Химическое исследование травы кориандра посевного (Coriandrum sativum) с целью получения фармакологически активных веществ [Электронный ресурс] Нерсесян Захар Мкртычевич

Содержание к диссертации

Введение

ГЛАВА 1 Современное состояние исследований биологически активных соединений кориандра посевного (coriandrum sativum) 10

1.1 Эфирное масло 10

1.2 Жирное масло плодов 11

1.3 Биологически активные соединения, сопутствующие эфирному маслу ... 12

1.4 Флавоноиды 13

1.5. Кумарины 14

1.6 Другие группы природных соединений 14

1.7 Применение растения в народной и научной медицине 14

Заключение 18

ГЛАВА 2 Обоснование технологии получения фармакологически активных соединений из травы кориандра посевного 19

2.1 Обсуждение результатов 19

2.1.1 Выбор оптимальных условий сбора сырья и экстракции биологически активных соединений из травы кориандра посевного 19

2.1.2 Флавоноиды 23

2.1.3 Кумарины 28

2.1.4 Фенолкарбоновые кислоты 30

2.1.5 Полисахариды 32

2.1.6 Органические кислоты 36

2.1.7 Качественный состав суммарных извлечений из кориандра посевного 38

2.1.8 Изучение динамики накопления основных биологически активных соединений кориандра посевного по фазам вегетации 41

2.1.8.1 Количественное содержание флавоноидов в траве кориандра посевного по фазам вегетации 41

2.1.8.2 Количественное содержание кумаринов в траве кориандра посевного по фазам вегетаци 43

2.2 Экспериментальная часть 47

2.2.1 Методики получение суммарных фармакологически активных фракций 47

2.2.2 Органические кислоты 50

2.2.3 Количественное определение флавоноидов 52

2.2.4 Количественное определение кумаринов 53

Выводы по главе 2 55

ГЛАВА 3 Идентификация индивидуальных соединений фармакологически активных фракций кориандра посевного 56

3.1 Обсуждение результатов 56

3.1.1 Полифенольные соединения 56

3.1.2 Макро-и микроэлементный состав 60

3.1.3 Аминокислотный состав 61

3.1.4 Определение жирорастворимых витаминов 62

3.1.5 Количественное содержание флавоноидов в суммарных фракциях 62

3.1.6 Количественное содержание кумаринов в суммарных фракциях 62

3.2 Экспериментальная часть 65

3.2.1 Полифенольный состав 65

3.2.2 Макро-и микроэлементный состав 66

3.2.3 Аминокислотный состав 66

3.2.4 Определение жирорастворимых витаминов 67

3.2.5 Количественное определение флавоноидов в суммарных фракциях из травы кориандра посевного 67

3.2.6 Количественное определение кумаринов в суммарных фракциях из травы кориандра посевного 67

Выводы по главе 3 68

ГЛАВА 4. Предварительные фармакологические исследования фракций из надземной части кориандра посевного 69

4.1 Острая токсичность и раздражающая активность 69

4.2 Влияние на органы и системы животных 70

4.3 Влияние фракции II на поведенческие реакции и ноотропную активность при хронической адреналиновой интоксикации 72

4.4 Влияние фракции II на мозговой кровоток и его ауторегуляцию после моделирования хронической адреналиновой интоксикации 75

4.5 Гистологическое изучение внутренних органов животных под влиянием фракции II 78

4.6 Экспериментальная часть 79

4.6.1 Определение острой токсичности и раздражающей активности 79

4.6.2 Изучение влияния фракции II на поведенческие реакции и ноотропную активность, мозговой кровоток и его ауторегуляцию при хронической адреналиновой интоксикации 79

4.6.3 Гистологическое изучение органов животных 80

Выводы по главе 4 81

Общие выводы 82

Список литературы 84

Приложение 99

• Биологически активные соединения, сопутствующие эфирному маслу
• Количественное содержание флавоноидов в траве кориандра посевного по фазам вегетации
• Количественное содержание кумаринов в суммарных фракциях
• Влияние фракции II на поведенческие реакции и ноотропную активность при хронической адреналиновой интоксикации

Введение к работе

На международном фармацевтическом рынке наблюдается явная тенденция к росту номенклатуры лекарственных препаратов, имеющих растительное происхождение. Преимущества разработки и применения фитопрепаратов обусловлены многими достоинствами, в числе которых широкий спектр фармакологической активности в сочетании с низкой токсичностью, редко проявляемыми побочными эффектами и практическим отсутствием противопоказаний. В настоящее время достаточно остро стоит проблема укрепления отечественной лекарственной растительной базы. Особую значимость при решении этой проблемы приобретает вопрос рационального и комплексного использования официнальных лекарственных растений, а также поиск новых источников биологически активных соединений, способных расширить номенклатуру лекарственного сырья и лекарственных средств на их основе. В связи с этим актуальной задачей становится изучение такой категории растений, которые характеризуются широким набором биологически активных веществ и используются как пищевые продукты, но не используются в фармации.

Одним из таких перспективных сырьевых источников является трава кориандра посевного, который, будучи пищевым растением, возделывается в промышленных масштабах для сбора семян. При этом под посевы этого растения выделяется более половины всех площадей, отводимых под эфирномасличные культуры. Следует отметить, что зелёная масса остаётся не востребованной. До настоящего времени химические исследования кориандра посевного преимущественно посвящены только изучению состава и биологической активности компонентов эфирного масла плодов. Что же касается надземной части растения, то она изучена очень мало, хотя в народной медицине народов Кавказа широко используется в качестве гипотензивного и кардиотонического средства.

В этой связи целесообразно изучение биологически активных веществ травы кориандра посевного с целью обоснования возможности использования растения в качестве источника биологически активных веществ и создания на их основе лечебно-профилактических средств. Это позволит одновременно решить важнейшую задачу как по комплексному использованию кориандра посевного, так и будет способствовать расширению лекарственной растительной сырьевой базы.

Цель и задачи исследований

Целью настоящей работы является изучение химического состава надземной части кориандра посевного и получение фармакологически активных суммарных фракций.

Для реализации поставленной цели мы сочли целесообразным решение следующих задач:

изучить биологически активные соединения надземной части кориандра посевного;

проанализировать химический состав растения по фазам вегетации для выявления оптимальных сроков заготовки сырья;

обосновать технологию получения суммарных фракций из травы кориандра посевного;

провести фармакологический скрининг полученных фракций с целью дальнейшего более углубленного химического исследования;

исследовать химический состав фракций, характеризующихся выраженной фармакологической активностью;

разработать нормативную документацию, регламентирующую показатели качества наиболее фармакологически активной фракции (Технические Условия на Фиточай).

Научная новизна

Изучены важнейшие биологически активные соединения надземной

части кориандра посевного - флавоноиды, кумарины, фенолокислоты, органические кислоты, углеводы, витамины, аминокислоты, макро- и микроэлементы.

Впервые в данном растении идентифицированы:

фенолкарбоновые кислоты - феруловая, кофейная, галловая и салициловая;

кумарины - эскулин, эскулетин, скополетин, умбеллиферон, 4-оксикумарин, дикумарин;

флавоноиды - 8-С-Р-глюкопиранозид апигенина (витексин), 6,8-ди-С-глюкозид апигенина (виценин), 8-С-Р-глюкопиранозид лютеолина (ориентин), лютеолин, апигенин, гиперозид, лютеолин-7-гликозид„ гесперидин, б^^-триокси-З'-метоксифлавон (хризоэриол) и катехинна;

органические кислоты (яблочная, винная, янтарная);

углеводы (галактоза, глюкоза, арабиноза, рамноза, ксилоза и галактуроновая кислота);

витамины С и Е.

Установлено количественное содержание флавоноидов и кумаринов по фазам вегетации.

Охарактеризован качественный и количественный состав макро- и микроэлементов, а также аминокислот в надземной части кориандра посевного.

Впервые установлено, что фракция, полученная экстракцией сырья спиртом этиловым 40%, проявляет антистрессорную, седативную, ноотропную и гипотензивную активность.

Изучен качественный и количественный состав данной фракции, в ней содержатся полифенолы (флавоноиды, кумарины и оксикоричные кислоты), аминокислоты, макро- и микроэлементы и другие БАВ.

Практическая значимость работы и внедрение результатов в практику

Результаты изучения фармакологической активности суммарных фракций, полученных из травы кориандра посевного, позволили рекомендовать наиболее активную фракцию, полученную экстракцией спиртом этиловым 40%, для углубленного экспериментального исследования её влияния на сердечнососудистую систему.

Определены нормы качества и методы их контроля для фармакологически активной фракции, которые отражены в разработанной нами технической документации (ТУ), что позволяет по-новому рассматривать надземную часть кориандра посевного, а именно, как дополнительный источник БАВ.

Разработанные технические условия, регламентирующие показатели качества Фиточая «Кориандр», внедрены в практику ООО «Ювикс-Фарм» г. Краснодар.

Положения, выдвигаемые на защиту:

результаты химического исследования биологически активных веществ, содержащихся в траве кориандра посевного: флавоноидов, кумаринов, фенолокислот, органических кислот, полисахаридов, витаминов, аминокислот, макро- и микроэлементов;

выбор оптимальных сроков заготовки травы кориандра посевного в качестве источника для получения фармакологически активных фракций;

данные фармакологического скрининга в качестве обоснования для разработки способа получения наиболее активной суммарной фракции;

итоги предварительного исследования влияния сухого экстракта из травы кориандра посевного на поведенческие реакции и основные показатели мозгового кровообращения.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательской работы (НИР) ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава, а также в соответствии с соглашением о выполнении НИР между Федеральным агенством по здравоохранению и социальному развитию и ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№06/1049).

Апробация работы и публикации

Основные фрагменты диссертационной работы доложены на 61-й и 62-й региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск 2006, 2007) и на IV научно-практической конференции молодых учёных и студентов «Медицинская наука и здравоохранение» (Анапа 2006).

По теме диссертации опубликовано 11 научных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 131 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы и 3 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 139 источников, в том числе 24 иностранных; содержит 26 таблиц, 6 рисунков и приложение.

_{ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ}

_к»

Биологически активные соединения, сопутствующие эфирному маслу

В Регистр лекарственных средств, разрешенных к применению в России, включено около четырех десятков препаратов отечественного производства, содержащих в своем составе биологически активные вещества из эфирномасличных растений [86]. В основном - это многокомпонентные лекарственные средства, обеспечивающие достаточный фармакологический эффект и комплексное воздействие на организм человека. Принцип сочетания в лекарственном препарате различных биологически активных комплексов эфирно-масличных растений (спиртовых экстрактов, эфирных масел и их компонентов) позволяет, кроме того, снизить эффективную дозу каждого из них и тем самым избежать возможные побочные явления, имеющие место при использовании высоких доз эфирных масел (раздражение, аллергические реакции). Необходимо отметить, что компонентный состав этих лекарственных препаратов не отличается большим разнообразием: 42% препаратов содержат в своем составе эфирные масла, ассортимент которых очень ограничен [46].

Интерес к эфирным маслам как к лечебным средствам связан с их высокой биологической активностью, что сводится к проявлению антисептического, противовоспалительного и ранозаживляющего действия. Они, как правило, предназначены для лечения заболеваний дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, ран и ожогов.

Выраженное спазмолитическое действие, сочетается с седативным эффектом [28], что имеет важное значение при создании местнообезболивающих, отвлекающих и согревающих средств. Ряд препаратов, содержащих эфирные масла, рекомендованы при почечнокаменной болезни, так как оказывают спазмолитическое, антибактериальное и умеренное мочегонное действие. В сочетании с ментолом, тимолом, камфорой усиливаются лечебные свойства эфирных масел [133]. Наиболее широкое применение в народной и научной медицине получили плоды кориандра и препараты на их основе. В отечественных фармакопеях 1-3-го и 8-9-го изданий, а также Британской Травяной Фармакопее плоды включены как корригирующее средство [111, 114]. Препараты из плодов, благодаря содержанию эфирного масла, применяют как улучшающие пищеварение, возбуждающие аппетит, желчегонное средство; применяют для лечения заболеваний печени и желчного пузыря, как отхаркивающее средство. Отвары из плодов и травы применяют при неврастении и диарее, а также наружно для промывания глаз, полоскания рта при воспалительных процессах [84]. Имеются рекомендации по использованию плодов и отвара из травы кориандра, как антисептического и болеутоляющего средства при гастритах, язвенной болезни желудка [105]. Плоды входят в состав желчегонного и желудочного сборов [105]. Спиртовые и водные настойки кориандра оказывают выраженное седативное и гипотензивное действие [4]. Эфирное масло кориандра используют в фармацевтической практике, как корригент, для улучшения вкуса и запаха ЛС [105], а также для синтеза альдегида цитраля, применяемого в глазной практике [114]. Наружно кориандровое масло применяется при невралгии, ревматизме (оказывает обезболивающие действие) [35], при рожистых воспалениях, при неврастении, циститах, диарее, как антисептическое средство [33,35,109]. Линалоол, выделенный из эфирного масла, обладает сильным бактерицидным и противоглистным действием, входит в состав антибактериальных капель, используемых при катарах верхних дыхательных путей; применяется в глазной практике при кератитах и коньюктивитах [114]. После получения эфирного масла в шроте плодов коринадра посевного остаётся достаточное количество биологически активных соединений (раздел 1.3. таблица 1), что создаёт предпосылки для его использования в фармацевтической и пищевой промышленности [98]. Анализ химического состава шрота плодов показывает, что последний вполне может использоваться в качестве источника некоторых витаминов. Наличие Р-активных веществ в сочетании с аскорбиновой кислотой может обусловливать высокую капилляроукрепляющую способность плодов кориандра посевного. Именно с наличием каротиноидов объясняется благотворное влияние на зрительные функции глаза, в частности на повышение остроты зрения и улучшение ночного зрения. Витамин Е (токоферолы), обнаруженный в плодах, обеспечивает устойчивое состояние нервной и эндокринной систем, нормализует процессы обмена веществ в скелетных и сердечной мышцах, печени; способствует укреплению иммунной системы [51,99,101,102]. Водный экстракт семян кориандра обладает анксиолитическим эффектом и имеет потенциально седативное действие [120]. СОг-экстракты из плодов кориандра обладают ярко выраженным бактерицидным и бактериостатическим действием в отношении многих видов граммположительных и граммотрицательных микроорганизмов, в том числе и на спороносные формы, за исключением Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa. Максимальный антимикробный эффект проявляется в отношении Bacillus anthracis и Streptocillus [3]. Во многих европейских центрах реабилитации рекомендуют в ароматерапии использовать масло кориандра как мягкий стимулятор творческих возможностей, для снятия усталости, стресса, нервозности.

Плоды кориандра входят в ряд фитокомплексов для очищения и оздоровления организма, лечения больных сосудистыми заболеваниями с нарушением липидного обмена [75]. Известны несколько биологически активных добавок, содержащие плоды кориандра и обладающие общеукрепляющим и седативным действием. Они применяются в комплексной терапии астенических состояний, в период выздоровления после перенесенных заболеваний, при повышенных физических и умственных нагрузках [70,71,72,73,74].

Жирное масло из плодов пригодно для технических целей [92]. Следует отметить, что линолевые кислоты, выделяемые из жирного масла плодов кориандра обладают ярко выраженным противоопухолевым действием. Данный факт свидетельствует о чрезвычайной привлекательности жирного масла с позиций профилактического питания человека [51].

Количественное содержание флавоноидов в траве кориандра посевного по фазам вегетации

Сырьё - надземная часть кориандра посевного, собранная на территории Ставропольского края в фазу цветения. Представляет собой верхнюю часть растения без грубых стеблей. Переработка проводилась следующим образом.

Схема 1. 100 г измельчённой травы в колбе с обратным холодильником при нагревании и постоянном перемешивании исчерпывающе экстрагируют спиртом этиловым 96% в соотношении 1:5 (кратность экстракции - 3, время -1ч. от начала кипения). Извлечения объединяют, фильтруют, упаривают в вакууме до небольшого объёма (концентрирование) и полученный остаток при перемешивании выливают в горячую воду (1:10) и, нагревая, вновь упаривают до полного удаления спирта этилового. Полученный остаток после охлаждения фильтруют через мелкопористый бумажный фильтр и получают концентрированный раствор суммы полифенольных соединений, которую делят на две равные порции. Одну из них выпаривают досуха и получают — сухую сумму полифенольных соединений (фракция I).

Вторую порцию переносят в делительную воронку и последовательно обрабатывают эфиром, этилацетатом и бутанолом [69,103]. Растворители -эфир, этилацетат и бутанол упаривают в вакууме до сухого остатка и получают соответственно фракции 1а, 16,1в.

Схема 2. 100 г сырья в колбе с обратным холодильником при нагревании и постоянном перемешивании исчерпывающе экстрагируют спиртом этиловым 40%, в соотношении 1:5. (кратность экстракции - 3, время каждой операции - 1ч. от начала кипения). Извлечения объединяют, фильтруют и упаривают в вакууме до небольшого объёма (концентрирование). Водно-спиртовый остаток при перемешивании выливают в горячую воду (1:10) и продолжают нагревать, до полного удаления этанола. Полученный остаток после охлаждения фильтруют через мелкопористый бумажный фильтр. Получают концентрированный раствор суммы полифенольных соединений, которую делят на две равные порции. Одну из них выпаривают досуха и получают - сухую сумму полифенольных соединений (фракция II).

Вторую порцию переносят в делительную воронку и последовательно обрабатывают эфиром, этилацетатом и бутанолом. Растворители - эфир, этилацетат и бутанол выпаривают в вакууме до сухого остатка и получают соответственно фракции Па, Пб, Пв.

Схема 3. 100 г сырья в колбе с обратным холодильником и постоянном перемешивании исчерпывающе экстрагируют водой в соотношении 1:5 на кипящей водяной бане. Кратность экстракции - 3; продолжительность по 1 ч на каждую операцию. Извлечения объединяют, фильтруют и упаривают до небольшого объёма (концентрирование). Полученный остаток после охлаждения фильтруют через мелкопористый бумажный фильтр. Получают концентрированный раствор суммы полифенольных соединений, которую делят на две равные порции. Первую из них выпаривают досуха и получают — сухую сумму полифенольных соединений (фракция III).

Вторую порцию переносят в делительную воронку и последовательно обрабатывают эфиром, этилацетатом и бутанолом. Растворители - эфир, этилацетат и бутанол упаривают в вакууме до сухого остатка и получают соответственно фракции Ша, Шб, Шв. Полученные фракции содержат сумму фенолкарбоновых кислот, кумаринов и флавоноидов, которые мы использовали для изучения этих классов соединений. Для идентификации соединений использовали хроматографию в тонком слое сорбента на пластинках «Сорбфил», «Silufol», силикагеле марки LS 5\40 Чехословакия) и на бумаге «Ленинградская», (БХ) [28,48,107], в различных системах растворителей. Качественные реакции на каждый класс соединений проводили общепринятыми реактивами [7,28,107]. Электронные спектры поглощения измеряли на спектрофотометрах СФ-46 и СФ-56 в кварцевых кюветах с толщиной рабочего слоя 1 см. Схема 4. На предварительном этапе измельчённое сырьё исчерпывающе экстрагируют в аппарате Сокслета смесью хлороформ-ацетон в соотношении 1:1 для удаления липофильных веществ, пигментов, низкомолекулярных соединений и части полифенольных веществ, мешающих выделению полисахаридов. Полученный шрот высушивали на воздухе. I. Выделение ВРПС — обезжиренное сырьё экстрагируют водой при комнатной температуре и постоянном перемешивании в течение 12 часов (соотношение сырья и экстрагента- 1:15). Полученное извлечение фильтруют, полисахариды из фильтрата осаждают двойным объёмом спирта этилового 96%. Водно-спиртовую смесь далее центрифугируют в течение 15 минут при частоте вращения - 3000 об/мин. Осадок количественно переносят в? выпарительную чашечку и сушат в эксикаторе до постоянной массы. II. Выделение ПВ - оставшийся шрот после выделения ВРПС экстрагируют на водяной бане при 100С и постоянном перемешивании в течение часа смесью 0,5% раствора оксалата аммония и 0,5% раствора щавелевой кислоты (1:1). Далее извлечение фильтруют через несколько слоев марли и добавляют один объём спирта этилового 96%-го для осаждения ПВ. Осадок отделяют центрифугированием при тех же условиях и осадок сушат в эксикаторе. III. Выделение Гц А - шрот, оставшийся после выделения ПВ, обрабатывают 7,5% раствором гидроксида натрия в течение суток. Извлечение фильтруют через несколько слоев марли и доводят до рН 6-7 по универсальному индикатору ледяной уксусной кислотой при этом выпадает осадок Гц А. Далее центрифугируют, осадок переносят в выпарительную чашку и сушат до постоянной массы.

Количественное содержание кумаринов в суммарных фракциях

Исследование острой токсичности завершено патологоанатомическим изучением жизненно важных органов и систем организма у выживших животных через 2 недели после введения изучаемых фракций: сердечнососудистой, дыхательной, пищеварительной, мочевыделительной, эндокринной. Животные забивались методом декапитации, а затем вскрывались.

Через разрез на шее осматривали трахею, щитовидную железу и лимфатические узлы. Состояние этих органов не отличалось от таковых у интактных животных, со средней линии живота рассекалась средняя стенка, и рассматривалось состояние парентеральной и висцеральной брюшины. В полости брюшины не наблюдалось выраженного скопления серозной жидкости. Брюшина была гладкой, блестящей, слегка увлажнённой. После вскрытия грудной клетки изучалось состояние органов брюшной полости. У животных парентеральная и висцеральная плевра была гладкой, блестящей, выпот и спаек не обнаруживалось. Ткань легких розовая, без уплотнений, эластичная, кровоизлияний не наблюдалось. Околосердечная сумка и сердце без изменений. Состояние аорты и других крупных сосудов не отличалось от состояния таковых у итактных животных. При исследовании пищевода его травм не обнаружено.

Далее оценивали состояние органов брюшной полости. Учитывая, что вещества вводили зондом в желудок, особое внимание обращали на макроскопические изменения данного органа. Макроскопический анализ свидетельствует, что изменений и перфораций в желудке не наблюдается. Осматривалась его слизистая: язв, эрозий и кровоизлияний не обнаружено. Слизистая оболочка кишечника имела матовый бархатистый вид, складчатость обычной выраженности.

При оценке влияния фракций на паренхиматозные органы было выявлено, что печень без изменений, имеет гладкую и блестящую поверхность, на разрезе обычной консистенции и кровенаполнения. Почки обычной формы и цвета, поверхность гладкая, блестящая. На разрезе хорошо просматриваются мозговой и корковый слой почек. Надпочечники без особенностей. Селезенка темно-красная, не отличается по виду от таковых у интактных животных. Мочевой пузырь без изменений.

Патоморфологическое исследование животных, получавших перорально фракции из травы кориандра посевного при изучении острой токсичности, не выявило местно-раздражающего действия на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта. Не выявлено также существенных морфологических изменений и в других внутренних органах у выживших экспериментальных животных, что свидетельствует об обратимости изменений после введения токсических доз экстрактов. Таким образом, анализируя данные по изучению острой токсичности, можно констатировать, что фракции, полученные из надземной части кориандра практически не токсичны.

Дозы полученных фракций из травы кориандра посевного были рассчитаны на основании предварительного исследования доза-эффект на уровень системного артериального давления и частоту сердечных сокращений в соответствии с требованиями официального руководства по доклиническому изучению новых фармакологических веществ [87] и составили 50 мг/кг массы тела животных.

Известно, что хроническое введение животным больших доз адреналина сопровождается не только развитием дистрофически-склеротических поражений артериальной стенки, но и более глубокими изменениями в различных органах и тканях. Структурные изменения сосудов (некроз, кальциноз и фиброз медии) при этом аналогичны склерозу Менкебера у человека [27,30,62].

Для создания стрессовой ситуации использовали модель хронической адреналиновой интоксикации (Ю.В. Быць, 1989). Раствор адреналина гидрохлорида крысам вводили внутрибрюшинно один раз в сутки в дозе 2 мг/кг в течение двух месяцев.

При введении адреналина через 1-2 минуты у животных опытной и контрольной групп наблюдали учащённое сердцебиение и дыхание, а также угнетённое состояние, которое наблюдалось на протяжении 15-20 минут после введения.

В группе животных, не получавших анализируемую фракцию, нарушение когнитивных функций отмечается на четвёртой неделе опыта и сохраняется до конца эксперимента. Следовательно, курсовое введение адреналина гидрохлорида приводит к нарушению когнитивных функций (таблица 21). Экспериментально установлено, что выработанный условный рефлекс у животных опытной группы прочно сохраняется на протяжении всего эксперимента. Таким образом, данная фракция способствует сохранению когнитивных функций, что, по-видимому, обусловлено благоприятным его влиянием БАВ извлечения на метаболические процессы в головном мозге [113].

Влияние фракции II на поведенческие реакции и ноотропную активность при хронической адреналиновой интоксикации

Завершающим этапом фармакологических исследований явилось гистологическое изучение жизненно важных органов животных (сердце, печень, почки, надпочечники и селезёнка). Животные забивались методом декапитации, а затем вскрывались.

Данный фрагмент работы выполнялся совместно со старшим преподавателем кафедры физиологии и патологии Огурцовым Ю.С, за что мы выражаем искреннею благодарность. Полученные данные представлены в приложении Г. В группе животных, длительно получавших адреналина гидрохлорид без фракции II, выявлены следующие гистоморфологические изменения внутренних органов: - в надпочечниках имеет место атрофия коркового и особенно мозгового слоев, уменьшение количества и атрофия хромаффинных клеток; - в почках наблюдается атрофия большого количества клубочков коркового вещества, спазм и полнокровие артерий; - в печени видно просветление гепатоцитов центролобулярных зон; - в миокарде отмечается гипертрофия и извитая волнистость миокардиоцитов, дистрофия и лизис отдельных групп клеток. В опытной группе животных, получавших перорально водный раствор суммарной фракции II, гистоморфологических изменений не обнаружено, что доказывает благоприятное воздействие комплекса биологически активных веществ сухого 40% спиртового извлечения из травы кориандра посевного на физиологические процессы в организме животных при моделировании экзогенной адреналиновой интоксикации. Для изучения острой токсичности использовали здоровых половозрелых животных, прошедших карантин в течение 14 дней, полученных из питомника «Раполово». Эксперименты проводились на белых беспородных мышах. Разброс массы тела животных в начале исследования не превышал ±10%. Определения проводили на белых мышах-самцах с массой тела 18-20 г по 30 животных в каждой группе. При исследовании острой токсичности полученные фракции вводили перорально с помощью зонда. Контрольной группе животных при тех же условиях вводили физиологический раствор. Общая продолжительность наблюдения за животными при исследовании острой токсичности составила 14 дней, причем в первый день после введения животные находились под непрерывным наблюдением.

Регулярно (ежедневно) фиксировали общее состояние животных, особенности их поведения, тонус скелетных мышц, реакцию на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители, частоту и глубину дыхательных движений, тонус скелетных мышц, ритм сердечных сокращений, состояние волосяного и кожного покрова, окраску слизистых оболочек, размер зрачка, положение хвоста, количество и консистенцию фекальных масс, частоту мочеиспускания и окраску мочи [87].

Опыты проведены на белых беспородных крысах-самцах и самках массой 200-300 г, возраст которых составлял 2-3 месяца. Количество животных в каждой серии составляло шесть. Животные выращены в стандартных условиях вивария Пятигорской государственной фармацевтической академии (температура окружающего воздуха 22±2 градуса, 12-часовая синхронизированная смена светового периода, комбинированный корм и воду животные получали ad libitum).

Для создания стрессовой ситуации использовали модель хронической адреналиновой интоксикации. Раствор адреналина гидрохлорида крысам вводили внутрибрюшинно один раз в сутки в дозе 2 мг/кг в течение двух месяцев [30,113].

После 2-х недельного введения адреналина животным опытной группы вводили водный раствор фракции II в дозе 50мг/кг перорально один раз в сутки. Контрольным животным в эквивалентном объёме вводили изотонический раствор натрия хлорида 0,9%.

На 14, 30 и 60 день эксперимента фиксировали неврологический статус животных по показателям: поведение животных в «Открытом поле» (ОП) [60,104] и оценивали когнетивные функции по тесту условной реакции пассивного избегания (УРПИ) [24].

Определение мозгового кровотока на 61-й день проводили методом водородного клиренса, системное артериальное давление измеряли монометрически.

Полученные в результате экспериментов данные обрабатывали; статистически. Результаты в таблицах представлены в виде средних величин с доверительным интервалом (М ± т) или среднеквадратичным отклонением. Достоверность полученных результатов определяли при помощи t-критерия Стьюдента. Изменения считали достоверно значимыми при наблюдении эффекта у 95% оцениваемых животных (р 0,05) [8,80].

Похожие диссертации на Химическое исследование травы кориандра посевного (Coriandrum sativum) с целью получения фармакологически активных веществ [Электронный ресурс]

Исследование цветков бархатцев распростертых (Tagetes patula L.) с целью получения биологически активных веществПодгорная Жанная Валериевна

Исследование цветков бархатцев распростертых (Tagetes patula L.) с целью получения биологически активных веществПодгорная Жанна Валериевна

Изучение химического состава амброзии полыннолистной с целью получения фармакологически активных веществПархоменко Александр Юрьевич

Получение и исследование комплексов включения бета-циклодекстрина с некоторыми синтетическими и природными лекарственными веществамиКомпанцева, Евгения Владимировна

Разработка технологии получения высокоэффективного биологически активного вещества "Тримиксан" широкого спектра действияМухаметшина Альбина Маратовна

Химико-фармацевтическое исследование гуминовых веществ сапропеля озера ГорчаковоСавченко Ирина Александровна

Химико-токсикологическое исследование лекарственных веществ, применяемых в практике купирования абстинентного синдромаКиреева Анна Владимировна

Методологические основы комплексного исследования полифенольных веществ и тест-соединений природного и синтетического происхожденияПисарев, Дмитрий Иванович

Определение веществ-маркеров при исследовании комплексных препаратов из лекарственного растительного сырьяРазживин Роман Вячеславович

Химико-фармакологическое исследование специфических органических веществ торфаФедько Ирина Валерьевна