Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Триметазидина дигидрохлорид. Фармакологическая активность. Способы получения и анализа
1.1 Современные лекарственные препараты для профилактики и лечения заболеваний сердечнососудистой системы
1.2 Структура, источники получения, свойства триметазидина дигидрохлорида
1.3 Методы анализа триметазидина дигидрохлорида 18
Выводы по обзору литературы 21
II Экспериментальная часть
Список сокращений 22
Объекты и методы исследования 23
Глава 2 Использование метода УФ-спектрофотометрии для стандартизации триметазидина дигидрохлорида в лекарственных препаратах
2.1 Разработка оптимальных условий анализа триметазидина дигидрохлорида методом УФ-спектрофотометрии
2.1.1 Потенциометрическое определение константы ионизации триметазидина дигидрохлорида
2.1.2 Изучение спектральных характеристик триметазидина дигидрохлорида
2.1.3 Изучение влияния вспомогательных веществ на спектр поглощения триметазидина дигидрохлорида в таблетках
2.1.4 Использование УФ - спектрофотометрии для идентификации и количественного определения триметазидинадигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой
2.1.5 Валидация методики количественного определения 40
УФ - спектрофотометрическим методом триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой
2.2 Использование УФ - спектрофотометрии для определения однородности дозирования триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой
2.3 Использование УФ - спектрофотометрии для проведения испытания «Растворение» триметазидина дигидрохлорида таблеток, покрытых оболочкой
Выводы по главе 2 47
Глава 3 Разработка методик стандартизации триметазидина дигидрохлорида в таблетках хроматографическими методами
3.1 Совершенствование методики идентификации триметазидина дигидрохлорида в таблетках с помощью метода тонкослойной хроматографии
3.2 Выбор условий ВЭЖХ для качественного и количественного анализа триметазидина в лекарственных препаратах
3.3 Разработка методики определения посторонних примесей методом ВЭЖХ
3.4 Валидационная оценка методик определения количественного содержания и постороних примесей триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, методом ВЭЖХ
3.5 Разработка методики определения однородности дозирования триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой
3.6 Разработка методик стандартизации триметазидина в шипучих таблетках методом ВЭЖХ 87
1 Определение распадаемости и рН раствора шипучих таблеток. Разработка методики подлинности и количественного определения триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках методом ВЭЖХ и ее валидационная оценка
2 Испытание на однородность дозирования 90 триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках методом ВЭЖХ
3 Разработка методики определения посторонних примесей триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках методом ВЭЖХ и ее валидация
Изучение стабильности лекарственных препаратов триметазидина дигидрохлорида и установление сроков годности
1 Изучение стабильности триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, и установление сроков годности
2 Изучение стабильности триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках, выбор стабилизатора и установление сроков годности
Выводы по главе 3 101
Изучение биофармацевтических параметров триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках и воспроизведенных таблетках
Использование теста «Растворение» для изучения фармацевтической эквивалентности триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой
Изучение условий экстракции триметазидина дигидрохлорида из водных растворов
1 Расчет основных констант, характеризующих процесс экстрагирования исследуемого вещества 112
2 Обоснование выбора массы навески биологического 113
объекта
Изолирование триметазидина дигидрохлорида из биологических жидкостей
1 Изолирование и определение триметазидина дигидрохлорида в моче
2 Изолирование и определение триметазидина дигидрохлорида в плазме крови
Фармакокинетическое исследование триметазидина дигидрохлорида в таблетках
Выводы по главе 4 129
Общие выводы 131
Литература 133
- Структура, источники получения, свойства триметазидина дигидрохлорида
- Потенциометрическое определение константы ионизации триметазидина дигидрохлорида
- Выбор условий ВЭЖХ для качественного и количественного анализа триметазидина в лекарственных препаратах
- Изучение стабильности триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках, выбор стабилизатора и установление сроков годности
Введение к работе
Актуальность темы. Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) называют эпидемией XX века, которая, к сожалению, продолжается и в XXI веке. По данным Всемирной организации здравоохранения, ежегодно в мире от сердечнососудистых заболеваний умирает около 12 млн. человек. Социальную значимость проблемы усиливает наблюдающаяся тенденция к возникновению инсультов и инфарктов у лиц молодого возраста.
Как правило, возникновение ССЗ провоцирует увеличение числа факторов, вызывающих образование свободных радикалов: курение, артериальная гипертония, гиперхолестеринемия, злоупотребление алкоголем, избыточная масса тела, наследственная предрасположенность. Поэтому одним из направлений фармацевтической химии и фармакологии является поиск лекарственных препаратов уменьшающих или устраняющих повреждающее действие свободных радикалов на нейроны и кардиомиоциты.
Одним из лекарственных препаратов этого направления является предуктал (триметазидина дигидрохлорид или 1-[(2,3,4 - триметоксифенил) - метил] -пиперазина дигидрохлорид), созданный в лабораториях фирмы «Сервье» во Франции.
На базе этого лекарственного средства в России налажено производство таблеток триметазидина дигидрохлорида. Однако, выпускаемого количества триметазидина дигидрохлорида явно недостаточно. Для расширения производства лекарственного препарата фирма «Максфарм» приступила к разработке таблеток триметазидина дигидрохлорида, покрытых оболочкой. Кроме того, известны положительные результаты исследований эффективности триметазидина дигидрохлорида при острой ишемии мозга и сердца, свидетельствующие о возможности разработки лекарственного препарата с более высокой биодоступностью, в том числе шипучих таблеток [Смирнов А.В. и соавт.,1998 г; Пархоменко А.Е. и соавт., 1996 г, 2001 г; Реброва Т.Ю. и соавт., 2004 г; Терещенко С.Н. и соавт., 2006 г].
Для внедрения указанных новых технологий необходимо на основе результатов исследований физико-химических свойств основного компонента
и вспомогательных веществ обосновать состав лекарственных форм, теоретически и практически подтвердить возможность стандартизировать разработанные лекарственные средства аналитическими методами.
Кроме того, необходимо разработать методики анализа триметазидина дигидрохлорида в биологических жидкостях, которые позволят установить его фармакокинетические характеристики и определить биоэквивалентность новых лекарственных препаратов по отношению к оригинальному зарубежному препарату.
Поэтому разработка методик анализа триметазидина дигидрохлорида для установления норм качества новых лекарственных препаратов и определения его в биологических жидкостях является актуальной задачей фармацевтической науки и практики.
Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является разработка методик анализа новых лекарственных препаратов (генериков) триметазидина дигидрохлорида с целью стандартизации и определения его в биологических жидкостях.
Реализация поставленной цели возможна при решении следующих задач:
-усовершенствовать или разработать методики определения подлинности триметазидина дигидрохлорида в предложенных лекарственных препаратах;
-усовершенствовать или разработать новые методики количественного определения триметазидина дигидрохлорида в таблетках, методики определения однородности дозирования в таблетках, покрытых оболочкой, и в шипучих таблетках по 0,02 г и провести их валидацию. Исследовать разработанные лекарственные препараты по тесту «Растворение»;
-разработать методики контроля чистоты и стабильности триметазидина дигидрохлорида в предлагаемых лекарственных препаратах;
-установить сроки годности лекарственных препаратов;
-разработать методики определения триметазидина дигидрохлорида в биологических жидкостях, провести фармакокинетические исследования созданных лекарственных препаратов;
-подготовить проекты Фармакопейных статей предприятия (ФСП) на
предлагаемые лекарственные препараты триметазидина дигидрохлорида.
Научная новизна. На основании изучения химических и физико-химических свойств триметазидина обоснованы оптимальные условия УФ -спектрофотометрического, хроматографического анализа триметазидина дигидрохлорида в разработанных лекарственных препаратах и оптимальные условия изолирования и определения триметазидина дигидрохлорида в биологических жидкостях.
Для идентификации, определения количественного содержания и однородности дозирования триметазидина дигидрохлорида в таблетках найдены оптимальные условия УФ - спектрофотометрического анализа. В соответствии с найденными значениями констант ионизации показано, что оптимальным растворителем является 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной, что позволяет исключить используемый для этой цели в нормативной документации спирт метиловый.
Установлены основные параметры хроматографического поведения: чувствительность, значения Rf, сорбент триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, методом тонкослойной хроматографии.
Найдены оптимальные условия идентификации, определения количественного содержания триметазидина дигидрохлорида и его посторонних примесей в таблетках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В результате проведенной валидационной оценки методик установлено наличие высокой воспроизводимости, точности, отсутствие систематической ошибки.
С помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии изучена стабильность триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках. Обоснован новый состав лекарственного препарата - триметазидина дигидрохлорида шипучие таблетки по 0,02 г. Показано, что триметазидина дигидрохлорид стабилен в шипучих таблетках в течение 1,5 лет при использовании в их составе лимонной кислоты и натрия гидрокарбоната в соотношении 1:0,9.
Методом математического планирования эксперимента (латинский квадрат) установлено влияние на процесс изолирования триметазидина дигидрохлорида
методом жидкость-жидкостной экстракции из водных растворов значения рН среды и природы органического растворителя. Установлены закономерности экстракции триметазидина дигидрохлорида, позволяющие рассчитать коэффициент распределения, степень экстракции, объем органического растворителя и число экстракций, необходимых для максимального извлечения лекарственного вещества из биологической жидкости.
Разработаны методики определения триметазидина дигидрохлорида в биологических жидкостях (кровь, моча). Для триметазидина дигидрохлорида в таблетках рассчитаны основные фармакокинетические параметры, подтверждено увеличение биодоступности триметазидина дигидрохлорида из шипучих таблеток по сравнению с предукталом на 18,6%.
Установлено методом in vitro и in vivo, что триметазидина дигидрохлорида таблетки, покрытые оболочкой, фармацевтически эквивалентны и биоэквивалентны по отношению к оригинальному лекарственному препарату.
Практическая значимость результатов исследований. В результате исследования разработаны методики идентификации, определения посторонних примесей, однородности дозирования и количественного определения
предлагаемых лекарственных препаратов триметазидина дигидрохлорида физико-химическими методами. Методики характеризуются простотой выполнения, экспрессностью, высокой чувствительностью и позволяют достоверно оценивать качество исследуемых лекарственных препаратов.
Методами «ускоренного старения» и хранения в естественных условиях определен срок годности триметазидина дигидрохлорида таблеток, покрытых оболочкой - 3 года.
Результаты экспериментальных исследований использованы в подготовке Фармакопейных статей предприятия на предлагаемые лекарственные препараты.
Внедрение результатов исследования в практику. Работа выполнялась по договору от 01.12.2001 г. с ОАО «Максфарм» г. Рязань. По результатам исследований разработаны проекты фармакопейных статей предприятия и пояснительные записки на шипучие таблетки триметазидина дигидрохлорида и таблетки, покрытые оболочкой.
Проект ФСП на таблетки триметазидина дигидрохлорида 0,02 г, покрытые оболочкой, передан заказчику ОАО «Максфарм» (акт внедрения от 11.01.2007 г.). Основные положения, выдвигаемые на защиту.
Определение константы ионизации позволяет обосновать оптимальный растворитель (0,1 М раствор кислоты хлористоводородной) для спектрофотометрического анализа триметазидина дигидрохлорида.
Найденные условия анализа методом ВЭЖХ можно использовать для подтверждения подлинности триметазидина дигидрохлорида в исследуемых лекарственных препаратах, а также при определении его количественного содержания и возможных продуктов деструкции.
Оптимальные условия экстракции триметазидина дигидрохлорида из водных растворов, обоснованные методом «латинского квадрата», позволили разработать методики для определения его в крови и моче.
4. Триметазидина дигидрохлорида таблетки, покрытые оболочкой,
фармацевтически эквивалентны и биоэквивалентны по отношению к
оригинальному лекарственному препарату. Биодоступность таблеток шипучих
превышает биодоступность предуктала на 18,6%.
Апробация и публикация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены на 58-62 региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава» (г. Пятигорск 2003-2007 гг.).
По материалам диссертации опубликовано 11 работ. Из них одна работа в журнале, рекомендованном ВАК России.
Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава», номер государственной регистрации 01.200101060.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 169 страницах машинописного текста, содержит 42 таблицы, 34 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, 4-х глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 116 источников, в том числе 19 иностранных, и приложений.
Структура, источники получения, свойства триметазидина дигидрохлорида
По химическому строению триметазидина дигидрохлорид это - 1 -[(2, 3, 4 триметоксифенил) - метил] - пиперазина дигидрохлорид (C14H22CI2N2O3) (рисунок 1).
Субстанция представляет собой кристаллический порошок белого цвета,очень легко растворим в воде, умеренно растворим в спирте и нерастворим в хлороформе, эфире диэтиловом. Молекулярная масса: 339,14 [112]. Существует несколько источников получения триметазидина дигидрохлорида.
Триметазидина дигидрохлорид и его продукты превращения синтезирован триметазидин дигидрохлорид при использовании в качестве исходного продукта 2,3,4-триметоксибензальдегида [36].
В настоящее время Государственный научный центр «НИОПИК» предложил новую технологию субстанции триметазидина дигидрохлорида, основанную на использовании в качестве исходного продукта 1,2,3-триметоксибензола и нового катализатора (палладированного угля) восстановительного аминирования. Авторами упрощен технологический процесс, позволяющий исключить применение органических растворителей и снизить себестоимость субстанции [66].
В субстанции триметазидина дигидрохлорида могут находиться продукты полусинтеза или продукты деструкции при нарушении норм хранения (рисунок 1). При этом у веществ №2 и №5 в положениях 1-4, могут присоединяться различные радикалы (№2 — R = СН3 или СООСгН5; №5 - Rj = R4 =R2 = R3 = Н или ОСНзНПО].
В молекуле основания триметазидина имеется третичная аминогруппа, которая обуславливает основные свойства и реакционную способность со многими осадительными реактивами [67].
Наличие бензольного кольца и метокси-групп свидетельствует о возможности использования специальных реактивов для идентификации данного ЛС. В литературе описана возможность использования реактивов Манделина и Марки для этих целей [112].
Для идентификации триметазидина дигидрохлорида в таблетках предуктала (НД 42-2855-00) и в субстанции [ПО] используют метод тонкослойной хроматографии (ТСХ). Анализ проводят на стеклянных пластинках, покрытых силикагелем с флуоресцирующей добавкой «Merk 60F 254», в системе растворителей: спирт этиловый 95% — раствор аммиака концентрированный (8:2). Проявитель — УФ свет при длине волны 254 нм, с последующим проявлением реактивом Драгендорфа или йодоплатиновым реактивом. Кроме того, описаны также системы растворителей (метод ТСХ): спирт метиловый - раствор аммиака I t концентрированный (100:1,5); гексан - толуол - диэтиламин (75:15:10); хлороформ - спирт метиловый (90:10), где Rf пятна триметазидина дигидрохлорида на хроматограмме после проявления йодоплатиновым реактивом представлено следующими значениями: 0,22; 0,05; 0,04 соответственно [112]. Данные хроматографические системы обладают малой разделительной способностью, так как вещество находится очень близко к линии старта.
По литературным данным и НД 42-0047239302 для установления подлинности субстанции также используется метод ИК-спектрофотометрии [68, 69, 112].
Имеются сведения, что для идентификации субстанции триметазидина дигидрохлорида можно применять метод масс-спектроскопии [112].
Для определения подлинности и количественного содержания лекарственных средств предуктал и веро-триметазидин используют метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В качестве элюента рекомендуют смесь спирта метилового, ацетонитрила, раствора натрия гептансульфоната моногидрата в растворе кислоты фосфорной, УФ-детектирование при 210 нм (НД 42-2855-00); или смесь ацетонитрила, раствора натрия гептансульфоната моногидрата в растворе кислоты фосфорной и триэтиламина, УФ-детектирование при 225 нм (НД 42-10947-00).
НД на таблетки веро-триметазидин предлагает для качественного и количественного определения использовать метод УФ-спектрофотометрии. Измерения проводят в области длин волн 200-350 нм в спирте метиловом, который, как известно, является высоко токсичным соединением [112].
Количественное определение триметазидина дигидрохлорида в субстанции проводят методом неводного титрования и методом аргентометрического титрования. Точку эквивалентности в обоих методах устанавливают потенциометрически. В первом случае лекарственное вещество титруют в присутствии кислоты уксусной ледяной и раствора ртути (II) ацетата (НД 42-0047239302).
Потенциометрическое определение константы ионизации триметазидина дигидрохлорида
Из представленных спектров следует, что только спектр поглощения триметазидина дигидрохлорида в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной имеет 2 выраженных максимума при длинах волн 231 ± 1 нм и 270 ± 1 нм.
Для понимания поведения триметазидина дигидрохлорида в зависимости от рН среды необходимо знание его протеолитического равновесия в исследуемых растворах. Данные о химическом поведении триметазидина дигидрохлорида в различных растворителях в литературе отсутствуют.
Сила кислот и оснований характеризуется константой диссоциации, которая является частным случаем константы равновесия реакции и характерной величиной для данного электролита, растворенного в определенном растворителе. В соответствии с теорией электролитической диссоциации, диссоциация веществ находится в прямой зависимости от рН среды. Известно, что влияние рН на соотношение ионной и молекулярной форм вещества зависит от разности значений рН и рК. Если рН = рК, то в растворе существует по 50% каждой из форм вещества. При значениях рН близких к рК, изменение рН - на 0,1 приводит к изменению соотношения молекулярной и ионной форм вещества на 5%. Поэтому, для избежания большой ошибки определения при спектрофотометрическом анализе важно добиться таких условий, чтобы в растворе существовала только одна форма определяемого вещества: ионизированная частица или нейтральная молекула. Соотношение диссоциированной (99,9%) и недиссоциированной форм вещества (0,1%) достигается в растворе при разности рК - рН 3 [73].
Целью исследования является выбор оптимального значения рН среды для спектрофотометрического определения триметазидина дигидрохлорида с учетом его константы ионизации. Потенциометрическое определение константы ионизации триметазидина дигидрохлорида Наиболее удобным методом определения констант ионизации (рК) является потенциометрическое титрование [67, 73]. Потенциометрическое определение проводили по следующей методике [73]: 0,1698 г (точная масса) триметазидина дигидрохлорида в точке полунейтрализации растворяли в 42,5 мл воды очищенной, определяли значение рН. Затем двадцатью порциями, каждая из которых пропорциональна одной десятой эквивалента, добавляли 0,1 М раствор натрия гидроксида (Кв = 1,0). После каждого добавления измеряли значения рН. Проводили шесть параллельных измерений. Для расчета рКа брали значения величин рН как среднее арифметическое из шести определений (таблица 2). Расчет проводили по формуле (1):
При значениях рН выше 10,0 или ниже 4,0 в расчетную формулу вводили поправки на ионы гидроксила или ионы водорода:
Полученные данные свидетельствуют о том, что потенциометрическое титрование триметазидина дигидрохлорида раствором щелочи представляет собой титрование соли слабого двухкислотного основания, так как в структуре имеется гетероцикл пиперазина с двумя атомами азота. Дифференциальная кривая титрования также подтверждает наличие двух точек эквивалентности, при этом вторая точка менее выражена (рисунок 3).
На основании этих значений констант ионизации получена кривая зависимости процента ионизации (а) от рН (рисунок 4), которая наглядно представляет области существования форм вещества при различных значениях рН среды.
Это позволило нам объективно найти оптимальное значение рН для количественного определения триметазидина дигидрохлорида.
Как следует из рисунка 4, триметазидина дигидрохлорид в виде нейтральной молекулы в растворах существует только при рН 11,4. Однако, растворы триметазидина дигидрохлорида при данном значении рН неустойчивы, поэтому использование таких растворов для спектрофотометрического анализа является нецелесообразным. В области значений рН растворов от 4,8 до 10,5 у его молекулы только одна из аминогрупп будет находиться полностью в ионизированном состоянии.
Триметазидина дигидрохлорид будет присутствовать в растворе, ионизированном на 99,9% состоянии только при рН 1,3. Таким образом, оптимальным растворителем для спектрофотометрического анализа триметазидина дигидрохлорида является 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной.
Для подтверждения выбора оптимальных условий спектрофотометрического анализа изучены спектры поглощения триметазидина дигидрохлорида в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной и спирте метиловом (рисунок 5).
Из представленных спектральных характеристик следует, что спектр поглощения триметазидина дигидрохлорида имеет слабый по интенсивности максимум в длинноволновой области спектра (270 ± 1нм), и только в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной при длине волны 231 ±1 нм спектр поглощения триметазидина дигидрохлорида имеет интенсивно выраженный максимум, тогда как в спирте метиловом наблюдается плечо при длинах волн в области 225-232 нм (рисунок 5).
Выбор условий ВЭЖХ для качественного и количественного анализа триметазидина в лекарственных препаратах
В качестве альтернативного метода испытания на однородность дозирования триметазидина дигидрохлорида таблеток, покрытых оболочкой 0,02 г, нами рекомендован также метод УФ-спектрофотометрии. От серии таблеток, подлежащей испытанию, отбирали пробу в количестве 30 штук. В каждой из 10 таблеток определяли содержание лекарственного вещества.
Методика определения. Одну таблетку триметазидина дигидрохлорида помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляли около 20 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной и обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин и доводили 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки, перемешивали и фильтровали через мелкопористый бумажный фильтр «Синяя лента», отбрасывая первую порцию фильтрата. 5 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивали. Концентрация триметазидина дигидрохлорида в растворе около 0,00002 г/мл.
Измеряли оптическую плотность испытуемого и стандартного растворов (методика приготовления раствора СО описана в п. 2.1.4) с помощью спектрофотометра при длине волны 231 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения использовали 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной. Содержание триметазидина дигидрохлорида в одной таблетке (X, г) вычисляли по формуле: где: Аисп_ - оптическая плотность испытуемого раствора; Аст_ - оптическая плотность раствора стандартного образца; аст_ - масса стандартного образца триметазидина дигидрохлорида, г. Результаты определения однородности дозирования триметазидина дигидрохлорида (таблица 7) свидетельствуют о том, что отклонения содержания действующего вещества в таблетках ЛП колеблется от — 8,0% до + 8,4% от среднего значения, то есть в пределах нормы (не более ±15%) [70].
На основании полученных данных разработана методика определения однородности дозирования триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой. Относительная ошибка составляет ± 3,6%.
Испытание «Растворение» предназначено для определения количества лекарственного вещества, которое в условиях, указанных в НД (ОФС 42-0003 -04), за определенный промежуток времени должно высвобождаться в среду растворения из твердой дозированной лекарственной формы.
В зависимости от скорости высвобождения лекарственных веществ все твердые дозированные лекарственные формы подразделяются на группы [81]. Таблетки триметазидина дигидрохлорида по 0,02 г, покрытые оболочкой, относятся к 1-й группе лекарственных препаратов (ОФС 42-0003-04). Испытание проводили на аппарате «Вращающаяся корзинка» на 6-й образцах модельной смеси таблеток. Проводили не менее трех параллельных определений и рассчитывали средний результат.
По ОФС 42-0003-04 методика проведения теста «Растворение» состоит из двух стадий (кислотной и щелочной). Предварительное исследование показало, что щелочную стадию проводить нецелесообразно, так как таблетки триметазидина дигидрохлорида распадаются, и лекарственное вещество полностью растворяется уже в кислотной стадии. В связи с тем, что для анализа был использован 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной (агрессивен по отношению к хроматографической колонке), метод ВЭЖХ заменили методом УФ-спектрофотометрии.
Методика. В сухую корзинку помещали 1 таблетку. Корзинку опускали в сосуд с 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной (750 мл) при температуре 37 ± 0,5С. Сосуд закрывали крышкой и приводили корзинку во вращение со скоростью 100 об/мин. Процесс высвобождения контролировали в течении 60 минут вращения корзинки. Через 5, 10, 15, 25, 35, 45 и 60 минут после начала опыта отбирали пробы по 10 мл и проводили определение в них триметазидина дигидрохлорида методом УФ-спектрофотометрии. Для этого отобранную пробу фильтровали через мелкопористый бумажный фильтр «Синяя лента», отбрасывая первые 5 мл фильтрата.
Измеряли оптическую плотность испытуемого и стандартного растворов (методика приготовления его описана в п. 2.2) с помощью спектрофотометра при длине волны 231 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм (не менее трех параллельных определений). В качестве раствора сравнения использовали 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной.
Изучение стабильности триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках, выбор стабилизатора и установление сроков годности
Таким образом, результаты выборок двух методик не отягощены систематической ошибкой. Воспроизводимость рассматривали как сходимость инжекций и внутрилабораторную повторяемость.
Сходимость инжекций проверяли на одних и тех же образцах модельной смеси таблеток триметазидина дигидрохлорида (п. 3.2). Вводили 5 повторных инъекций стандартного раствора, регистрировали пик основного вещества и измеряли его площадь. Результаты исследования свидетельствуют о высоком качестве инжектора. Относительное стандартное отклонение определений не превышает 1% (таблица 14).
Внутрилабораторную воспроизводимость (прецизионность) методик определения количественного содержания и посторонних примесей в таблетках триметазидина дигидрохлорида проводили, как описано в разделе «правильность».
Рассчитывали средний результат содержания определяемого вещества (xi), исперсию (S ), стандартное отклонение (S), относительное стандартное отклонение (RSD) по формуле 9, определяли границы доверительных интервалов и оценивали сходимость двух параллельных определений (таблицы 19, 20).
Из таблиц 19, 20 следует, что относительное стандартное отклонение методики определения количественного содержания и посторонних примесей триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, составляет ± 0,8% и ± 9,1% (в лекарственных препаратах RSD должно быть не более - ± 2% и ±15-20% соответственно [75, 88]).
Таким образом, разработанные методики определения количественного содержания и посторонних примесей в предлагаемом ЛП триметазидина дигидрохлорида обладают высокой воспроизводимостью.
Для таблеток триметазидина дигидрохлорида диапазон применения методики количественного определения охватывает от 90 до 110% от номинального содержания (0,0180 - 0,0220 г (таблица 19)), а для определения примесей — от 0,5% до 1,2% от номинального содержания основного вещества (таблица 20).
Для оценки линейности исследуемые растворы готовили следующим образом: по 0,325 г модельной смеси вспомогательных веществ помещали в 5 мерных колб вместимостью 25 мл, добавляли точные массы триметазидина дигидрохлорида на уровнях около 0,050 г, 0,075 г, 0,100 г, 0,125 г, 0,150 г (с концентрацией действующего вещества от 50 до 150% по отношению к содержанию, декларированному в готовом лекарственном препарате 0,02 г), доводили водой до метки, перемешивали, отбирали пробы по 10 мкл и хроматографировали не менее 3 раз в условиях описанных ранее п. 3.2.
Результаты экспериментальных данных, полученных при изучении линейной зависимости методики определения количественного содержания триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, представлены в таблице 21 и на рисунке 20. равен 0,9998, что свидетельствует о наличии линейной зависимости между указанными параметрами. Расчет и статистическая оценка параметров линейной зависимости площади пика от концентрации триметазидина дигидрохлорида показали, что данная зависимость описывается следующим уравнением: у = 258,68х(. Как показала проверка значимости коэффициента уравнения с помощью коэффициента Стьюдента, свободный член в данном уравнении (- 0,025) незначим ( выч їтабл.) И МОЖЄТ бьіТЬ ИСКЛЮЧЄН ИЗ НЄГО.
Таким образом, прямая, описывающая зависимость между площадью пика и концентрацией триметазидина дигидрохлорида, для методики количественного определения триметазидина дигидрохлорида в таблетках должна проходить через начало координат (рисунок 20).
Линейность методики для определения содержания примесей оценивали следующим образом (п. 3.2). К 1 мл 0,4% раствора триметазидина дигидрохлорида прибавляли по 0,02 мл, 0,03 мл, 0,04 мл, 0,048 мл; и 0,06 мл раствора, используемого для проверки пригодности хроматографической системы, (диапазон концентрации примеси 50 -150% от регламентируемой нормы) и перемешивали. Далее пробы по 10 мкл хроматографировали в вышеописанных условиях (п. 3.3). Результаты определения представлены в таблице 21 и на рисунке 21.
По методике определения посторонних примесей коэффициент корреляции (г) равен 0,9999, что свидетельствует о наличии линейной зависимости между указанными параметрами. Расчет и статистическая оценка параметров линейной зависимости площади пика от концентрации примеси показали, что данная зависимость описывается следующим уравнением: у = 4,92XJ.
Проверка значимости коэффициентов уравнений с помощью коэффициента Стьюдента показала, что свободнй член в уравнении (- 0,024) также незначим (tBU4. Uadn.) и может быть исключен из него.
