Введение к работе
Актуальность проблемы. Патогенные для человека вилы боррелнй — Borrelia burgdorferi sensu lato, передающиеся нксодовымн клещами, вызывают самостоятельные заболевания, выделенные в группу икешювых клещевых боррелиоэов (ИКБ) или инфекций группы Лайм-боррелиоза (Э.И. Коренберг, 1993, 1996). Это классические облнгатно-трансмиссивкые природио-очаговыс инфекция с острым и/или хроническим течением, при которых возможны поражения кожи, нервной, сердечно-сосудистой системы, печени, опорно-двигательного аппарата. По уровню заболеваемости ИКБ занимают в России одно из ведущих мест среди прнродно-очаговых зоонозов. За четыре последних года (1999-2002 гг.) было зарегистрировано 31902 случая (ЖЕ, что составило в интенсивных показателях от 5.1 до 5.8 на 100 тыс человек.
Экологоэошюшггеские в таксономические связи боррелнй с нксодовымн клещами имеют две существенные особенности. Во-первых, тесную экологическую и коэволюционную связь с определенной сравнительно небольшой таксономической группой иксодовых клещей рода Ixodes(W. Burgdorfer et aL, 1983; Н. Hoogstraal, 1986; J.R Anderson, 1989; W. Burgdorfer, S.F. Hayes, 1989; H.А. Филиппова, 1990;NA Filippova, 1991; J.B. Keirans et «I., 1992), -группой Ixodes persulcatus (или комплексом 1.(1.) ricinus/persulcaius). Во-вторых - отсутствие . специфических связей разных геновидов боррелнй с определенным видом переносчика и 'возможность микстннфтшровання последних (Э.И. Коренберг, 1999; НА. Филиппова, 1999).
На большей части лесной, зоны Евразии основной эпидемически значимый переносчик Borrelia burgdorferi sensu lato - таежный клещ {Ixodes perstiicatus Scbulze), причем на людей нападают, главным образом, взрослые особи (Е. I. Korenberg et at., 2001, 2002). Уровень их зараженности боррелнями - это один из главных показателей эпизоотического состояния природного очага н его потенпдальвоа-эпнлвыйчесьюй опасности (Э.И. Коренберг, Ю.В.
Ковалевский, 2000; Е. I. Korenberg et al, 2002). Он определяется процессами горизонтальной (между резервуаряыми хозяевами) и вертикальной (трансфазовой) и, возможно, трансовариальной) передачи спирохет.
По имеющимся немногочисленным фрагментарным данным частота трансовариальиой передачи боррелвй у клеша / persulcatus варьирует от 0% до 100% (Du YongetaL, 1990; М. Nakao, К. Miyamoto, 1992; Ю.С Балашов, Л.А. Григорьева, 1997; Ю.С Балашов н др., 1998; ЯЛ. Григорьева, К.Л. Третьяков, 1998; H.V. Dubbtna, 2000). На этом основании высказацы самые разные, порой взаимоисключающие мнения: от отрицания возможности трансовариальной передачи боррелий (М. Nakao, К. Miyamoto, 1992) до придания этому феномену очень важного значения (Ю.С. Балашов, ЯЛ. Григорьева, 1997; Ю.С. Балашов в др., 1998; ЯЛ. Григорьева, ЮЛ. Третьяков, 1998). Изоляты боррелий были получены в очень редких случаях от голодных личинок I riclnus, собранных в Северной Африке (Н. Younsi et aL, 2001), АтЫуотта americaman в США (ТХ. Schulze et al, 1986), I. persulcatus в России (H.E Горелова, не опубликованные данные). Также единичные изоляты были получены из Сяоїггатов или крови лабораторных животных, на которых кормили личинок I riclnus, собранных в природных очагах (fl. Stanek et aL, 1986, В. Hammer et al, 2002) или от напитавшихся личинок, происходивших от инфицированных в лаборатории клешей (Н.Е. Krampitz, 1986). Методами темкопольной микроскопии живые борредин были обнаружены у голодных личинок следующих видов: /. scapularis (ЕЛІ, Bosler et aL, 1983, J. Ptesman et at, 19S6), A. americaman (T.L. Schulze et aL, 1986), I. rlcitttis (Z. Hubalek, J. Наїоигка, 1998), I. persulcatus (Ю.С. Балашов, ЯЛ, Григорьева, 1997; Ю.С. Балашов и др., 1998). Ли данные плохо сопоставимы и не поддаются количественной опенке. В целом значимость трансовариальной передачи боррелий как одного из факторов, определяющих уровень зараженности взрослых клешей и, следовательно, влпяюшего на риск зараженности человека и пнтенсивность эпидемического проявления природных очагов ИКБ, оставалась слабо изученной. Это определило цель и задачи диссертационной работы.
з Цель работы
Изучить возможность трансовариалыюй передачи боррелиЯ у нх важнейшего
переносчика в Евразии - клеша /. persulcatus, и опенвть частоту этого феномена у
естественно зараженных клешей в природных очагах.
Задачи исследования
1. Провести сравнительную оценку результативности индикации боррелий у естественно
зараженных клешей традиционным методом темнополыюй микроскопии и методом
полимеразной цепной реакцией (ПЦР) с праймерамн, специфичными в отношении
консервативных последовательностей В. burgdorferi 16S рРНК гена;
2. Оценить вероятность присутствия боррелий в яйцах, полученных от спонтанно
зараженных клешей /, persulcatus%
-
Оценить результативность траксовариальной передачи путём индикации боррелий в голодных личинках дочернего поколения, полученных из яйцекладок спонтанно зараженных самок Л persutcatus;
-
Проанализировать значение трапсовариальной передачи боррелий у таежного клеша как одного из факторов, способных влиять на интенсивность эпизоотического процесса и эпидемического проявления природных очагов ИКБ в нашей стране,
Научная новизна:
впервые на репрезентативном материале показана эффективность применения метода ПЦР для изучения трансоварнальной передачи боррелий у нх основного переносчика - клеша /, pcrsulcatus;
получены данные, подтверждающие величие геномной ДНК В. burgdorferi sensu lato в яйцах спонтанно инфицированных самок клеша /. persulcasm, что свидетельствует о способности зараженных самок инфицировать свои яйцекладки;
- впервые на репрезентативном материале оценена степень результативности
трансовариалъной передачи боррелий спонтанно зараженными самками / persulcatiis
голодным дичинкам дочернего поколения;
- проанализировано значение вертикальной передачи борреяий у таёжного клеша для их
циркуляции в природных очагах ИКБ в России.
Практическая значимость. Показано, что при определении уровня зараженности клещей /. persulcatus боррслиями более дорогой и сложный метод ПЦР по своей результативности не имеет существенных преимуществ перед темною льной микроскопией витальных препаратов. Поэтому в практической работе санэпидслужбы при осуществлении мошпоринга за состоянием природных очагов 1ІКБ массовые исследования клещей с этой целью могут осуществляться методом темнопольной микроскопии витальных препаратов.
Апробация работы. Материалы диссертации представлены на 11 Интернациональных курсах по биологин переносчиков инфекций (Чехия, Чешские Будеевиие. июнь 2001 г.), межрегиональной научно-практической конференции ко яриродне-очаговым инфекциям, посвященной 80-летию Омского НИИШІ (Омск, октябрь 2001 г.). Всероссийской научно-практической конференции с международным участием по иксодовым клешевым боррелиозам (Ижевск, ноябрь 2002 г.) и да VII Интернациональном Потсдамском симпозиуме по клешевым инфекциям (Германия, Берлин, март 2003 г.).
Апробация диссертации состоялась на научной конференции отдела природко-очэговых инфекций ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН 15 октября 2003 г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ.
5 Объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, двух глав обзора
литературы, собственных исследований, включающих описание материалов и методов,
результаты и их обсуждения, заключения и выводов и списка литературы, включающего 333
источника, из них 272 зарубежных. Работа изложена на 119 страницах, иллюстрирована 8
таблицами, ] б рисунками.
