Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Обзор литературы
1.1 Биологическая роль эссенциальных жирных кислот 13
1.2 Ботанико-географическое описание энотеры двухлетней 24
1.3 Исследования рода энотера 26
1.4 Фармакологические исследования и применение видов рода энотера 28
Выводы по обзору литературы 35
Глава 2 Объекты и методы исследования
2.1 Объект исследования 36
2.2 Методы исследования 36
2.2.1 Биологические методы 36
2.2.2 Методы обнаружения и идентификации биологически активных соединений (БАС) 39
2.2.2.1 Приготовление водных и спиртовых извлечений 39
2.2.2.2 Фенольные соединения 39
2.2.2.3 Дубильные вещества 41
2.2.2.4 Полисахариды 41
2.2.2.5 Аминокислоты 42
2.2.2.6 Липиды 42
2.2.3 Хроматографические методы 47
2.2.3.1 Методы бумажной и тонкослойной хроматографии 47
2.2.3.2 Метод колоночной хроматографии 47
2.2.3.3 Метод препаративной тонкослойной хроматографии 48
2.2.3.4 Метод газо-жидкостной хроматографии 48
2.2.3.5 Метод жидкостной хроматографии 48
2.2.3.6 Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии 48
2.2.4 Спектральные методы 50
2.2.4.1 Метод УФ-спектрофотометрии 50
2.2.4.2 Метод масс-спектроскопии 52
2.2.4.3 ИК-спектральный анализ 53
2.2.4.4 Эмиссионный спектральный анализ 53
2.2.5 Титриметрические методы 53
2.2.6 Гравиметрические методы 54
2.2.7 Фармакологические методы 54
2.2.7.1 Изучение острой токсичности 54
2.2.7.2 Изучение противовоспалительного действия 55
2.3 Методы стандартизации сырья и масла 56
2.3.1 Отбор проб для анализа 56
2.3.2 Методы морфолого-анатомического исследования 56
2.3.3 Определение числовых показателей качества сырья 57
2.3.4 Определение содержания радионуклидов 57
2.3.5 Определение влияния длительного хранения семян на состав БАС и установление срока годности масла 57
2.3.6 Определение микробиологической чистоты 58
2.4 Статистическая обработка данных 58
Глава 3 Изучение химического состава семян и травы энотеры двухлетней
3.1 Изучение липидов семян энотеры двухлетней 59
3.1.1 Определение основных показателей семян и масла 59
3.1.2 Изучение жирнокислотного состава 60
3.1.3 Изучение нейтральных липидов 61
3.1.4 Изучение полярных липидов 62
3.1.5 Изучение неомыляемой фракции 67
3.1.6 Изучение позиционно-видового состава триацилглицеридов 68
3.1.7 Изучение влияния сроков хранения семян на состав БАС и определение срока годности масла 70
3.2 Фитохимическое изучение надземной части 72
3.2.1 Изучение фенольных соединений 72
3.2.2 Изучение дубильных веществ и полисахаридов 77
3.2.3 Изучение аминокислотного состава 78
3.2.4 Изучение элементного состава 80
Выводы по главе 3 81
Глава 4 Интродукционные исследования и определение сырьевых запасов энотеры двухлетней в дикорастущей флоре
4.1 Определение сырьевых запасов энотеры двухлетней в Краснодарском крае 82
4.2 Изучение всхожести семян 87
4.3Изучение онтогенеза энотеры двухлетней на опытных делянках ботанического сада ПМФИ - филиала ВолгГМУ 88
Выводы по главе 4 93
Глава 5 Морфолого-анатомическое исследование травы энотеры двухлетней, установление товароведческих показателей сырья
5.1 Морфолого-анатомическое исследование травы энотеры двухлетней 94
5.2 Определение товароведческих показателей 100
5.2.1 Определение содержания радионуклидов 100
5.2.2 Определение микробиологической чистоты 101
Выводы по главе 5 103
Глава 6 Получение сухого экстракта травы и предварительные фармакологические исследования масла и сухого экстракта энотеры двухлетней
6.1 Получение сухого экстракта травы энотеры двухлетней 104
6.2 Предварительные фармакологические исследования масла семян и сухого экстракта травы энотеры двухлетней 107
6.2.1.Изучение острой токсичности масла семян энотеры двухлетней 107
6.2.2 Изучение противовоспалительной активности масла 108
Выводы по главе 6 109
Заключение 110
Список литературы 113
Приложение 129
- Биологическая роль эссенциальных жирных кислот
- Изучение полярных липидов
- Морфолого-анатомическое исследование травы энотеры двухлетней
- Получение сухого экстракта травы энотеры двухлетней
Введение к работе
Актуальность проблемы. Эссенциальные жирные кислоты (витамин F), являясь универсальными эндогенными биорегуляторами, привлекают внимание исследователей, а поиск источников данных соединений является весьма актуальной задачей. F-витаминные свойства растительных масел связывают с наличием в их составе триацилглицеридов ненасыщенных жирных кислот семейства -3 или -6. Известно множество, главным образом, импортных лекарственных препаратов и биологически активных добавок к пище, содержащих витамин F и зарегистрированных в РФ: эссенциале, липостабил, эгамол, фитос- F, омеганол, омегамама «9 месяцев», омакор и др.
Еще в начале 80-х годов были установлены преимущества энотеры двулетней (э. двухлетней), как экономически наиболее перспективного растительного источника эссенциальных жирных кислот, в том числе -6 -линоленовой кислоты (ГЛК), содержание которой в масле семян может достигать 10%. За рубежом э. двухлетнюю относят к пищевым, медоносным, кормовым, техническим, лекарственным и декоративным растениям. В отечественной литературе представителям рода Oenothera уделяется недостаточное внимание: в научно-практической медицине, фармацевтической, пищевой промышленности нашей страны семена и жирное масло энотеры не используются и в промышленных масштабах не производятся. Между тем, некоторые виды рода энотера представляют научный и практический интерес, т.к. довольно широко представлены во флоре Кавказа (э. двухлетняя) и могут служить новыми источниками биологически активных веществ (БАВ) и фитопрепаратов.
Поэтому весьма актуальным являются ресурсные исследования э. двухлетней в дикорастущей флоре (на территории Краснодарского края) и возможности ее интродукции в условиях Ставропольского края с целью выявления источника жирного масла с высоким содержанием эссенциальных жирных кислот, а также технологических приемов для его выделения, переработки и рационального комплексного использования.
Степень разработанности темы. В Институте химии растительных веществ АН РУЗ в Ташкенте в результате исследований липидов э. двухлетней флоры Узбекистана были идентифицированы ряд оксигенированных ацилглицеридов и 5 классов липофильных веществ. В Белгородском государственном университете при изучении масла семян э. двухлетней, произрастающей на территории Белгородской области, было установлено, что основными ненасыщенными жирными кислотами масла являются линолевая, олеиновая и -линоленовая. В Государственном НИИ органической химии и технологии совместно с ВИЛАРом разработан комплексный метод извлечения ценных компонентов из жмыха семян э. двухлетней. Методом перекристаллизации путем образования комплексов включения жирных кислот с мочевиной китайским исследователям ., . и др. удалось получить из масла семян э. двухлетней фракцию жирных кислот, на 95,6% обогащенную ГЛК.
В семенах, корнях и надземной части энотеры двухлетней выявлено значительное количество дубильных веществ, фенолкарбоновых кислот, флавоноловых гликозидов гиперозида и изокверцетрина, антоцианов, тритерпеновых сапонинов, ситостерина, аскорбиновой кислоты, слизи, смолы.
Исследований по введению в культуру, ресурсных исследований, изучения фитохимического состава э. двухлетней в условиях интродукции и сравнительному изучению дикорастущих и интродуцированных видов не проводилось.
Цель и задачи работы. Цель – экспериментальное обоснование применения э. двухлетней как сырьевого источника масла, содержащего -линоленовую кислоту; проведение фитохимических исследований надземной части с целью комплексного использования сырья.
Для реализации поставленной цели необходимо решение следующих задач:
-
Интродуцировать э. двухлетнюю на базе ботанического сада ПМФИ -филиала ВолгГМУ Минздрава России и определить ее сырьевые запасы в дикорастущей флоре Краснодарского края;
-
Выделить, изучить, идентифицировать различные классы липидов семян;
-
Провести фитохимическое исследование надземной части растения;
-
Дать фармакологическую оценку противовоспалительного действия масла семян и острой токсичности сухого экстракта травы э. двухлетней;
-
Установить морфолого-анатомические диагностические признаки и товароведческие показатели сырья;
-
Разработать нормативную документацию на масло из семян э. двухлетней.
Научная новизна. Впервые проведены ресурсные исследования (определены сырьевые запасы и величины возможных ежегодных заготовок семян и масла) э. двухлетней во флоре Краснодарского края; осуществлена интродукция данного вида на базе ботанического сада ПМФИ - филиала ВолгГМУ Минздрава России, определена сырьевая продуктивность семян и надземной части э. двулетней в условиях интродукции. Впервые проведено сравнительное изучение качественного состава и количественного содержания БАВ семян дикорастущих растений и культивируемых образцов э. двухлетней (подробно изучен состав нейтральных и полярных липидов, неомыляемой фракции, позиционно-видовой состав триацилглицеридов, а также установлено высокое содержание в масле -6 -линоленовой кислоты и значимое количество -3 -линоленовой кислоты). Изучен химический состав травы э. двухлетней (установлено содержание и состав фенольных соединений, гидролизуемых дубильных веществ, полисахаридов, аминокислот) определены товароведческие показатели сырья.
Получен сухой экстракт травы э. двухлетней, определены оптимальные параметры экстракции. Установлено, что сухой экстракт является малотоксичным и может представлять несомненную перспективу для дальнейших фармакологических исследований в качестве средства, обладающего кардиотоническим действием. Установлено, что масло семян обладает противовоспалительной активностью.
Проведено морфолого-анатомическое изучение надземной части э. двухлетней, установлены диагностические признаки и товароведческие показатели сырья.
Теоретическая и практическая значимость работы.
Теоретическая значимость. В результате проведенных экспериментальных исследований состава семян э. двухлетней доказана целесообразность ее применения как источника жирного масла с высоким содержанием эссенциальных жирных кислот, в особенности -6 -линоленовой кислоты. Результаты определения химического состава травы и предварительные фармакологические исследования свидетельствуют о необходимости дальнейшего более глубокого изучения надземной части э. двухлетней для получения новых лекарственных препаратов.
Практическая значимость. Методики анализа масла семян э. двухлетней, включенные в проект ФСП «Масло семян энотеры», апробированы в ГУЗ «Республиканский центр контроля качества и сертификации лекарственных средств Министерства Здравоохранения РСО-Алания» (акт апробации от 17.02.2012г.). Материалы информационного письма «Изучение позиционно-видового состава триацилглицеридов методом панкреатического гидролиза» включены в лекционный курс и практические занятия кафедры органической химии ПМФИ – филиала ВолгГМУ по курсу: «Липиды» (акт о внедрении от 04.02.2013 г.). Разработана «Инструкция по сбору и сушке травы и семян энотеры двулетней» (утверждена ПМФИ – филиалом ВолгГМУ 05.02.2013 г.).
Методология и методы исследования. Методология фармакогностического исследования подразумевает научно обоснованную и целесообразно организованную последовательность действий и включает несколько
блоков: информационно-исследовательский, фитохимический, технологический, стандартизационный и фармакологический. При проведении работы использовались следующие методы исследований: биологические, химические, физико-химические (ГЖХ, УФ-спектрофотометрия, ВЭЖХ, жидкостная хроматография, масс-спектроскопия и др.), микробиологические, технологические и фармакологические.
Положения, выносимые на защиту:
-
Результаты изучения липидов семян э. двухлетней.
-
Результаты фитохимического изучения надземной части э. двухлетней.
-
Результаты ресурсных и интродукционных исследований э. двухлетней.
-
Результаты морфолого-анатомических исследований надземной части э. двухлетней.
-
Результаты технологических исследований по разработке сухого экстракта травы.
Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность полученных результатов достигается благодаря использованию современных химических, физико-химических, технологических, биологических и фармакологических методов, позволяющих получать воспроизводимые и однозначные результаты. Результаты измерений статистически обработаны. Апробация методик анализа липидов в условиях ГБУЗ «Республиканский центр контроля качества и сертификации лекарственных средств» МЗ РСО-Алания показала их воспроизводимость, что также подтверждает достоверность полученных данных.
Основные положения диссертационной работы доложены на научных конференциях ГБОУ ВПО Пятигорской ГФА «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» в январе 2008, 2009, 2010 и 2011 г. (г. Пятигорск). По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ, в т.ч. 3 - в журналах, рекомендованных ВАК.
Биологическая роль эссенциальных жирных кислот
Выяснению многогранной роли жиров в обеспечении процессов жизнедеятельности организма посвящено значительное число биохимических и физиологических исследований и работ.
Биологические свойства масел обусловлены жирнокислотным и триглицеридным составами, а также наличием в них биологически активных соединений (токоферолов, стеролов, фосфолипидов, каротиноидов и др.). Однако базовым критерием ценности является жирнокислотный состав, характеристикой которого является его сбалансированность по соотношению эссенциальных жирных кислот, представленных 2 основными наиболее значимыми классами:
- кислоты семейства со-3 (в структуре жирной кислоты первая двойная связь находится у третьего атома углерода, считая от концевой метильной группы): а-линоленовая (цис-9,12Д5-октадекатриеновая) С18:3, эйкозапентаеновая (цис-5,8,11,14,17-эйкозапентаеновая) С20:5, докозапентаеновая (цис-4,8,12,15,21-докозапентаеновая) С22:5, цис-4,7,10,13,16,19-докозагексаеновая С22:6;
- кислоты семейства (л-6 (в структуре жирной кислоты первая двойная связь находится у шестого атома углерода, считая от концевой метильной группы): линолевая (цис-9,12-октадекадиеновая) С18:2, у-линоленовая (цис-6,9,12-октадекатриеновая) С18:3, арахидоновая (цис-5,8,11,14-эйкозатетраеновая) С20:4.
Клетки организма человека способны образовывать моноеновые жирные кислоты, то есть жирные кислоты, содержащие одну двойную связь, например пальмитолеиновая — 16:1 или олеиновая кислота 18:1. Однако способность синтезировать некоторые ПНЖК, состоящие из 18 углеродных атомов и содержащие две и три двойные связи, клетки животных и человека утратили. Поэтому ПНЖК (семейств со-3 и ш-6) являются незаменимыми или эссенциальными для человека и должны поступать с пищей.
ПНЖК входят в состав фосфолипидов мембран всех клеток, особенно много их содержит мозговая ткань. Дефицит этих соединений приводит к уменьшению текучести мембран и нарушению их функций. Установлено, что докозагексаеновая (22:6) и арахидоновая (20:4) кислоты являются ключевыми строительными блоками клеточных мембран мозга и сетчатки глаза. Эти же кислоты составляют пятую часть от общего содержания жирных кислот в фосфолипидах головного мозга и влияют на передачу сигнала между нервными клетками через синапсы. В фосфолипидах мембран сетчатки глаза около 60% ПНЖК представлены докозагексаеновои кислотой, которая влияет на фоторецепторную функцию сетчатки через активацию зрительного пигмента родопсина [88].
Важную роль ПНЖК играют в процессах терморегуляции, поскольку один из путей метаболизма линолевой кислоты является ее окисление, сопровождаемое выделением энергии (за счет этого организм получает 3-5% энергии).
Кроме того, ПНЖК являются предшественниками эйкозаноидов (тканевых гормонов): простациклинов, простагландинов (ПГ), лейкотриенов (ЛТ) и тромбоксанов (ТК) (рис.1).
Тканевые гормоны, образованные из разных предшественников, выполняют в организме схожие функции, отличающиеся по интенсивности воздействия и изменяющиеся в зависимости от места образования (тканеспецифичный процесс). В зависимости от исходной жирной кислоты все эйкозаноиды делят на три группы:
- производные эйкозатриеновой кислоты образуются путем удлинения линолевой кислоты (С 18:3). Для этой группы в соответствии с числом двойных связей ПГ и ТК присваивается индекс 1, ЛТ - индекс 3 (ПГЕ1, ПГП, ТКА1, ЛТАЗ);
- производные арахидоновой кислоты (С20:4). Эйкозаноидам этой группы присваивается индекс 2 или 4 (ПГЕ2, ПП2,ТКА2, ЛТА4);
- производные эйкозапентаеновой кислоты (С20:5). По числу двойных связей присваиваются индексы 3 или 5 (ПГЕЗ, ПГІЗ, ТКАЗ, ЛТА5).
Подразделение эйкозаноидов на группы имеет клиническое значение, так как их активность напрямую зависит от числа двойных связей. Например, в ряду простациклинов от ПЦП до ПЦІЗ возрастает антиагрегационная и вазодилататорная активность, в ряду ТК1 до ТКЗ снижается проагрегационная и вазоконстрикторная активность [22].
В ряде исследований было выявлено, что эпидерма кожи не способна самостоятельно синтезировать линолевую кислоту, поэтому эпидермальный фермент липоксигеназа-15 преобразовывает 13-гидроксиоктадекадиеновую кислоту, которая обеспечивает антипролиферативные свойства. Незначительные количества со-6 арахидоновой кислоты метаболизируется через циклооксигеназный путь к простагландину Е2, F2 D2. Другие ПНЖК, полученные от масел, также трасформируются в ЖК, проявляющие противовоспалительные свойства in vitro (рис. 2). Именно поэтому добавление в диету масел, богатых ПНЖК, может использоваться в терапии воспалительных заболеваний кожи [132], а также в косметических средствах для профилактики и коррекции возрастных изменений кожи [2].
Большой интерес среди ПНЖК со-6 вызывает у-линоленовая кислота (ГЛК), которая является метаболитом линолевои кислоты, первым промежуточным продуктом в цепочке превращений линолевои кислоты в арахидоновую и предшественником простагландинов - эндогенных биорегуляторов в организме. Преобразование линолевои кислоты в ГЛК происходит под влиянием специфического печеночного фермента А 6 - десатуразы, однако таким образом преобразуется не более 3% суточной дозы линолевои кислоты. Активность фермента А 6 - десатуразы снижается при старении организма, гиперхолестеринемии, чрезмерном потреблении насыщенных жирных кислот и транс-изомеров ненасыщенных жирных кислот, при стрессах, злоупотреблении алкоголем, радиационном облучении, а также при ряде заболеваний: сахарном диабете, экземе, бронхиальной астме, вирусных инфекциях. В таких случаях в ГЛК превращается не более 1% линолевой кислоты.
Исходя из вышеизложенного, становится понятной биологическая ценность ГЛК. Она характеризуется чрезвычайно высокой биодоступностью (не требуя А -десатуразы) и может легко «удлиняться» на 2 атома углерода, превращаясь в дйгомо ГЛК - непосредственного предшественника синтеза простагландинов, в частности простагландина Е и его производных (рис.3) [40].
Исследования показали, что ГЛК снижает уровень холестерина и липопротеинов низкой и очень низкой плотности при диете, обогащенной холестерином [105], нормализует фосфолипидный состав микросомальных мембран при Zn - дефицитной диете и липидный состав мембран гепатоцитов при алкогольном поражении печени, снижает уровень перекисного окисления липидов, нормализует активность НФДФН-оксидазы, НАДН-оксидазы и НАДФН-редуктазы и повышает содержание цитохромов Р-450 и bs относительно не только облученных, но и контрольных животных, что позволяет рекомендовать ГЛК как один из компонентов комплексной терапии радиационных повреждений и профилактики неблагоприятных последствий радиационного облучения [9].
Изучение полярных липидов
Полярные липиды методом ПТСХ разделили на гликолипиды и фосфолипиды. Используя методы КХ и ПТСХ, из ГЛ выделили 3 фракции, которые идентифицировали по ТСХ путем сравнения с модельными образцами и на основании качественных реакций. Содержание ГЛ составило 0,2% от массы ПЛ, ФЛ - 3,6% от массы ПЛ и 2,2 10"3% от веса воздушно-сухого сырья. В составе ФЛ семян э. двухлетней, интродуцированной в ботаническом саду ПМФИ-филиала ВолгГМУ, идентифицировали 7 компонентов, главными из которых были фосфатидилхолин и фосфатидилинозитол.
Стерилгликозиды не гидролизовались в условиях мягкого щелочного гидролиза. В продуктах кислотного гидролиза присутствовал компонент, соответствовавший по своей подвижности на ТСХ стеринам и дававший положительную качественную реакцию на данный класс соединений.
Кроме классов, представленных в таблице 6, в ГЛ обнаружили компонент, который по своей подвижности на ТСХ совпадал с урсоловой кислотой и давал качественную реакцию с кислотой серной, реактивом Либермана-Бурхарда и Сальковского. В ИК-спектре в вазелиновом масле обнаружили полосы поглощения 1705 см"1, характерные для кислотного карбонила, и 1392, 1383, 1250 см"1 от трех метальных групп.
Методом ГЖХ определили жирнокислотный состав фракций нейтральных и полярных липидов исследуемых образцов энотеры двухлетней (табл. 7, 8).
Как видно из данных таблиц 7 и 8, ГЛК присутствовала во всех классах нейтральных липидов в количестве от 1,2% до 7,4% (во фракции ТАГ). В полярных липидах ГЛК также присутствовала в значимых количествах (от 4,1 до 7%). Наименьшее содержание ГЛК отмечено в масле семян энотеры двухлетней, произрастающей в окрестностях Казани (1,2%), наибольшее - в масле семян энотеры двухлетней, собранной в окрестностях Уфы. Как видно, содержание ГЛК в масле зависит от многих факторов внешней среды (условий произрастания растения). Что касается а-линоленовой кислоты в изученных образцах семян, то в незначительных количествах она присутствовала только в ПЛ (2,3-2,9%).
Доминирующей ненасыщенной жирной кислотой является линолевая (18:2), содержание которой варьировало от 24,6% (в ГЛ энотеры двухлетней, выращенной на территории Краснодарского края) до 91,0% (в ТАГ энотеры двухлетней, произрастающей в окрестностях Казани). Насыщенные жирные кислоты, лидирующей среди которых является пальмитиновая, в заметных количествах присутствуют в СЭТТС, ДАТ и МАГ [26, 50].
Морфолого-анатомическое исследование травы энотеры двухлетней
Лист дорзовентральный, амфистоматический. Верхняя эпидерма листа имеет многогранные по форме клетки, антиклинальные стенки слабоизвилистые, трихомы - простые одноклеточные волоски, имеющие розетку в основании из 7-8 вытянутых клеток, и более мелкие головчатые волоски. Устьица встречаются достаточно часто, тип - аномоцитный и анизоцитный (рис.11).
Нижняя эпидерма имеет сильноизвилистые антиклинальные стенки, устьичный аппарат аномоцитного и анизоцитного типа, обнаружено большое количество простых одноклеточных волосков (рис. 12).
Микроморфологическое исследование поперечного среза листовой пластинки показало, что колленхима расположена в области главной жилки как под верхней, так и под нижней эпидермой. Склеренхима не обнаружена. Проводящая система представлена крупным дорзальным проводящим пучком полулунной формы и мелкими вентральными проводящими пучками. Проводящие пучки коллатерального типа. Проводящие элементы жилок второго порядка не имеют во флоэме клеток-спутниц. Внутренняя флоэма хорошо заметна (рис.13, 14).
Стебель имеет цилиндрическую форму на поперечном сечении. Покровная ткань-эпидерма. В нижней части стебля покровная ткань утолщается за счет деятельности пробкового камбия. Колленхима пластинчатого типа залегает в 1-2 непрерывных слоя. Паренхима коры представлена крупными изодиаметрическими клетками.
Эндодерма представлена одним слоем паренхимных клеток.
Перициклическая зона представлена отдельными группами склеренхимных волокон, расположенными по 5-7, между которыми залегает перициклическая паренхима. Внутренний слой перицикла имеет характерное строение, клетки прямоугольной формы расположены в два слоя по кругу, клеточная стенка неравномерно утолщена. В средней и нижней части стебля проводящая система непучкового типа, но сохраняется внутренняя флоэма. Ксилема представлена как сосудами, так и либриформом, трахеиды отсутствуют. Сердцевинная паренхима представлена клетками округлой формы, клеточные стенки заметно утолщены (рис.15) [85].
Получение сухого экстракта травы энотеры двухлетней
Наибольший интерес вызывает значительное содержание гиперозида в траве (0,39±0,03%). Известно, что гиперозид увеличивает амплитуду, минутный объем крови и замедляет ритм сердечных сокращений. Гиперозид и его агликон кверцетин снимает спазм венечных сосудов, увеличивает коронарный кровоток, не оказывая существенного влияния на кровяное давление, периферические сосуды и сосуды внутренних органов.
Опыт применения гиперозида у больных с коронарной недостаточностью дает хороший терапевтический эффект, выражающийся в уменьшении частоты, продолжительности и интенсивности болевого приступа, улучшении ЭКГ. Его рекомендуют для лечения различных форм коронарной недостаточности. Поэтому нами было принято решение о разработке кардиотонического средства на основе травы энотеры двулетней в форме сухого экстракта, поскольку данный способ переработки ЛРС является одним из наиболее рациональных.
При разработке лекарственных препаратов растительного происхождения возникает вопрос, связанный с ограниченностью сырьевой базы. Одним из способов безотходного производства фитопрепаратов является максимальное истощение сырья за счет подбора оптимальных технологических параметров.
Для выявления оптимального экстрагента нами был взят спирт этиловый с концентрацией 20, 40, 70 и 95%. Извлечения получали при трехкратной экстракции, соотношении сырья и экстрагента 1:3, размере частиц сырья 0,5-1 мм и продолжительности экстрагирования 20 мин. Установили, что наибольшее количество БАВ извлекается из травы спиртом этиловым 70% (табл. 28).
Для выявления оптимального размера частиц сырья были выбраны фракции сырья с размером частиц: 0,5, 1, 3 и 5 мм. Извлечения получали на спирте этиловом 70% при трехкратной экстракции, соотношении сырья и экстрагента 1:3 и продолжительности каждого экстрагирования 20 мин. Установили, что оптимальный размер частиц сырья, при котором происходит наибольший выход БАВ, - 0,5-1 мм (табл. 29).
Для повышения интенсивности и эффективности массообмена при экстрагировании сырья была использована ремацерация, поэтому следующим этапом было выявление оптимального числа ступеней экстракции. Извлечения получали на спирте этиловом 70% при размере частиц сырья 0,5-1 мм, 1 ступень - 1:5 и традиционное время экстракции.
Определили, что выход БАВ в извлечение после третьей экстракции возрастает незначительно (табл. 30), поэтому оптимальная кратность экстракции - 3.
Технологическая схема получения сухого экстракта травы энотеры двухлетней предусматривает стадии экстракции, упаривания полученного извлечения, очистку и сушку концентрированного экстракта (рис. 16). Фильтрацию экстракта проводили традиционно с помощью нутч-фильтра. Сгущение экстракта проводили в вакуум-аппарате до удаления экстрагента примерно на Ул. Далее (в лабораторных условиях) проводили сушку полуфабриката в сушильном шкафу при температуре 60С до содержания влаги в экстракте 5±0,03%.
Готовый продукт - сухой экстракт представляет собой аморфный порошок светло-желтого цвета со слабым специфическим запахом.
