Введение к работе
Актуальность темы. Исследованиями последних лет установлено, что на территории России циркулирует несколько видов риккетсий из группы клещевой пятнистой лихорадки (КПЛ) с доказанной и пока не установленной патогенностью для человека (Рудаков Н.В. и др., 2006).
Наибольшее эпидемиологическое значение имеют Rickettsia sibirica – этиологический агент клещевого риккетсиоза ( КР или клещевой сыпной тиф) и риккетсии генокомплекса R. conorii, вызывающие астраханскую пятнистую лихорадку. Отмечены единичные завозные случаи везикулезного риккетсиоза (возбудитель – R. akarii) (Тарасевич И.В., 2005). Выявлен новый риккетсиоз, вызываемый R. heilongjiangensis, названный дальневосточным клещевым риккетсиозом (Медянников О.Ю. и др., 2008). Показана возможная этиологическая роль R. helvetica в развитии острых лихорадочных заболеваний после присасывания клеща на территории Пермского края (Нефедова В.В. и др., 2008).
Кроме того, на территории РФ в иксодовых клещах были выявлены патогенные риккетсии R.slovaca (D.marginatus), R.heilongjiangensis (H.concinna, D.nuttalli), R.helvetica (I.persulcatus), R.aeschlimanii (Hyalomma marginatum) (Шпынов С.Н. и др., 2003, 2004). Наряду с патогенными риккетсиями в клещах выявлены R.raoultii, R.tarasevichiae патогенность которых для человека изучается (Рудаков Н.В. и др., 2006).
Совершенствование эпидемиологического надзора за риккетсиозами требует дальнейшего изучения этиологической роли риккетсий, как хорошо известных, так и новых, что в значительной степени сдерживается отсутствием высокочувствительных и доступных методов серологической диагностики.
Применяемые в лабораторной диагностике риккетсиозов реакция связывания комплемента (РСК) и реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) обладают рядом недостатков, одним из которых является недостаточная видоспецифичность.
В 1980-х годах для диагностики риккетсиозов, вызываемых R. rickettsii, R. prowazekii, R. conorii, было предложено использовать иммуноферментный анализ (ИФА) (Тарасевич И.В., 2005; La Scola B., Raoult D. 1997; Clements M.L. et al., 1983). До настоящего времени иммуноферментные методы в системе эпидемиологического надзора за риккетсиозами группы КПЛ не применялись. Отсутствуют сравнительные данные о специфичности и чувствительности ИФА для выявления антител в сравнении с РСК и РНИФ.
Таким образом, для осуществления эпидемиологического надзора за риккетсиозами группы КПЛ целесообразным является разработка чувствительной и специфичной тест-системы ИФА для выявления антител риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки, позволяющей осуществить дифференциальную диагностику риккетсиозов, вызываемых различными представителями группы КПЛ, а также изучить возможную этиологическую роль новых риккетсий с неустановленной патогенностью.
Цель работы - повышение эффективности эпидемиологического надзора за клещевым риккетсиозом на основе совершенствования серологической диагностики риккетсиозов группы КПЛ с помощью иммуноферментного анализа.
Задачи исследования:
1. Провести анализ основных тенденций эпидемического процесса клещевого риккетсиоза в РФ за последние 11 лет (1999-2009гг.), определить контрастные по эпидемиологическим показателям территории Западной Сибири для апробации тест-системы ИФА для выявления антител к риккетсиям группы КПЛ.
2. Провести накопление риккетсий пяти видов (R. raoultii, R. heilongjiangensis, R.sibirica subsp. BJ-90, R. tarasevichiae, R. akari) в культуре клеток Vero и Hep-2, приготовить из них цельнорастворимые антигены, создать на их основе опытные серии тест-систем ИФА для выявления антител к риккетсиям группы КПЛ и провести их сравнительное изучение.
3. Провести апробацию тест-системы ИФА для выявления антител к риккетсиям группы КПЛ у пациентов на территориях, отличающихся риском заражения возбудителем клещевого риккетсиоза.
4. Обосновать применение ИФА для лабораторной диагностики клещевого риккетсиоза и осуществления эпидемиологического надзора за риккетсиозами группы КПЛ.
Научная новизна. Определены современные эпидемиологические особенности заболеваемости КР в Российской Федерации. После периода резкого роста (с 1979г.) и высокого уровня заболеваемости (1993-2001гг.), в современный период отмечается тенденция к снижению заболеваемости КР при сохранении в ее структуре высокой доли Западной Сибири, прежде всего Алтайского края. В структуре заболеваемости инфекциями, передающимися иксодовыми клещами, КР занимает третье ранговое место после иксодового клещевого боррелиоза (ИКБ) и клещевого энцефалита (КЭ) и составляет около 16%.
В территориальной структуре трёх инфекций, передаваемых через укус клеща, имеются отличия в различных округах РФ. Одной из причин различий территориальной структуры «клещевых» инфекций могут служить региональные отличия в типе населения иксодид и их численности.
Обосновано применение ИФА для выявления антител к риккетсиям группы КПЛ в сыворотках крови больных для лабораторной диагностики и осуществления эпидемиологического надзора за КР.
Осуществлена научно-технологическая разработка ИФА тест-систем для выявления антител к риккетсиям группы КПЛ в сыворотках пациентов, проведена их апробация при изучении природных очагов КР на территориях, отличающихся риском заражения R. sibirica, и определена тактика применения тест-систем ИФА в комплексе с другими методами для решения эпидемиологических задач.
Показано, что созданная тест-система ИФА выявляет антитела к антигенам различных видов риккетсий и по чувствительности значительно превосходит РСК, особенно при исследовании парных сывороток (91,7 % и 52,9 % соответственно). Использование ИФА для определения антител к R. sibirica subsp. sibirica классов IgG и IgM в парных сыворотках крови позволяет верифицировать диагноз КР у больных в подавляющем большинстве случаев, в том числе при отрицательных результатах РСК.
Практическая значимость работы и внедрения. Обосновано внедрение в систему эпидемиологического надзора серологического мониторинга за риккетсиями группы КПЛ. Применение метода ИФА для диагностики КР способствует повышению эффективности эпидемиологического надзора за риккетсиозами группы КПЛ.
В результате проведенных исследований разработаны лабораторно-экспериментальные серии ИФА тест-системы для выявления антител к риккетсиям группы КПЛ в сыворотках крови больных. Отработана тактика применения ИФА для серологической верификации диагноза КР на контрастных по этой инфекции территориях.
Разработан эффективный способ лабораторной диагностики КР путем обнаружения антител классов IgM и IgG в парных сыворотках крови у больных в ИФА с коммерческим антигеном R. sibirica.
Разработанные серии ИФА тест-системы использованы для совершенствования эпидемиологического надзора за КР как на эндемичных территориях, так и на территориях с отсутствием заболеваемости. Использование антигенов различных видов риккетсий в качестве основы твердофазного непрямого варианта ИФА может быть использовано для широкомасштабного серо-эпидемиологического изучения географического распространения видов риккетсий и их роли в патологии человека.
По результатам проведенных исследований опубликованы статьи методического характера, подготовлено учебно-методическое пособие: «Использование иммуноферментного анализа для диагностики риккетсиозов группы клещевой пятнистой лихорадки».
Подана заявка (регистрационный № 2010134106) на выдачу изобретения в Роспатент «Способ лабораторной диагностики клещевого риккетсиоза с использованием иммуноферментного анализа для определения антител к риккетсиям группы клещевой пятнистой лихорадки», получено уведомление о положительном результате формальной экспертизы от 16.09.2010г. Дата приоритета 13.08.2010г.
Положения, выносимые на защиту:
1. Определены территориальная структура и динамика очагов, место КР в структуре заболеваемости инфекциями, передающимися иксодовыми клещами, в Российской Федерации в современный период.
2. Разработан эффективный способ лабораторной диагностики клещевого риккетсиоза в ИФА с антигеном R. sibirica. Непрямой твердофазный вариант ИФА с цельнорастворимыми антигенами является высокочувствительным и специфичным методом обнаружения антител к риккетсиям группы КПЛ.
3. Антигены различных видов риккетсий, применяемые в качестве основы твердофазного непрямого варианта ИФА, могут эффективно использоваться для широкомасштабного серо-эпидемиологического изучения географического распространения «старых» и «новых» видов риккетсий и их роли в патологии человека, лабораторной диагностики и микробиологического мониторинга в системе эпидемиологического надзора за риккетсиозами группы КПЛ.
Апробация работы. Диссертационная работа апробирована на совместном заседании кафедр эпидемиологии, микробиологии и вирусологии с курсом иммунологии ГБОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, с участием научных сотрудников ФБУН «Омский НИИ природно-очаговых инфекций» Роспотребнадзора, 29.12.2011 г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 печатных работ, в том числе 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для публикации основных положений диссертации.
Результаты работы были представлены на следующих отечественных и международных конференциях: VII межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения», г.Омск, 2007г.; VI Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, г.Москва, 2007г.; VIII межрегиональной конференции с международным участием «Актуальные проблемы сохранения здоровья населения Сибири», посвящённой 70-летию медико-профилактического факультета Омской государственной медицинской академии, г.Омск, 2008г; научной конференции с международным участием «Этиологические, эпидемиологические и клинические аспекты инфекционных болезней», Иркутск, 15-17 сентября 2010г.; 4 региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии на Дальнем Востоке Российской Федерации» г. Хабаровск, 6-8 октября 2010г.
Объём и структура диссертации. Работа изложена на 146 страницах машинописного текста, иллюстрирована 9 таблицами и 12 рисунками. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, четырёх глав собственных исследований, заключения, выводов. Библиографический указатель содержит 162 источника, из которых 89 работ отечественных и 73 – зарубежных авторов.
![Совершенствование серологического мониторинга в системе эпидемиологического надзора за социально значимыми инфекциями [Электронный ресурс]](/i/i/4357/197342.png "Совершенствование серологического мониторинга в системе эпидемиологического надзора за социально значимыми инфекциями [Электронный ресурс] Литвиненко Марина Олеговна")
