Содержание к диссертации
Введение 6
Глава 1. Современное состояние исследований по изучению подрода Dracunculus Bess. (Обзор литературы)
1.1. Современное состояние исследований по изучению рода Полыни {Artemisia L.)
1.2. Основные направления применения растений подрода Dracunculus Bess, в народной и научной медицине
1.2.1. Применение полыни подрода Dracunculus в народной медицине
1.2.2. Эспериментальные данные по применению полыней подрода Dracunculus
1.3. Химический состав полыней подрода Dracunculus 20
1.4. Ботаническая и фармакогностическая характеристика полыни эстрагон - Artemisia dracunculus L.)
1.4.1. Историческая справка 25
1.4.2. Ботаническое описание и культивирование 27
1.4.3. Изучение анатомического строения растения Artemisia dracunculus L.
1.4.4. Химический состав травы полыни эстрагон 31
1.4.5. Применение полыни эстрагон в народной медицине 37
1.4.6. Фармакологические свойства полыни эстрагон и препаратов на ее основе
Выводы к обзору литературы 44
Экспериментальная часть 45
Глава 2. Характеристика объектов и методов исследования 45
2.1. Объекты исследования 45
2.2 Методы исследования 46
Методы морфолого-анатомического исследования 46
Технологические методы 50
Метод ТСХ-анализа 50
Метод колоночной хроматографии 52
Метод спектрофотометрии 52
Метод ВЭЖХ 53
Метод ГЖХ 53
Методы установления структуры выделенных веществ 54
Методы микробиологического исследования 55
Глава 3. Фармакогностическое изучение травы полыни эстрагон
Морфолого-анатомическое исследование травы полыни эстрагон
Сравнительный ТСХ-анализ различных органов травы полыни эстрагон
Сравнительный ТСХ-анализ травы полыни эстрагон по фазам вегетации.
Сравнительный ТСХ-анализ образцов травы полыни эстрагон из различных мест произрастания
Сравнительная хроматографическая характеристика изученных веществ травы полыни эстрагон
Выделение веществ из травы полыни эстрагон (тархун), культивируемой в Самарской области.
Установление строения и идентификация фенольных соединений, выделенных из травы полыни эстрагон
Выводы к главе 3 99
Глава 4. Стандартизация лекарственного растительного сырья - травы полыни эстрагон
Разработка методик качественного анализа травы полыни эстрагон
Количественное определение содержания суммы флавоноидов в траве полыни эстрагон методом спектрофотометрии
Исследование травы полыни эстрагон методом ВЭЖХ 111
Выводы к главе 4 119
Глава 5. Стандартизация препаратов полыни эстрагон. 120
Обоснование технологии получения препарата полыни эстрагон - "Полыни эстрагон настойка"
Качественный анализ препаратов (настой, настойка) и эфирного масла полыни эстрагон
Количественное определение суммы флавоноидов в препаратах (настое и настойке) полыни эстрагон.
Изучение эфирного масла полыни эстрагон методом ГЖХ 134
Научное обоснование целесообразности использования в медицинской практике настоя и настойки полыни эстрагон
1. Изучение антимикробной активности препаратов полыни эстрагон
2. Изучение противогрибковой активности препаратов полыни эстрагон
3. Изучение острой токсичности препаратов полыни эстрагон 151
4. Опыт клинических наблюдений применения настоя полыни эстрагон
5. Фармакоэкономическое обоснование целесообразности применения препаратов полыни эстрагон в медицинской практике
Выводы к главе 5 155
Глава 6. Разработка нормативной документации на сырье "Полыни эстрагон трава " и препарат " Полыни эстрагон настойка"
1. Разработка проекта ФС "Полыни эстрагон трава" 157
2. Разработка проекта ФСП "Полыни эстрагон настойка" 168
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ 173
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 175
ПРИЛОЖЕНИЕ 199
Введение к работе
Актуальность темы: На сегодняшний день, несмотря на наличие широкого ассортимента антимикробных препаратов, важной задачей является поиск новых противомикробных лекарственных средств растительного происхождения. Данная проблема является особенно актуальной на фоне того обстоятельства, что возможности химиотерапевтических препаратов не всегда реализуются в полной мере. Это связано с образованием штаммов микроорганизмов, устойчивых к антибиотикам и другим антимикробным синтетическим средствам. Учитывая тот факт, что доля антимикробных лекарственных средств растительного происхождения, представленных на фармацевтическом рынке РФ, составляет лишь 11 %, представляется актуальным поиск новых сырьевых источников для производства фитопрепаратов.
Одним из перспективных лекарственных растений с точки зрения проявления противомикробных свойств является полынь эстрагон или тархун (Artemisia dracunculus L., сем. Asteraceae). Литературные данные о фитохимических и фармакологических исследованиях, опыт использования этого растения в народной медицине свидетельствуют о возможностях применения полыни эстрагон в современной медицине в качестве антимикробного, противовоспалительного, ранозаживляющего, общеукрепляющего и улучшающего пищеварение средства.
По данным отечественных и зарубежных ученых о химическом составе, в траве полыни эстрагон содержатся следующие группы биологически активных веществ: флавоноиды, фенилпропаноиды, эфирное масло, кумарины, которые обусловливают противовоспалительное, антимикробное, регенерирующее действие растения. Исходя из различий литературных данных относительно флавоноидного состава надземной части полыни эстрагон, представляется целесообразным проведение изучения флавоноидного состава травы полыни эстрагон с целью уточнения химического состава исследуемого растения, а также разработки нормативной документации на новый вид лекарственного растительного сырья "Полыни эстрагон трава".
С учетом имеющейся в Самарской области промышленной сырьевой базы (Средне-Волжская ЗОС ВИЛАР) полыни эстрагон, а также потребности практического здравоохранения в эффективных, безопасных и доступных по себестоимости растительных антибактериальных препаратах проведены исследования по разработке новых лекарственных средств на основе сырья данного растения.
В ходе исследований нового вида лекарственного растительного сырья (ЛРС) и создания на его основе нового отечественного антимикробного средства "Полыни эстрагон настойка" возникла необходимость в разработке объективных методик качественного и количественного анализа, подходов к стандартизации травы полыни эстрагон и препарата на ее основе с целью разработки нормативной документации на лекарственный препарат полыни эстрагон - ФСП "Полыни эстрагон настойка".
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является фармакогностическое изучение травы полыни эстрагон, разработка методик качественного и количественного анализа сырья и препаратов данного растения.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
1. Провести фармакогностическое изучение ЛРС.
2. Изучить химический состав травы полыни эстрагон, культивируемой в Самарской области.
3. Выделить вещества (флавоноиды, фенилпропаноиды, фенолкарбоновые кислоты) из травы полыни эстрагон, культивируемой в Самарской области.
4. Разработать методики качественного анализа сырья и препаратов полыни эстрагон.
5. Разработать методики количественного определения пиноцембрина и суммы флавоноидов в сырье и препаратах полыни эстрагон с использованием метода ВЭЖХ и метода спектрофотометрии .
6. Изучить антимикробную активность лекарственных препаратов на основе полыни эстрагон.
7. Разработать нормативную документацию на траву полыни эстрагон и настойку полыни эстрагон - ФС "Полыни эстрагон трава", ФСП "Полыни эстрагон настойка".
Научная новизна: В результате изучения химического состава травы полыни эстрагон (Artemisia dracunculus L., сем. Asteraceae), культивируемой в Самарской области, впервые выделены и идентифицированы 8 индивидуальных веществ, три из которых (эстрагонозид, тархунозид и аннагенин) выделены впервые. Для установления структуры и определения физико-химических свойств выделенных соединений были использованы методы УФ- , Н-ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии, а также различные химические превращения.
Показана целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов полыни эстрагон по содержанию эфирного масла (трава) и по содержанию флавоноидов (трава, настойка).
На основе углубленного изучения химического состава сырья и с учетом методологических подходов к выделению целевой группы действующих веществ выполнены фотохимические и аналитические исследования по разработке нового лекарственного средства "Полыни эстрагон настойка". Разработаны унифицированные методики качественного и количественного анализа сырья "Полыни эстрагон трава" и нового лекарственного препарата на основе изучаемого растения "Полыни эстрагон настойка" с использованием методов тонкослойной хроматографии (ТСХ-анализ) и дифференциальной спектрофотометрии. Практическая значимость:
1. Разработаны методики качественного и количественного анализа нового лекарственного растительного сырья - травы полыни эстрагон с использованием методов ТСХ-анализа и дифференциальной спектрофотометрии.
2. Разработаны методики качественного и количественного анализа нового лекарственного препарата "Полыни эстрагон настойка" с использованием методов ТСХ-анализа и дифференциальной спектрофотометрии.
3. Обоснована целесообразность применения травы полыни эстрагон и настойки полыни эстрагон в медицинской практике в качестве антимикробного, регенерирующего лекарственного препарата.
4. Разработаны проекты нормативной документации - ФС "Полыни эстрагон трава" и ФСП "Полыни эстрагон настойка".
5. Результаты исследований используются в научных исследованиях и в учебном процессе на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Самарского государственного медицинского университета (СамГМУ) (акты внедрения от 20.10.03).
6. Полынь эстрагон как лекарственное растение, содержащее эфирное масло, включено в программу по фармакогнозии с основами фитотерапии (2001 г.), используемую в учебном процессе кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии СамГМУ [68].
Положения, выдвигаемые на зашиту:
1. Результаты изучения химического состава травы полыни эстрагон методами ТСХ-анализа, колоночной хроматографии, ВЭЖХ, ГЖХ, УФ-, Н-ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии.
2. Данные исследований по разработке подходов к стандартизации сырья и препаратов полыни эстрагон.
3. Методики качественного и количественного анализа сырья "Полыни эстрагон трава" и нового лекарственного препарата "Полыни эстрагон настойка".
Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Самарского государственного медицинского университета (№ Государственной регистрации 01200105332) и Республиканских программ:
1. "Совершенствование лекарственного обеспечения населения и лечебно-профилактических учреждений в рыночных условиях" по теме: "Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепатопротекторного действия" (№ Государственной регистрации 01990005277).
2. "Разработка методик качественного и количественного анализа сырья и препаратов лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды и флавоноиды" (№ Государственной регистрации 01990007536).
Апробация работы и публикации: Основные положения работы доложены и обсуждены на 2-ой Международной конференции молодых ученых и студентов "Актуальные проблемы современной науки" (Самара, 2001); на Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием "Санкт-Петербургские научные чтения - 2001" (Санкт-Петербург, 2001); на конференции молодых исследователей "Аспирантские чтения - 2001" (Самара, 2001); на VII Всероссийском Конгрессе "Экология и здоровье человека" (Самара, 2001); на Межрегиональной конференции молодых ученых медицинских и фармацевтических вузов "Аспирантские чтения - 2002" (Самара, 2002); на Первой Астраханской областной научно-практической конференции "Лекарство и здоровье человека" (Астрахань, 2002); на VIII Международном конгрессе "Актуальные проблемы экологии человека" (Самара, 2002); на VI Международном съезде "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения" (Санкт-Петербург, 2002); на Всероссийской конференции "Молодые ученые - медицине" - Аспирантские чтения - 2003 (Самара, 2003); на 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии "Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции" (Пятигорск, 2003).
Основное содержание диссертации опубликовано в 20 научных работах.
Объем и структура работы: Диссертационная работа изложена на 198 страницах машинописного текста, содержит 39 таблиц, 36 рисунков. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, описания объектов и методик исследования, 4-х глав, отражающих результаты собственных экспериментальных исследований и их обсуждение, общих выводов, приложения и списка литературы, включающего 231 источник, из которых 52 - на иностранных языках.
Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, отмечена новизна и практическая значимость полученных результатов, а также изложены положения, выносимые на защиту.
Глава 1 содержит аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы по проблеме современного состояния исследований растений рода Полынь - Artemisia, где подробным образом рассматривается малоизученный подрод Dracunculus и также его перспективный представитель полынь эстрагон - Artemisia dracunculus L. Обобщены и систематизированы сведения по изучению химического состава растений подрода Dracunculus, в том числе полыни эстрагон, их фармакологической активности и применению в медицинской практике.
В главе 2 представлены характеристика объектов и методов исследования. Приведены методики химического и физико-химического изучения лекарственного сырья, индивидуальных веществ и препаратов, контроля качества травы полыни эстрагон и настойки полыни эстрагон, изучения антимикробной активности лекарственных форм на основе травы полыни эстрагон, фармакоэкономических исследований.
В главах 3-6 экспериментальной части приводятся результаты собственных исследований по изучению химического состава травы полыни эстрагон, разработке методов качественного и количественного анализа сырья полыни эстрагон и препарата на ее основе. Дано экономическое обоснование применения в медицинской практике препаратов полыни эстрагон, а также результаты проведенных маркетинговых исследований. Приведены собственные результаты разработки нормативной документации на новый вид лекарственного растительного сырья - траву полыни эстрагон и на новую лекарственную форму - настойку полыни эстрагон.
В приложение вынесены проекты нормативной документации на ЛРС и настойку полыни эстрагон (проекты ФС и ФСП), акты внедрения.
Результаты, полученные при проведении исследований, обработаны статистически и представлены в таблицах, на рисунках, выражены в соответствующих формулах, которые приведены в тексте диссертации.
