Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Краткая характеристика иксодовых клещевых боррелиозов как природно-очаговых инфекций 10
1.1. ИКБ как классические клещевые облигатно-трансмиссивные инфекции ..13
1.2. Основные переносчики и резервуарные хозяева ИКБ 16
1.3. Феномен трансовариальной передачи боррелий 22
1.3.1. Трансовариальная передача возбудителей трансмиссивных инфекций, передающихся клещами семейства Ixodidae 23
1.3.2. Трансовариальная передача возбудителей аргасовых клещевых боррелиозов 29
1.3.3. Трансовариальная и трансфазовая передача спирохет группы
клещевых возвратных лихорадок у иксодид 34
1.3.4. Трансовариальная и трансфазовая передача боррелий группы ИКБ 36
ГЛАВА 2. Эколого-эпидемиологическая характеристика иксодовых клещевых боррелиозов в пермской области 47
ГЛАВА 3. Материалы и методы исследований 56
ГЛАВА 4. Сравнительный анализ результативности индикации боррелий в иксодовых клещах 67
4.1. Сравнение результативности методов индикации боррелий темнопольной микроскопией и полимеразной цепной реакцией 68
4.2. Обсуждение результатов 71
4.3. Заключение 76
ГЛАВА 5. Спонтанная зараженность боррелиями взрослых ixodes persulcatus и возможность их передачи через яйца 80
5.1. Зараженность боррелиями взрослых голодных и напитавшихся самок 80
5.2. Частота (вероятность) присутствия боррелий в яйцах инфицированных иксодовых клещей 81
5.3. Обсуждение результатов 85
ГЛАВА б. Индикация боррелий в голодных личинках дочернего поколения спонтанно зараженных dxodes persulcatus 86
6.1. Частота (вероятность) присутствия боррелий в голодных личинках 86
6.2. Обсуждение результатов 87
ГЛАВА 7. Значение трансовариальнои передачи я burgdorferi sensu lato в эпизоотологии и эпидемиологии иксодовых клещевых боррелиозов в России 91
Заключение 98
Выводы. 100
Литература
- Основные переносчики и резервуарные хозяева ИКБ
- Трансовариальная передача возбудителей аргасовых клещевых боррелиозов
- Сравнение результативности методов индикации боррелий темнопольной микроскопией и полимеразной цепной реакцией
- Частота (вероятность) присутствия боррелий в яйцах инфицированных иксодовых клещей
Введение к работе
Актуальность проблемы. Патогенные для человека виды боррелий Borrelia burgdorferi sensu lato, передающиеся иксодовыми клещами, вызывают самостоятельные заболевания, выделенные в группу иксодовых клещевых боррелиозов (ИКБ) или инфекций группы Лайм-боррелиоза (Э.И. Коренберг, 1993, 1996). Это классические облигатно-трансмиссивные природно-очаговые инфекции с острым и/или хроническим течением, при которых возможны поражения кожи, нервной, сердечно-сосудистой системы, печени, опорно-двигательного аппарата. По уровню заболеваемости ИКБ занимают в России одно из ведущих мест среди природно-очаговых зоонозов. За четыре последних года (1999-2002 гг.) было зарегистрировано 31902 случая ИКБ, что составило в интенсивных показателях от 5.1 до 5.8 на 100 тыс. человек.
Эколого-эпидемические и таксономические связи боррелий с иксодовыми клещами имеют две существенные особенности. Во-первых, тесную экологическую и коэволюционную связь с определенной сравнительно небольшой таксономической группой иксодовых клещей рода Ixodes (W. Burgdorfer et al., 1983; H. Hoogtraal, 1986; J.F. Anderson, 1989; W. Burgdorfer, S.F. Hayes, 1989; H.A. Филиппова, 1990; N.A. Filippova, 1991; J.E. Keirans et al, 1992), - группой Ixodes persulcatus (или комплексом 1.(1.) ricinus/persulcatus). Во-вторых - отсутствие специфических связей разных геновидов боррелий с определенным видом переносчика и возможность микстинфицирования последних (Э.И. Коренберг, 1999; Н.А. Филиппова, 1999).
На большей части лесной зоны Евразии основной эпидемически значимый переносчик Borrelia burgdorferi sensu lato - таежный клещ (Ixodes persulcatus Schulze), причем на людей нападают, главным образом, взрослые особи (Е. I. Korenberg et al., 2001, 2002). Уровень их зараженности боррелиями - это один из главных показателей эпизоотического состояния природного очага и его потенциальной эпидемической опасности (Э.И. Коренберг, Ю.В. Ковалевский, 2000; Е. I. Korenberg et al., 2002). Он определяется процессами горизонтальной (между резервуарными хозяевами) и вертикальной (трансфазовой) и, возможно, трансовариальной) передачи спирохет.
По имеющимся немногочисленным фрагментарным данным частота трансовариальной передачи боррелии у клеща /. persulcatus варьирует от 0% до 100% (Du Yong et al., 1990; M. Nakao, К. Miyamoto, 1992; Ю.С. Балашов, Л.А. Григорьева, 1997; Ю.С. Балашов и др., 1998; Л.А. Григорьева, К.А. Третьяков, 1998; H.V. Dubinina, 2000). На этом основании высказаны самые разные, порой взаимоисключающие мнения: от отрицания возможности трансовариальной передачи боррелии (М. Nakao, К. Miyamoto, 1992) до придания этому феномену очень важного значения (Ю.С. Балашов, Л.А. Григорьева, 1997; Ю.С. Балашов и др., 1998; Л.А. Григорьева, К.А. Третьяков, 1998). Изоляты боррелии были получены в очень редких случаях от голодных личинок /. ricinus, собранных в Северной Африке (Н. Younsi et al., 2001), Amblyomma amcricanum в США (T.L. Schulze et al., 1986), /. persulcatus в России (Н.Б. Горелова, не опубликованные данные). Также единичные изоляты были получены из биоптатов или крови лабораторных животных, на которых кормили личинок /. ricinus, собранных в природных очагах (G. Stanek et al., 1986, В. Hammer et al., 2002) или от напитавшихся личинок, происходивших от инфицированных в лаборатории клещей (Н.Е. Krampitz, 1986). Методами темнопольной микроскопии живые боррелии были обнаружены у голодных личинок следующих
6 видов: I. scapularis (E.M. Bosler et al., 1983, J. Piesman et al., 1986), A. americanum (T.L. Schulze et al., 1986), I. ricinus (Z. Hubalek, J. Halouzka, 1998), I. persulcatus (Ю.С. Балашов, Л.А. Григорьева, 1997; Ю.С. Балашов и др., 1998). Эти данные плохо сопоставимы и не поддаются количественной оценке. В целом значимость трансовариальной передачи боррелий как одного из факторов, определяющих уровень зараженности взрослых клещей и, следовательно, влияющего на риск зараженности человека и интенсивность эпидемического проявления природных очагов ИКБ, оставалась слабо изученной. Это определило цель и задачи диссертационной работы.
Цель работы
Изучить возможность трансовариальной передачи боррелий у их важнейшего переносчика в Евразии - клеща /. persulcatus, и оценить частоту этого феномена у естественно зараженных клещей в природных очагах.
Задачи исследования
Провести сравнительную оценку результативности индикации боррелий у естественно зараженных клещей традиционным методом темнопольной микроскопии и методом полимеразной цепной реакцией (ПЦР) с праймерами, специфичными в отношении консервативных последовательностей В. burgdorferi 16S рРНК гена;
Оценить вероятность присутствия боррелий в яйцах, полученных от спонтанно зараженных клещей /. persulcatus;
Оценить результативность трансовариальной передачи путём индикации боррелий в голодных личинках дочернего поколения, полученных из яйцекладок спонтанно зараженных самок /. persulcatus;
Проанализировать значение трансовариальной передачи боррелий у таёжного клеща как одного из факторов, способных влиять на интенсивность эпизоотического процесса и эпидемического проявления природных очагов ИКБ в нашей стране.
Научная новизна: впервые на репрезентативном материале показана эффективность применения метода ГЩР для изучения трансовариальной передачи боррелий у их основного переносчика - клеща I. persulcatus; получены данные, подтверждающие наличие геномной ДНК В. burgdorferi sensu lato в яйцах спонтанно инфицированных самок клеща /. persulcatus, что свидетельствует о способности зараженных самок ішфицировать свои яйцекладки; впервые на репрезентативном материале оценена степень результативности трансовариальной передачи боррелий спонтанно зараженными самками /. persulcatus голодным личинкам дочернего поколения; проанализировано значение вертикальной передачи боррелий у таёжного клеща для их циркуляции в природных очагах ИКБ в России.
Практическая значимость. Показано, что при определении уровня зараженности клещей I. persulcatus боррелиями более дорогой и сложный метод ПЦР по своей результативности не имеет существенных преимуществ перед темнопольнои микроскопией витальных препаратов. Поэтому в практической работе санэпид-
8 службы при осуществлении мониторинга за состоянием природных очагов ИКБ массовые исследования клещей с этой целью могут осуществляться методом тем-нопольной микроскопии витальных препаратов.
Апробация работы. Материалы диссертации представлены на 11 Интернациональных курсах по биологии переносчиков инфекций (Чехия, Чешские Будеёвице, июнь 2001 г.), межрегиональной научно-практической конференции по природно-очаговым инфекциям, посвященной 80-летию Омского НИИПИ (Омск, октябрь 2001 г.), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием по иксодовым клещевым боррелиозам (Ижевск, ноябрь 2002 г.) и на VII Интернациональном Потсдамском симпозиуме по клещевым инфекциям (Германия, Берлин, март 2003 г.).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ.
Объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, двух глав обзора литературы, собственных исследований, включающих описание материалов и методов, результаты и их обсуждения, заключения и выводов и списка литературы, включающего 333 источника, из них 272 зарубежных. Работа изложена на 119 страницах, иллюстрирована 8 таблицами, 16 рисунками.
Благодарности. Автор выражает глубокую благодарность руководителю профессору Эдуарду Исаевичу Коренбергу; профессору Александру Леонидовичу Гинцбургу и старшему научному сотруднику Людмиле Николаевне Нестеренко за практическую помощь в освоении ПЦР метода. Старшему научному сотруднику
НИИ дезинфектологии Наталье Игоревне Шашиной за предоставление незаражен-ных голодных нимф из лабораторной колонии и оказанное содействие при кормлении клещей и Dr. Lise Gern (Институт Зоологии, Швейцария), любезно предоставившую напитавшуюся самку /. ricinus из лабораторной колонии незараженных клещей.
Автор крайне признателен научным сотрудникам лаборатории переносчиков инфекций ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН Н.Б. Гореловой за сбор материалов для данного исследования, предоставление изолятов разных спирохет для контроля специфичности ПЦР и содействие в освоении методики культивирования борре-лий, Ю.В. Ковалевскому и Г.Г. Москвитиной - за помощь в освоении техники микроскопии витальных и фиксированных препаратов.
Основные переносчики и резервуарные хозяева ИКБ
Совокупность фактов накопленных более чем за 20-тилетний период изучения проблемы позволило выдвинуть постулат об экологической и коэволюционной связях боррелий группы ИКБ с клещами комплекса Ixodes ricinus/Ixodes persulcatus рода Ixodes семейства Ixodidae [23; 57; 73; 104; 109; 134; 164; 183]. Среди этих видов все основные переносчики боррелий группы В. burgdorferi — I. persulcatus [29; 67; 181; 191], I. ricinus [109; 194; 286; 332], I. dammini (I. scapularis) [74; 108; 261], I. pacificus [109; 110; 261] (табл. 1), а также генетически близких к ним спирохетам (табл. 2).
Довольно много внимания было уделено изучению спонтанной зараженности различных групп кровососущих членистоногих боррелиями группы ИКБ. Описаны случаи выделения В. burgdorferi sensu lato от отловленных в природных очагах ик-содовых клещей родов Amblyomma, Dermacentor, Haemaphysalis, Ixodes, Rhipicephalus, а так же слепней, комаров и блох. Проведен ряд экспериментов по исследованию возможности восприятия, сохранения и передачи боррелий этими членистоногим. Большая часть этих фактов была суммирована в нескольких обзорных публикациях [104; 261]. В результате установлено, что только клещи комплекса /. (Ixodes) ricinus/persulcatus являются основными переносчиками В. burgdorferi sensu lato в Северной Америке, Европе и Азии. Это определяет их первостепенное значение в эпизоотологии и эпидемиологии ИКБ. Остальные виды ге матофагов могут быть отнесены к второстепенным, дополнительным или случайным переносчикам.
Иксодовые клещи принадлежат к экологической группе временных паразитов с длительным питанием [4; 56; 60]. Для этих членистоногих характерен сложный цикл развития, многохозяинность и обязательная смена хозяев по ходу метаморфоза. В их жизненном цикле фазы личиночного, нимфального и имагинального питания, когда они являются настоящими паразитами, чередуются с разделяющими их непаразитическими периодами эмбрионального развития, метаморфоза напитавшихся личинок и нимф, яйцекладки самок и существованием голодных особей.
Численность клещей и степень их зараженности существенно зависят от того конкретного варианта, по которому будет осуществляться их цикл развития. Популяция клещей обычно состоит из особей принадлежащих к разным генерациям: клещи, произошедшие из одной яйцекладки в зависимости от складывающихся для них сочетаний условий, могут подойти к фазе имаго с разрывом в несколько лет. В строгой зависимости от соотношения общего числа развивающихся без диапаузы и диапаузирующих личинок и нимф находится смертность генерации в целом. В совокупности все это приводит к тому, что численность и соотношение возрастных групп клещей существенно изменяется по годам. Развитие потомства сытых самок может осуществляться по разным вариантам - в течение 3, 4 или 5 лет [60]. И популяция, состоящая из одновременно закончивших развитие представителей минимум трех генераций, ежегодно имеет различную общую численность и числен ность клещей зараженных боррелиями [15; 166; 189]. Концентрация боррелии в имаго также зависит от численности и уровня зараженности поколений, от которых они произошли и от особенностей изменения этой зараженности по мере развития каждой генерации.
На территории России особый интерес представляет пара /. persulcatus-1. (Exopalpiger) trianguliceps Birala, где первый является переносчиком боррелии для человека, а второй - не связан с человеком и питается на мелких млекопитающих. Для личинок и нимф /. persulcatus и /. trianguliceps свойственен единый круг про-кормителей - мелких млекопитающих: Sorex araneus, Sorex minitus, Apodemus sylvaticus, Apodemus jlavicollis, Clethrionomys glareolus, Clethrionomys rutilus, Microtus oeconomus, Microtus arvalis, в организме которых боррелии способны к сохранению и длительной персистенции [И; 13; 189; 273]. Зараженность нимф I. trianguliceps спирохетами В. garinii в Пермской области составила по результатам посевов 9,5% [189], личинок в Северо-Западном регионе по результатам нРИФ -100% [13].
Морфо-экологическое сходство клещей /. pavlovskyi, от которых были изолированы спирохеты В. garinii, с I. persulcatus и сравнительно высокий уровень зараженности /. pavlovskyi (27,3%) свидетельствуют об их весьма вероятном участии в эпизоотическом процессе [10]. Личинки и нимфы /. persulcatus и I. pavlovskyi паразитируют примерно в равных пропорциях в одни и те же сроки на одних и тех же видах позвоночных: мелких млекопитающих и птицах из экологической группы, собирающих корм на земле.
Трансовариальная передача возбудителей аргасовых клещевых боррелиозов
По мнению Е.Н. Павловского и А.Н. Скрынник (1948), В.В. Слесаренко и К.А. Дунаевского (1964), феномен трансовариалъной передачи боррелий группы АКБ клещами рода Omithodoros - явление большого эпидемиологического значения и один из основных факторов длительного и стойкого существования природных очагов АКБ, компенсирующий в отдельные периоды отсутствие в составе их биоценозов восприимчивых животных - резервуаров возбудителя.
Поэтому особый интерес для нас представляет принципиальная возможность трансовариалъной передачи боррелий этой группы клещами рода Omithodoros. Описан 21 вид спирохет - возбудителей аргасовых боррелиозов, передающихся клещами семейства A rgasidae рода Omithodoros.
АКБ широко распространены в различных частях света в тропиках, субтропиках и прилегающих к ним территориях умеренной полосы. На территории ближнего зарубежья очаги имеются в странах Средней Азии, Кавказа и Закавказья и, возможно, сохранились местами на юге Украины.
В 1905 году Dutton и Todd точно установили, что возбудитель этой болезни передается клещом Omithodoros moubata при кровососании (экспериментальные животные - обезьяны) и присутствует в средней кишке и мальпигиевых сосудах инфицированных клещей. В продолжение этих исследований Koch в том же году в зо Восточной Африке не только доказал, что В. duttonii передается клещами О. moubata, но и установил их вертикальную передачу, выявив спирохеты в яичниках инфицированных самок, их яйцах и вылинявших из них личинках.
В настоящей работе мы ссылаемся на ряд обзорных работ [43; 44; 53; 101; 104; 105; 132; 133]. Феномен вертикальной передачи боррелий группы АКБ был установлен для ряда видовых ассоциаций клещ - боррелия, а именно: О. moubata — В. duttonii, О. erraticus (два подвида - eraticus, или "large" и sonrai, или "small") - В. hispanica и В. crocidurae, соответственно, О. tholozani {papillipes) - В. persica, О. papillipes — В. sogdianum, О. tartakovskyi - В. latyschewii, О. verrucosus - В. caucasica, О. turicata — В. turicatae, О. hermsi - В. hermsii, О. alactagalis — В. armenica, О. coriaceae - В. coriaceae, О. nereensis - В. nereensis, Alectorobius asperus verrucosus - В. caucasica. Трансовариальная передача не выявлена у пар О. parkeri - В. parkeri, О. talaje - В. mazzottii, О. rudis (О. venezuelensis) - В. venezuelensis и О. (Omithodoros) savignyi - Borrelia crocidurae [145].
Экспериментально определена трансовариальная передача спирохет, которые в естественных условиях передаются другими видами Omithodoros: О. papillipes — В. tartakovskyi, В. verrucosus, В. papillipes, О. verrucosus - В. verrucosus, В. papillipes и О. alactagalis - В. nereensis [52].
Инвазия спирохетами зародышевых клеток, то есть оогониев и ранних ооцитов -основная причина феномена трансовариалъной передачи боррелий этой группы у Omithodoros spp. с возможным уровнем дочерней инфекции до 90% [64]. В первые 24 часа после кровососания, микроорганизмы проникают через базальную мембрану в полость тела клеща, где интенсивно размножаются. И уже отсюда вторгаются в различные органы, в том числе и половую систему. Генерализованная инфекция у клещей этого рода явление распространенное. Спирохеты, оставаясь сравнительно пассивными в ранней фазе овогенеза, покидают цитоплазму яйцеклетки для проникновения в эмбриональные ткани развивающейся нервной системы. Только из этой ткани микроорганизмы проникают в другие органы, такие как слюнные железы, в постэмбриональной стадии развития клеща.
Важный момент, отмеченный некоторыми отечественными учеными — наличие авизуальных стадий у некоторых спирохет, в частности у В. sogdianum. Сидоров (1930), по результатам серии экспериментов с клещами О. papillipes и О. lahorensis и возбудителем клещевого возвратного тифа - В. sogdianum, заключил, что спирохеты в полости тела изученных клещей подвергаются фагоцитозу. В случае О. papillipes фагоцитоз носит незавершенный характер, при этом спирохеты переходят в авизуальные формы и становятся внутриклеточными симбионтами. Тем не менее, сохраняется инфицирующая способность клеща при отсутствии видимых спирохет в гемолимфе и его внутренних органах, а также содержимом яиц при наличии феномена трансовариальной передачи боррелий своему потомству.
Для видовой ассоциации клещ - боррелия уровень инфицирования дочернего поколения колеблется в весьма широких пределах. Например, трансовариальная передача В. latyschewii клещом О. tartakovskyi явление весьма редкое. Спонтанно инфицированные самки О. hermsi передавали спирохеты В. hermsii дочернему поколению, по одним данным - в 2% случаев, по другим - в 12%. Две самки О. coriaceae с генерализованной инфекцией передавали вертикально В. coriaceae 14% и 9% F1 личинкам и далее нимфам [203].
Сравнение результативности методов индикации боррелий темнопольной микроскопией и полимеразной цепной реакцией
Для оценки целесообразности применения метода ПЦР с целью изучения тран-совариальной передачи В. burgdorferi sensu lato была исследована его результативность в сравнении с обычным методом выявления боррелий темнопольной микроскопии.
Результаты обоих сравниваемых методов индикации боррелий свидетельствовали о высоком уровне зараженности клещей (48,8% и 61,0%), однако, методом ПЦР было выявлено примерно на 10% больше инфицированных особей, чем темнопольной микроскопией (табл. 5). При этом различия показателей зараженности клещей, полученных разными методами, вполне достоверны (критерий Стьюдента t=2.5).
В большинстве случаев (около 70% исследованных особей) оба метода показали идентичные результаты, но, данные в общей сложности по 35 клещам из 205 (2б.9±7.8%) не совпали. Главным образом это произошло из-за того, что методом ПЦР удалось обнаружить возбудителя у 30 клещей, у которых он не был выявлен темнопольной микроскопией. Вместе с тем 5 проб, подготовленных из достоверно зараженных клещей, оказались негативными в ПЦР (табл. 6).
В природных очагах ИКБ переносчики, содержащие большое количество возбудителя, составляют лишь незначительную часть зараженных клещей; преобладают особи, содержащие минимальное количество боррелий [17; 193]. Для отражения уровня инфицированности исследуемых клещей, Ю.В. Ковалевским и др. (1991) предложена шкала балльных оценок концентрации боррелий в препарате: низкая (до 10), средняя (10,1-50), высокая (50,1-250) и очень высокая (более 250 спирохет на 100 полей зрения).
Результаты исследования клещей методом ПЦР при разном уровне их индивидуальной зараженности, выявленной темнопльной микроскопией, показывают, что этот метод позволил выявить боррелий у 28,6% клещей, которые были отнесены к числу незараженных на основании просмотра 250 полей зрения в каждом из соответствующих витальных препаратов. Вместе с тем ПЦР не выявил в общей сложности примерно 8% клещей, содержавших боррелий в достаточной концентрации (более 10 на 100 полей зрения) (табл. 6).
Несомненно, ПЦР дает лучшие результаты по сравнению с темнопольной микроскопией витальных препаратов, когда образец содержит очень небольшую концентрацию бактериальных клеток. Высокий уровень зараженности клещей, выявленный методом ПЦР, основан на обнаружении возбудителя у особей, содержащих единичные спирохеты.
В целом, наши данные показывают, что при выявлении зараженности клещей боррелиями, метод ПЦР, несмотря на несколько большую чувствительность, не имеет существенных преимуществ перед темнопольной микроскопией.
Существенное расхождение в результатах отмечалось при исследовании в ПНР материала от клещей, учтенных как неинфицированные (28,6%) по результатам темнопольной микроскопии. Среди особей, содержащих среднее и высокое число боррелий, возбудитель, с небольшими расхождениями, был выявлен обоими методами практически во всех случаях. Казалось бы, это свидетельствует о заметно большей чувствительности метода ПЦР. Однако следует учитывать, что увеличение числа просматриваемых полей зрения приводит к существенному уменьшению вероятности пропуска положительного препарата при микроскопии. Так при просмотре 350 полей таковая составляет 0.0215, при просмотре 500 - всего лишь 0.0055 [17]. Иными словами, если использовать рассчитанную ранее величину возможной ошибки микроскопии в качестве поправочного коэффициента, то данный метод даст величину общей зараженности клещей, приближающуюся к таковой при ПЦР-анализе. Несомненно, ПЦР дает лучшие результаты по сравнению с темнопольной микроскопией витальных препаратов, когда образец содержит очень небольшую концентрацию бактериальных клеток.
Частота (вероятность) присутствия боррелий в яйцах инфицированных иксодовых клещей
Однако, у личинок, вылинявших из этих яиц, ДНК боррелий отсутствовала или, возможно, была в чрезвычайно низкой концентрации. Это свидетельствует об уменьшении числа яиц, инфицированных боррелиями или о потере возбудителя на этапе развития яиц и вылинивания личинок. Нельзя исключить также возможность гибели боррелий в процессе овогенеза, что подтверждается малым количеством их в яйцах и личинках.
Реализация трансовариальной передачи возбудителей, как известно, зависит от частоты генерализованной инфекции в материнском организме переносчиков и возможности проникновения инфицирующего агента в генеративные органы членистоногих до окончания формирования наружной кутикулярной оболочки яиц, причем концентрация агента должна быть достаточной для преодоления "яйцевого барьера" [64; 105].
Генерализованная инфекция у клещей рода Ixodes явление заметно более редкое, чем у клещей рода Ornithodoros - переносчиков аргасовых клещевых борре-лиозов. Частота генерализованной инфекции существенно отличается у разных видов иксодид и варьирует в широком диапазоне у одного и того же вида. В США при общей невысокой зараженности голодных I. scapularis таковая обнаружена у 3,9% [106] и 2,4% [39] от общего числа инфицированных особей. В Европе этот показатель у голодных /. ricinus составил 5,5% [109] и 36% [208] от общего числа инфицированных особей. В Китае по данным Du Yong et al. (1990) процент голодных самок 7. persulcatus с системной инфекцией составил 2,9%, т. е. 1 самка из 34 инфицированных содержала боррелий и в яичниках. В Японии из 27 исследованных на наличие генерализованной инфекции взрослых голодных /. persulcatus методом посева, только 3 особи содержали боррелий в кишечнике в незначительном числе [325]. По данным Г.Г. Москвитиной и др. (1995) генерализованная инфекция выявлена у 12,9% особей /. persulcatus. В нашем исследовании, боррелий присутствовали в яичниках у 3 голодных самок таежного клеща из 96 исследованных (примерно 3%), или 11,5% от общего числа инфицированных самок.
Процент клещей с генерализованной инфекцией значительно возрастает после насыщения, особенно в более поздние сроки после кровососания. По данным ряда исследований проникновение спирохет через кишечный эпителий и их последующая диссеминация происходят в первые 5-7 суток после прикрепления клеща и начала кровососания [5; 90; 104; 106; 126; 241; 276]. На 5 сутки у 20 (57,1%) I. dammimi из 35 исследованных и содержавших спирохеты в кишечнике клещей, боррелий регистрировались в гемолимфе [276]. В исследовании Monin et al. (1989), 11,8 и 9,8% самок I. ricinus содержали боррелий в слюнных железах и яичниках на 3, 4 и 5 сутки от начала питания на инфицированных животных. У I. persulcatus по данным Балашова, Григорьевой (1997) спустя 3-4 суток от начала питания количество боррелий в слюнных железах, яичниках, мальпигиевых сосудах значительно возрастает. Burgdorfer et al. (1988) по результатам экспериментальных исследований заключил, что чем продолжительнее период между насыщением и последующим исследованием, тем большее число клещей имеет боррелиозную генерализованной инфекцию. Так, процент экспериментально инфицированных голодных 7. dammini имевших генерализованную инфекцию (от числа зараженных особей) возрастал с 2,8% до 19,5-78,2% на 43-68 и 110-130 день от начала кровососания, соответственно. У завершивших яйцекладку самок 7. pacificus и содержавших боррелий в яичниках, этот диапазон варьировал от 3% [200] до 8,3% [285]. Самки I. ricinus в 5,1% случаев имели генерализованную инфекцию со значительным со держанием боррелий в яичниках [109]. Процент напитавшихся самок /. persulcatus, имевших генерализованную инфекцию, увеличился до 15% с присутствием боррелий в яичниках уже у 2 из них [127]. Поэтому вертикальная передача спирохет В. burgdorferi sensu lato иксодовыми клещами происходит реже, чем возбудителей АКБ, у которых она обычно наблюдается более чем в половине случаев (52; 53; 64; 105; 145).
Нам кажется маловероятным наличие столь высокого процента голодных самок /. persulcatus с генерализованной инфекцией, приведенное в работах Балашова и Григорьевой [6; 7], как и стабильно высоких показателей уровня их зараженности в природе и генерализации инфекции, имевших место на протяжении сравнительно длинного отрезка времени - 4-х лет наблюдений [8]. Например, в первом случае, по данным этих исследований, из 95,4% зараженных голодных самок 94% имели генерализованную инфекцию и содержали боррелий (именно В. burgdorferi sensu lato!) в яичниках [7], во втором, 48,2% голодных самок от числа инфицированных также содержали боррелий в яичнике и яйцеводе [6]. Так же кажется маловероятным, чтобы все исследованные клещи как /. persulcatus, так /. trianguliceps содержали, передавали и получали В. burgdorferi sensu lato по циклу своего развития в 100% случаев [6; 7; 13].
