемый в анализе посторонних примесей каждого индивидуального компонента препарата).
Хроматографирование хлороформного экстракта модельной смеси таблеток СПАЛГИН форте показало, что дротаверина гидрохлорид частично разрушается в растворе (в частности, возрастает содержание дротавералдина, Rf 0,58). Этот факт, вероятно, обусловлен влиянием анальгина, содержание которого в таблетке в 6 раз превышает содержание дротаверина гидрохлорида, и растворимость которого в хлороформе в присутствии дротаверина гидрохлорида улучшается.
Для проверки этой гипотезы были приготовлены хлороформные растворы смесей дротаверин-анальгин в следующих молярных соотношениях: 1:1; 1:0,5; 1:0,1. При этом с увеличением содержания анальгина в смеси на хроматограммах наблюдался рост интенсивности пятна cRfO,58.
Был также отмечен рост интенсивности пятна с Rf 0,58 (по сравнению с чистым дротаверином), но чёткой зависимости от количества сульфокомпоненты не наблюдалось.
С целью устранения описанного выше взаимного влияния компонентов рассмотрены различные способы обработки хлороформа и получения хлороформных растворов исследуемого препарата.
Использование безводного хлороформа не оказало существенного влияния на результаты хроматографирования - вид хроматограмм, полученных при применении коммерческого и безводного хлороформа одинаков; в случае использования хлороформа, насыщенного аммиаком, либо раствором сульфита натрия, общий вид хроматограммы также не изменялся.
При извлечении модельных смесей анальгина и дротаверина гидрохлорида в хлороформ из водного раствора с рН 8-9 результаты были сопоставимы с полученными при растворении навесок модельных смесей непосредственно в хлороформе, но при этом интенсивность пятна примеси дротавералдина несколько снижалась.
Оптимальные результаты были получены после обработки хлороформа раствором натрия гидроксида и натрия сульфитом.
Двумерное хроматографирование смеси анальгина и дротаверина гидрохлорида в выбранных условиях показало, что в процессе хроматографирования не происходит разрушения соединений. В результате первого хроматографирования отмечен рост интенсивности пятна примеси дротаверина гидрохлорида с Rf 0,58 (дротавералдин) по сравнению с аналогичным пятном на хроматограмме дротаверина гидрохлорида в чистом виде, при последующем хроматографировании в перпендикулярном направлении образования подобного пятна не наблюдалось.
Таким образом, качественный и количественный состав примесей под воздействием компонентов подвижной фазы не менялся.
В качестве веществ-свидетелей выбраны дротаверин и 4-аминоантигшрин, что обусловлено результатами исследований по определению чувствительности обнаружения соединений и, кроме того, доступностью указанных веществ, о чем упоминалось ранее.
Для более четкого отнесения примесей к анальгину или дротаверина гидрохлориду предпринимались попытки селективного определения примесей анальгина [21] с помощью реактива Эрлиха: помимо анальгина, 4-аминоантипирина (жёлтые пятна) и, через некоторое время, антипирина (розовые пятна) обнаруживалось пятно с Rf 0,58 (жёлтого цвета) и неизвестная примесь с Rf близким к Rf антипирина, но жёлтого цвета. Также пластины опрыскивались раствором хлорида железа (Ш), при этом кроме анальгина и его примесей обнаруживалось пятно с Rf 0,58.
Учитывая результаты этих исследований и условия детектирования, выбранные при определении примесей в субстанциях анальгина и дротаверина гидрохлорида, а также в их однокомпонентных таблетированных лекарственных формах, нами был использован просмотр хроматограмм в ультрафиолетовом свете при 254нм.
Было обнаружено также несколько пятен — до 6, незначительного размера и интенсивности между анальгином и дротаверином (исключая примеси анальгина), которые на рисунке не представлены.
На приготовленных модельных смесях изучено влияние вспомогательных веществ, входящих в состав исследуемых таблеток, на результаты определения содержания примесей в препарате. В результате проведенных исследований установлено, что вспомогательные вещества не мешают хроматографированию и обнаружению рассматриваемых соединений.
Полученные экспериментальные данные позволили предложить методику оценки содержания примесей в таблетках «СПАЛГИН форте», покрытых оболочкой, изложенную ниже.
Методика определения содержания посторонних примесей в препарате «СПАЛГИН форте» таблетки, покрытые оболочкой
Испытуемый раствор:
В делительную воронку помещают 5 мл хлороформа, 5 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида и 0,1 г натрия сульфита безводного и перемешивают в течение 1 минуты. После разделения слоев в делительную воронку помещают около 0,1г порошка растертых таблеток, встряхивают в течение 30 секунд и оставляют до разделения слоев. Нижний слой отделяют и анализируют (содержит около 2,5 мг/мл дротаверина гидрохлорида и следовые количества анальгина).
Растворы веществ-свидетелей:
Для дротаверина гидрохлорида
0,05г дротаверина гидрохлорида растворяют в хлороформе и доводят тем же растворителем до 100 мл. 2,5 мл (СОВС 1), 1,5 мл (СОВС 2) и 0,75 мл (СОВС 3) полученного раствора разбавляют хлороформом до 10 мл. Для анальгина
0,03г 4-аминоантипирина растворяют в 100мл хлороформа в мерной колбе. 5мл полученного раствора разбавляют хлороформом до 10мл (СОВС 1) или до 20мл (СОВС 2).
На линию старта хроматографической пластинки наносят по 20 мкл растворов СОВС дротаверина гидрохлорида в хлороформе (2,5, 1,5 и 0,75 мкг в пятне). Рядом наносят по 20 мкл растворов СОВС 4-аминоантипирина в хлороформе (6, 3 и 1,5 мкг/пятно), затем - 20 мкл свежеприготовленного испытуемого раствора (около 50 мкг дротаверина гидрохлорида и эквивалент 300 мкг анальгина).
