Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Устойчивость микроорганизмов к дезинфицирующим средствам и её мониторинг .
1.1 Устойчивость микроорганизмов к антибактериальным средствам: распространенность, механизмы формирования, классификации
1.2 Факторы, влияющие на эффективность дезинфекции и проявления устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам .
1.3 Мониторинг устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам
Глава 2. Организация, материалы и методы исследований . Собственные исследования
Глава 3. Научное обоснование мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам
3.1 Теоретические аспекты устойчивости к дезинфектантам и другим антибактериальным средствам
3.2 Экспериментальное доказательство возможности формирования устойчивости к дезинфицирующим средствам .
3.2.1 Формирование индуцированной устойчивости у тест-штамма E.coli к ДС на основе ЧАС
3.2.2 Формирование индуцированной устойчивости у тест-штамма E.coli к хлорсодержащему ДС
3.3 Способ моделирования формирования устойчивости бактерий к дезинфицирующему средству .
3.4 Изучение различных факторов, связанных с проявлениями устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам...
3.4.1 Изучение адгезивности и деколонизирующей способности устойчивых к ДС штаммов микроорганизмов
3.4.2 Видовые особенности чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам .
3.4.3 Изучение особенностей устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам на различных поверхностях
3.4.4 Сравнительная характеристика чувствительности микрофлоры медицинских учреждений при различной эпидемиологической обстановке
Глава 4 Методическое обеспечение мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам
4.1 Методология изучения чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам
4.1.1 Определение чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам
4.1.2 Интерпретация результатов .
4.1.3 Оценка методики .
4.2 Параметры мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам
4.2.1 Общие параметры мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам
4.2.2 Мониторинг устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам при разных видах медицинской помощи .
4.2.2.1 Мониторинг устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам в многопрофильных ЛПО
4.2.2.2 Мониторинг устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам в отделениях и ЛПО хирургического профиля .
4.2.2.3 Мониторинг устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам в амбулаторно-поликлинических учреждениях .
4.2.2.4 Мониторинг устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам в учреждениях родовспоможения .
4.2.3 Мониторинг устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам на территориальном уровне
4.3 Программное обеспечение мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам
Глава 5 Организационные основы мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам .
5.1 Организация мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам
5.2 Организационно-функциональные модели мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам .
5.2.1 Организационно-функциональная модель мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам в ЛПО
5.2.2 Организационно-функциональная модель мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам на территориальном уровне
5.3 Образовательный компонент организационно-методического обеспечения мониторинга устойчивости микроорганизмов к ДС...
5.3.1 Образовательный компонент обеспечения МУ к ДС на додипломном уровне
5.3.2 Образовательный компонент обеспечения МУ к ДС на последипломном уровне
Глава 6 Анализ результатов мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам в рамках эпидемиологического надзора за ИСМП
6.1 Анализ результатов мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам на территориальном уровне
6.1.1 Маркетинговые исследования регионального сегмента рынка дезинфицирующих средств в Нижегородской области .
6.1.2 Анализ чувствительности микрофлоры ЛПО Нижегородской области к дезинфицирующим средствам .
6.2 Подходы к оценке экономической эффективности мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам .
6.3 Оценка эффективности мероприятий по мониторингу устойчивости микроорганизмов к ДС на территориальном уровне
Заключение .
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы
- Факторы, влияющие на эффективность дезинфекции и проявления устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам
- Организация, материалы и методы исследований . Собственные исследования
- Экспериментальное доказательство возможности формирования устойчивости к дезинфицирующим средствам
- Определение чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам
Введение к работе
Актуальность проблемы
Проблема устойчивости микроорганизмов к антибактериальным препаратам, включая антибиотики, антисептики и дезинфектанты, в настоящее время находится в фокусе пристального внимания ученых и специалистов практического здравоохранения. Наличие устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам (ДС) изучается уже на протяжении ряда лет (Пхакадзе Т.Я., 2002; Walsh S.E., 2003; Chapman J.S., 2003; Russel A.D., 2004; Шкарин В.В., Ковалишена О.В., 2004, 2005, 2006, 2008; Афиногенов Г.Е., 2004, 2008; Гудкова Е.И., 2007; Тимошинова Е.В. с соавт.,2010 и др.). Установлено наличие устойчивости к различным группам дезинфектантов, у различных микроорганизмов (Chapman J.S., 2003; Cloete T. E., 2003; Russel A.D., 2004). Знания о механизмах устойчивости варьируют от выявления генетического механизма её формирования к ЧАС и кислородсодержащим дезсредствам до отсутствия достоверных представлений и только описания феномена устойчивости (Yoshimatsu T., Hiyama K., 2007; Maillard J.-Y., 2007; Гудкова Е.И., 2007; Anderson G.G., O'Toole G.A., 2008). Еще меньше информации о частоте встречаемости устойчивости, ее распространенности и влиянии различных факторов на формирование устойчивости (Chapman J.S., 2003; Шкарин В.В., Ковалишена О.В., 2005, 2007; SCENIHR: 28th plenary, 2009).
В условиях нарастания устойчивости возбудителей к антибактериальным средствам, назрела необходимость глубокого всестороннего изучения проблемы устойчивости и осуществления её мониторинга. Необходимость изучения и динамического наблюдения за устойчивостью микроорганизмов к ДС и антисептикам обусловлена целым рядов факторов: ростом заболеваемости инфекциями, связанными с оказанием медицинской помощи (ИСМП), широким распространением госпитальных штаммов, большим арсеналом адаптационных механизмов у условно-патогенных микроорганизмов, расширением спектра применяемых ДС, отсутствием единой стратегии применения дезинфектантов в практическом здравоохранении и др. причинами. Чувствительность микрофлоры к применяемым ДС в настоящее время может рассматриваться как один из основных факторов, влияющих на качество дезинфекционных мероприятий в лечебно-профилактических организациях (ЛПО). Чувствительность различных микроорганизмов к указанным средствам может варьировать в зависимости от типа ЛПО, особенностей санитарно-противоэпидемического режима, политики применения ДС. Способность микроорганизмов адаптироваться к воздействию неблагоприятных факторов, в том числе применяемых в ЛПО дезинфицирующих средств, обуславливает возможность формирования устойчивых штаммов. В многолетних исследованиях, проведенных кафедрой эпидемиологии и НИИ профилактической медицины НижГМА, была показана необходимость динамической оценки состояния чувствительности микрофлоры ЛПО к ДС (Шкарин В.В., Ковалишена О.В., 2004, 2006, 2007).
Одним из направлений борьбы с ИСМП является совершенствование дезинфекционных и стерилизационных мероприятий как за счет разработки новых ДС и технологий, так и за счет улучшения организации и проведения этого комплекса мероприятий. Рациональная организация и проведение эффективных дезинфекционных мероприятий играют важную роль в комплексе мер по борьбе с инфекциями (Gebel J., 2002; Пантелеева Л.Г., 2005; Шкарин В.В., 2006; Шандала М.Г., 2009). Стратегию борьбы с ИСМП в России определяет утвержденная в 2011г. «Национальная концепция профилактики инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи», одним из приоритетов которой является систематическое проведение мер, направленных на сдерживание селекции штаммов микроорганизмов, устойчивых к ДС и антисептикам, за счет качества проведения дезинфекции, тактики дезинфекционных мероприятий с учетом результатов мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфектантам. Выбор тех или иных ДС, технологий, режимов их применения определяется типом медицинского учреждения, эпидемиологической ситуацией (Акимкин В.Г., 2006). Внедряется система ротации дезинфицирующих средств, для обоснования которой требуется исследование механизмов формирования резистентности микроорганизмов к дезинфектантам, а также мониторинг резистентности в условиях применения ДС в ЛПО (Шкарин В.В., Ковалишена О.В., 2006, 2007; Селькова Е.П., 2006). Требования к проведению оценки устойчивости микроорганизмов к ДС и мониторингу устойчивости в системе эпидемиологического надзора за ИСМП (ВБИ) закреплены в нормативных документах (СП 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность»).
Однако остаются нерешенными многие организационно-методические вопросы проведения мониторинга устойчивости в ЛПО различного профиля. Их решение затруднено в связи с несовершенством методического обеспечения (Шандала М.Г., Соколова Н.Ф., 2005; Селькова Е.П. с соавт., 2006; Редгер Х.И. с соавт., 2006). Широкому внедрению мониторинга устойчивости во многом препятствует отсутствие методик определения чувствительности микроорганизмов к ДС, утвержденных на федеральном уровне (Соколова Н.Ф., 2005; Шкарин В.В., 2008; Афиногенов Г.Е. с соавт., 2008). Необходимо полное и всестороннее изучение таких вопросов, как вероятность возникновения устойчивости к ДС, скорость ее формирования; факторы, влияющие на развитие устойчивости к ДС; влияние эпидемиологической ситуации в ЛПО на распространенность и формирование устойчивости больничной микрофлоры.
Таким образом, имеется множество нерешенных вопросов теоретического, методического и организационного плана, которые препятствуют широкому внедрению мониторинга устойчивости микроорганизмов к ДС на территории России и требуют разработки научно-методических подходов к его проведению в медицинских учреждениях разного профиля, при различной эпидемиологической обстановке, на территориальном уровне.
Цель исследования: на основе комплексного изучения проблемы устойчивости разработать теоретическое обоснование, организационно-методическое обеспечение и внедрить мониторинг устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам.
Задачи исследования
Теоретическая разработка проблемы устойчивости микроорганизмов к антибактериальным средствам и научное обоснование мониторинга устойчивости к дезинфицирующим средствам (МУ к ДС):
совершенствование терминологии и разработка современной классификации устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим и другим антибактериальным средствам;
формирование устойчивости в экспериментальных условиях;
моделирование условий формирования устойчивости к ДС;
изучение различных факторов, влияющих на проявление устойчивости к дезинфектантам.
Совершенствование методов оценки чувствительности бактерий к дезинфицирующим средствам.
Методическое обеспечение МУ к ДС:
разработка параметров мониторинга;
программное обеспечение мониторинга;
разработка и внедрение образовательного компонента в систему обучения и подготовки кадров по МУ к ДС на до- и последипломном уровне
Создание организационно-функциональных моделей МУ к ДС:
на уровне ЛПО;
на региональном уровне.
Внедрение МУ к ДС, анализ его результатов и оценка эффективности.
Теоретическая значимость и научная новизна исследования
Впервые проведено комплексное исследование проблемы устойчивости микроорганизмов к ДС от теоретических основ до практической реализации ее регионального мониторинга в течение двух лет с оценкой эффективности.
На основе обобщения и систематизации имеющихся сведений и результатов собственных исследований предложена классификация механизмов устойчивости микроорганизмов к антибактериальным средствам (АБС), введены новые понятия и дано их определение, согласована отечественная и зарубежная терминология, что существенно расширяет научные представления о данной проблеме.
Получены новые теоретические данные о различных видах устойчивости к АБС: перекрестной, ассоциированной, сочетанной, комбинированной и индуцированной устойчивости.
В серии экспериментов доказана возможность формирования устойчивости в эксперименте; выработана индуцированная устойчивость у тест-штамма E.coli, как результат адаптации к систематическому воздействию суббактерицидных концентраций ДС разных групп химических соединений (ЧАС, ХДС).
Разработан способ моделирования устойчивости бактерий к дезинфектантам в лабораторных условиях, позволяющий изучать закономерности её формирования.
Впервые разработано научное обоснование и организационно-методическое обеспечение МУ к ДС, определены общие положения, принципы и адаптированные параметры мониторинга устойчивости, как компонента эпидемиологического надзора.
Впервые разработаны и внедрены организационно-функциональные модели мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам в медицинских учреждениях, на региональном и межрегиональном уровне в рамках инновационного пилотного проекта в Российской Федерации.
Практическая значимость исследования
Разработаны общие и специальные параметры МУ к ДС на основе организационно-функциональных моделей, апробированных в ЛПО различного профиля и на региональном уровне, включающие взаимодействие ЛПО, органов управления здравоохранением, учреждений Роспотребнадзора и Центра МУ к ДС.
Разработаны и внедрены рекомендации по МУ к ДС как компонента эпидемиологического надзора за ИСМП в хирургических клиниках (отделениях), амбулаторно-поликлинических и учреждениях родовспоможения в зависимости от эпидемиологической ситуации.
Разработан и внедрен образовательный компонент организационно-методического обеспечения МУ к ДС в систему обучения и подготовки кадров, задействованных в его организации и проведении, на до- и последипломном уровне.
Разработанный способ моделирования устойчивости позволяет оптимизировать дезинфекционные мероприятия, разрабатывать новые и совершенствовать уже известные дезинфицирующие средства с целью преодоления формирования устойчивости.
Предложена новая упрощенная, экономичная методика оценки чувствительности/устойчивости бактерий к ДС, основанная на точной количественной оценке результатов; обладающая высокой чувствительностью, специфичностью, валидностью и воспроизводимостью результатов; использующаяся в практическом здравоохранении в качестве методического обеспечения проведения МУ к ДС на региональном и межрегиональном уровне.
Разработаны организационно-методические подходы к проведению МУ к ДС в ЛПО и на территориальном уровне с программным обеспечением.
Проведена оценка результатов регионального МУ к ДС на протяжении двух лет в динамике с оценкой распространенности устойчивости, её характеристик, определением эффективности, а также проблемных моментов и путей дальнейшего совершенствования этого компонента эпидемиологического надзора.
Внедрение результатов исследования в практическую деятельность
По результатам исследования получен патент на изобретение №2378363 РФ, «Способ определения чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующему средству (варианты)». Авторы: Шкарин В.В., Ковалишена О.В., Благонравова А.С., Ермольева С.А., Воробьева О.Н., Алексеева И.Г., Усачева С.Ю.; заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО «НижГМА Росздрава» - №2008123115; заявл. 10.06.2008; зарег.10.01.2010, опубл. Бюл.№1 10.01.2010 и Решение от 05.07.2011 о выдаче патента на изобретение «Способ моделирования формирования устойчивости бактерий к дезинфицирующему средству». Авторы: Шкарин В.В., Ковалишена О.В., Благонравова А.С., Воробьева О.Н., Алексеева И.Г., Саперкин Н.В.; заявитель ГОУ ВПО «НижГМА Росздрава» - №2010119642/(027960) заявл. 18.05.2010.
Положения диссертационного исследования включены в «Национальную концепцию профилактики инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи» (утв. 06.11.2011г. главным государственным санитарным врачом РФ Онищенко Г.Г.);
Издано учебное пособие «Эпидемиологический надзор за внутрибольничными инфекциями», рекомендованное УМО по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России в качестве учебного пособия для студентов и врачей.
Результаты и технологии исследования с 2010 г. используются в работе Российского референс-центра по мониторингу за внутрибольничными инфекциями, опорной базой которого является НижГМА.
Технологии Центра МУ к ДС НИИ профилактической медицины НижГМА внедрены в работу органов и учреждений практического здравоохранения: краевой экспертной (референс) бактериологической лаборатории ГУЗ «Пермский краевой госпиталь для ветеранов войн», Министерства здравоохранения Пермского края, МУЗ «Городская клиническая больница №7» г.Перми (акт внедрения от 20 октября 2010г.); ГУЗ «Краевая клиническая больница» Алтайского края (акт внедрения от 14 июня 2011г.).
Результаты работы Центра мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам НИИ профилактической медицины Нижегородской государственной медицинской академии внедрены в учебный процесс кафедры эпидемиологии ГОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (акт внедрения от 27 марта 2011г.) и ГОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (акт внедрения от 14 июня 2011г.).
Результаты диссертационного исследования использованы при подготовке ряда региональных документов: Приказ №722/663 Департамента здравоохранения г.Н.Новгорода «Об организации в МЛПУ г.Н.Новгорода мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам» (от 22.12.2008), Приказ №1537/466 Министерства здравоохранения Нижегородской области «Об организации мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам» (от 01.10.2008); «План мероприятий по профилактике внутрибольничных инфекций в части организации мониторинга устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам в учреждениях Нижегородской области»; также программный документ «План мероприятий по организации эпидемиологического надзора и профилактики внутрибольничных инфекций в ЛПУ Нижегородской области на 2011-2012гг.)
По результатам работы подготовлены и утверждены совместно Министерством здравоохранения Нижегородской области, Управлением Роспотребнадзора по Нижегородской области и НижГМА следующие методические рекомендации: «Мониторинг устойчивости к дезинфицирующим средствам госпитальных и внебольничных штаммов микроорганизмов» (2008г.); «Способ определения чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам» (2010 г.); «Организация мониторинга устойчивости бактерий к дезинфицирующим средствам в ЛПО различного профиля и на территориальном уровне» (2011г.).
Был организован Центр МУ к ДС НИИ профилактической медицины НижГМА, являющийся базовым компонентом, осуществляющим координацию регионального мониторинга.
Разработанная методика «Способ определения чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующему средству (варианты)» внедрена в практическую деятельность бактериологических лабораторий ЛПО Нижегородской области при проведении МУ к ДС в рамках регионального пилотного проекта.
Результаты диссертационного исследования внедрены в практическую деятельность ФГУП «Профилактика» г.Н.Новгорода (акт внедрения от 2011г.) и используются в учебном процессе кафедры эпидемиологии и кафедры профилактической медицины ИПО ГБОУ ВПО НижГМА Минздравсоцразвития России при чтении лекций студентам, клиническим ординаторам, интернам, врачам, а также включены в программу работы постоянно действующей Школы-семинара госпитального эпидемиолога ЛПУ Нижегородской области (акты внедрения от 2011г.).
Разработка «Технология оценки устойчивости микроорганизмов к дезинфектантам» удостоена Золотой медали Международного салона изобретений «Женева-2011» (8 апреля 2011г., Женева, Швейцария).
За работу «Инновационная технология обеспечения качества и безопасности медицинской помощи в учреждениях здравоохранения г. Нижнего Новгорода», включившую результаты внедрения диссертационного исследования, автор удостоена премии г. Нижнего Новгорода в области медицины в 2011г.
Положения, выносимые на защиту
Существует приобретенная устойчивость микроорганизмов к ДС, одной из форм которой является индуцированная устойчивость, формирующаяся в результате адаптации бактерий к систематическому воздействию заниженных (суббактерицидных) концентраций ДС. Разработанная классификация позволяет систематизировать данные о механизмах устойчивости к антибактериальным средствам и согласовать терминологию по этой проблеме.
Способ моделирования устойчивости бактерий к ДС позволяет воспроизвести возникновение и изучить закономерности формирования устойчивости в лабораторных условиях.
Разработанные общие положения, принципы, организационно-методическое обеспечение, адаптированные параметры позволяют эффективно осуществлять МУ к ДС на территориальном уровне и в ЛПО различного профиля при разной эпидемиологической обстановке, являются обязательным компонентом эпидемиологического надзора за ИСМП.
Организационно-функциональные модели мониторинга в ЛПО различного профиля и на региональном уровне являются эффективным инструментом координации деятельности по совершенствованию дезинфекционных мероприятий, обеспечению качества и безопасности оказания медицинской помощи.
Апробация работы
Диссертационная работа апробирована на расширенном заседании проблемной комиссии «Иммунология, инфекционная патология и эпидемиология», кафедры эпидемиологии, НИИ профилактической медицины ГОУ ВПО НижГМА Минздравсоцразвития России, ФБУН Нижегородский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. ак. И.Н.Блохиной (Протокол №3 от 27 июня 2011 г.).
Материалы диссертации доложены на:
IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (26-27 апреля 2007г., г.Москва); Научно-практической конференции «Современные проблемы эпидемиологии», посвященной 65-летию кафедры эпидемиологии ГОУ ВПО «НижГМА Росздрава» (27-28 ноября 2007г., г.Н.Новгород); Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы теории и практики дезинфектологии», посвященной 75-летию НИИ дезинфектологии (22-23 мая 2008г., г.Москва); Научно-практической конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», посвященной 250-летию Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова (19-22 мая 2008г., г.Москва); VII, VIII, IX научно-практических конференциях «Внутрибольничные инфекции в стационарах различного профиля, профилактика, лечение осложнений»(2009г., 2010г., 2011г., г.Москва); XI международном конгрессе МАКМАХ/ESCMID по антимикробной терапии (27 – 29 мая 2009г., г.Москва); X Международном Медицинском форуме «Профилактика заболеваний – основа качества медицинской помощи и благополучия человека» (15 – 17 июня 2009г., г.Н.Новгород); XI Международном Медицинском форуме «Современные медицинские технологии на службе охраны здоровья россиян» в рамках выставки «Медицина +» (27 – 29 апреля 2010г., г.Н.Новгород); Всероссийской научно-практической конференции «Состояние и перспективы совершенствования научного и практического обеспечения дезинфекционной деятельности в РФ» и Общем собрании членов Национальной организации дезинфекционистов (XIX съезд) (22-23 сентября 2010г., г.Звенигород); III съезде военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных Сил РФ «Достижения науки практики в обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия Вооруженных Сил Российской Федерации» (8-10 декабря 2010г., г.С.-Петербург); Научно-практической конференции «Инновационные технологии в системе инфекционного контроля в ЛПУ» (6 октября 2010г., г.Екатеринбург); XII Международном Медицинском форуме «Модернизация здравоохранения – основа повышения качества и доступности медицинской помощи» и выставка «Медицина +» (19 – 21 апреля 2011г., г.Н.Новгород); III Ежегодном Всероссийском конгрессе по инфекционным болезням (28 – 30 марта 2011г., г.Москва); II Международном конгрессе «Стратегия и тактика борьбы с внутрибольничными и нфекциями на современном этапе развития медицины» (23-24 ноября 2011г., г.Москва) и других конференциях.
Структура и объем диссертации
Факторы, влияющие на эффективность дезинфекции и проявления устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам
Действие дезинфектантов на микроорганизмы определяется рядом факторов, связанных как со свойствами самих микроорганизмов, так и с особенностями окружающей среды и т.д. Знание этих факторов позволит усовершенствовать качество проводимой дезинфекции [31, 124, 200, 230, 281, 297]. Количество и локализация микроорганизмов В литературе приводятся данные, что при прочих равных условиях чем больше микробных клеток находится на том или ином объекте, тем больше времени требуется для уничтожения всех микроорганизмов дезинфектантом [22, 27, 31, 124, 164, 167]. Эта связь была проиллюстрирована Spaulding, который показал, что в идентичных условиях опыта для уничтожения 10 спор Bacillus subtilis потребовалось 30 минут, а для уничтожения 100 000 спор Bacillus subtilis – 3 часа [31]. Снижение микробной контаминации поверхностей обеззараживаемых объектов позволяет сократить время экспозиции, необходимое для уничтожения всей присутствующей микробной флоры [31, 164, 167]. Кроме того, необходимо учитывать локализацию микробов. Объекты, имеющие сложное строение, щели, соединения и каналы (например, эндоскопы), труднее дезинфицировать, поскольку в этих случаях могут возникать сложности, связанные с проникновением дезинфектанта во все части оборудования. Полноценной дезинфекции подвергаются только такие поверхности, которые имеют прямой контакт с дезинфектантом [27, 31, 124].
Видовые особенности микроорганизмов Известно, что микроорганизмы разных групп, семейств, родов, видов и даже разные штаммы одного вида обладают неодинаковой, часто существенно различающейся чувствительностью к тем или иным внешним воздействиям [19, 165, 184]. Это свойство особенно четко проявляется в отношении чувствительности к химическим дезинфицирующим средствам. Так, известно, что к воздействию растворов хлорактивных средств наиболее чувствительны грамотрицательные и грамположительные бактерии [165].
В настоящее время описаны случаи возникновения резистентности к дезинфектантам у широкого спектра грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов [60, 67, 164, 167, 184, 210, 250, 252, 257]. О более высокой устойчивости грамположительных микроорганизмов в сравнении с грамотрицательными сообщают отечественные исследователи [166, 176]. В ряде работ описана резистентность к ЧАС у S.aureus и коагулазоотрицательных стафилококков; резистентность к ЧАС, хлоргексидину, фурациллину и некоторым хлорсодержащим препаратам у P.aeruginosa [67, 277]. По данным выборочных исследований, у стафилококков удельный вес устойчивых к хлорамину штаммов составляет от 30 до 58%, к фенолу – до 77%, хлоргексидину – от 10 до 20% [184]. Эти же авторы указывают, что псевдомонады были устойчивы к хлорамину в 25 – 35% случаев, к хлоргексидину - до 71%; энтеробактерии характеризовались высокой устойчивостью к хлорамину - до74% и хлоргексидину - до 95%; отмечается низкий уровень устойчивости к йодопирону [184]. Необходимо констатировать, что популяции микроорганизмов гетерогенны по спектру чувствительности к дезсредствам, что создает предпосылки для селекции штаммов. Среди больничных штаммов стафилококков и псевдомонад были выявлены штаммы, устойчивые к 5-8 препаратам. Энтеробактерии чаще устойчивы к одному препарату [184]. Некоторые авторы отмечают вариабельность чувствительности к ДС энтеробактерий в зависимости от мест обитания данных микроорганизмов. Популяции бактерий, выделенные от больных, проявляют большую устойчивость к перекиси водорода, фенолу, ниртану, по сравнению со штаммами, выделенными из пищевых продуктов [79].
Многие авторы подробно изучают вопрос формирования устойчивости к ДС на основе ЧАС у микроорганизмов разных видов [31, 42, 78]. По некоторым данным, до 50% клинических изолятов Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris устойчивы к АС и ДС группы ЧАС [42, 190, 227]. Кроме того, существует мнение о наличии естественной устойчивости к ЧАС, которая характерна для грамотрицательных бактерий, микобактерий, бактериальных спор [67]. Причем среди грамотрицательных бактерий наибольшей резистентностью обладает P.aeruginosa [73]. У некоторых мукоидных штаммов стафилококков исследователи также отмечают наличие естественной устойчивости к соединениям из групп ЧАС [73]. Отмечается, что резистентные к ЧАС варианты микроорганизмов имеют атипичные морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства. Последнее вызывает определенные трудности в диагностике инфекционной патологии на этапе выделения и идентификации возбудителя [78, 106].
Что касается устойчивости псевдомонад, в литературе приводятся интересные данные о наличии резистентности в природных популяциях данного микроорганизма [31]. Существуют данные, что в природных популяциях псевдомонад присутствуют устойчивые к дезинфектантам варианты. Чаще встречаются варианты со сниженной по сравнению с фоновой чувствительностью, но нередко выявляются варианты, способные расти после воздействия концентраций дезинфектантов, равных и выше применяемых в практике дезинфекции [47]. Природная устойчивость ко многим антибактериальным препаратам является признаком не только P.aeruginosa, но и других представителей неферментирующих грамотрицательных бактерий – Acinetobacter spp., B.cepacia и др. [178]. Интересно также и то, что показатели устойчивости к дезинфектантам зависят от источника /объекта выделения бактерий. Так, имеются сведения, что в отделениях хирургического профиля P.aeruginosa проявляла резистентность к ДС с частотой 15,3±1,6 на 100 исследованных культур [140]. В целом считается, что у больничных популяций уровень устойчивости и частота выделения устойчивых вариантов выше, а спектр устойчивости шире [47].
Существует мнение, что очевидной зависимости между устойчивостью к ДС возбудителей инфекции и тяжестью вызываемых ими заболеваний нет [60]. Так, высокоустойчивые риновирусы вызывают, как правило, клинически легкие заболевания, в то время как низкоустойчивые вирусы гепатитов В и С, лихорадки Эбола, ВИЧ, а также вегетативные формы целого ряда бактерий являются возбудителями тяжелых, нередко смертельных болезней. Таким образом, возбудители многих опасных болезней легко инактивируются соответствующими ДС и наоборот [60].
Физические и химические факторы Некоторые физические и химические факторы влияют на эффективность применения ДС, в том числе температура, рН, относительная влажность воздуха и жесткость воды. Например, активность большинства дезинфектантов возрастает по мере повышения температуры, за некоторыми исключениями, например, едкого натра. В случае хлорактивных соединений, с повышением температуры ускоряется процесс их диссоциации в воде и возрастает антимикробная активность [165]. Однако температура не должна превышать определенной точки, при которой происходит разложение самого ДС [31]. Кроме того, присутствие органических веществ может влиять на эффективность обеззараживания. Снижение антимикробной активности различных дезинфектантов в присутствии органических веществ объясняется взаимодействием АДВ с органическими веществами субстрата, в результате чего на микроорганизмы воздействует более низкая концентрация [27, 124]. Например, при наличии в среде органических загрязнений, зависимость эффективности хлорактивных соединений от температуры проявляется менее заметно, т.к. их биоцидная активность снижается вследствие взаимодействия активного хлора с органическими веществами [166]. В экспериментальных исследованиях было показано влияние добавления в питательную среду глюкозы или галактозы, увеличивающих устойчивость иерсиний к фенолу [19].
Организация, материалы и методы исследований . Собственные исследования
Диссертация выполнена в соответствии с планом (РК 208.048.06) в рамках ведущей НИР Нижегородской государственной медицинской академии «Разработка и испытание новых технологий борьбы с инфекционными болезнями» (РК 208.015.01), выполняемой совместно кафедрой эпидемиологии и НИИ ПМ. Исследование носило комплексный, многолетний характер и включало широкомасштабные эпидемиологические, микробиологические и клинические исследования в ЛПО различного профиля г.Н.Новгорода и на территории Нижегородской области в целом.
Исследование было организовано по нескольким направлениям (табл.1). I. Теоретическая разработка проблемы и научное обоснование мониторинга устойчивости микроорганизмов к ДС: - обобщение теоретических данных о видах и механизмах устойчивости микроорганизмов к ДС; - экспериментальное доказательство возможности формирования индуцированной устойчивости к ДС; - разработка способа моделирования формирования устойчивости бактерий к ДС; - изучение различных факторов, связанных с проявлениями устойчивости микроорганизмов к ДС: адгезивности и деколонизирующей способности устойчивых к ДС штаммов микроорганизмов; видовых особенностей чувствительности микроорганизмов к ДС; особенностей устойчивости микроорганизмов к ДС на поверхностях; сравнительная характеристика чувствительности микрофлоры медицинских учреждений при различной эпидемиологической обстановке. II. Организационно-методическое обеспечение обоснование мониторинга устойчивости микроорганизмов к ДС: - разработка способа определения чувствительности микроорганизмов к ДС в двух вариантах (в растворе и на поверхности); - обоснование общих и специальных параметров МУ к ДС; - создание программного обеспечения (компьютерной программы) МУ к ДС; - разработка и внедрение организационно-функциональных моделей МУк ДС в ЛПО и на территориальном уровне; - разработка образовательного компонента организационно-методического обеспечения МУ к ДС. III. Анализ результатов обоснование мониторинга устойчивости микроорганизмов к ДС: - маркетинговые исследования регионального сегмента рынка ДС в Нижегородской области; - анализ результатов изучения чувствительности микрофлоры ЛПО Нижегородской области к ДС; - разработка подходов к оценке экономической эффективности МУ к ДС; - оценка эффективности мероприятий по МУ к ДС на территориальном уровне. Таблица 1 Направления, виды, материалы, методы, объем исследований Направления исследований Виды и методы исследований Материалы и объём исследований I. Теоретическая разработка и научное обоснование мониторинга устойчивости микроорганизмов к ДС Формирование индуцированной устойчивости к ЧАС Лабораторный эксперимент:1. Подбор суббактерицидной концентрации ДС.2. Экспериментальное формирование устойчивости к ДС.3. Оценка чувствительности микроорганизмов к бактерицидной концентрации ДС в течение всего периода эксперимента после каждого воздействия ДС в суббактерицидной концентрации.4. Изучение микробиологических свойств тест-штамма позволяющие комплексно оценить изменения в ходе эксперимента:- тинкториальные свойства культуры;- морфологические изменения;- культуральные свойства;- оценка подвижности микроорганизма;- биохимическая активность;- чувствительность к антибиотикам;- чувствительность к ДС в бактерицидной концентрации Тест-штамм E.coli шт.12571936 исследований Формирование индуцированной устойчивости к ХДС Тест-штамм E.coli шт.125712800 исследований Изучение сочетанной устойчивости Микробиологические методы: определение чувствительности к ДС 4 ДС266 штаммов микроорганизмов5352 исследования Изучение комбинированной устойчивости Микробиологические методы:- определение чувствительности к антибиотикам;- определение чувствительности к ДС 196 штаммов микроорганизмов2696 исследований чувствительности к антибиотикам1764 исследования чувствительности к ДС Изучение различных факторов, связанных с проявлениями устойчивости микроорганизмов к ДС Изучение адгезивной и деколонизационной активности Микробиологические методы:изучение искусственной адгезии на буккальном эпителии 44 штамма Staphylococcus spp.6600 исследований
Изучение видовых особенностей чувствительности Эпидемиологические методы:- ретроспективный эпид.анализ;- оперативный эпид.анализ;- проспективное эпид.наблюдение;Лабораторные методы:- микробиологические;- РТ-ПЦР 5941 истории болезни1357 пациентов с ИСМП 462 штамма УПМ разных видов6555 исследований 924 смыва с объектов внешней среды и 172 пробы воды горячего водоснабжения на ДНК L.pneumophilaТест-штамм L.pneumophila
Изучение особенностей устойчивости к ДС на различных поверхностях Микробиологические методы: определение чувствительности к ДС (вариант на поверхностях) 6 тест-объектовТест-штаммы E.coli шт.1257, S.aureus шт.906, клинические изоляты разных видов750 исследований
Сравнительная характеристика чувствительности микрофлоры ЛПО при разной эпидобстановке Эпидемиологический и микробиологический скрининг и мониторингМикробиологические методы: выделение и идентификация микроорганизмов, определение чувствительности к антибиотикам и к ДС 5891 история болезни666 пациентов с ГСИ989 проб с объектов внешней среды ЛПО824 штамма микроорганизмов8399 исследований II. Организационно-методическое обеспечение мониторингаустойчивости микроорганизмов к ДС Разработка способа определения чувствительности микроорганизмов к ДССравнение с «золотым стандартом» Лабораторный экспериментМикробиологические методы: определение чувствительности к ДС (варианты)Оценка диагностического теста: чувствительность, специфичность, положительное прогностическое значение, отрицательное прогностическое значение, воспроизводимость результатов, достоверность Тест-штаммы E.coli шт.1257, S.aureus шт.906, клинические изоляты разных видов31 ДС, 53 режима применения5705 исследований200 штаммов микроорганизмов,1200 ледований III. Анализ результатов мониторинга устойчивостимикроорганизмов к ДС Анализ результатов изучения чувствительности микрофлоры ЛПО .
Экспериментальное доказательство возможности формирования устойчивости к дезинфицирующим средствам
Задачами данного этапа исследования было установление возможности формирования приобретенной индуцированной резистентности микроорганизмов к ДС, определение условий ее возникновения и выявление изменений свойств микроорганизма в процессе вырабатывания устойчивости. Для решения этих задач был проведен лабораторный эксперимент на основе разработанного «Способа моделирования формирования устойчивости бактерий к дезинфицирующему средству» (Патент 2437932 РФ / Шкарин В.В., Ковалишена О.В., Благонравова А.С. [и др.]).
Мотивирующими факторами к проведению такого исследования были: - спорные точки зрения о наличии устойчивости к ДС вплоть до отрицания возможности ее формирования; - немногочисленные и противоречивые данные о формировании устойчивости микроорганизмов к ДС; - сведения о время- и дозо-зависимом эффекте воздействия ДС на микроорганизм; - исследование влияния заниженных концентраций дезинфектантов на выработку резистентности; - стремление выяснить является ли такое нарушение дезинфекционного режима как систематическое занижение концентраций дезинфицирующих средств при их применении в ЛПО причиной формирования устойчивости микроорганизмов к ДС; - необходимость изучения механизмов формирования индуцированной устойчивости; - данные зарубежных исследователей о возможности выработки устойчивости в лабораторных условиях; - возможность сравнения особенностей устойчивости микроорганизмов к ДС разных групп химических соединений. Для экспериментального доказательства возможности формирования устойчивости к дезинфицирующим средствам была проведена серия экспериментов в лабораторных условиях, которые включали: 1) формирование устойчивости у тест-штамма E.coli к ДС на основе ЧАС; 2) формирование устойчивости у тест-штамма E.coli к ХДС. Объектом исследования послужил микроорганизм Escherichia coli шт.1257, использующийся в соответствии с Российскими требованиями в качестве одного из тест-штаммов для для оценки бактерицидной активности в отношении грамотрицательных бактерий.
Тест-штамм E.coli шт.1257 обладает типичными биохимическими, морфологическими, культуральными, тинкториальными и ферментативными свойствами, присущими данному виду, а также стандартной устойчивостью к к эталонным дезинфицирующим средствам (растворам хлорамина, перекиси водорода, Катамина АБ – алкилдиметилбензиламмония хлорида (АДБАХ), глутарового альдегида) согласно Руководству Р 4.2. 2643 -10 «Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности».
Эксперименты включали несколько этапов. 1. Подбор суббактерицидной концентрации ДС. 2. Экспериментальное формирование устойчивости к ДС. 3. Оценка чувствительности микроорганизмов к бактерицидной концентрации ДС в течение всего периода эксперимента после каждого воздействия ДС в суббактерицидной концентрации. 4. Изучение микробиологических свойств тест-штамма позволяющие комплексно оценить изменения в ходе эксперимента: - тинкториальные свойства культуры; - морфологические изменения; - культуральные свойства; - оценка подвижности микроорганизма; - биохимическая активность; - чувствительность к антибиотикам; - чувствительность к ДС в бактерицидной концентрации. 3.2.1 Формирование индуцированной устойчивости у тест-штамма E.coli к ДС на основе ЧАС Выбор ДС на основе ЧАС для проведения эксперимента обусловлен широким применением этой группы химических соединений в лечебно-профилактических организациях (ЛПО) Нижегородской области, значительной распространенностью устойчивости и относительно быстрым формированием резистентности микроорганизмов к данным веществам. Проведена серия опытов по подбору неполной бактерицидной и суббактерицидной концентрации дезинфектанта (табл.6). Таблица 6 Подбор концентрации ДС, оказывающей неполное бактерицидное действие на E.coli шт.1257 (фрагмент исследования) № опыта рост микроорганизма при различныхконцентрациях ДС (%) 0,5 0,1 0,05 0,02 0,01 1 рн рн рн 30 КОЕ сплошной рост 2 рн рн рн 160 КОЕ сплошной рост 3 рн рн рн 45 КОЕ рост более 300 КОЕ оценка чувствительности микроорганизма полная чувствительность полная чувствительность полная чувствительность неполная чувствительность устойчив концентрация и время воздействия ДС, рекомендованные в Инструкции для дезинфекции различных объектов при бактериальных (кроме туберкулеза) инфекциях заниженная концентрация дезинфицирующего средства применялась фиксированная экспозиция 60 минут, рекомендованная Иструкцией по применению для дезинфекции различных объектов при бактериальных (кроме туберкулеза) инфекциях В табл.6 продемонстрирована чувствительность тест-микроорганизма к дезинфицирующему средству в режиме, рекомендованном Иструкцией по применению для дезинфекции различных объектов при бактериальных (кроме туберкулеза) инфекциях и в заниженных концентрациях при фиксированной экспозиции воздействия.
На следующем этапе исследования выполнялся основной эксперимент по формированию устойчивости к ЧАС в рабочей концентрации. В ходе эксперимента производилось последовательное воздействие ДС на те штаммы, которые сохраняли жизнеспособность после предыдущего воздействия: - после каждого воздействия ДС оценивался рост культур на чашках Петри; из нескольких колоний готовили мазки с окраской по Граму; - при обнаружении роста от 1 до 299 КОЕ/мл с чашки бралось несколько изолированных колоний (от 5 до 10) и пересевалось на скошенный питательный агар с последующей инкубацией при t= 37 в течение 24 часов; - выросшие штаммы включались в эксперимент и воздействие дезинфектантом в рабочей концентрацией производилось уже на них. Таким образом, было выполнено 6 воздействий. В ходе выполнения воздействий отмечались определенные изменения культуры микроорганизма. Далее они описаны по этапам появления и обобщены (Приложение 11). Характеристика изменений микробиологических свойств тест-штамма E.coli в ходе эксперимента по формированию индуцированной устойчивости к ДС на основе ЧАС Интактные клетки Тинкториальные свойства: грамотрицательные бактерии. Культуральные свойства. На плотной питательной среде (МПА) через 18-24 ч инкубации при 37С круглые беловатые полупрозрачные колонии диаметром 1,5-2,5 мм, с гладкой влажной блестящей поверхностью, ровными краями, однородной структуры, пастообразной консистенции, легко эмульгирующиеся. На плотной питательной среде среде Эндо через 18-24 ч инкубации при 37С образуют плоские красные колонии средней величины с темным металлическим блеском.
Определение чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам
Определение чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам в растворе I. Приготовление бактериальной взвеси. 1. Культуры микроорганизмов, выращенные на плотной питательной среде в течение 18 – 24 часов, смыть стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. 2. Микробные взвеси каждого вида довести до 5 единиц (5Х108 КОЕ/мл) по стандарту мутности для оптической стандартизации бактерий (ГИСК им. Тарасевича Л.А.). II. Проведение исследования 1. Растворы дезинфектантов в рабочей концентрации (0,9 мл) разлить в стерильные пробирки с резиновыми пробками. 2. В пробирки с растворами дезинфектантов внести по 0,1 мл микробной взвеси и перемешать встряхиванием несколько секунд. 3. Экспозиция в течение времени, указанного в методических рекомендациях по применению ДС для данной концентрации при требуемом режиме обработки. 4. После действия дезинфектанта в указанной в методических рекомендациях по использованию препарата (или необходимой для эксперимента) экспозиции, внести по 0,5 мл раствора нейтрализатора и перемешать встряхиванием. 5. Посеять на плотную питательную среду по 0,1 мл смеси и поместить чашки с посевами в термостат. 6. Параллельно с проведением опыта поставить контроли: 1) Контроль жизнеспособности микроорганизма (посев микробной культуры на питательную среду); 2) Контроль стерильности раствора дезинфектанта без добавления культуры (посев приготовленного раствора дезинфектанта на питательную среду); 3) Контроль полноты нейтрализации дезинфектанта (1 - к раствору ДС добавляется нейтрализатор, 2 – в полученную смесь вносится микробная суспензия, 3 – выдерживается необходимая экспозиция, 4 – высев смеси на питательную среду); 4) При наличии устойчивости – контроль чувствительности тест-штаммов микроорганизмов к тестируемым ДС в бактерицидном режиме. III. Учет результатов По истечении времени, необходимого для культивирования микроорганизмов данного вида, провести учет результатов по количеству выросших на чашке Петри колоний. При отсутствии роста увеличивают сроки культивирования микроорганизмов в 2 раза (так, при сроках культивирования 24 ч., оставляют в термостате до 2-х суток). Выросшие колонии подвергают микроскопии. Вариант 2 Определение чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам при дезинфекции различных поверхностей I. Приготовление бактериальной взвеси 1. Культуры микроорганизмов, выращенные на плотной питательной среде при температуре 37С в течение 18 – 24 часов, смыть стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. 2. Микробные взвеси каждого вида довести до 5 единиц (5Х108 КОЕ/мл) по стандарту мутности для оптической стандартизации бактерий (ГИСК им. Тарасевича Л.А.). II. Проведение исследования 1. На стерильную поверхность тест-объекта площадью 10х10 см2 дозатором нанести микробную взвесь в количестве 0,1 мл и распределить стерильным шпателем по всей площади квадрата. 2. После подсыхания микробной взвеси на поверхность мерно нанести 0,9мл раствора дезинфектанта в рабочей концентрации и распределить по поверхности квадрата стерильным шпателем. Дезинфектант применять в концентрациях, указанных в методических рекомендациях по использованию средства (или необходимых для исследования). 3. Экспозиция в течение времени, указанного в методических рекомендациях по применению ДС для данной концентрации при требуемом режиме обработки (на отдельном столе в лабораторном боксе или в ламинарном боксе класса биологической защиты II А). 4. После воздействия дезинфектанта в требуемой экспозиции, на тест-объекты дозатором нанести по 0,5 мл раствора нейтрализатора и равномерно растереть по поверхности. Экспозиция нейтрализатора – 1- 3 секунды. 5. Смыв произвести сухим стерильным тампоном с поверхности тест-объекта. 6. Высев на чашки с плотной питательной средой произвести немедленно этим же тампоном (по 0,1 мл). Чашки с посевами помещаются в термостат. 7. Параллельно с проведением опыта ставят контроли: 1) Контроль жизнеспособности микроорганизма (посев микробной культуры на питательную среду); 2) Контроль дезинфектанта без добавления культуры (посев приготовленного раствора дезинфектанта на питательную среду); 3) Контроль полноты нейтрализации дезинфектанта; 4) Контроль контаминации тест-объекта (после нанесения микробной взвеси на тест-поверхность произвести с нее смыв стерильным тампоном с последующим высевом на питательную среду); 5) Контроль стерильности тест-объекта (до нанесения микробной взвеси произвести смыв стерильным тампоном с тест-поверхности с последующим высевом на питательную среду). 6) При наличии устойчивости – контроль чувствительности тест-штаммов микроорганизмов к тестируемым ДС в бактерицидном режиме. IV. Учет результатов По истечении времени, необходимого для культивирования микроорганизмов данного вида, провести учет результатов по количеству выросших на чашке Петри колоний. При отсутствии роста увеличивают сроки культивирования микроорганизмов в 2 раза (так, при сроках культивирования 24 ч., оставляют в термостате до 2-х суток).
Выросшие колонии подвергают микроскопии. Оценка результатов изучения чувствительности микроорганизмов к ДС проводится в зависимости от назначения дезинфектанта (табл.14). 1. При использовании ДС для обеззараживания поверхностей в помещениях, санитарно-технического оборудования, выделений Штамм считать чувствительным при отсутствии роста или при росте не более 300 КОЕ/мл, что соответствует требуемой эффективности ДС (гибель 99,99% микроорганизмов). При росте менее 300 КОЕ/мл штамм оценивать степень чувствительности: 1. полная чувствительность – при отсутствии роста; 2. неполная чувствительность – при наличии роста: 100 – 299 КОЕ/мл – дезинфектант оказывает суббактерицидное действие; от 1 до 99 КОЕ/мл – неполное бактерицидное действие Штамм считать устойчивым к данному дезинфектанту в изучаемом режиме при росте 300 КОЕ/мл и более. 2. При использовании ДС для обеззараживания ИМН, посуды, белья, одежды, обуви, игрушек, предметов ухода за больными Штамм считать чувствительным при отсутствии роста микроорганизмов, что соответствует требуемой эффективности ДС (гибель 100% микроорганизмов). Штамм считать устойчивым к данному дезинфектанту в изучаемом режиме при наличии роста микроорганизмов (1 КОЕ/мл и более). Таблица 14 Интерпретация результатов изучения чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам Характеристика чувствительности к ДС Назначение обеззараживание поверхностей в помещениях, санитарно-технического оборудования, выделений обеззараживание ИМН, посуды, белья, одежды, обуви, игрушек, предметов ухода за больными Оценка роста микроорганизмов Устойчивый рост 300 КОЕ/мли более Наличие роста(1 КОЕ/мл и более) Чувствительный от «роста нет» до 299 КОЕ/мл Отсутствие роста («роста нет») Степени чувствительности Полностью чувствительный(полное бактерицидное действие ДС) роста нет Неполностью чувствительный (неполное бактерицидное действие ДС) рост 1-99 КОЕ/мл Неполностью чувствительный (суббактерицидное действие ДС) рост 100-299 КОЕ/мл Нормативные показатели эффективности дезинфекции 99,99% 100% Степени чувствительности оцениваются при использовании ДС для обеззараживания поверхностей в помещениях, санитарно-технического оборудования, выделений
Проведена оценка разработанной методики (вариантов – в растворе и на поверхности) по следующим стандартам: Чувствительность Специфичность Точность теста Положительное прогностическое значение Отрицательное прогностическое значение Воспроизводимость В качестве методики сравнения («Золотого стандарта») использовались «Методы определения эффективности дезинфицирующих средств, предназначенных для обеззараживания поверхностей в помещениях, санитарно-технического оборудования, транспортных средств, дорожных покрытий, других объектов окружающей среды, посуды, белья, одежды, выделений, изделий медицинского назначения, предметов ухода за больными, игрушек, антимикробных тканей, лаков, красок и др., обеззараживания воздуха» (М.Г. Шандала, Л.Г. Пантелеева, Н.Ф. Соколова и др.) [98]. Был проведен анализ результатов исследований 200 культур: оценка устойчивости данных культур к дезинфицирующим средствам согласно разработанной методике и оценка эффективности дезинфицирующего средства в отношении этих же культур согласно «золотому стандарту», при действии дезинфицирующего средства в растворе и на поверхностях (табл.15, 16).
