Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы „ 10
1.1. Понятие о БАД и фиточаях. 10
1.1.1. Биологически активные добавки к пище 10
1.1.2. Фиточаи 12
1.1.3. Применение пищевых добавок при производстве фиточаев 14
1.2. Стандартизация и контроль качества БАД 16
1.3. Понятие маркеров в лекарственном растительном сырье 19
1.4. Классификация индикаторных компонентов .22
1.5. Особенности газового хромато-масс-спектрометрического анализа 11..:...:..35
ВЫВОДЫ. .„ 40
Глава 2. Материалы и методы исследования 41
2.1. Оборудование и реактивы 41
2.2. Обоснование выбора объектов исследования .42
2.3. Объекты исследования 44
2.4. Методика подготовки проб для скринингового газового хромато-масс-спектрометрического анализа 50
2.5. Получение эфирного масла из листьев шалфея лекарственного 50
2.6. Подбор условий экстракции листьев шалфея лекарственного. 50
2.7. Выбор максимума поглощения 54
2.8. Методика количественного определения суммы
дитерпеновых кислот в листьях шалфея 56
ВЫВОДЫ 58
Глава 3. Скрининговые исследования качественного состава лекарственного растительного сырья 59
3.1. Результаты скрининговых исследований 59
3.2. Изучение качественного состава листьев шалфея лекарственного 97
3.3. Методика качественного определения 4-винилгвайакола в листьях шалфея лекарственного 99
3.4. Изучение качественного состава эфирного масла листьев шалфея лекарственного 100
ВЫВОДЫ 102
Глава 4. Скрининговые исследования многокомпонентных фитопрепаратов 103
4.1. Результаты анализа „ 103
ВЫВОДЫ 117
Глава 5. Обсуждение результатов.. „ 118
5.1. Анализ вариабельности состава сырья мяты перечной 118
5.2. Применение метода смешения проб . 122
5.3. Анализ вариабельности определения биохимических маркеров корневищ аира и корневищ с корнями валерианы 124
Выводы..127
Список литературы
- Применение пищевых добавок при производстве фиточаев
- Методика подготовки проб для скринингового газового хромато-масс-спектрометрического анализа
- Изучение качественного состава листьев шалфея лекарственного
- Применение метода смешения проб
Введение к работе
Актуальность проблемы
В наши дни фальсификация лекарственных препаратов представляет серьезную угрозу рынку лекарственных средств во всем мире. В то же время опасность подделки лекарственных растительных сборов и биологически активных пищевых добавок до сих пор привлекала не столь пристальное внимание российской фармацевтической общественности. И это несмотря на то, что потребительский спрос на подобные препараты увеличивается с каждым годом.
Рынок Б АД в России на конец 2007 г. оценивается примерно в 12 млрд. рублей с ежегодным приростом, превышающим таковой во многих зарубежных странах и составляющим около 12%.
Нормативная документация (НД) на лекарственные растительные сборы и БАД не в полной мере соответствуют требованиям определения доброкачественности. Контроль качества сводится к оценке безопасности по НД на пищевые продукты. В отличие от производителей биодобавок к производителям лекарственных средств предъявляются гораздо более жесткие требования. Поэтому разработка подходов и методов, позволяющих надежно идентифицировать конкретные виды лекарственного растительного сырья в составе лекарственных растительных сборов и БАД, представляется актуальной задачей. Одним из перспективных подходов является изучение специфических биологически активных соединений, присущих только данному виду лекарственного растительного сырья («хемотаксономические или биохимические маркеры»), что позволит совершенствовать методы определения доброкачественности многокомпонентных растительных сборов и БАД.
Цель и задачи исследования Целью работы явилась разработка методического подхода к проведению скрининговых газовых хромато-масс-спектрометрических исследований качественного состава лекарственного растительного сырья.
Для достижения поставленной цели необходимо решение следующих задач:
1. Изучить требования, предъявляемые действующей нормативной документацией к определению подлинности и доброкачественности лекарственных растительных сборов и БАД. Изучить имеющиеся в литературе сведения об индикаторных соединениях и биохимических маркерах лекарственного растительного сырья, входящего в состав лекарственных растительных сборов и БАД.
2. На основании анализа литературных данных обосновать выбор физико-химического метода для поиска биохимических маркеров в лекарственном растительном сырье.
3. Провести скрининговое исследование качественного состава 50 фармакопейных видов лекарственного растительного сырья методом газовой хро-мато-масс-спектрометрии.
4. Провести анализ полученных данных и выявить соединения, обладающие видовой специфичностью, которые могут выступать в роли биохимических маркеров.
5. Показать возможность использования выявленных биохимических маркеров конкретных видов лекарственного растительного сырья для контроля состава многокомпонентных растительных сборов и БАД.
6. Изучить качественный состав водно-спиртовых извлечений, а также эфирного масла из листьев шалфея лекарственного.
7. Разработать методику качественного определения вещества-маркера 4-винилгвайакола в листьях шалфея лекарственного методом газовой хромато-масс-спектрометрии.
Научная новизна
Изучен качественный состав 50 фармакопейных видов лекарственного растительного сырья методом газовой хромато-масс-спектрометрии.
Для 15 видов лекарственного растительного сырья предложены биохимические маркеры, позволяющие идентифицировать их в составе многокомпонентных растительных сборов и БАД.
Разработан методический подход к проведению скрининговых исследований качественного состава лекарственного растительного сырья методом газовой хромато-масс-спектрометрии.
Разработана методика качественного хромато-масс-спектрометрического определения вещества-маркера 4-винилгвайакола в листьях шалфея лекарственного.
Практическая значимость
Результаты диссертационной работы апробированы в отделении ОФХТИ санитарно-гигиенической лаборатории ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в г. Москве», а таюке в контрольно-аналитической лаборатории ОКК ОАО «Красногорсклексредства», где отмечена хорошая воспроизводимость и стабильность получаемых результатов в условиях лабораторного и промышленного анализа лекарственного растительного сырья, многокомпонентных растительных сборов и БАД. По результатам апробации, методический подход рекомендован для контроля качества, как индивидуальных видов лекарственного растительного сырья, так и многокомпонентных фитопрепаратов на его основе, а также для включения в проект НД.
Разработанный методический подход внедрен в нормативную документацию ОАО «Красногорсклексредства».
Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе кафедры фармацевтической и токсикологической химии медицинского факультета РУДН.
На основании проведенных исследований подготовлен и представлен на рассмотрение в ФГУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» проект фармакопейной статьи «Salviae folia. Шалфея листья».
Апробация работы
Результаты работы доложены на VIII Международном конгрессе «Здоровье и образование - ХХГ век; Концепции болезней цивилизации» (ноябрь 2007 г., Москва), на IV Российской конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов» (июнь 2007 г., Москва), на научных конференциях кафедры общей химии с курсом стоматологического материаловедения ММА им. И.М.Сеченова (2006-2008 гг., Москва), на XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (апрель 2008 г., Москва).
Положения, выносимые на защиту
1. Экспериментальные данные по разработке методического подхода к проведению скрининговых газовых хромато-масс-спектрометрических исследований качественного состава лекарственного растительного сырья.
2. Результаты скрининговых газовых хромато-масс-спектрометрических исследований качественного состава 50 фармакопейных видов лекарственного растительного сырья.
3. Результаты скрининговых газовых хромато-масс-спектрометрических исследований качественного состава 15 сложных многокомпонентных растительных сборов и БАД.
Публикация результатов исследования. По результатам проведенных исследований опубликовано 9 печатных работ.
Объем и структура диссертации
Работа изложена на 147 страницах машинописного текста, включая 2 схемы, 18 таблиц, 41 рисунок и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трёх экспериментальных глав, содержащих результаты исследований и их обсуждение, выводов и списка литературы, включающего 193 источника (65 из которых зарубежные).
Применение пищевых добавок при производстве фиточаев
В настоящее время регистрация биологически активных добавок к пище осуществляется Министерством здравоохранения и социального развития Российской Федерации на основании приказа МЗ РФ № 117 от 15.04.97 г. «О порядке экспертизы и гигиенической сертификации биологически активных добавок к пище».
В соответствии с этим приказом Роспотребнадзору и уполномоченным им органам и учреждениям поручено осуществлять экспертизу и гигиеническую сертификацию биологически активных добавок к пище в соответствии с «Положением о порядке экспертизы и гигиенической сертификации биологически активных добавок к пище» (схема. 2).
Значения показателей безопасности регламентируются требованиями СанПин 2.3.2.1078-01. [96]. Методики определения показателей безопасности утверждены в виде соответствующих ГОСТов и СанПиНов (например, ГОСТ 30538-97 Продукты пищевые. Методика определения токсичных элементов атомно-эмиссионным методом, ГОСТ Р50474-93 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (ко-лиформных бактерий), МУК 2.6.1.1194-03 Методические указания по методикам контроля. Радиационный контроль. Стронций 90. Цезий 137. Пищевые продукты. Отбор проб, анализ и гигиеническая оценка).
Нормирование показателей качества - гораздо более сложный вопрос. Каждый продукт, имея уникальный состав, имеет различный набор этих показателей. Поэтому данные нормативы закладываются при разработке документации на конечный продукт. Для российских БАД - это технические условия, для импортных - спецификация фирмы-производителя [193]. Для определения показателей и их нормирования, как правило, необходимо проводить определенные исследования. Поэтому выбор показателей качества и методов их контроля должны брать на себя государственные структуры, отвечающие за реги -17 страцию новых продуктов.
Источниками официальных методов, применяемых в России для контроля качества БАД можно назвать только «Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище» [91] и действующие фармакопейные статьи.
Фармакопейные методики, используемые в контроле качества лекарственного растительного сырья для определения действующих веществ, не всегда можно применить для контроля качества многокомпонентных фиточаев и БАД без соответствующей доработки.
В руководстве Р.4Л. 1672-03 [91] приведены методы определения макро-нутриентов (глава 1), микронутриентов (глава 2), минорных биологически активных компонентов пищи (глава 3) и пищевых добавок (глава 4). Отличительной особенностью указанных методик, является их универсальность.
Методики, включенные в главы 1, 2 и 4 являются общепризнанными в аналитической химии пищевых продуктов. Они отвечают современным требованиям и позволяют определять макро и микронутриенты в БАДах.
В 3 главу, включены методики контроля растительных компонентов. Так как данное направление в анализе БАД развивается только с конца 1990-х годов, то методик, описанных в руководстве, недостаточно для контроля большинства БАД и фиточаев. К тому же некоторые методы, позаимствованные из ГФ3 могут быть использованы лишь отчасти в контроле качества многокомпонентных БАД. Разработке методов стандартизации растительного сырья в составе фиточаев и БАД посвящена данная диссертация. Для оценки подлинности, состава и биологической активности нами был выбран методический подход определения индикаторных компонентов (маркеров). В России данный подход встречается в немногих работах [113, 130]. В то время как иностранные фармакопеи используют преимущественно методы определения именно индикаторных компонентов.
Методика подготовки проб для скринингового газового хромато-масс-спектрометрического анализа
Около 1 г (точная навеска) сырья помещают в коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 100 мл, прибавляют 20 мл 90% спирта и экстрагируют 60 мин при комнатной температуре с использованием магнитной мешалки. Извлечение отстаивают в течение 30 мин. Затем 1,5 мл извлечения переносят в микропробирку типа Эппендорф объемом 1,5 мл с завинчивающейся крышкой и центрифугируют при 8000 об/мин в течение 10 мин. Затем автоматической пипеткой отбирают 1 мл надосадочной жидкости в стеклянную виалу с завинчивающейся крышкой, которую помещают в барабан автосамплера хромато-масс-спектрометра.
Получение эфирного масла из листьев шалфея лекарственного Содержание эфирного масла определяли в 30 г измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм, сырья методом 2 (ГФ XI, вып.1, с. 290), согласно ГФ XI, вып.2, ст. 22.
При подборе условий экстракции суммы дитерпеновых кислот (ДТК) из листьев шалфея лекарственного было изучено влияние растворителя, измель-ченности сырья, соотношения сырье - экстрагент, времени и температуры экстрагирования.
При выборе растворителя были проанализированы водные, водно-спиртовые, спиртовые, ацетоновые извлечения листьев шалфея лекарственного. Результаты исследования приведены в табл. 4.
При выборе степени измельченности исследовано сырье, измельченное до размера частиц, проходящих сквозь сита с диаметрами отверстий 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 5,0; 7,0 мм. Результаты исследования приведены в табл. 6.
Исходя из данных табл. 6 видно, что максимальное извлечение суммы дитерпеновых кислот достигается при использовании сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм.
При установлении оптимального соотношения сырье - экстрагент исследовались извлечения, полученные в соотношениях 1:10, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50, 1:60,1:70,1:80, 1:90,1:100. Результаты исследования приведены в табл. 7.
Исходя из данных табл. 7 видно, что более полное истощение сырья достигается при использовании соотношения 1:20.
При установлении времени экстракции проводили извлечение в течение 15, 30,60,90 мин. Кривая экстракции представлена на рис. 2. с 90 Т, мин Рис. 2. Кривая экстракции суммы дитерпеновых кислот из листьев шалфея. Как видно из рис. 2, для максимального извлечения дитерпеновых кислот из листьев шалфея достаточно 60 мин. Полнота экстракции дитерпеновых кислот из листьев шалфея лекарственного определялась путем сравнения содержания суммы ДТК в извлечениях, полученных описанным выше способом, и извлечений, полученных на аппарате Сокслета. Результаты приведены в табл. 8. -54 Таблица 8 Полнота извлечения дитерпеновых кислот из листьев шалфея
Анализ извлечений, который осуществлялся с использованием достоверного образца карнозоловой кислоты, показал, что карнозоловая кислота, как основной представитель дитерпеновых кислот шалфея лекарственного, присутствует во всех проанализированных образцах. Было также обнаружено совпадение УФ-спектров поглощения у полученных извлечений и раствора карнозоловой кислоты (максимумы при 285 ±5 нм).
Наиболее подходящим методом определения дитерпеновых кислот является УФ-спектрофотометрический метод, т.к. в структуре этой группы соединений имеются хромофоры. Спектр поглощения очищенного спиртового извлечения из листьев шалфея и спиртового раствора стандартного образца карнозоловой кислоты, относящейся к классу дитерпеновых кислот, представлен на рис. 3. Спектр имеет максимум поглощения при длине волны 285 нм.
Спектры поглощения анализируемого извлечения из листьев шалфея и раствора стандартного образца карнозоловой кислоты в 70% спирте совпадают.
Для решения вопроса о возможности использования данной длины волны. для аналитических целей изучали зависимость оптических плотностей от концентрации карнозоловой кислоты в растворах.
Построение калибровочного графика. Готовят водные растворы карнозоловой кислоты с содержанием последней 0,0180%, 0,0365%, 0,0730%, 0,1090%, 0,1450%.
Измеряют оптическую плотность пяти растворов, содержащих карнозоло-вую кислоту, относительно раствора сравнения, карнозоловую кислоту не содержащего, на УФ-спектрофотометре при длине волны 285 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Строят калибровочный график в координатах D - С, где D -оптическая плотность, С - концентрация растворов карнозоловой кислоты в процентах (рис. 4).
Калибровочный график зависимости оптической плотности от концентрации карнозоловои кислоты в растворе.
Калибровочная кривая зависимости между оптической плотностью растворов и концентрацией растворов карнозоловои кислоты носит линейный характер в интервале концентраций от 0,018 % до ОД 45 %. Открываемый минимум - 0,021 мг/мл.
Следовательно, максимум поглощения при длине волны 285 нм может быть использован в аналитических целях.
Спектры поглощения раствора карнозоловои кислоты в 70% спирте и очищенного спиртового извлечения из листьев шалфея совпадают, что говорит о возможности использования данного метода для анализа ДТК в листьях шалфея.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 100 мл, прибавляют 20 мл 70% спирта и экстрагируют 60 мин при комнатной температуре с использованием магнитной мешалки. Извлечение отстаивают в течение 30 мин. Затем 1,5 мл извлечения переносят в микропробирку типа Эппендорф объемом 1,5 мл с завинчивающейся крышкой и центрифугируют при 8000 об/мин в течение 10 мин. 1мл Надосадочной жидкости с помощью автоматической пипетки переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем 70% спиртом до метки. Оптическую плотность измеряют на УФ-спектрофотометре при длине волны 285 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 70 % спирт.
Изучение качественного состава листьев шалфея лекарственного
Изучение качественного состава полученных водно-спиртовых извлечений листьев шалфея лекарственного проводился на хроматографе Fisons GC8000 (Великобритания) с квадрупольньтм масс-спектрометрическим детектором Fisons MD800 MS. Колонка капиллярная DB-5MS (30мх0,25ммх 0,25мкм, 5%-фенилметшшолисилоксан).
При проведении измерений использовали экспериментально подобранное программируемое изменение температуры и параметров, обеспечивающее наилучшее разделение и идентификацию пиков на хроматограммах исследуемых извлечений.
Параметры хроматографирования: температура колонки: начальный изотермический участок 35С-5 мин, 35-100С, со скоростью подъема температуры 2С/мин, 100-200С, со скоростью подъема температуры 5С/мин, 200-250С, со скоростью подъема температуры 10С/мин и конечным изотермическим участком 15 мин. Температура испарителя 200С. Температура инжектора 300С. Температура источника ионов 250С. Скорость газа-носителя (гелия) - 1 мл/мин.
Хроматограмма извлечения листьев шалфея лекарственного представлена на рис. 19. В составе исследуемых образцов идентифицировано 25 соединений, основные компоненты представлены в таблице 15-1.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 100 мл, прибавляют 20 мл 90% спирта и экстрагируют 60 мин при комнатной температуре с использованием магнитной мешалки. Извлечение отстаивают в течение 30 мин. Затем 1,5 мл извлечения переносят в микропробирку типа Эппендорф объемом 1,5 мл с завинчивающейся крышкой и центрифугируют при 8000 об/мин в течение 10 мин. Затем автоматической пипеткой отбирают 1 мл надосадочной жидкости в стеклянную виалу с завинчивающейся крышкой, которую помещают в барабан автосамплера хромато-масс-спектрометра. Колонка капиллярная DB-5MS (30м х 0,25мм х 0,25мкм, 5%-фенилметилполисилоксан). Параметры хроматографирования: температура колонки: начальный изотермический участок 35С-5 мин, 35-100С, со скоростью подъема температуры 2С/мин. Температура испарителя 200С Температура инжектора 300С. Температура источника ионов 250С. Скорость газа-носителя (гелия) - 1 мл/мин.
На хроматограмме исследуемого образца должен присутствовать пик с временем удерживания 24,019 ± 5%, определяемый по совпадению масс-спектра с библиотечным (степень совпадения не менее 95%).
Изучение качественного состава эфирного масла листьев шалфея лекарственного проводилось на хроматографе Agilent Technologies 6850 Series II (США) с квадрупольным масс-спектрометрическим детектором с линейной ионной ловушкой Agilent Technologies 5973 Network. Колонка капиллярная НР-5MS (30м х 0,5мм х 0,25мкм, 5%-фенил-метшшолисилоксан (фаза G27 по USP-классификации)). Ввод пробы осуществлялся автоматически.
Параметры хроматографирования теже, что и при анализе водно-спиртовых извлечений листьев шалфея лекарственного.
В контроле показателей качества листьев шалфея лекарственного присутствует только количественное содержание эфирного масла, однако весьма важной характеристикой является его качественный состав.
Качественный состав эфирного масла листьев шалфея лекарственного включает в себя более 30 соединений, основные компоненты представлены в таблице 16. Типичная хроматограмма эфирного масла листьев шалфея лекарственного представлена на рис.20.
Лимонен, а-пинен и Р-пинен, кариофиллен, цинеол также входят в состав эфирного масла мяты перечной, эвкалиптол и а-пинен входят в состав эфирного масла эвкалипта, Р-мирцен, Р-фелландрен, р-бурбонен, у-терпинен входят в состав эфирного масла сосны, другие компоненты также встречаются в составе эфирных масел других видов лекарственного растительного сырья. Однако 4-винилгвайакол содержится только в составе эфирного масла листьев шалфея лекарственного, поэтому считаем целесообразным обязательное его присутствие в составе эфирного масла листьев шалфея лекарственного в качестве маркера.
Применение метода смешения проб
Как было показано выше, не во всех образцах проанализированных фитопрепаратов были идентифицированы биохимические маркеры заявленных производителями видов лекарственного растительного сырья.
Так, при анализе разных партий фиточая Опалиховский производства ОАО «Красногорсклексредства» и сбора Элекасол производства ОАО «Крас-ногорсклексредства» (образцы №10 и 15, см. табл. 17) не был обнаружен маркер листьев шалфея - 4-винилгвайакол; при анализе разных партий сбора успокоительного №3 производства ЗАО «Здоровье» и сбора успокоительного №3 производства ОАО «Красногорсклексредства» (образцы №13 и 14, см. табл. 17) не был обнаружен маркер травы чабреца - цис-неролидол.
Для устранения возможных ошибок анализа и для дополнительного контроля результатов был использован метод смешения проб, согласно которому в многокомпонентный фитопрепарат, в котором не был идентифицирован иско мый маркер заявленного производителем вида лекарственного растительного сырья, искусственно добавлялось это лекарственное растительное сырье того же производителя и в той же пропорции, что и указывает производитель. По описанной выше методике были приготовлены извлечения этих четырех фитопрепаратов с добавлением соответственно листьев шалфея и травьт чабреца в пропорциях, соответствующих указаниям производителей. Результаты анализа на примере сбора успокоительного №3 и сбора Эле-касол представлены на рисунках 38 и 39 соответственно.
Во всех проанализированных образцах фитопрепаратов были найдены искомые биохимические маркеры добавленных видов лекарственного растительного сырья - листьев шалфея и травы чабреца.
На основании полученных результатов анализа можно сделать вывод, что отсутствие маркеров в исследованных фитопрепаратах (образцы №10, 13, 14 и 15, см. табл. 17) может быть связано как с возможной сортовой вариацией состава сырья или его низким качеством, так и с возможным отсутствием соответствующего им вида лекарственного растительного сырья.
Напомним, что нами предложено по 3 (три) маркера для корневищ аира и корневищ с корнями валерианы. По результатам анализа фитопрепаратов, в одиннадцати из них были идентифицированы не все 3 предложенные нами маркера корневищ аира и корневищ с корнями валерианы, а лишь некоторые (см. табл.12).
Так, например, при анализе сбора желудочного №3 производства ОАО «Красногорсклексредства» (образец №3, см. табл. 17) были идентифицированы следующие маркеры: (3-кедрен - один из трех предложенных для корневищ аира; гвайол и тетрагидроквинальдин - два из трех предложенных для корневищ с корнями валерианы.
Для выявления возможных причин «исчезновения» некоторых маркеров нами был проведён дополнительный анализ, в ходе которого были проанализированы фитопрепараты разных серий и разных партий (2006 и 2007 гг.). Цель анализа - выяснить, могут ли быть причиной данной ситуации сортовая вариация состава и технологические операции производителя.
Например, как видно из рисунка 40, во всех образцах сбора желудочного №3 производства ОАО «Красногорсклексредства» были идентифицированы те же маркерные соединения, что и при первоначальном анализе. Не были идентифицированы два других маркера корневищ аира - изолонгифолен и а кедренол, маркер корневищ с корнями валерианы — валеранон.
Фрагменты хроматограмм извлечений сбора желудочного №3 производства ОАО «Красногорсклексредства» а) - без добавления корневищ аира и корневищ с корнями валерианы; б) - с добавлением корневищ аира и корневищ с корнями валерианы. 1 - (-)-пулегон; 2 - (-)-пиперитон; 3 - р-кедрен; 4 - гвайол; 5 - 1,2,3,4 - тетрагидроквинальдин. На основании полученных данных можно сделать БЫВОД, что причиной «исчезновения» некоторых биохимических маркеров корневищ аира и корневищ с корнями валерианы могут быть как химические превращения в растворе, так и возможная сортовая вариация химического состава сырья.
Поэтому, обнаружение хотя бы одного из трёх биохимических маркеров корневищ аира и одного из трёх биохимических маркеров корневищ с корнями валерианы может служить показателем присутствия данного конкретного вида лекарственного растительного сырья в составе многокомпонентного фитопрепарата.
1. Изучены требования, предъявляемые нормативной документацией (НД), определяющие показатели подлинности и доброкачественности растительных сборов и БАД. Показано, что в контроле показателей качества отсутствуют упоминания о биохимических маркерах, специфичных для каждого конкретного вида лекарственного растительного сырья.
2. На основании изучения сведений, имеющихся в литературе по современным методам анализа многокомпонентных смесей, обоснован выбор высокочувствительного метода газовой хроматографии с масс-слектрометрическим детектированием, позволяющий определить набор индивидуальных химических соединений и оценить их специфичность для конкретного вида лекарственного растительного сырья.
3. Изучен качественный состав 50 фармакопейных видов лекарственного растительного сырья методом газовой хромато-масс-спектрометрии.
4. Установлено, что у 15 видов лекарственного растительного сырья имеются биохимические маркеры, по присутствию которых возможна идентификация соответствующего им вида лекарственного растительного сырья в составе растительных сборов и БАД.
5. Разработан методический подход к проведению скрининговых исследований качественного состава лекарственного растительного сырья методом газовой хромато-масс-спектрометрии.
6. Изучен качественный состав водно-спиртовых извлечений, а также эфирного масла из листьев шалфея лекарственного.
7. Разработана методика качественного определения вещества-маркера 4-винилгвайакола з листьях шалфея лекарственного методом газовой хромато-масс-спектрометрии.
