Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 11
1.1. Иммунный статус новорожденных телят 11
1.2. Диспепсия новорожденных телят 13
1.2.1. Этиология и патогенез 14
1.2.2. Течение, симптомы и диагностика 21
1.2.3. Лечение и профилактика 22
1.3. Пробиотики - теоретические и практические аспекты 29
1.3.1. Лактобактерии - облигатные представители нормальной микрофлоры организма животных 37
1.3.2. Антибактериальные метаболиты лактобактерии 39
1.3.3. Иммуномодуляторы на основе лактобактерии 42
Глава II. Материал и методы исследования... 45
Глава III Собственные исследования 53
3.1. Краткая характеристика и технология животноводства в хозяйстве.. 53
3.2. Исследования стельных коров и нетелей 65
3.3. Получение пробиотического кисломолочного продукта на основе молозива 67
3.4. Физико-химические и иммунобиологические параметры сквашенного молозива 69
3.5. Влияние сухого лактобактерина и сквашенного им молозива на клинико-биохимические показатели телят 76
3.5.1. Клиническое состояние, живая масса и сохранность 76
3.5.2. Биохимические показатели крови 85
3.6. Влияние сухого лактобактерина и сквашенного им молозива на иммунный статус телят
3.6.1. Гематологические показатели и лейкоцитарная формула 92
3.6.2. Иммунологические показатели 96
3.6.3. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови 106
3.6.4. Уровень фагоцитоза 110
Глава IV Обсуждение результатов исследований 113
Выводы 128
Практические предложения 131
Список использованной литературы 132
Приложения 158
- Диспепсия новорожденных телят
- Лактобактерии - облигатные представители нормальной микрофлоры организма животных
- Получение пробиотического кисломолочного продукта на основе молозива
- Гематологические показатели и лейкоцитарная формула
Введение к работе
Актуальность темы. Незаразные болезни молодняка
сельскохозяйственных животных в первые дни жизни широко распространены в животноводстве и являются одной из основных проблем ветеринарной практики. Они носят массовый характер и вызывают значительный экономический ущерб. Изучение этих болезней, разработка новых способов их лечения и профилактики являются неотложными задачами ветеринарии.
Из незаразных заболеваний молодняка наиболее часто регистрируют диспепсию новорожденных, удельный вес которой составляет 60-90%, а падеж - 15-70% от числа заболевших. Это связано, прежде всего, с нарушением технологии содержания и кормления животных, а также несовершенством естественной защиты организма к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды [46,54,56,110,113].
Ущерб от диспепсии складывается из падежа, затрат на лечебные мероприятия, снижения продуктивных качеств и племенной ценности животных. Заболевание имеет сложную этиологию, что создает трудности в лечении и профилактике. Это вызывает необходимость поиска и разработки новых средств и схем лечения, способных повысить эффективность ветеринарных мероприятий. Особо важное значение при высокой заболеваемости животных незаразными болезнями и для снижения причиняемого ущерба приобретает профилактика [54,73].
Для профилактики диспепсии телят, повышения жизнеспособности, сохранности и продуктивности важно своевременно сформировать устойчивость к неблагоприятным факторам внешней среды, начиная с молозивного периода. Для этих целей при выращивании молодняка крупного рогатого скота в настоящее время используется большое количество биологически активных препаратов, позволяющих целенаправленно и эффективно влиять на различные звенья иммунной системы организма [26,34,52,70,114,158,163,173,190].
Многочисленными исследованиями доказано профилактическое и лечебное действие пробиотиков на организм человека, сельскохозяйственных животных и птицы. Данные препараты представляют собой культуры микроорганизмов - симбионтов желудочно-кишечного тракта и их метаболиты, которые улучшают кишечный микробный баланс у животных, активизируют неспецифическую резистентность организма и улучшают иммунный статус животных. Пробиотики хорошо сочетаются с другими лекарственными средствами, в том числе и с антибиотиками. Они стимулируют рост животных, но в отличие от антибиотиков, могут применяться длительными курсами, не вызывая побочных эффектов [8,55,104,122,123,144,172,178,203].
Использование пробиотиков, направленное на снижение заболеваемости молодняка животных желудочно-кишечными болезнями и риска контаминации животноводческой продукции возбудителями пищевых токсикоинфекций, следует рассматривать как альтернативу антибиотикотерапии. Остаточные количества антибиотиков, которые находят в продукции сельского хозяйства, особенно в молоке, ухудшают его санитарные качества и технологические свойства, искажают результаты редуктазной пробы, завышая классность молока по бактериальной обсеменности. Присутствие в молоке антибиотиков подавляет развитие молочнокислых бактерий, применяемых при производстве кисломолочных продуктов. Антибиотики нарушают сычужное свертывание молока при производстве сыра и творога. Остаточные количества антибиотиков в молоке, мясе и других продуктах отрицательно влияют на здоровье людей, вызывая развитие аллергических реакций, дисбактериоза, появление суперинфекций, развитие токсического, тератогенного и мутагенного действия. Более широкое применение пробиотиков в комплексной терапии и профилактике дисбиотических состояний у животных позволяет исключить использование антибиотиков или снизить негативные последствия их применения [114,122,123,144,183].
Однако широкому применению ветеринарных пробиотиков препятствует их высокая стоимость. Не каждое животноводческое хозяйство в современных экономических условиях может позволить себе использование данных препаратов. В качестве альтернативных или дополнительных средств бактериотерапии можно рассматривать более дешевые, обогащенные полезной микрофлорой корма, в том числе и молочные продукты [10,61,62,159].
В связи с этим разработка способа приготовления и применения пробиотического продукта на основе молозива, которое и само по себе является биологически ценным продуктом для телят в первые дни жизни, приобретает особую актуальность.
Способ, разработанный нами, является своеобразным методом биологической консервации молозива. Внесение лактобактерии позволяет провести его деконтаминацию от патогенной и условно-патогенной микрофлоры и обогатить молозиво бактериальными метаболитами в процессе сквашивания, повышая при этом его полезные свойства. Заквашенное молозиво повышает иммунологическую реактивность, потенциальную энергию роста и развития, профилактирует диспепсию и является перспективным и экономически выгодным средством бактериотерапии.
Цель и задачи исследования. Цель исследования - повышение эффективности лечебно - профилактических мероприятий при заболеваниях органов пищеварения у телят в ранний постэмбриональный период на основе применения пробиотических продуктов и препаратов, содержащих лактобактерии. Для реализации этой цели перед нами были поставлены следующие задачи:
1. Изучить и проанализировать основные причины желудочно-
кишечных заболеваний телят.
2. Определить физиологическое состояние, в том числе напряженность
колострального иммунитета, у новорожденных телят по клиническим,
биохимическим и иммунологическим показателям.
3. Разработать способ получения заквашенного молозива, определить его микробиологические показатели, сроки и режимы хранения.
4. Определить влияние лактобактерина и заквашенного им молозива на
естественную резистентность, клиническое и биохимические состояние
новорожденных телят при желудочно-кишечных заболеваниях.
5. Разработать и внедрить в производство схемы лечения и
профилактики диспепсии у телят с использованием полученного
пробиотического продукта.
Научная новизна. Выявлена способность лактобактерий (штамм Lactobacillus plantarum 8Р-АЗ) сквашивать молозиво, обогащать его биологически-активными веществами, способствовать деконтаминации от патогенной и условно-патогенной микрофлоры и сохранять его полезные свойства, что является своеобразным способом биоконсервации.
Впервые получен пробиотический кисломолочный продукт путем сквашивания лактобактерином (штамм Lactobacillus plantarum 8Р-АЗ) молозива, обладающий высокой кормовой ценностью и не уступающий по биологической активности пробиотическим препаратам и лечебным кисломолочным продуктам, содержащих лактобактерий.
Представлена иммунобиологическая характеристика и определена дозировка и схема применения полученного продукта.
Проведено сравнительное изучение профилактической и терапевтической эффективности лактобактерина сухого и заквашенного им молозива при диспепсии новорожденных телят. Исследовано влияние данных пробиотиков на неспецифическую резистентность, биохимические, гематологические показатели крови и энергию роста телят.
Практическая значимость. Разработан способ получения пробиотического продукта на основе молозива с учетом производственных условий животноводческого хозяйства, определены сроки и режимы его
хранения, дозировка и схема применения для профилактики и лечения диспепсии новорожденных телят.
Показана более высокая лечебно-профилактическая и экономическая эффективность сквашенного молозива по сравнению с лактобактерином сухим и традиционным методом лечения желудочно-кишечных заболеваний у молодняка.
Результаты исследований позволяют рекомендовать животноводческим хозяйствам использование пробиотических продуктов и препаратов на основе лактобактерий в технологическом процессе при выращивании молодняка крупного рогатого скота, начиная с первых дней жизни. Это повысит уровень неспецифической резистентности, иммунный статус, сохранность телят и прирост живой массы.
Внедрение. Результаты исследований включены в комплекс лечебно-профилактических мероприятий ФГУП «Верхнемуллинский» Пермского района Пермской области. Экономический эффект от применения лактобактерина сухого и заквашенного лактобактерином молозива при диспепсии новорожденных телят составляет 8,4 руб. и 10,46 руб. на 1 руб. затрат соответственно.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту.
Получение пробиотического продукта путем сквашивания молозива с помощью лактобактерий (штамм Lactobacillus plantarum 8Р-АЗ) и его иммунобиологическая характеристика.
Влияние лактобактерина сухого и сквашенного молозива на биохимические, иммунологические, гематологические показатели, клиническую картину и динамику роста при диспепсии телят.
Схемы лечения и профилактики при диспепсии телят с использованием лактобактерина сухого и сквашенного им молозива.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: областной научной конференции молодых ученых,
студентов и аспирантов «Молодежная наука Прикамья- 2002» (Пермь, 2002); международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса (Казань, 2003); научно-производственном семинаре «Профилактика болезней молодняка» (Карагай, Пермской обл., 2003); Российской научно-практической конференции «Новые пробиотические и иммунотропные препараты в ветеринарии» (Новосибирск, 2003); II международной межвузовской научно-практической конференции аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в науке» (Санкт-Петербург, 2004).
Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в пяти работах.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 167 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения, библиографический список (162 отечественных и 92 зарубежных авторов) и приложение. Работа содержит 29 таблиц и 28 рисунков.
Диспепсия новорожденных телят
Слово «диспепсия» означает несварение, которое длительное время выступало как один из признаков многих болезней животных. В настоящее время расстройство пищеварения в форме диареи у новорожденных животных является самостоятельной нозологической единицей [30,54]. В ряде зарубежных публикаций заболевание «диспепсия новорожденных» описано как «диарея новорожденных», «ферментативный понос». Диспепсия новорожденных животных, в частности телят, - это остро протекающее заболевание, возникает в первые дни и часы жизни, сопровождается дисфункцией органов пищеварительного тракта (нарушение процесса ферментирования и ассимиляции молозива и молока), нарушением обмена веществ, обезвоживанием и интоксикацией организма [2,30,32,137].
Данное заболевание является полиэтиологическим. Устанавливают две основные группы этиологических факторов: антенатальные, возникающие при нарушении внутриутробного развития плода, и постнатальные, связанные с неблагоприятным воздействием на организм новорожденного [2,30]. Диарея антенатального происхождения может быть обусловлена плохими условиями содержания и кормления глубокостельных коров, когда неблагоприятные факторы, действуя на организм коров, превышают их адаптационные возможности и вызывают нарушение гомеостаза, приводящее к патологии плода [101].
Особое значение в этиологии диспепсии придают недостаточному, неполноценному, несбалансированному кормлению матерей по протеину, сахару, витаминам, минеральным веществам. При нарушении кормления нарушается кислотно-щелочное равновесие в организме стельных коров, снижаются их защитные реакции, и рождается молодняк с низкой устойчивостью к воздействию факторов внешней среды [2,5,6,17,24,30,137, 147,156]. Нарушение кормления приводит к изменению состава (уменьшению содержания белка, в частности лакто-гамма-глобулинов, а также витаминов, минеральных веществ) и качества молозива (кислотность) [32,157].
Важная роль в возникновении диспепсии принадлежит кормовым токсикозам. Скармливание кормов с высоким содержанием масляной кислоты, нитратов, пестицидов оказывает негативное влияние на обмен веществ матери и жизнеспособность развивающегося организма плода [2,106,110].
При нарушении обмена веществ у коров возникают изменения в печени, поджелудочной железе и других органах с развитием аутоиммунных реакций. В крови накапливаются аутоантитела к антигенам органов в больших концентрациях, которые затем появляются и в молозиве, при выпаивании которого у телят развивается диспепсия на аутоиммунной основе [18,76,127].
Немалая роль в возникновении диспепсии принадлежит нарушениям технологии выращивания молодняка и соблюдения ветеринарно-санитарных правил. Здесь важно отметить отсутствие секционных профилакториев и их антисанитарное состояние (повышенный микробный фон, нарушение параметров микроклимата и др.), которые наряду со снижением естественной резистентности организма животных обусловливают сезонный характер заболевания [2,17,136]. В зимне-весенний период заболевания ЖКТ регистрируются у 83-85% новорожденных телят, а в летне-осенний у 15-20% [48].
Проблема иммунной недостаточности у молодняка животных в настоящее время выходит на первое место среди этиологических факторов. В момент рождения организм животного, находящийся до этого в стерильной среде, вступая в контакт с окружающей миром, не располагает защитой против патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, поскольку строение плаценты жвачных препятствует передаче гамма-глобулинов от матери к плоду [50]. Устойчивость новорожденных животных к воздействию факторов внешней среды и их заболеваемость зависит от уровня колострального иммунитета, обеспечивающегося полноценным секретом молочных желез коров в первые часы его жизни, и являющегося единственным источником защиты организма [91,115,132,158].
Недостаточное содержание в молозиве клеточных, гуморальных и неспецифических факторов защиты, а также наличие в нем аутоантител при аутоиммунных поражениях, хронических интоксикациях, нарушениях обмена веществ, заболеваниях метритом, маститом, эндокринной системы снижают его иммунологические качества [18,52,93]. Молозиво первых удоев от здоровых животных обладает выраженным бактериостатическим свойством, которое обусловлено содержанием в нем бактериолизинов, комплемента, лизоцима и лейкоцитов [92,147]. Лейкоциты попадают в молочную железу из крови, преодолевая своеобразный гемато-альвеолярный барьер, являясь нормальными функциональными компонентами молозива [52,81]. Присутствие жизнеспособных Т - и В-лимфоцитов, макрофагов необходимо как для санации вымени, так и для организации иммунной защиты новорожденного от чужеродных антигенов [74,127,132,147].
Кроме защитной функции, молозиво обеспечивает организм новорожденных животных питательными веществами. Наибольшую биологическую ценность у коров имеет молозиво двух первых после отела удоев, в которых содержится в 2 раза больше сухих веществ и энергии, в 100 раз больше витамина А, в 6 раз больше белка и в 3 раза больше минеральных веществ (железа, цинка, меди, кобальта, марганца), чем в обычном молоке [15,56,74,92,96,132].
Лактобактерии - облигатные представители нормальной микрофлоры организма животных
Ведущая роль в поддержании симбионтных отношений между макроорганизмом и его микрофлорой, а также в регуляции межмикробных взаимоотношений принадлежит одним из основных представителей индигенных микроорганизмов - лактобактериям. Значимость данных бактерий для организма животных сводится к двум основным взаимосвязанным функциям: участию в обменных процессах и защите от инфекции извне [21,33,169,230].
Лактобактерии присутствуют во всех отделах пищеварительного тракта, начиная с полости рта и заканчивая толстой кишкой, являются доминирующей флорой влагалища, выявляются и в молоке [43,45,82,243]. Входящие в состав биопленки, покрывающей слизистые, микроколонии лактобактерии устойчивы к действию лизоцима, пищеварительным сокам, желчи и кислотам [82].
Лактобактерии пищеварительного тракта обладают выраженной антагонистической активностью и способностью к адгезии, что обусловливает этим микроорганизмам важную роль в поддержании колонизационной резистентности ЖКТ [167,214]. Они подавляют приживление, рост и размножение поступающих извне микроорганизмов за счет выработки комплекса антибактериальных метаболитов и блокады рецепторов клеток слизистых от адгезинов потенциально патогенных бактерий [164,174].
Многочисленные исследования свидетельствуют о действии лактобактерий и структурных компонентов их клеток на иммунную систему организма животных [185,200,218,231]. Именно с иммуностимулирующей активностью связывают терапевтический эффект лактобактерий при многих бактериальных, вирусных инфекциях [21,180,224].
Кишечные лактобактерий и их метаболиты оказывают антимутагенное и антиканцерогенное действие, снижают рН кишечного содержимого и создают анаэробные условия, изменяющие метаболическую активность кишечных микроорганизмов [33,35,129,224,234].
Лактобактерий обеспечивают защитную функцию за счет целого ряда механизмов [242]. Они расщепляют углеводы корма до молочной кислоты и тем самым поддерживают рН среды менее 4,5, обеспечивая оптимальные условия для своей жизнедеятельности и неблагоприятные для условно-патогенных и патогенных микроорганизмов [143].
Лактобактерий проявляют непосредственную антимикробную активность за счет выработки перекиси водорода, лизоцима и бактериоцинов [25,142]. Важным вкладом в колонизационную резистентность лактобактерий является их высокая адгезивная активность, обусловленная наличием липотейхоевой кислоты клеточной стенки [66]. Кроме того, лактобактерий повышают местный иммунитет, способствуют активации макрофагов, образованию секреторного IgA и лизоцима [63,124].
Лактобактерий до настоящего времени остаются одними из самых широко используемых пробиотических микроорганизмов. В состав пробиотиков входят L. cellobiosum, L brevis, L. curvatus, L. delbreuckii подвид bulgaricus, L. case, L fermentum, L. lactis, L plantarum, L. reuterii [21,223].
Таким образом, лактобактерии, являясь неотъемлемой частью нормальной микрофлоры организма животных, обеспечивают колонизационную резистентность, играют важную роль в пищеварении, обмене веществ и функционировании иммунной системы. Представленные материалы подчеркивают значимость лактобактерии для организма животных и обоснованность применения препаратов на их основе.
Выраженные антагонистические свойства - один из характерных признаков лактобактерии, обеспечивающих им широкое распространение и высокую удельную численность в природных экологических системах [82,119].
Метаболиты лактобактерии, обладающие антимикробной активностью, относятся к самым разным группам химических соединений [16,181]. Основным продуктом жизнедеятельности лактобактерии, как активных кислотообразователей, является молочная кислота [69,126]. Кроме молочной, в процессе сбраживания глюкозы, лактобактерии продуцируют другие кислоты и многоатомные спирты: пируват, ацетат, ацетоуксусную и пропионовую кислоты, 2,3-бутандиол, манитол и др. [33]. Показано, что выраженное угнетение роста, размножения и процесса адгезии патогенных и условно-патогенных микроорганизмов зависит от совместного присутствия всего спектра кислот, вырабатываемых микроорганизмами. Синергизм такого сочетания обеспечивает ингибирование не только бактерий, но и некоторых видов дрожжей, при этом практически не затрагивается нормальная кислотоустойчивая микрофлора [164].
Особое место среди антибактериальных метаболитов лактобактерий занимает перекись водорода, она угнетает рост целого ряда микроорганизмов -кишечной палочки, стафилококков, псевдомонад, гонококков и др [165,186].
Антагонистическая активность лактобактерий реализуется и за счет изменения активности ферментных систем патогенных клеток. О.В. Бухариным и др. показано, что экзометаболиты лактобактерий снижают активность каталазы S. aureus и, тем самым, увеличивают повреждающий эффект перекиси водорода [25,142]. Многие штаммы L. fermentum, L. casei и L. acidophilus, составляющие нормальную микрофлору кишечника и влагалища, активно продуцируют лизоцим [111,151].
Получение пробиотического кисломолочного продукта на основе молозива
Известно, что кисломолочные продукты на основе цельного и обезжиренного молока, сыворотки, пахты применяют телятам с первых дней жизни для профилактики желудочно-кишечных заболеваний. Для этой цели используют ацидофильное молоко, мацун, кефир и др. [10,61,62,139,159] Недостатком подобного способа кормления новорожденных телят можно считать следующее: - субстрат для приготовления кисломолочных продуктов уступает молозиву по содержанию гуморальных, клеточных и неспецифических факторов защиты; - снижение биологической и пищевой ценности разовых порций кормления за счет разведения молозива кисломолочными продуктами на основе цельного и обезжиренного молока. Одной из задач нашей работы было повышение биологической ценности молозива, предотвращение его быстрой порчи и массивной контаминации посторонней микрофлорой. Данная задача была реализована с помощью сквашивания молозива лактобактериями.
Нами был получен пробиотический кисломолочный продукт для вскармливания телят в первые дни жизни. В качестве субстрата использовали сборное молозиво 1-2-го удоев, имеющего наибольшую биологическую ценность. Молозиво получали от здоровых (по маститу, метриту) коров, а также от животных, не проходивших курс лечения антибиотиками, так как это могло нарушить процесс сквашивания или негативно отразиться на здоровье новорожденных телят. В качестве закваски использовали сухой препарат -лактобактерин (штамм Lactobacillus plantarum 8Р-АЗ).
Для получения заквашенного молозива были использованы 2 технологические схемы. 1-я - схема предусматривала непосредственное внесение сухого лактобактерина в весь объем молозива. П-я - схема предусматривала получение рабочей закваски путем предварительного сквашивания небольшого количества молозива (3-5-го дня лактации), что позволяло значительно снизить расход сухого лактобактерина.
Для приготовления готового продукта по 1-й схеме на один литр свежевыдоенного, подогретого до 37+3 С молозива вносили содержимое 4-5-и флаконов (20-25 доз) лактобактерина, тщательно перемешивали и инкубировали при температуре 30-37 С. Процесс сквашивания вели в течение 48+8 часов, с периодическим перемешиванием, до образования сгустка. Если молозиво было только 2-го удоя, то время сквашивания составляло 32+4 часа.
При сквашивании молозива по И-й схеме для приготовления 1 л рабочей закваски использовали аналогичное количество лактобактерина (20-25 доз). Время инкубации составляло 18+2 часов. Полученную закваску вносили в свежевыдоенное, подогретое до 37+3 С молозиво в количестве 10%-ти от его объема. Далее процесс сквашивания соответствовал первому способу. Эта схема позволила сократить расход лактобактерина в 10 раз на 1 литр готового продукта.
Предлагаемый способ получения заквашенного молозива отличается простотой выполнения, не требующей дорогостоящего оборудования, что позволяет получать данный продукт непосредственно на животноводческих комплексах; экологической безопасностью; предотвращает возможные потери молозива, как ценного продукта, в результате его быстрой порчи и массивной контаминации посторонней микрофлорой. Полученный продукт сочетает пищевую ценность молозива и биологическую активность пробиотика, что одновременно повышает эффективность кормления телят и является лечебно-профилактическим средством при диспепсии.
Полученный кисломолочный продукт представляет собой однородную массу беловато-желтого цвета со специфическим горьковато-кислым вкусом и кислым запахом. Срок годности для полученного продукта был установлен исходя из известных сроков годности кисломолочных продуктов на основе лактобактерий.
Изучали физико-химические, микробиологические и иммунологические параметры в исходном смешанном (1 и 2-го удоев) молозиве и заквашенном молозиве в течение 7-й суток. Полученные данные отображены в таблицах 10, 11 и на рисунках 2,3,4,5.
Результатами наших исследований, представленных в таблице 10 установлено, что кислотность нативного смешанного молозива 1 и 2-го удоя составляла 37,0+2,67 Т, рН 6,21+0,49. В готовом сквашенном молозиве через 48+8 часов инкубирования (в 1-е сутки) наблюдали повышение кислотности в 2,8 раза (Р 0,001) и снижение рН в 1,2 раза (Р 0,01). Через 72 часа (2-е сутки) культивирования лактобактерий кислотность еще повысилась в 2,9 раз (Р 0,001), рН снизилось в 1,3 раза (Р 0,01), на 3-е сутки регистрировали повышение уровня кислотности в 2,8 раза (Р 0,001), рН в 1,25 (Р 0,05) раза по сравнению с исходными показателями.
Гематологические показатели и лейкоцитарная формула
Определение абсолютного количества лимфоцитов и лейкоцитарной формулы в цельной венозной крови является достаточно информативным показателем, позволяющим судить о многих процессах, затрагивающих как клеточное, так и гуморальное звено иммунитета [58]. Анализ представленных в таблице 19 данных показал, что содержание эритроцитов и гемоглобина у телят опытных групп было ниже, чем у телят контрольной группы. Так, у телят 1-й опытной группы содержание эритроцитов было снинижено на 20,3% (Р 0,05), П-й опытной группы на 26,6% (Р 0,01), а уровень гемоглобина - на 4,5% (Р 0,05) в 1-й опытной и 7,3% (Р 0,05) во П-й опытной группах животных по сравнению с контролем. Содержание лейкоцитов у телят опытных групп, напротив, было выше по сравнению с контрольными животными, однако достоверные различия наблюдались лишь у телят, получавших заквашенное молозиво, и разница составляла 20,7% (Р 0,05).
Удельный вес форменных элементов «белой» крови у животных контрольной и опытных групп на 10-е сутки жизни не имел существенных различий, кроме процентного содержания палочкоядерных нейтрофилов, которое у телят П-й опытной группы было ниже (Р 0,05) по сравнению с контролем. Кроме того, сравнивая данные показатели с аналогичными, у животных в возрасте 2-х суток наблюдали значительное снижение доли сегментоядерных нейтрофилов- и увеличение доли лимфоцитов. Так, количество сегментоядерных нейтрофилов уменьшилось у телят контрольной группы на 17,7% (Р 0,05), у 1-й опытной- на 11,9% и П-й опытной группах- на 16,4% (Р 0,05), в тоже время количество лимфоцитов повысилось на 27,4% (Р 0,05) , 34,9% (Р 0,05) и 36,2% (Р 0,01) соответственно. Динамика данных показателей отражена на рисунке 13.
Данные таблицы 20 показывают, что к 20-ти суткам жизни содержание эритроцитов и гемоглобина у телят контрольной и опытной групп не имело статистически достоверных различий. Однако содержание лейкоцитов у телят П-й опытной группы было выше на 16% (Р 0,05) по сравнению с контролем.
Также остается тенденция к снижению процента сегментоядерных нейтрофилов по сравнению с 2-х и 10-ти суточным возрастом. Уровень последних был выше в контрольной группе животных на 17,5% по сравнению с 1-й опытной и на 22,6% - с П-й опытной, однако разница была недостоверна. Одновременно регистрируется повышение процента лимфоцитов, содержание которых было достоверно выше (Р 0,05) на 9,4% у животных 1-й и на 15% у животных П-й опытных групп по сравнению с контролем.
Полученные данные о количестве лимфоцитов были использованы для расчета абсолютного и относительного содержания отдельных субпопуляций лимфоидных клеток в реакциях Е - и ЕАС - розеткообразования, которые наиболее полно и объективно характеризуют формирование иммунного статуса животных. Следует отметить, что данные, касающиеся изучения популяций и субпопуляций лимфоцитов, не однозначны и трудно сопоставимы, так как их получают с использованием различных методических подходов. Мы исследовали иммунную систему по методике Ю.И. Шилова с соавт. (1997), которые предлагают для расширения трактовки иммунограммы проводить различные варианты постановки реакции Е-розеткообразования (термостабильные и ранние Е-РОК, нагрузочные тесты с теофиллином и гормональными препаратами тимуса). Ранние Е-РОК выявляют субпопуляцию дифференцированных Т-лимфоцитов с повышенной аффинностью Е-рецептора и обладающими характеристиками Т - хелперов/индукторов; термостабильные Е-РОК - это низкодифференцированные Т-лимфоциты, которые являются предшественниками ранних Е-РОК; теофиллинчувствительные Е-РОК (Тт+) -это клетки, которые после инкубации с теофиллином, теряют Е-рецептор и способность розеткообразования, существует корреляция между их числом и количеством Т-лимфоцитов несущих CD8 маркер (Т-киллеры/супрессоры); теофиллинрезистентные Е-РОК (Тт-), теофиллин не влияет на экспрессию Е-рецептора, корреляция с количеством СВ4-позитивных Т-лимфоцитов (Т-хелперы/индукторы и эффекторы реакции ГЗТ). Таким образом, результаты данных тестов весьма информативны в комплексной характеристике функций Т-лимфоцитарной системы, поскольку позволяют выявить появление в периферической крови незрелых (низкодифференцированных) клеток этой популяции иммуноцитов [154].
